Name: Intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: למדו שיטת הזרקת חיסונים ישירות לבלוטות הלימפה בעכברים לשיפור התגובה החיסונית. טכניקה זו מאפשרת יעילות גבוהה יותר בהשוואה להזרקות תת-עוריות מסורתיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים על העזרה הניסיונית בפיתוח שיטת חיסון intralymphatic בעכברים מאיריס ארדמן, ברברה פון בויסט, וג&#39;וליה מריה מרטינז-גומז. תודה גם לMaggy אראס וניקולה Cesarovic ומאפשרות לנו להשתמש בתיאטרון כירורגית שלהם לייצור בסרטון זה.

1. בהרדמה של עכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את חומרי ההרדמה על ידי ערבוב של קטמין (הרדמה דיסוציאטיבית) וxylazine (הרגעה ושיכוך כאבים) שבנאגר מלוח. הריכוזים של קטמין ו xylazine בפתרון הסופי הם 12.5 ו2 מ&quot;ג / מיליליטר, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק חומרי ההרדמה לעכברים על ידי ממשל intraperitoneal באמצעות מזרק עם מחט G 25-30. השתמש 0.1 ml/10 גרם של משקל גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחת עיניים לעיניים של העכברים על מנת למנוע התייבשות של הקרניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבטיח שהעכבר הוא הרדים מספיק על ידי צובט את הרגל או הבוהן שלה עם המלקחיים. אם העכבר אינו מגיב עם רפלקסים לקורט, המשך לניתוח. אם העכבר מגיב לצביטה עם רפלקסים או התכווצויות שרירים, חכה 1-2 דקות ולחזור על בדיקת הצביטה. אם העכבר עדיין מגיב, להחליף את העכבר עם בעלי חיים חדשים ולחזור על ההליכים מהשלב 1.2 ואילך. </li></ol> 2. אני כירורגיncision של אזור מפשעתי של העכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על הגב שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרטב אזור אחד מפשעתי עם אתנול חיטוי (70%). כדי לספק חיטוי טוב יותר, באזור המפשעה עשוי להיות מגולח כדי להסיר חיטוי לפני פרווה עם אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את רגלו האחורית ולכופף את מפרק הירך כדי לייצר זווית כ 90 ° של מפרק הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים microdissecting מעוקלים, לקחת את העור של העכבר באזור המפשעה שבו מפרק הירך הוא כפוף ולמשוך את העור הרטוב מעט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד מחזיק את העור עם המלקחיים, לחתוך חתך קטן (&lt;5 מ&quot;מ) דרך העור באמצעות מספריים כירורגיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הקצה של המספריים הסגורים לתוך החתך ועוד יותר לפתוח את החתך על ידי פתיחת המספריים כשהוא אוחז אותו בתוך החתך. זה יגרום לעור לקרוע וצריך לייצר בקוטר של פחות מ -10 מ&quot;מ. הערה: מקור אור קר עם מדריכי אור גמישים יכול לשמש כדי לשפר את הנראות. במבוגרעכברים, בעיקר זכרים, זיהוי של הבלוטות לימפה עלול להיות קשה בשל הרבה יותר רקמת שומן באזור המפשעה. </li></ol> 3. הזרקת Intralymphatic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מזרק (0.5 מיליליטר או פחות) עם מחט מזרק G 28-30; פוע קצר עשוי להיות עדיף לפוע ארוך. לשאוב 10 μl של החיסון להיות מוזרק ולהבטיח שהמזרק הוא חופשי של אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקם את הצומת לימפה מפשעתי עם עזרה של המלקחיים המעוקלים והקצה של המספריים הסגורים. הבלוטות לימפה תופיע אפרפרות בתוך רקמת השומן לבנבן יותר וניתן לזהות עוד דרך נימים מביא efferent וכניסה וביציאה לימפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשתק את הבלוטות לימפה על ידי מחזיק אותו בין זרועות המלקחיים המעוקלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את המזרק ולהכניס את המחט לתוך הבלוטה לימפה עם השיפוע כלפי מעלה; מוודא השלם שפוע נכנס לימפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את החיסון (10 μl). אם ההנהון לימפהדואר הוא נפיחות (פיצוץ), ההזרקה ניתן להניח מוצלחת. אם המחט אינה ממוקמת עמוק מספיק לבלוטות לימפה, כל החיסון מסוים או עלול לדלוף החוצה ולא להיכנס לימפה. אם המחט מוחדרת עמוקה מדי, החיסון המוזרק ישוחרר תת עורי מתחת לימפה. במקרה של האחרון, לחזור על ההזרקה או להחליף את העכבר עם עכבר מטופל חדש. </li></ol> 4. סגירת החתך על ידי תפירה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח חפיסת תפר כירורגי סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחוז במחט התפר עם בעל מחט בחלק הדיסטלי של גוף המחט. הדק את בעל המחט באמצעות אחיזתו עד שתופס את מחגר הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחוז בעור בצד אחד של החתך באמצעות מלקחיים (בהתאם להעדפותיו של המנתח, שיניים או בלתי שיני מלקחיים או ווי עור עשוי לשמש). הכנס את ca המחט. 2-3 מ&quot;מ מהקצה של החתך, שנכנס מהצד החיצוני של העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוסen האחיזה של העור עם המלקחיים ולהבין את הצד השני של החתך עם המלקחיים. הכנס את ca המחט. 2-3 מ&quot;מ מהקצה של החתך, שנכנס מהפנימי של העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את בעל המחט ולתפוס את קצה מחט עם המלקחיים. משוך את המחט עם לדרוך דרך העור, משאיר את אורך נוח של לדרוך מחוץ לנקודת מחט ההכנסה הראשונה (אם כמה עכברים יטופלו, להשאיר סוף קצר יותר; 5-10 עכברים יכולים להיות מופעלים על עם מחט תפר אחד / לדרוך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את הקשר המועדף על פי פרוטוקולי מנתח סטנדרטיים. תפר אחד די אם החתך אינו גדול מ10 מ&quot;מ. לחתכים גדולים יותר, להפוך את התפר שני. </li></ol> 5. טיפול שלאחר תפעולי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בכלוב ולכסות עם רקמות כדי להתחמם. כאשר מטפלים עכברים מרובים, למקם אותם קרוב אחד לשני כדי להתחמם. לחלופין, למקם את העכברים על משטח חם עד שהם התעוררועד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לעכברים עד שהם מתעוררים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לעכברים יומיים בכל הקשור לריפוי פצע, כמו גם סימפטומים קליניים אחרים, כגון זיהומים בפצע. הפצע הוא בדרך כלל סגור במידה מספקת בתוך יומיים ורפאו בתוך שבעה ימים של ההליך. </li></ol>

