איסוף וזיהוי הלמינת'ס מחיות בר

המטרה הכוללת של הליך זה היא לאסוף, לשמר ולזהות הלמינתים מבעלי חיים ברים. הדבר משיג תחילה על ידי ביצוע נתיחה לאחר המוות (necropsy) לבעל חיים בר. לאחר מכן, נאספים הלמינתים מאיברים שונים, ולאחר מכן הם נשמרים באמצעות מגוון טכניקות לצורך זיהוי מאוחר יותר.

לבסוף, הקסדות עוברות הבהרה, צביעה והרכבה, והמינים מזוהים. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות מבנים ספציפיים של הקסדות באמצעות טכניקות של הבהרה ו/או צביעה, אשר יכולות לסייע רבות בזיהוי המינים. שיטה זו ניתנת ליישום לצורך זיהוי קסדות מיונקים, ציפורים, זוחלים ודו-חיים.

ניתן ליישם זאת גם על אורגניזמים אחרים כמו דגים. כדי להתחיל, הנח את בעל החיים על משטח שטוח והשתמש בזכוכית מגדלת כדי לבחון את כל הפתחים החיצוניים, כולל האוזניים, חלל הפה והעיניים, כדי לאתר נמטודות, CSEs, בהונות וטרמטודות. השתמש בלהב חד או סכין ובפינצטת דיסקציה.

בצעו חתך מעל חלל הבטן תוך הקפדה שלא לפגוע באיברים הפנימיים. לאחר מכן, בעזרת קוצץ עצמות או מסור ידני קטן במידת הצורך, פתחו את חלל בית החזה. בחנו את שני החללים לאיתור fal, תולעי סרט (roundworm) וטרמטודות (trematodes) גדולות.

לאחר מכן, קשרו חוט קרוב לתחילת הוושט וחוט נוסף בקצה המעי הגס לצורך בדיקה. תחת מיקרוסקופ סטריאואופטי, הפרידו את הלב וכלי הדם הראשיים, את הקנה ואת הריאות לצלחוני פטרי נפרדים. הוציאו את הכבד, כיס המרה ותעלת הלבלב, הטחול, הכליות ושלפוחית השתן, ובחנו אותם תחת המיקרוסקופ הסטריאואופטי.

לאחר מכן, הוציאו את מערכת העיכול השלמה והניחו כל מקטע בתוך צלחת זכוכית. לאחר הוצאת האיברים, השתמשו בצינור או בבקבוק ריסוס המולא ב-0.9%saline כדי לשטוף את חלל הגוף, תוך סינון הנוזלים דרך נפה עם רשת של 106 micrometer. העבירו בשטיפה חוזרת את תכולת הנפה לצלוחית פטרי ובחנו את התוכן תחת מיקרוסקופ סטריאואופטי כדי לאתר תולעי Fal או טרמטודות דם. בעזרת מספריים, פתחו כל מקטע של צינור העיכול.

גרדו את הרירית ובדקו אותה בקפידה כדי לאתר טפילים גדולים. ה-psci של encanto cephas מוטמעים לעיתים קרובות עמוק בדופן המעי. לכן, במידת הצורך, השתמשו בפינצטה ו/או במספריים קטנים כדי להוציא אותם בזהירות מהרקמה.

הנח כל מקטע פתוח תחת זרם מים ושטוף את התוכן אל תוך נפה של 106 micrometer. לאחר מכן, פתח את הלב וכלי הדם הראשיים, את הקנה, את שלפוחית השתן ואת כיס המרה, ובחן את תוכנם. באותו אופן, השתמש בלהב חד ובפינצטה כדי לחתוך ולהפריד איברים מוצקים כגון הכבד, הריאות, הכליות, הטחול והלבלב, ושטוף ובחן את התוכן. רשום את סוגי הטפילים.

מנּו את מספר הפרטים מכל סוג ואת האיברים שבהם הם נמצאו. סמנו את המבחנות או הצנצנות על ידי הצבת פיס קטן של כרטיסייה לבנה בתוכן, המסומנת בעיפרון, כדי לשמר את הקסדות למחקרים גנטיים עתידיים. ראשית, הניחו אותם ישירות באתנול.

לאחר קיבוע הדגימה למשך יום אחד עד מספר ימים, העבירו אותה לבקבוק זכוכית של 5 ml המלא ב-70% ethanol לאחסון לטווח ארוך. כדי לשמר Trematodes, הניחו פרטים חיים על תיתורה של מיקרוסקופ זכוכית בטיפת סליין, הניחו זכוכית כיסוי, והעבירו את התיתורה מעל להבה מבלי להרתיח את הסליין. לאחר מכן, הצניחו את התיתורה לתוך צלחת פטרי המכילה אלכוהול, חומצה אצטית או FA, והניחו לזכוכית הכיסוי לצוף ולהיפרד.

קבעו טרמטודות מתות ב-FA או בפורמלין מקושר בריכוז 10% למשך 48 שעות לפני העברתן לצנצנת מלאה ב-70% ethanol לאחסון לטווח ארוך. כדי לקבע אלה, הרפו בעלי חיים חיים בצלחת פטרי על ידי שפיכת מים קרובים לרתיחה עליהם, ולאחר מכן העבירו לצנצנת מלאה ב-70% ethanol לאחסון לטווח ארוך. הרפו encanto cephas חיים על ידי הנחתם בצלחת פטרי עם מי ברז במקרר למשך שעה אחת עד מספר שעות, עד שהחרטומית תהיה רפויה לחלוטין.

העבירו אותם לצנצנת מלאה ב-70% ethanol או ל-FA לצורך אחסון לטווח ארוך. כדי להמית נמטודות קטנות או שבירות, השתמשו ב-70% ethanol חם ושמרו אותן בצנצנת מלאה ב-70% ethanol עם 5% glycerin לצורך ההמתה. נמטודות בגודל בינוני עד גדול.

הניח אותם בחומצה אצטית קרחית קרה, ולאחר 15 דקות, העבר לצנצנת מלאה ב-70% ethanol ו-5% glycerin. הכן Harris Hematin על ידי המסת hematin ואלכוהול, ועל ידי המסת ammonium aluminum sulfate במים בחימום יתר. ערבב את שני התמיסות והבא לרתיחה.

לאחר מכן, הוסיפו sodium iodate והרתיחו במשך שתי עד שלוש דקות. כאשר התמיסה תתקרר, השתמשו בנייר סינון 5 41 כדי לסנן את התמיreson לצורך צביעת Trematodes estos ודלקו את Cephas. השאירו ב-Harris Hematin או ב-semicon Carmine למשך לילה כדי לקבע את הדגימות. השאירו ב-70% acid ethanol עד שהאיברים יהיו גלויים.

כדי לעצור את הצביעה, העבירו את הדגימות ל-70% basic ethanol למשך 30 דקות לפחות. בצעו דהידרטציה לדגימות בסדרה של אתנול והשתמשו ב-xylene או ב-methyl salicylate לשקיפות, ולאחר מכן הצמידו את הדגימות לסלייד של מיקרוסקופ, הוסיפו טיפה של Canada Bossum וכיסוי זכוכית. השאירו לייבוש למשך לילה. לשקיפות של נמטודות קטנות עד בינוניות ו-encanto cephas, הניחו אותן בתוך lact phenol על סלייד של מיקרוסקופ וכסו בכיסוי זכוכית למשך 15 עד 30 דקות. עבור נמטודות גדולות ו-encanto Cephas.

העבירו ל-80% phenol למשך עד 60 דקות. בחנו תחת מיקרוסקופ אור כדי לוודא את הפינוי של מבנים קטנים יותר לצורך בחינת ה-culex atos. חתכו אותו והניחו אותו בכמות של lacto phenol.

על זכוכית כיסוי של מיקרוסקופ. השתמשו בכיסוי זכוכית כדי למעוך את ה-culex כדי לאפשר מדידה וספירה של ה-rose stellar hooks. חתכו את הקצה הקדמי והניחו על Foss תחת מיקרוסקופ.

החלק תחת מספר טיפות של lact phenol או בתוך ג'לי גליצרין לצורך קיבוע קבוע. בדוק את חלקי הפה תחת מיקרוסקופ אור. לאחר חיתוך הזנבות של נמטודות גדולות וקיבוע ב-lacto phenol, בדוק את המורפולוגיה של הפאולי הוונטרליים והספיקול של הזכרים תחת מיקרוסקופ אור, תוך שימוש בשיטות המתוארות בסרטון זה.

סקר של קסדות של Sox scenarios של חולד-מסיכה נערך במחוז מיסולה, מונטנה, בין השנים 2007 ו-2011. סך של 56 חולדים נאספו ממלכודות בור ונבדקו בתוך שעתיים מרגע המוות.

השכיחות הכוללת של הזיהום הייתה 96% ורק שניים מהנמלים היו נקיים מטפילים. זוהו 15 מיני תולעים, כולל תשעה מינים של אקנתוצפאלות (acanthocephalans) ושישה מינים של נמטודות (nematodes). מין אחד מהסוג Staphylo chưa תואר בעבר.

האיברים שנמצאו נגועים כללו את המעי הדק, הקיבה, הריאות ושלפוחית השתן. עוצמות הזיהום הכוללות נעות בין שבע ל-234 תולעים למארח נגוע; עשירות המינים, או מספר מיני ה-helmet לכל מארח נגוע, נעה בין אחד לשמונה עם ממוצע של 4.1. לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע אותה בשעה אחת עד שעתיים ביונק קטן כמו סנאי, ובארבע עד חמש שעות ביונק גדול יותר כמו דביב.

לאחר צפייה בסרטון זה, תגייו הבנה טובה מאוד לגבי האופן שבו אוספים, משמרים ומזהים קסדות מבעלי חיים ברים.