Name: ריכוז Itraconazole מופחת ומשכים מצליחים בטיפול Dendrobatidis Batrachochytrium זיהום בדו (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: למד פרוטוקול טיפול מותאם ב-itraconazole לזיהום Batrachochytrium dendrobatidis בדו-חיים. גלה כיצד ריכוז מופחת ומשך קצר יותר מבטלים את הזיהום תוך צמצום תופעות לוואי ושיפור רווחת בעלי החיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אני רוצה להודות לCL ריצ&#39;רדס-זאוואצקי לעזרת המשגה תכנון הניסוי וסיוע עם חומרים, א Pessier לעזרת הקמת משטר טיפול ונתיחה לאחר מות ניתוחים, MWh Chatfield, MJ Robak, ק טסקר וד &#39;לנגר לעזרה ב מעבדה ותמיכה ומ &#39;מקפאדן ופ הארלו בגן החיות Taronga לשימוש במרחב שלהם במהלך צילומים. הפרויקט מומן בחלקו על ידי מחלקת לואיזיאנה של חיות הבר ודיג באמצעות מענק ועדת החינוך הסביבתי לואיזיאנה העניק ללוס אנג&#39;לס Brannelly ועל ידי חיים טכנולוגיים.

אישור אתיקה: מחקר זה והשיטות שלה אושרו על ידי הוועדה של אוניברסיטת טוליין שימוש בבעלי חיים ובטיפול (פרוטוקול לא 0407.). 1. בדיקות לזיהום Bd <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניקוי עבור BD <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים ספוגית עם מקלון צמר גפן סטרילי חמש פעמים בventrum, חמש פעמים בכל ירך, מכל צד, וכל איבר בסכום כולל של 45 שבץ. בניקוי הוא שיטה לא פולשנית של דגימה עבור BD על עור של דוחי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לסובב את ספוגית בזמן ובין שבץ על מנת להבטיח את הכמות הגדולה ביותר של ה-DNA שנאספה בספוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מטליות חנות ב1.5 מיליליטר microtubes ב -20 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפקת DNA וassay qPCR <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמצית ה-DNA הגנומי מהמטליות באמצעות ערכת בידוד DNA זמינה מסחרי, בהתאם להוראות לרקמות בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתח את ה-DNA שחולץ באמצעות זמן אמת PCR (qPCR) הבאה בויל <eמ &#39;&gt; אח&#39; 17, בשינויים הבאים.: </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל דגימות מיצוי DNA 1:10 עם מים כפולים deionized. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 0.7 μl של אלבומין בסרום שור (BSA) על מנת למנוע עיכוב ה-PCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כולל שליטה פנימית חיובית בכל דגימה כדי להבטיח עיכוב PCR לא משפיע על תוצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות לרוץ עם ביקורת חיובית ושלילית ושורה של סטנדרטים דילול להעריך עומס zoospore (זיהום). </li></ol></li></ol> 2. חיסון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות Bd <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מרק tryptone ידי הוספת tryptone 10 גרם לאוסמוזה ההפוכה או 1 ליטר מים deionized, autoclaved (121 מעלות צלזיוס במשך 40 דקות) ונותנת לו להתקרר. ברגע שהתקרר ל23 מעלות צלזיוס, להוסיף 1 מיליליטר פניצילין, סטרפטומיצין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדול זן BD (JEL411 מג&#39; Longcore, מבודד מGuabal, פנמה ממור Phyllomedusa) במרק tryptone במשך שבעה ימים ב23 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את bרוט התרבות לtryptone וצלחות אגר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפוך את הצלחות, להוסיף 10 tryptone גרם ו10 אגר גרם לאוסמוזה ההפוכה או 1 ליטר מים deionized וחיטוי (121 מעלות צלזיוס במשך 40 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שתערובת autoclaved הוא מגניב מספיק כדי לגעת, אבל, לפני שהוא נקרש לשפוך לתוך צלחות פטרי, 1/4-1/3 מלאים, בזרימה למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר אגר נקרש והתקררתי לחלוטין, להוסיף 0.5 מיליליטר מרק Bd לכל צלחת ולהתפשט באופן שווה סביב הצלחת. לאפשר לו להתייבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הצלחות מחוסנת עם zoospores BD, צלחות חותם עם Parafilm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר צלחות לדגירה על 23 מעלות צלזיוס במשך חמישה עד שבעה ימים. בדוק zoospore תנועה כדי להבטיח את הכדאיות לפני החיסון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות מבול לפתרון חיסון zoospore <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חמישה עד שבעה הימים של הדגירה Bd וצמיחה, להציף כל צלחת עם 5 מיליליטר של מים ברז בגילים ולאפשר zoospores להיכנס לתקשורת ל10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את suspe zoosporension לתוך מיכל נייד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעריך ריכוז zoospore עם hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל תערובת לריכוז של 1 x 10 6 ל3 מיליליטר עם מי ברז בגילים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן חיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב50 מיליליטר מכלים נפרדים, לחסן כל חיה על ידי שפיכת 3 תערובת הבידוד מיליליטר מעל ventrum. אפשר לבידוד נוסף כדי לטפטף לתוך הבסיס של מיכל החיסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל בעל חיים יישארו במכל חיסון ל24 שעות כדי להבטיח זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 24 שעות של חיסון, להחזיר חיות לTerraria חיטוי הבודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר זיהום לבנות במשך שבועיים. לאשר זיהום עם ספוגית ותוצאות qPCR, ולהתחיל בטיפול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור פקדים BD-שליליים, צלחות אגר מבול BD-חופשי עם 5 מיליליטר בגילי מים ברז, ולחסן מדומה בעלי החיים משתמשים באותן השיטות כאמור לעיל. </li></ol></li></ol> 3. טיפול משטר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תכשיריםמחדש אמבטיה טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 2.50 מיליליטר itraconazole מימיים (1% אוראלי פתרון Sporanox) לפתרון 1 של L אמפיבי רינגר (itraconazole 0.0025% - ריכוז הטיפול היעיל הנמוך ביותר). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתכון של דוחי רינגר פתרון: אוסמוזה ההפוכה או 1 ליטר מים deionized, נתרן כלורי 6.6 גרם, 0.15 אשלגן כלורי גרם, 0.15 כלוריד הסידן גרם, ו0.2 סודיום ביקרבונט גרם. פתרון החיטוי (C ° 121 ל40 דקות) ולהתקרר לטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ל0.01% ריכוז טיפול itraconazole, להוסיף itraconazole 10.00 מיליליטר מימיים (1% אוראלי פתרון Sporanox) לפתרון של 1 L אמפיבי רינגר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ל0.005% ריכוז טיפול itraconazole, להוסיף 5.00 מיליליטר itraconazole מימיים (1% אוראלי פתרון Sporanox) לפתרון של 1 L אמפיבי רינגר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור פקדים BD-חיוביים ו-BD-שליליים, לרחוץ בעלי חיים בפתרון של אמפיבי רינגר ללא itraconazole. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיפול &lt;ol&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח דו חיים בודדים ב50 מיליליטר מכולות לחטא עם 35 מיליליטר של פתרון הטיפול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי החיים להבטיח מכוסים במלואן במשך חמש דקות על ידי בעדינות מתערבל מיכל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר חיות לTerraria חיטוי. חזור על פעולה במשך שישה ימים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבטיח את הצלחה של טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי החיים מבחן לזיהום Bd על טיפול היום מתחילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים מבחן לזיהום Bd שבוע לאחר סיום טיפול, ופעם בשבוע במשך ארבעה שבועות כדי להבטיח זיהום יש פינה. </li></ol></li></ol> 4. BD כBiohazard <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא שבועי Terraria בודד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתרחץ מכולות Terraria וטיפול ב10% אמבטיה פתרון אקונומיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את כל מיכל מולבן פעמיים עם מים זורמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר מכולות להתייבש במשך 24 שעות לפני שימוש חוזר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללבוש כפפות nitrile נקיות בעת טיפול בבעלי חיים על מנת למנוע זיהום צולבשל הפתוגן Bd. שינוי כפפות בין טיפול בכל בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את כל הפסולת נוזלית לפני סילוק על ידי הבאת הפתרון לאקונומיקת 10%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי כל הפסולת מוצקה כי הוא עלול להיות חשוף לBd לפני הסילוק. </li></ol>

<ol><li>Stuart, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Status+and+trends+of+amphibian+declines+and+extinctions+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Status and trends of amphibian declines and extinctions worldwide.</a> Science. 306 (5702), 1783-1786 (2004).</li>
<li>Skerratt, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+chytridiomycosis+has+caused+the+rapid+global+decline+and+extinction+of+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22EcoHealth%22%5BJournal%5D)">Spread of chytridiomycosis has caused the rapid global decline and extinction of frogs.</a> EcoHealth. 4, 125-134 (2007).</li>
<li>Wake, D. B., Vredenburg, V. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colloquium+paper%3A+are+we+in+the+midst+of+the+sixth+mass+extinction%3F+A+view+from+the+world+of+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Colloquium paper: are we in the midst of the sixth mass extinction? A view from the world of amphibians.</a> PNAS. 105, 11466-11473 (2008).</li>
<li>Voyles, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrolyte+depletion+and+osmotic+imbalance+in+amphibians+with+chytridiomycosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Electrolyte depletion and osmotic imbalance in amphibians with chytridiomycosis.</a> Dis. Aquat. Org. 77 (2), 113-118 (2007).</li>
<li>Ramsey, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibian+immune+defenses+against+Batrachochytrium+dendrobatidis%3A+A+war+between+host+and+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Amphibian immune defenses against Batrachochytrium dendrobatidis: A war between host and pathogen.</a> , (2011).</li>
<li>McMahon, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chytrid+fungus+Batrachochytrium+dendrobatidis+has+nonamphibian+hosts+and+releases+chemicals+that+cause+pathology+in+the+absence+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis has nonamphibian hosts and releases chemicals that cause pathology in the absence of infection.</a> PNAS. 110 (1), 210-215 (2013).</li>