<ol><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+intralymphatic+injection+of+peptide+vaccines+enhances+immunogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity.</a> Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).</li>
<li>Maloy, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+immunization+enhances+DNA+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 3299-3303 (2001).</li>
<li>Smith, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+DNA+vaccination+by+sequential+injection+of+lymph+nodes+with+plasmid+vectors+and+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Enhancing DNA vaccination by sequential injection of lymph nodes with plasmid vectors and peptides.</a> Vaccine. 27, 2603-2615 (2009).</li>
<li>Kreiter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranodal+vaccination+with+naked+antigen-encoding+RNA+elicits+potent+prophylactic+and+therapeutic+antitumoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Intranodal vaccination with naked antigen-encoding RNA elicits potent prophylactic and therapeutic antitumoral immunity.</a> Cancer Res. 70, 9031-9040 (2010).</li>
<li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+kinetics+determines+immune+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Antigen kinetics determines immune reactivity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 5189-5194 (2008).</li>
<li>Smith, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node-targeted+immunotherapy+mediates+potent+immunity+resulting+in+regression+of+isolated+or+metastatic+human+papillomavirus-transformed+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Lymph node-targeted immunotherapy mediates potent immunity resulting in regression of isolated or metastatic human papillomavirus-transformed tumors.</a> Clin. Cancer Res. 15, 6167-6176 (2009).</li>
<li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+ligands+as+adjuvants+in+allergen-specific+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Allergy%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor ligands as adjuvants in allergen-specific immunotherapy.</a> Clin. Exp. Allergy. 35, 1591-1598 (2005).</li>
<li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+denaturation%2C+a+simple+method+to+improve+the+immunotherapeutic+potential+of+allergens%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Heat denaturation, a simple method to improve the immunotherapeutic potential of allergens.</a> Eur. J. Immunol. 35, 3591-3598 (2005).</li>
<li>Martinez-Gomez, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+injections+as+a+new+administration+route+for+allergen-specific+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Arch.+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic injections as a new administration route for allergen-specific immunotherapy.</a> Int. Arch. Allergy Immunol. 150, 59-65 (2009).</li>
<li>Martinez-Gomez, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+MHC+class+II+pathway+of+antigen+presentation+enhances+immunogenicity+and+safety+of+allergen+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Targeting the MHC class II pathway of antigen presentation enhances immunogenicity and safety of allergen immunotherapy.</a> Allergy. 64, 172-178 (2009).</li>
<li>Mohanan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+routes+affect+the+quality+of+immune+responses%3A+A+cross-sectional+evaluation+of+particulate+antigen-delivery+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Administration routes affect the quality of immune responses: A cross-sectional evaluation of particulate antigen-delivery systems.</a> J. Control Release. 147, 342-349 (2010).</li>
<li>Waeckerle-Men, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+targeting+of+BCG+vaccines+amplifies+CD4+and+CD8+T-cell+responses+and+protection+against+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Lymph node targeting of BCG vaccines amplifies CD4 and CD8 T-cell responses and protection against Mycobacterium tuberculosis.</a> Vaccine. 31, 1057-1064 (2013).</li>
<li>von Beust, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+therapeutic+index+of+CpG+oligodeoxynucleotides+by+intralymphatic+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Improving the therapeutic index of CpG oligodeoxynucleotides by intralymphatic administration.</a> Eur. J. Immunol. 35, 1869-1876 (2005).</li>
<li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+immunotherapy+for+cat+allergy+induces+tolerance+after+only+3+injections%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Allergy+Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic immunotherapy for cat allergy induces tolerance after only 3 injections.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 129, 1290-1296 (2012).</li>
<li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+allergen+administration+renders+specific+immunotherapy+faster+and+safer%3A+a+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic allergen administration renders specific immunotherapy faster and safer: a randomized controlled trial.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 17908-17912 (2008).</li>
<li>Lesterhuis, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Route+of+administration+modulates+the+induction+of+dendritic+cell+vaccine-induced+antigen-specific+T+cells+in+advanced+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Route of administration modulates the induction of dendritic cell vaccine-induced antigen-specific T cells in advanced melanoma patients.</a> Clin. Cancer Res. 17, 5725-5735 (2011).</li>
<li>Fadul, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+in+patients+with+newly+diagnosed+glioblastoma+multiforme+treated+with+intranodal+autologous+tumor+lysate-dendritic+cell+vaccination+after+radiation+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunother%22%5BJournal%5D)">Immune response in patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccination after radiation chemotherapy.</a> J. Immunother. 34, 382-389 (2011).</li>
<li>Eizenberg, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceptance+of+Intanza%28R%29+9+mug+intradermal+influenza+vaccine+in+routine+clinical+practice+in+Australia+and+Argentina%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Ther%22%5BJournal%5D)">Acceptance of Intanza(R) 9 mug intradermal influenza vaccine in routine clinical practice in Australia and Argentina.</a> Adv. Ther. 28, 640-649 (2011).</li>
<li>Durando, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adjuvants+and+alternative+routes+of+administration+towards+the+development+of+the+ideal+influenza+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Vaccin%22%5BJournal%5D)">Adjuvants and alternative routes of administration towards the development of the ideal influenza vaccine.</a> Hum. Vaccin. 7, 29-40 (2011).</li>
<li>Barth, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+trial+of+ex+vivo+CD40L+activation+of+a+dendritic+cell+vaccine+in+colorectal+cancer+patients%3A+tumor-specific+immune+responses+are+associated+with+improved+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A randomized trial of ex vivo CD40L activation of a dendritic cell vaccine in colorectal cancer patients: tumor-specific immune responses are associated with improved survival.</a> Clin. Cancer Res. 16, 5548-5556 (2010).</li>
<li>Schwaab, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+immunologic+effects+of+intranodal+autologous+tumor+lysate-dendritic+cell+vaccine+with+Aldesleukin+%28Interleukin+2%29+and+IFN-%7Balpha%7D2a+therapy+in+metastatic+renal+cell+carcinoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Clinical and immunologic effects of intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccine with Aldesleukin (Interleukin 2) and IFN-{alpha}2a therapy in metastatic renal cell carcinoma patients.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4986-4992 (2009).</li>
<li>Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Allergy+Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic immunotherapy.</a> Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 9, 537-543 (2009).</li>
<li>Catron, D. M., Itano, A. A., Pape, K. A., Mueller, D. L., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+first+50+hr+of+the+primary+immune+response+to+a+soluble+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Visualizing the first 50 hr of the primary immune response to a soluble antigen.</a> Immunity. 21, 341-347 (2004).</li>
<li>Itano, A. A., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+presentation+to+naive+CD4+T+cells+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen presentation to naive CD4 T cells in the lymph node.</a> Nat. Immunol. 4, 733-739 (2003).</li>
<li>Johansen, P., Mohanan, D., Martinez-Gomez, J. M., Kundig, T. M., Gander, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lympho-geographical+concepts+in+vaccine+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Lympho-geographical concepts in vaccine delivery.</a> J. Control Release. 148, 56-62 (2010).</li>
<li>Johansen, P., von Moos, S., Mohanan, D., Kundig, T. M., Senti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+routes+for+allergen+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Vacc.+Immunother%22%5BJournal%5D)">New routes for allergen immunotherapy.</a> Hum. Vacc. Immunother. 8, 1525-1533 (2012).</li>
<li>Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+immunotherapy%3A+from+the+rationale+to+human+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic immunotherapy: from the rationale to human applications.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 352, 71-84 (2011).</li>
<li>Duthie, M. S., Windish, H. P., Fox, C. B., Reed, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+defined+TLR+ligands+as+adjuvants+within+human+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Use of defined TLR ligands as adjuvants within human vaccines.</a> Immunol. Rev. 239, 178-196 (2011).</li>
<li>Ribas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-lymph+node+prime-boost+vaccination+against+Melan+A+and+tyrosinase+for+the+treatment+of+metastatic+melanoma%3A+results+of+a+phase+1+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Intra-lymph node prime-boost vaccination against Melan A and tyrosinase for the treatment of metastatic melanoma: results of a phase 1 clinical trial.</a> Clin. Cancer Res. 17, 2987-2996 (2011).</li>
<li>Bedrosian, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranodal+administration+of+peptide-pulsed+mature+dendritic+cell+vaccines+results+in+superior+CD8%2B+T-cell+function+in+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients.</a> J. Clin. Oncol. 21, 3826-3835 (2003).</li>
<li>Lesimple, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+by+various+routes+of+melanoma+antigen-associated+macrophages%3A+biodistribution+and+clinical+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol.+Immunother%22%5BJournal%5D)">Injection by various routes of melanoma antigen-associated macrophages: biodistribution and clinical effects.</a> Cancer Immunol. Immunother. 52, 438-444 (2003).</li>
<li>Brown, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-transduced+dendritic+cells+injected+into+skin+or+lymph+node+prime+potent+simian+immunodeficiency+virus-specific+T+cell+immunity+in+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-transduced dendritic cells injected into skin or lymph node prime potent simian immunodeficiency virus-specific T cell immunity in monkeys.</a> J. Immunol. 171, 6875-6882 (2003).</li>
<li>Fong, L., Brockstedt, D., Benike, C., Wu, L., Engleman, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+injected+via+different+routes+induce+immunity+in+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients.</a> J. Immunol. 166, 4254-4259 (2001).</li>
</ol>

