A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

Rupesh Kanchi Ravi; Mahdieh Khosroheidari; Johanna K. DiStefano

doi:10.3791/51158

JoVE Journal
Medicine

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Medicine

A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

שיטת ממטרים השתנה לבודד השתן Exosomes

Full Text

18,102 Views

05:05 min

January 16, 2015

DOI: 10.3791/51158-v

Rupesh Kanchi Ravi¹, Mahdieh Khosroheidari¹, Johanna K. DiStefano¹

¹Diabetes, Cardiovascular and Metabolic Diseases Division,Translational Genomics Research Institute (TGen)

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

כתב יד זה מתאר פרוטוקול לבידוד אקסוזומים משתן אנושי באמצעות טכניקת משקעים שונה.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לתכנן שיטת משקעים אקסוזומית שונה המציעה אלטרנטיבה מהירה, ניתנת להרחבה ויעילה לבידוד אקסוזומים מהשתן. זה מושג על ידי הסרת תאים מתים גדולים ופסולת תאים מדגימת השתן על ידי צנטריפוגה, והחטט המכיל את אקסוזומי השתן מועבר לצינור טרי. בשלב השני, הגלולה מומסת בתמיסת בידוד המכילה DTT כדי להסיר חלבון נפילת סוס TAM.

לאחר צנטריפוגה נוספת, הסופרנטנט נטול ה-TP מודגר עם מגיב TC מהיר אקסו למשך הלילה כדי לזרז את האקסוזומים למחרת. הדגימות שטופלו במגיב TC המהיר של אקסו עוברות צנטריפוגה בפעם האחרונה כדי להשיג את גלולת האקסוזום. בסופו של דבר, ניתן לבצע תהליכים במורד הזרם כגון כתם מערבי ו-QPCR בזמן אמת על האקסוזומים כדי לזהות את הסמנים הביולוגיים המעניינים.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos