Name: שיטה משופרת להכנת סוג I קולגן מעור (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-21T22:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 17 s
Description: למדו שיטה מהירה לבידוד קולגן מסוג I מדגימות עור, המקצרת את הזמן משבוע לפחות משלוש שעות. השיטה משתמשת בחומצת ציטרת וסינון צנטריפוגלי לטיהור יעיל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מחקר ממכון הבריאות הלאומי (HL068915 לDBC), פרס חוקר חדש מקרן מחקר Thrasher (לCAP), גרנט-in-Aid מאיגוד הלב האמריקאי (12GRNT11910008 לDBC) , מענק מחקר מהקרן לילדים לב (לDBC), ותרומות לבית החולים לב ההולכה הקרן לילדים בבוסטון, קרן ריאן המשפחתית, ועל ידי דוד פולמן.

להלן נדגים את בידודה של col1 מעור כבש. כפי שנכתב, פרוטוקול זה יכול לשמש גם לבודד בהצלחה col1 מארנב ועור אנושי. 1. היכונו לדוגמא Dermal <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן את כל חומרים כימיים כדי 4 מעלות צלזיוס לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את עורי מדגם (25-50 גר &#39;) ב DH קר כקרח 2 O והסר את כל צמר, פרווה, או שיער עם קרם מקריח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בסכין גילוח חד קצה לגרד נקי הדגימה של רקמת שומן וחיבור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את המדגם בקר כקרח DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פורסים את דגימת העור ל1 סנטימטר x חתיכות 1 סנטימטר בסכין גילוח חד קצה. </li></ol> 2. הסר Noncollagenous solubilized חומר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את 5 גרם של מדגם בצינור חרוטי 50 מיליליטר ולהוסיף 30 מיליליטר של 0.5 נתרן אצטט M קר כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים צינורות 1 דקות ב6 ההגדרה מ &#39;/ השנייה באמצעות מתאם 50 צינור מיליליטר בhomogenizer ספסל העליון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant וחזור על פעולה עבור סכום כולל של 7 מחזורים לשטוף נתרן אצטט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את המדגם ב DH קר כקרח 2 O ולערבב פעם אחת כדי להסיר נתרן אצטט שיורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במרית כדי לדחוס את המדגם על הצד של הצינור כדי להסיר נוזל עודף ולאחר מכן להעביר לצינור חרוטי 50 מיליליטר טרי. </li></ol> 3. הקלד אני קולגן הפקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את המדגם פעמיים ב 2 מיליליטר / גרם 0.075 M חיץ ציטרט הנתרן 1 דקות ב6 מ &#39;/ השני בhomogenizer ספסל העליון דחיסת המדגם ושלכת supernatant לאחר כל שטיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת aliquot 2 מיליליטר / גרם טרי של 0.075 חיץ ציטרט M נתרן לדוגמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע 6 דקות 1 רציפה, 6 מחזורי תמהיל homogenizer ספסל העליון מ &#39;/ שנייה של תסיסה מבלי להסיר את החיץ בין כל מחזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את supernatant העבה, ברור לצינור איסוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת חיץ ציטרט נוסף 1 מיליליטר / גרם 0.075 M נתרן למדגם ולבצע agita homogenizer אחד סופי ספסל העליוןמחזור tion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת supernatant זה סופי לצינור איסוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה צינור האיסוף ב3,200 XG 10 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את supernatant לתא העליון של משקל מולקולרי 100,000 נותק מכשיר מסנן צנטריפוגלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב 3,200 XG במשך 30 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר col1 מטוהר מהתא העליון לצינור נקי חרוטי ולאחסן ב 4 ° C. </li></ol>

<ol><li>Nageotte, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coagulation+fibrillaire+in+vitro+du+collag%C3%A8ne+dissous+dans+un+acide+dilu%C3%A9%5BTitle%5D)+AND+%22CR+hebd.+s%C3%A9ances+Acad.+Sei%22%5BJournal%5D)">Coagulation fibrillaire in vitro du collagène dissous dans un acide dilué.</a> CR hebd. séances Acad. Sei. 184, 115 (1927).</li>
<li>Schmitt, F. O., Hall, C. E., Jakus, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscope+investigation+of+the+structure+of+collagen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electron microscope investigation of the structure of collagen.</a> J. Cell Comp. Physiol. 20, 11-33 (1942).</li>
<li>Choi, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+conduction+through+engineered+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am. J. Pathol. 169, 72-85 (2006).</li>
<li>Pacak, C. A., Cowan, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+myogenic+engineered+tissue+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Fabrication of myogenic engineered tissue constructs.</a> J. Vis. Exp. (27), (2009).</li>
<li>Cliche, S., Amiot, J., Avezard, C., Gariepy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+and+characterization+of+collagen+with+or+without+telopeptides+from+chicken+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Sci%22%5BJournal%5D)">Extraction and characterization of collagen with or without telopeptides from chicken skin.</a> Poultry Sci. 82, 503-509 (2003).</li>
<li>Rajan, N., Habermehl, J., Cote, M. F., Doillon, C. J., Mantovani, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+ready-to-use%2C+storable+and+reconstituted+type+I+collagen+from+rat+tail+tendon+for+tissue+engineering+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of ready-to-use, storable and reconstituted type I collagen from rat tail tendon for tissue engineering applications.</a> Nat. Protoc. 1, 2753-2758 (2006).</li>
<li>Seifter, S., Gallop, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+properties+of+soluble+collagens%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Preparation and properties of soluble collagens.</a> Methods in Enzymology. Colowick, S., Kaplan, N. , Academic Press. NY. (1963).</li>
<li>Pacak, C. A., Powers, J. M., Cowan, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrarapid+purification+of+collagen+type+I+for+tissue+engineering+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Ultrarapid purification of collagen type I for tissue engineering applications.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17, 879-885 (2011).</li>
<li>Ohan, M. P., Dunn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+stabilizes+collagen+sterilized+with+gamma+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Glucose stabilizes collagen sterilized with gamma irradiation.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 67, 1188-1195 (2003).</li>
<li>Tyan, Y. C., Liao, J. D., Lin, S. P., Chen, C. C. The study of the sterilization effect of gamma ray irradiation of immobilized collagen polypropylene nonwoven fabric surfaces. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTyan%2C+YC+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22">J. Biomed. Mater. Res. A</a>. 67, 1033-1043 (2003).</li>
<li>Ber, S., Torun Kose, G., Hasirci, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+tissue+engineering+on+patterned+collagen+films%3A+an+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Bone tissue engineering on patterned collagen films: an in vitro study.</a> Biomaterials. 26, 1977-1986 (2005).</li>
<li>Liu, Y., Sun, S., Singha, S., Cho, M. R., Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-D+femtosecond+laser+patterning+of+collagen+for+directed+cell+attachment%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">3-D femtosecond laser patterning of collagen for directed cell attachment.</a> Biomaterials. 26, 4597-4605 (2005).</li>
<li>Thakar, R. G., Ho, F., Huang, N. F., Liepmann, D., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+vascular+smooth+muscle+cells+by+micropatterning%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Comm%22%5BJournal%5D)">Regulation of vascular smooth muscle cells by micropatterning.</a> Biochem. Biophys. Res. Comm. 307, 883-890 (2003).</li>
<li>Leighton, J., Justh, G., Esper, M., Kronenthal, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-coated+cellulose+sponge%3A+three+dimensional+matrix+for+tissue+culture+of+Walker+tumor+256%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Collagen-coated cellulose sponge: three dimensional matrix for tissue culture of Walker tumor 256.</a> Science. 155, 1259-1261 (1967).</li>
</ol>

יש המחברים אין אינטרסים כלכליים מתחרים לחשוף.

מרכיב חיוני בשיטה זו הוא יעילה הדחיסה החוזרת של דגימת עורי להסיר את הנוזל עודף. זה קריטי כדי להסיר כמה שיותר נתרן אצטט ככל האפשר בשלב 2.5 ידי דחיסת המדגם. אנו משתמשים במרית כדי לדחוס את העור מפני הצד של הצינור, אך יכולה לשמש גם גזה, אם כי זה יחייב ההסרה של המדגם מהצינור ולהגדיל את הזמן הנדרש לביצוע פעולות אלה. כמו כן, חשוב כדי לדחוס את המדגם בשלב 3.1 כך שהנפח של ציטרט הנתרן הוא מדויק בצעדי חילוץ שלאחר מכן. אי להסיר כראוי נוזל מהמדגם בכל אחד מהשלבים הבאים תהיה השפעה מזיקה על תשואת ...

במשך עשרות שנים, חוקרים וספקים מסחריים יש לבודד col1 solubilized ממגוון של מקורות, כולל רקמת עור וגידים באמצעות גרסה כלשהי של פרוטוקול פשוט הפקת חומצה ואחרי נטרול, שתוצאתה resuspension של מטריצה ​​של סיבי col1 מאורגנים שניתן להשתמש בי עבור מספר רב של יישומים ביו 1-4. אמנם יש דוגמאות רבות של יישומים קליניים לcol1, כמה מהם להעסיק col1 autologously נגזר בגלל הכנה של חלבון זה דורשת עקירות ארוכות לוקחת ימים או שבועות כדי לבצע 5-7. כתוצאה מכך, חוקרי מחקר ורופאים בדרך כלל להשתמש בתכשירים יקרים, מסחריים של col1 שהוכנו באמצעות רקמות אנושיות כגון חולדה, שור, או גלד חזירי או באמצעות עור הוסר מן הגופות או בעקבות מילת גברים. עבור יישומי משובי, רבים של השתנות אלה תערוכת מוצרים ביחס ליכולת שלהם לצורה מוצקהמטריצות או מבני רקמות מסוגלים לתמוך מצורף תא וצמיחה. כתוצאה מכך, יש צורך מובהק לשיטה סטנדרטית חדשה שנועדה לחלץ במהירות col1 ממקורות רקמות עצמיים נגישים ושפע. שיטה כזו תחסוך זמן וכסף במסגרת המחקר שבו col1 אפשר להפיק ממודל החיה של עניין ומשמש לבדיקה קליני של רקמות מהונדסות התאספו על פיגומים מבוססי קולגן. במקביל, יש את האפשרות של שימוש במהירות col1 מבודד, autologously נגזר במרפאת יגדיל את הבטיחות הכוללת של חולים שאמורים היה לקבל אלוגנאית או תכשירי xenogeneic. לחולים שקבלו הכנת autogeneic, שיטה יעילה זה תהיה לצמצם במידה ניכרת את המרווח בין אוסף ביופסיה ויישום קולגן. מסיבות אלה, בקשנו לשפר את שיטת בידוד וטיהור col1 הוקמה ארוך באמצעות AG במהירות גבוההitation וצנטריפוגה בגודל הדרה. שיטה זו היא פשוטה לביצוע באמצעות מאגרים סטנדרטיים וציוד שנמצאו במעבדות רבות. על ידי העסקת תסיסה במהירות גבוהה, הפרוטוקול שלנו מקטין את הזמן הדרוש כדי לבודד מסיס col1, עורי מכ 10 ימים פחות מ 3 שעות 8. חשוב מכך, בשיטה זו ניתן לבצע בקלות בסביבה הקלינית על מנת להכין col1 autologously נגזר לשימוש בחולים בקבוצה אחת של נהלים.

<table><tbody><tr><td>FastPrep-24 System</td><td>MP Biomedicals</td><td>116004500</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Beckman</td><td>J6-MI</td><td>רוטור דלי נדנדה כדי להכיל צינורות חרוטיים של 50 מ"ל ב-3,200 x גרם.</td></tr></tbody></table>

שיטה משופרת להכנת סוג i קולגן מעור

An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

סוג מסיס קולגן 1 (col1) נעשה שימוש נרחב כמצע דבק לתרביות תאים ופיגום סלולארי ליישומי רגנרטיבית. מבחינה קלינית, חלבון זה נמצא בשימוש נרחב עבור ניתוחים קוסמטיים, זריקות עורי, השתלת עצם, וניתוח שחזור. מקורות col1 לנהלים אלה הם בדרך כלל לא אנושיים, דבר המגדיל את הפוטנציאל לדלקת ודחייה, כמו גם העברת מחלות xenobiotic. לאור זאת, בשיטה יעילה ומהיר כדי לטהר col1 מכמויות מוגבלות של רקמות autologously נגזרות תעקוף רבות של בעיות אלה, עם זאת, פרוטוקולי בידוד סטנדרטיים הם ארוכים ולעתים קרובות דורשים כמויות גדולות של collagenous רקמות. הנה, אנחנו מדגימים שיטת חילוץ col1 יעילה המפחיתה את הזמן הדרוש לבודד ולטהר חלבון זה בערך מ 10 ימים פחות מ 3 שעות. אנחנו בחרנו בדרמיס כמקור לרקמות שלנו בגלל זמינותו בהרבה ניתוחים. Tהשיטה שלו משתמשת במאגרי חילוץ מסורתיים בשילוב עם תסיסה חזקה וסינון צנטריפוגלי להשיג מאוד טהור col1, מסיס מכמויות קטנות של גלד. בקצרה, ביופסיות עורי נשטפות ביסודיות ב DH קר כקרח 2 O לאחר הסרת שומן, רקמת חיבור, ושיער. דגימות העור הופשטו מחלבונים והסוכרים noncollagenous באמצעות נתרן אצטט M 0.5 וhomogenizer ספסל העליון במהירות גבוהה. קולגן ממוצקי שיורי מופק לאחר מכן עם חיץ ציטרט הנתרן 0.075 M באמצעות homogenizer. תמציות אלה הם מטוהרים באמצעות 100,000 מסננים MW חתוכים הצנטריפוגלי שיניבו הכנות col1 באיכות דומה או עדיפה על מוצרים מסחריים או לאלה שהושגו באמצעות נהלים מסורתיים. אנו צופים בשיטה זו תאפשר הניצול של col1 autologously נגזר עבור מספר רב של מחקר ויישומים קליניים.

פרוטוקול בידוד col1 זה דורש כ 2 שעות ו15 דקות כדי להשלים. איור 1 מציג תרשים סכמטי המתאר את השלבים העיקריים בהליך זה. הכנת הדגימה וביצוע 7 המחזורים של הסתה במהירות גבוהה ושטיפות עם נתרן אצטט לוקחת כ 35 דקות (איורים 1 א-C). ביצוע תסיסה אחד ולשטוף מחזור עם DH 2 O לוקח כ 5 דקות (1D דמויות ו1E). הוספת ציטרט הנתרן והכפפת המדגם לתסיסה אחד ולשטוף מחזור ואחרי 6 מחזורים של תסיסה לוקח כ 45 דקות (1F דמויות ו1G). צנטריפוגה המוצקים ש...

נהלים מסורתיים לבידוד של קולגן סוג מסיס 1 (col1) דורשים על 10 ימים מהתחלה ועד הסוף בגלל incubations חיץ הארוך ומייגע resuspensions של סיבים. כאן, אנו מתארים אמצעים כדי לטהר col1 מביופסיות עורי קטנים בפחות מ 3 שעות.

שיטה משופרת להכנת סוג I קולגן מעור

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבודד במהירות קולגן מסוג 1 מדגימה של דרמה. זאת על ידי חיתוך ראשוני של דגימת הדרמה לחתיכות קטנות. בשלב השני, חלבונים מומסים שאינם קולגניים ופוליסכרידים מוסרים באמצעות ערבול מהיר של דגימת הדרמה בנתרן אצטט.בשלב הבא, שוטפים את הדגימה במים כדי להסיר את כל השאריות של ה-sodium acetate. בשלב הסופי, מפיקים את ה-collagen type one מהדגימה העורית באמצעות citrate buffer; משתמשים בצנטריפוגה כדי להסיר מוצקים שנותרו בדגימה, ולאחר מכן מסננים באמצעות התקן צנטריפוגה חד-פעמי כדי לרכז את המוצר הסופי. לבסוף, ניתן לבצע פולימריזציה נוספת של ה-collagen type one מתוך תרכיז זה.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות הוא שהיא מקצרת את זמן הבידוד של קולגן מסוג 1 מדגימות עור משבוע למילימטרים של פחות משלוש שעות. התחילו בשטיפה של דגימת עור במשקל 25 עד 50 גרם במים מזוקקים קרים במיוחד (בטמפרטורת קרח), ולאחר מכן השתמשו בקרם להסרת שיער כדי להסיר צמר, פרווה או שיער.בשלב הבא, השתמש להב תער בעל קצה יחיד כדי לגרד מהדגימה רקמת חיבור ושומן, ושטוף את הדגימה בעוד מים מזוקקים קריים. לאחר מכן, השתמש בתער כדי לחתוך את דגימת העור לחתיכות של 1x1 סנטימטר. כדי להסיר חומרים ממיסים שאינם קולגניים, שקול תחילה חמישה גרם של דגימה לכל מבחנה קונית של 50 מיליליטר והוסף 30 מיליליטר של sodium acetate 0.

an-improved-method-for-the-preparation-of-type-i-collagen-from-skin

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

שיטה מתוארת להכנת מטריצה ​​3-ממדית המורכבת מסוג קולגן אני ופיברובלסטים אנושיים ראשוניים. ג'ל organotypic זה משמש כמצע שימושי להעריך נדידת תאים פולשניים כי זה מחק את התכונות בסיסיות של הרקמה סטרומה והוא נוח לצורות רבות של מיקרוסקופיה.