TMK נקרא על שמו כממציא פטנטים העוסקים בטיפול החיסוני intralymphatic באדם. TMK היה יועץ מדעי וקיבל הוצאות נסיעה מImVisioN GmbH, Cytos ביוטכנולוגיה, חברת MannKind, ויש לי XBiotech ארה&quot;ב בע&quot;מ PJ שום עניין סכסוך לחשוף.

חיסונים וטיפול חיסוני Intralymphatic הוכחו כמתאימים לגירוי של שני תגובות נוגדנים ותגובות תאי T. כפי שמודגם במאמר וידאו זה, הליך intralymphatic של חיסון הוא שיטה מהירה וקלה להמרצת תגובה חיסונית חזקה בעכברים. מנתח מיומן יכול לבצע את ההליך ב3-4 דקות. המפגש יכול גם להיות משותף בין שני מנתחים שבו הוא בדרך כלל עושים הרדמה והתפירה והמנתח השני הוא עושה חתך וההזרקה. היעילות של ההליך היא יותר מפעיל תלוי מאשר שיטת חיסונים אחרת, במיוחד אם המנתח עדיין לא מאומן היטב. עם זאת, מפעיל מנוסה הוא מסו...

חיסונים בדרך כלל מוזרקים מתחת לעור או לשריר לגירוי של מערכת החיסונית. ההצלחה של הליך זה דורשת ניקוז יעיל של חיסון לבלוטות הלימפה שבו תאי המציגים אנטיגנים יכולים לקיים אינטראקציה עם לימפוציטים לדור של T-ותגובות B-cell. בנוסף, הכוח והסוג של תגובה החיסונית המושרית תלוי גם בצפיפות או התדירות של אינטראקציות כאלה, כמו גם את המיקרו עצמו, במיוחד את התוכן של ציטוקינים. כחלק קטן בלבד של חיסון המוזרק לרקמה היקפית מגיע לבלוטות לימפה, חיסונים של עכברים ובני אדם על ידי הזרקה ישירה של החיסון לבלוטות הלימפה, האתר היו תגובה חיסונית נוצרות, כבר בוצע. באדם, ההליך מונחה על ידי אולטרסאונד, הליך משמש גם לניהול סוכני הדמיה להדמיה ואבחון במערכת הלימפה. בעכברים, ההליך הוא פולשני. כאן, incisio קטן (5-10 מ&quot;מ)n מורכב באזור המפשעה של חיות הרדים 1, הבלוטות לימפה היא מקומית ומשותק עם מלקחיים, ונפח של 10-20 μl של החיסון מוזרק תחת שליטה חזותית; 10 μl משמש לזריקות הראשונות ובעכברים צעירים עם בלוטות לימפה קטנות, בעוד שניתן להזריק 20 μl לבלוטות הלימפה של מבוגר או עכברים כבר דרוכים, שיש לי בלוטות לימפה גדולות יותר. החתך יכול להיות סגור עם תפר אחד באמצעות תפרים כירורגית. לפי שיטה זו, עכברים שחוסנו עם פלסמיד דנ&quot;א 2,3, RNA שליח 4, פפטיד 1,3,5,6, חלבון 7-10, חלקיקי 11, חיידקי 12 כמו גם אדג&#39;ובנטים 7,13, ושיפור חזק של חיסון תגובות נגד כל הסוג של חיסונים כבר נצפו. שיטת intralymphatic של החיסון מתאימה במיוחד במקרים בהם חיסון קונבנציונלי מייצר חסינות בלתי מספיקה או שבו הסכום של חיסון זמין הוא מוגבל או very יקר. באדם, בשיטת intralymphatic של חיסון הוחל חולי אלרגיה 14,15 או לחולים עם הסרטן 16-21. למרות שהרעיון הנוכחי הוא ששיטת intralymphatic היא יותר פולשניים יותר מאשר בשיטות אחרות, כגון זריקות זריקות תוך שרירית ותת עורית, לתפיסת הכאב היא לא גבוהה יותר מאשר לאחר ניקור ורידי 15. צפוי כי חיסון intralymphatic יהפוך חלופי או משלימים לשיטות אחרות של חיסונים מניעתי וטיפוליים במיוחד. מאמר זה מתאר בפרטים כיצד ההליך של חיסון intralymphatic מבוצע בעכברים. כל ההליכים שתוארו, אושרו על ידי וטרינרית סוכנות Cantonal ציריך ומבוצעים על פי הנחיות פדרליות שוויצריים והנחיות על ההגנה על בעלי החיים המשמשים למטרות מדעיות.

