הערכת שינויים בנדיפות כללית הרדמה רגישות של עכברים לאחר התערבות תרופתי מקומית או מערכתית

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעריך שינויים ברגישות להרדמה לאחר התערבות תרופתית. זה מושג על ידי בדיקה מדוקדקת של תאי החשיפה כדי להבטיח זרימת גז וטמפרטורה אחידים. השלב השני הוא הרגלת בעלי חיים לחדרים.

לאחר מכן, מתבצעת ההתערבות התרופתית המעניינת. השלב האחרון הוא להעריך שינויים ברגישות ההרדמה על ידי הערכת רפלקס הכתיבה של החיה בתגובה לחשיפה להרדמה. בסופו של דבר, מבחני רפלקס כתיבה משמשים כדי להראות הבדלים ברגישות להרדמה הנגרמים על ידי התערבויות תרופתיות ארוכות או קצרות טווח.

למרות שמערכת זו יכולה לספק תובנה לגבי שינויים ברגישות להרדמה בעכברים, ניתן להשתמש בה גם במגוון מינים כדי לחקור את ההשפעות של כל טיפול בשאיפה. מנגנון הבדיקה מורכב מ -24 תאים גליליים אקריליים שקופים, באורך 10 סנטימטרים ובקוטר חמישה סנטימטרים. גודל זה מתאים לעכבר בוגר טיפוסי במשקל 25 גרם.

לכל תא יש יציאה בכל קצה לכניסת ויציאת גז. קצה היציאה אטום באטמי גומי כדי להקל על הסרתו. להכנסת בעלי חיים, הרכיב כל תא על מתלה שיושב בתוך אמבט מים.

הנח את המתלה כך שרק החלק התחתון של התאים יהיה שקוע. תמיכה בקצה האחורי של החדר מספקת יציבות ושומרת על התאים אופקיים, ומבטיחה מגע אחיד של כל תא עם האמבטיה. לאחר חיבור מיכל חמצן לוופורייזר ומד זרימה עם צינורות פוליאתילן, פצלו את הצינור ל -25 נגדים בקוטר קטן באורך שווה.

זה מבטיח שזרימה שווה מועברת לכל תא כאשר הוא מחובר. לאחר מכן, חבר את קווי הוואקום היוצאים מכל תא בקצה הנגדי של כניסת הגז. קווי הוואקום משתלבים בסעפת כדי להתחבר לקו יניקה פנימי.

שסתום קופץ לאורך קו הוואקום הראשי מבטיח תנאי לחץ אטמוספרי בכל תא. לאחר שהכל מחובר, מלאו את האמבטיה במספיק מים כדי ליצור קשר מלא עם תחתית כל תא. הפעל את המשאבה כדי להזרים את המים ולשמור על טמפרטורה קבועה של 37 מעלות צלזיוס.

לפני שתמשיך בבדיקה, התאים נבדקים לאיתור נזילות וזרימת אוויר תקינה. ראשית, הגדר את החמצן לקצב של חמישה ליטר לדקה. טבלו כל תא מתחת למים וחפשו בועות או כניסת מים, שניהם אינדיקציה לדליפות.

החלף את כל התאים הדולפים לפני תחילת הניסוי. עבור כל תא, חבר מד זרימה של 500 מיליליטר לדקה בתור לפני החדר כדי לוודא שהזרימות מאוזנות על פני כל קו. כל תא שאינו מקבל את הזרימה הצפויה צריך לבדוק את הצינורות שלו לאיתור חסימות.

לבסוף, כייל את מנתח הסוכן כדי להבטיח קריאה של 0.0% איזוף פלואור כאשר 100% חמצן זורם שבוע לפני ההתרגלות. משדרים מושתלים כדי לעקוב אחר טמפרטורת הגוף במהלך הבדיקה. לאחר השגת עומק ההרדמה המתאים, יש לעקר את אזור הצוואר הגבי עם בטאדין.

לאחר מכן, השתמש במחט סטרילית כדי להזריק את משדרי הטמפרטורה באופן תת עורי בין השכמות. עקוב אחר אתר ההזרקה מדי יום לאיתור זיהום ונדידה של המשדר. ארבעה ימים לפני ההערכה הראשונה, כל חיות הניסוי מורגלות לתאים כדי להפחית את השפעות הלחץ עקב סביבה חדשה.