קולגן אני Assay Organotypic: פלטפורמה חשילה לבחינת התנהגות תא בהקשר 3-Dimensional

המטרה של פרוטוקול זה היא לבנות עור תלת מימדי בעובי מלא, הדומה לעור טבעי. עם מכשיר פציעה אוטומטי שנבנה במיוחד, ניתן ליצור פצעים מדויקים וניתנים לשחזור תחת שמירה על סטריליות.

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

יצירת מיקרו-רקמות פונקציונליות בתוך מכשירים מיקרופלואידיים דורשת ייצוב של פנוטיפים של תאים על ידי התאמת טכניקות תרבית תאים מסורתיות לממדים המרחביים המוגבלים במיקרו-מכשירים. שינוי הקולגן מאפשר שקיעה שכבה אחר שכבה של מכלולי קולגן דקים במיוחד שיכולים לייצב תאים ראשוניים, כגון הפטוציטים, כמודלים של רקמות מיקרופלואידיות.

קולגן שכבת הפקדת-ידי שכבה במכשירי microfluidic לMicrotissue ייצוב

אנו מציגים פרוטוקול להשיג מטריצות תאים שמקורם עשירות בחלבונים תאים מטריקס, באמצעות crowders macromolecular (MMC). בנוסף, אנו מציגים פרוטוקול אשר משלב MMC בדור העור 3D organotypic שיתוף התרבות, אשר מקטין את זמן תרבות תוך שמירה לפדיון של מבנה.

עור 2D and 3D שיפור<em&gt; במבחנה</em&gt; מודלים שימוש להצטופפות מולקולארית

כאן אנו מציגים פרוטוקול לבודד ביעילות keratinocytes האדם העיקרי של רקמות העור למבוגרים. שיטה זו מפשטת את הפרוצדורה המקובלת על-ידי שימוש Y-27632 מעכב את רוק המדיום חיסון להפריד באופן ספונטני תאים אפידרמיס מתאי עורי.

שיטה פשוטה ויעילה כדי לבודד Keratinocytes האנושי העיקרי של רקמת עור מבוגר

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול עבור הכנת בשתי צורות שונות של תרבות סובסטרטים ניצול מסוג קולגן. בהתאם דרך הטיפול קולגן, קולגן מולקולות לשמור על צורה דו-ממדית, הלא-סיבית או להרכיב מחדש לצורה תלת ממדי, fibril. התפשטות תאים על סוג הקולגן מושפע באופן משמעותי היווצרות fibril.

הערכת תקין התפשטות על שניים - שלושה ממדי מסוג קולגן מצעים

מטרת פרוטוקול זה היא לתאר את הדור ואת הניתוח הנפחי של שווה ערך לעור אנושי וסקולרי באמצעות טכניקות נגישות ופשוטות לתרבות ארוכת טווח. ככל האפשר, הרציונל לצעדים מתואר כדי לאפשר לחוקרים את היכולת להתאים אישית בהתבסס על צרכי המחקר שלהם.

דור של שווה ערך לעור אנושי בהרכבה עצמית

כאן, אנו מציגים הליכים זולים ופשוטים להצגת מודלים שונים של עור תלת ממדי למחקר שגרתי במעבדה לתרביות תאים. חוקרים יכולים ליצור מודלים המותאמים לצרכיהם מבלי להסתמך על מודלים זמינים מסחרית.

בניית מודלים לעור עבור יישומים רבים - החל ממונוקולטורה דו-ממדית (2D) ועד רב-תרבותיות תלת-ממדית (3D)

הפרוטוקול הבא מציג שיטת שחול מבוססת גזירה לייצור הידרוג'לים של קולגן עם סיבים בדוגמת ננומטר, הניתנת ליישום במגוון רחב של יישומי הנדסת רקמות.

ייצור קולגן בדוגמת ננו-פיברילר להנדסת רקמות

המכשול העיקרי בתא טיפולים שוטפים גזע הוא לקבוע את השיטה היעילה ביותר, כדי לספק תאים אלה לרקמות המארחות. כאן אנו מתארים שיטה chitosan מבוסס משלוח יעיל ופשוט של הגישה, תוך מתן אפשרות השומן שמקורם בתאי גזע כדי לשמור על multipotency שלהם.

בניית Hydrogel קולגן עבור משלוח של התא טעון גזע Chitosan microspheres

למדו שיטה מהירה לבידוד קולגן מסוג I מדגימות עור, המקצרת את הזמן משבוע לפחות משלוש שעות. השיטה משתמשת בחומצת ציטרת וסינון צנטריפוגלי לטיהור יעיל.

שיטה משופרת להכנת סוג I קולגן מעור

גלה סרטונים נוספים