<table><tbody><tr><td>קטמין (קטזול-100)</td><td>Graeub AG, שוויץ</td><td></td> חומרי <td>הרדמה</td></tr><tr><td>קסילזין (רומפון)</td><td>באייר, גרמניה</td><td></td><td>חומרי הרדמה</td></tr><tr><td>Viscotears ג'ל עיניים</td><td>נוברטיס, שוויץ</td><td></td><td>כדי למנוע מהעיניים להתייבש במהלך ההרדמה.</td></tr><tr><td>BD Micro-Fine 0.5 מ"ל</td><td>BD Medical, צרפת</td><td></td><td>29 גרם מזרקי אינסולין עם מחטים מחוברות לצמיתות</td></tr><tr><td>6-0 Dermalon Monofilament Nylon</td><td>Covidien, MA, ארה"ב</td><td></td><td>לתפרים (0.7 מטרי, 18 גרם, 45 ס"מ, כחול)</td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים, 4.5</td><td>בפולימד, שוויץ</td><td></td><td>לחתך והחזקה של בלוטת הלימפה</td></tr><tr><td>מספריים כירורגיות ישרות, 4.5</td><td>בפולימד, שוויץ</td><td></td><td>לחתך</td></tr><tr><td>מחזיק מחט, 5.5</td><td>בפולימד, שוויץ</td><td></td><td>לסגירת חתך עם תפר</td></tr></tbody></table>

intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

חיסונים בדרך כלל מוזרקים מתחת לעור או לשריר לגירוי של תגובות חיסון. ההצלחה של זה דורשת ניקוז יעיל של חיסון לבלוטות הלימפה שבו תאי המציגים אנטיגנים יכולים לקיים אינטראקציה עם לימפוציטים לדור של התגובות החיסונית רצתה. הכוח והסוג של תגובה החיסונית המושרית תלוי גם בצפיפות או התדירות של אינטראקציות, כמו גם את המיקרו, במיוחד התוכן של ציטוקינים. כמו שרק שבריר זעיר של חיסונים מוזרקים שולי מגיע לבלוטות הלימפה, חיסונים של עכברים ובני אדם שבוצעו על ידי הזרקה ישירה של חיסון לבלוטות לימפה מפשעתי, כלומר הזרקת intralymphatic. באדם, ההליך מונחה על ידי אולטרסאונד. בעכברים, חתך קטן (5-10 מ&quot;מ) הוא עשה באזור המפשעה של חיות מורדמות, הבלוטות לימפה היא מקומיות ומשותקת עם מלקחיים, ונפח של 10-20 μl של החיסון מוזרק תחת שליטה חזותית.החתך נסגר עם תפר אחד באמצעות תפרים כירורגית. עכברים שחוסנו עם פלסמיד דנ&quot;א, רנ&quot;א, פפטיד, חלבון, חלקיקים, חיידקים, כמו גם אדג&#39;ובנטים, ושיפור חזק של תגובות חיסוניים נגד כל הסוג של חיסונים נצפה. שיטת intralymphatic של החיסון מתאימה במיוחד במצבים שבם חיסון קונבנציונלי מייצר חסינות בלתי מספיקה או שבו הסכום של חיסון זמין מוגבל.

ההליך של זריקות intralymphatic בעכברים, למרות האופי כירורגית, הוא ישר קדימה ומהיר יחסית. אדם מאומן יכול לבצע את ההליך ב3-4 דקות. החתך שנסגר עם תפר אחד בדרך כלל מרפא בתוך יומיים (איור 1) חיסון או חיסון Intralymphatic שבוצע עם ה-mRNA, ה-DNA פלסמיד, פפטידים, חלבונים, וירוסים וחיידקים. איור 2 ממחיש את ייצור הנוגדנים לאחר חיסון עם החלבון A2 פוספוליפאז (PLA2), אלרגן ארס דבורה הגדול. עכ...

חיסון המניעה והטיפולי לעתים קרובות לא מצליח לעורר תגובה חיסונית חזקה בשל ניקוז שבוע של החיסון לבלוטות הלימפה ומעורבות עניות וכתוצאה מכך של תאים חיסוניים. על ידי הזרקה ישירה של חיסון לבלוטות הלימפה, הזרקת intralymphatic כביכול, יעילות חיסון ניתן לשפר מאוד וניתן להפחית מינוני חיסון.

Intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לעורר את התגובות החיסוניות של עכברים על ידי הזרקה ישירה של חיסון לקשרי הלימפה שלהם. פעולה זו מתבצעת תחילה על ידי הרדמת העכבר וביצוע חתך קטן באזור המפשעה. לאחר מכן, יש לאתר ולקבע את קשרי הלימפה המפשעתיים.השלב הסופי הוא הזרקת החיסון לקשרית הלימפה המפקירית. בסופו של דבר, ניתן להעריך מתן חיסון תוך-לימפטי על ידי מדידת התגובה אליו והשוואתה לשיטות הזרקה מסורתיות, כגון הזרקות תת-עוריות. בדרך כלל, אנשים שאינם מיומנים בשיטה זו מתקשים להגיע לקשרית הלימפה בעת הזרקת החיסון.ייתכן שיידרש תרגול כדי לתאם את קיבוע קשרי הלימפה, את ה पेशेת המחט ואת הזרקת החסון, מכיוון שהמחט עלולה לצאת בקלות מהמיקום המיועד ואז החסון יוזרק מחוץ לקשר הלימפה. כדי להתחיל, הרדימו את העכבר כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט המצורף. בהקדם האפשרי, מרחו משחה עינית בעיני העכבר כדי למנוע את התייבשות הקרניות.לאחר מכן, הנח את העכבר במצב שכיבה על הגב (supine) וצבט את רגלו בעזרת פינצטה כדי לוודא שהוא מורדם מספיק. אם לא נצפתה תגובה, הנח רקמה מעל ראשו של העכבר להגנה מהאור וחטא אזור מפשעה אחד עם 70% ethanol. לאחר מכן, הרם את הרגל האחורית וכופף את מפרק הירך לזווית של 90 מעלות.כעת, בעזרת פינצטת מיקרו-דיסקציה קמורה, הרימו את העור המחובר בכיפוף ובצעו חתך קטן דרך העור. לאחר מכן, הכניסו את קצה המספריים הסגורות לתוך החתך. פתחו את המספריים כדי ליצור פתח בקוטר של פחות מ-10 millimeters באזור המפשעה.זהו את קשרי הלימפה על ידי מראה כדורי ואפורי על רקע רקמת השומן הלבנה יותר שמסביב. השתמשו במזרק של 0.5 מיליליטר עם מחט היפודרמית בעלת שיפוע קצר (short bevel) במידה 28 כדי לשאוב 10 µL מהוואקצין להזרקה. כעת קבעו את קשרי הלימפה בין זרועותיהן של הפינצטה המעוקלת.לאחר מכן, כאשר הפהית פונה כלפי מעלה, הכניסו את מחט המזרק אל תוך קשרי הלימפה. ודאו כי כל הפהית חודרת לקשרי הלימפה. הזריקו את החסון וחפשו את הנפיחות המעידה על הזרקה מוצלחת.פתחו מארז של חוט תפירה כירורגי סטרילי באמצעות מחזיק מחטים. אחזו במחט התפירה בחלק המרוחק של גוף המחט. לאחר מכן, הדקו את מחזיק המחטים על ידי לחיצה עד שהשן הראשונה של הגלגלת ננעלת, ומשכו החוצה את החוט.בשלב הבא, אחזו בעור בצד אחד של החתך. הכניסו את המחט מהצד החיצוני של העור בקצה החתך. כעת שחררו את האחיזה בעור ואחזו בצדו השני של החתך באמצעות הפינצטה.החדירו את המחט מצדו הפנימי של העור, כ-שני עד שלושה מילימטרים מקצה החתך. תפסו שוב את המחט בעזרת הפינצטה ושחררו את תופס המחט.משכו את המחט עם החוט דרך העור, והשאירו אורך נוח של חוט מחוץ לנקודת הכניסה הראשונה של המחט. קשרו את הקשר הכירורגי המועדף. אם החתך גדול מ-10 millimeters.בצעו תפר שני כאשר החתך סגור מספיק. העבירו את העכבר למשטח חימום להתאוששות. עקבו אחר העכברים מדי יום לצורך בדיקת ריפוי הפצע וכן לזיהוי תסמינים קליניים אחרים, כגון זיהום.הזרקות תוך-לימפטיות אלו בעכברים הן פשוטות ומהירות יחסית. חתך הנסגר בתפר אחד מחלים בדרך כלל תוך יומיים. כאן, נמדדה ייצור נוגדנים לאחר חיסון עם החלבון phospholipase A two.האלרגן העיקרי של ארס הדבורה. הזרקה לשורש הלימפתי עוררה תגובות נוגדנים חזקות עם הזרקה של 0.01 µg של PLA A2, בעוד שהזרקה תת-עורית של 10 µg של PLA A2 הייתה נדרשת כדי להשיג תגובה הולמת.בניסוי זה, נעשה שימוש בחיסון תוך-לימפטי כדי לעורר תגובות של תאי T ציטוטוקסיים. הזרקה תת-עורית בודדת של G 33 לעכברי TCR 3 1 8 עוררה תגובת תאי T ציטוטוקסיים שמינה שמונה צפויה. תגובה זו הוגברה בכשששה סדרי גודל לאחר הזרקה תוך-לימפטית. כמו כן, נבחנו תפקודי תאי T CD4 בבדיקת אתגר גידולים.כאשר העכברים החסוניים הועמדו בפני אתגר של הזרקה תוך-ורידית של תאי גידול EL four סינגנאיים המבטאים NP 52, התפתח בעכברים לימפומה סיסטמית. חיסון דרך השורש הלימפטי הביא לזמני הישרדות ארוכים בהרבה מאשר חיסון דרך השורש התת-עורי. בבני אדם.מתן חיסון תוך-לימפטי מבוצע בעזרת אולטראסאונד על ידי איתור קשרי לימפה תת-עוריים. באופן מעניין, בבני אדם, סומנים חלבוניים רדיואקטיביים מעידים כי זריקות תת-עוריות מגיעות באופן דל לקשרי הלימפה, בעוד שזריקה תוך-לימפטית ישירה למערכת הלימפה מקלה על הובלה יעילה לתאי מערכת החיסון לצורך גירוי תגובה חיסונית. לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע הליך חיסון תוך-לימפטי זה במשך כשתי עד שלוש דקות לעכבר.