לשם כך, הכניסו חיה לכל תא עם 100% חמצן הזורם למשך שעתיים. יש לחזור על חשיפה זו מדי יום עד לבדיקה. לאחר ארבעה ימים של מגורים, יום הבדיקות מתחיל בחשיפה להתערבות התרופתית המעניינת.

התערבות זו עשויה להיות הזרקה סטריאוטקסית לאזור ספציפי במוח, זריקה תוך ורידית או זריקה תוך צפקית להתערבויות תרופתיות. עם משך פעולה ארוך, מתבצעת קביעה הדרגתית של רגישות ההרדמה. התחל את הבדיקה על ידי הכנסת כל בעל חיים לתאים נפרדים עם זרימת חמצן של 100% ברגע שכל בעלי החיים נמצאים במקומם.

הגדר את ריכוז הפלואור של איזוף ל-0.4% למשך 15 דקות. במהלך שתי הדקות האחרונות של תקופה זו, העריכו את רפלקס הכתיבה של כל בעל חיים על ידי גלגול עדין של החדר עד שהעכבר מונח על גבו. רפלקס הכתיבה נחשב שלם אם העכבר מסוגל להחזיר את כל כפותיו לרצפת החדר.

תוך שתי דקות, רשום את מצב רפלקס הכתיבה עבור כל עכבר וסרוק כל עכבר לנתוני טמפרטורה. לאחר מכן, הגדל את ריכוז הפלואור של איזוף בכ-0.05% למשך 15 דקות, והעריך את רפלקס הכתיבה כפי שהודגם קודם לכן. המשיכו להגדיל את ריכוז חומרי ההרדמה עד שכל בעלי החיים איבדו את רפלקס הכתיבה שלהם.

לחלופין, ניתן למדוד הופעת הרדמה על ידי חזרה על הערכת רפלקס הכתיבה ההדרגתית כאשר ריכוז ההרדמה מוטה כלפי מטה. כדי לסיים את הניסוי, כבה את האיזוף פלואור ושטוף את כל המערכת ב-100% חמצן למשך 15 דקות להתערבויות עם משך זמן קצר יותר. מבחן הזמן עד להופעה מתבצע.

לאחר הכנסת כל בעל חיים לתאים נפרדים עם זרימת חמצן של 100%, הגדר את ריכוז הפלואור ל-1.2% לאחר מספר דקות של חשיפה להרדמה, גלגל בעדינות כל תא עד שכל עכבר נשאר על גבו. אישור אובדן רפלקס הכתיבה, שמור על ריכוז האיזוף פלואור ב-1.2% למשך 30 דקות עד שעה בהתאם למשך הפעולה הצפוי של ההתערבות החריפה. לאחר כיבוי האיזוף, פלואור זורם 100% חמצן ומדוד את הזמן עד שכל בעל חיים מניח את כל ארבע הכפות על הרצפה.

רפלקס הכתיבה נחשב שלם כאשר החיה יכולה להניח את כל ארבע הכפות על הרצפה שלוש פעמים רצופות. כאן, רפלקס הכתיבה נבדק שבוע לאחר הזרקת חומצה בוטנית לגרעין הגחון לפני הניתוח. נגע באזור זה במוח נחזה להפחית את הרגישות להרדמה.

עם זאת, לא נמצאו הבדלים משמעותיים ברגישות להרדמה מדורגת לאינדוקציה או להופעה. בדוגמה זו, בדיקת זמן היציאה בוצעה מיד לאחר הזרקת מיקרו חומצה בוטנית דו-צדדית I. כאשר הוזרקו ל-VLPO, הייתה היפנוזה ממושכת באופן ניכר בהשוואה לזריקות מכיוון שהמחיצה המדיאלית הסמוכה והרכב הזריקו בקרות.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להעריך את רגישות ההרדמה באמצעות בדיקת האינדוקציה המדורגת או מבחן זמן היציאה תוך הקפדה על חשיפה של כל בעל חיים לזרימות גז וטמפרטורות זהות.