intralymphatic-immunotherapy-and-vaccination-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

אנו מדגימים לא ניתוחי מסירה של חומרי הבדיקה לריאות של העכברים הרדים דרך קנה הנשימה. שיטה זו מאפשרת חשיפה הריאות לפתוגנים, ציטוקינים חיידקים ווירוסים, נוגדנים, חרוזים, כימיקלים, או צבעים. בנוסף, אנו מתארים קציר ועיבוד של הריאות ניקוז ריאה בלוטות לימפה (LDLNs) עבור cytometry הזרימה.

לא ניתוחי Intratracheal החדרה של עכברים עם ניתוח ריאות וניקוז ריאות בלוטות הלימפה על ידי זרימת cytometry

סרטון זה מדגים שיטת הדמיה להמחשת אינטרפרון-גמא באתרו (IFN-γ) בטחול העכבר. בעקבות זיהום חיידקי והשראת הצטברות IFN-γ בתוך תאי T ותאי הרג טבעיים, הטחול נקצר מהעכבר. עם קבלת קטעי רקמות, immunostaining מבוצע כדי לדמיין IFN-γ בתוך התאים.

בדיקה לזיהוי הפרשת אינטרפרון-גמא באיברי הלימפה של מורין

סרטון זה מדגים בדיקת חיסון לגידול מבוסס תאים. עכבר, המוזרק תוך עורית עם תאי מלנומה B16-F10 להיווצרות גידול, מחוסן בתאי B16-F10 המפרישים ציטוקין Flt3L בסמוך לגידול המפותח. ה- Flt3L המופרש מהחיסון מקדם את ההבשלה וההתרבות של תאים דנדריטיים המציגים אנטיגנים סרטניים לתאי T בבלוטות הלימפה, ומעוררים תגובה חיסונית ממוקדת נגד הגידול.

השתלת גידול והזרקת חיסון נגד גידול במודל עכבר

בלוטות הלימפה הן הרקמות החיסוניות המתזמרות את התגובה החיסונית והן יעד קריטי לחיסונים. Biomaterials הועסקו כדי למקד טוב יותר בלוטות הלימפה כדי לשלוט על משלוח של אנטיגנים או אדג'ובנטים. מאמר זה מתאר טכניקה המשלבת רעיונות אלה כדי להזריק חלקיקי פולימר תואמים ביולוגית לתוך בלוטות הלימפה.

הזרקת בלוטות תוך-לימפתיות של חלקיקי פולימר מתכלים

העבודה הנוכחית ממחישה את הנוחות של שימוש באימונותרפיה תת-לשונית כדי להגביר את התגובה החיסונית המולדת בריאות ולהעניק הגנה מפני דלקת ריאות פנאומוקוקית חריפה בעכבר.

אימונותרפיה תת לשונית כחלופה ללהשרות הגנה מפני זיהומים בדרכי הנשימה חריפים

אנו מפרטים כאן את המתודולוגיה שננקטה כדי להשוות את יעילות ההגנה והתגובה החיסונית של הריאות הנגרמת על ידי חיסון תוך-אף ותת עורי עם BCG במודל עכבר. התוצאות שלנו מראות את היתרונות של חיסון ריאתי ומצביעות על תפקיד לתגובה בתיווך IL17 בהגנה הנגרמת על ידי חיסון.

מגן היעילות ריאתי החיסונית בתגובה תת עורי ואת אפי BCG מינהל עכברים

המתואר הוא הכנת חלקיקים liposomal antigenic והשימוש שלהם עירור תאי B הפעלה במבחנה וב -vivo. תגובות נוגדנים חזקים ועקביים הוביל את הפיתוח של מודל חדש של אלרגיה לבוטנים. הפרוטוקול עבור יצירת ליפוזומים antigenic ניתן להרחיב אנטיגנים שונים ומודלים חיסונים.

ליפוזומים antigenic לדור של נוגדנים מחלות ספציפיות

פרוטוקול שהוצג כאן מאפשרת אפיון ריאות ביות של לימפוציטים אנושיים הראשי תחת תנאים דלקתיים ויוו. יכול להיות עם תמונה, לכמת על-ידי קרינה פלואורסצנטית אור גיליונות מיקרוסקופיה של רקמת הריאה כימית שנוקה ריאתי חדירה של תאים חיסוניים האנושי הועבר adoptively במודל של עכברים של דלקת אלרגית.

הדמיה של לימפוציטים אנושיים יונת ריאות ב ניסיוני במודל Vivo של דלקת אלרגית בהתבסס על מיקרוסקופ אור גיליונות מתקדמות

הפרוטוקול מציג מודל אימונותרפיה לסרטן באמצעות חיסון מבוסס תאים עם מלנומה B16-F10 המבטאת Flt3L. פרוטוקול זה מדגים את ההליכים, כולל הכנת תאי גידול בתרבית, השתלת גידול, הקרנת תאים, מדידת צמיחת הגידול, בידוד תאי חיסון תוך-גופיים וניתוח ציטומטריה של זרימה.

מודל אימונותרפיה ניסיוני למלנומה באמצעות חיסון לגידול עם ציטוקין המטופויאטי

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הליך רדיולוגיה התערבותי שנקבע להזרקה תוך-תימית בעכברים כדי למנוע את הסיכון לניתוח פתוח ולשפר את הדיוק של זריקות מלעוריות עיוורות.

טכניקה זעיר פולשנית, מדויקת ויעילה להזרקה תוך-תימית בעכברים

המחקר מדגים את תפקידו של העור בוויסות התגובות החיסוניות בעכברים באמצעות חיסון אפיעורי (EC). חיסון EC עם אנטיגן חלבון יכול לדכא תגובות חיסוניות ברגישות יתר למגע או להפוך דיכוי המושרה על ידי העור בשילוב עם דפוסים מולקולריים הקשורים לפתוגן. חיסון EC מראה הבטחה כגישה יעילה ונטולת מחטים לאימונותרפיה.

מודל עכברי של אימונומודולציה המושרה אפיעורית

למדו שיטת הזרקת חיסונים ישירות לבלוטות הלימפה בעכברים לשיפור התגובה החיסונית. טכניקה זו מאפשרת יעילות גבוהה יותר בהשוואה להזרקות תת-עוריות מסורתיות.

Intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים

גלה סרטונים נוספים