<li>Berger, L., Speare, R., Pessier, A., Voyles, J., Skerratt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+chytridiomycosis+requires+urgent+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Treatment of chytridiomycosis requires urgent clinical trials.</a> Dis. Aquat. Org. 92, 165-174 (2010).</li>
<li>Chatfield, M. W. H., Richards-Zawacki, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+temperature+as+a+treatment+for+Batrachochytrium+dendrobatidis+infection+in+captive+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Elevated temperature as a treatment for Batrachochytrium dendrobatidis infection in captive frogs.</a> Dis. Aquat. Org. 94 (3), 235-238 (2011).</li>
<li>Karbowski, M., et al. Free radical-induced megamitochondria formation and apoptosis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKarbowski%2C+M+%22Free+Rad.+Biol.+Med%22">Free Rad. Biol. Med</a>. 26 (98), 396-409 (1999).</li>
<li>Bishop, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elimination+of+the+amphibian+chytrid+fungus+Batrachochytrium+dendrobatidis+by+Archey%27s+frog+Leiopelma+archeyi%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Elimination of the amphibian chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis by Archey's frog Leiopelma archeyi.</a> Dis. Aquat. Org. 84 (1), 9-15 (2009).</li>
<li>Pessier, A. P., Mendelson, J. A Manual For Control of Infectious Diseases in Amphibian Survival Assurance Colonies and Reintroduction Programs. , IUCN/SSC Conservation Breeding Specialist Group. Apple Valley, MN. (2009).</li>
<li>Page, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloramphenicol+1.+Hazards+of+use+and+the+current+regulatory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Aus.+Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Chloramphenicol 1. Hazards of use and the current regulatory environment.</a> Aus. Vet. J. 68 (1), 1-2 (1991).</li>
<li>Yoon, H. -J., Seo, M. H., Kim, J. -K. Pharmaceutical formulations for itraconazole. , (2005).</li>
<li>Garner, T. W. J., Garcia, G., Carroll, B., Fisher, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+itraconazole+to+clean+Batrachochytrium+dendrobatidis+infection%2C+and+subsequent+depigmentation+of+Alytes+muletensis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Using itraconazole to clean Batrachochytrium dendrobatidis infection, and subsequent depigmentation of Alytes muletensis tadpoles.</a> Dis. Aquat. Org. 83, 257-260 (2009).</li>
<li>Brannelly, L. A., Richards-Zawacki, C. L., Pessier, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+with+itraconazole+as+a+treatment+for+chytrid+fungal+infections+in+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Clinical trials with itraconazole as a treatment for chytrid fungal infections in amphibians.</a> Dis. Aquat. Org. 101 (2), 95-104 (2012).</li>
<li>Jones, M. E. B., Paddock, D., Bender, L., Allen, J. L., Schrenzel, M. S., Pessier, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+chytridiomycosis+with+reduced-dose+itraconazole%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Treatment of chytridiomycosis with reduced-dose itraconazole.</a> Dis. Aquat. Org. 99 (3), 243-249 (2012).</li>
<li>Boyle, D. G., Boyle, D. B., Olsen, V., Morgan, J. A. T., Hyatt, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantitative+detection+of+chytridiomycosis+%28Batrachochytrium+dendrobatidis%29+in+amphibian+samples+using+real-time+Taqman+PCR+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Rapid quantitative detection of chytridiomycosis (Batrachochytrium dendrobatidis) in amphibian samples using real-time Taqman PCR assay.</a> Dis. Aquat. Org. 60 (2), 141-148 (2004).</li>
<li>Martel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+safe+antifungal+treatment+protocol+to+eliminate+Batrachochytrium+dendrobatidis+from+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Developing a safe antifungal treatment protocol to eliminate Batrachochytrium dendrobatidis from amphibians.</a> Med. Mycol. 49 (2), 143-149 (2011).</li>
<li>Bowerman, J., Rombough, C., Weinstock, S. R., Padgett-Flohr, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terbinafine+hydrochloride+in+ethanol+effectively+clears+Batrachochytrium+dendrobatidis+in+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Herpetol.+Med.+Surg%22%5BJournal%5D)">Terbinafine hydrochloride in ethanol effectively clears Batrachochytrium dendrobatidis in amphibians.</a> J. Herpetol. Med. Surg. 20 (1), 24-29 (2010).</li>
<li>Young, S., Speare, R., Berger, L., Skerratt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloramphenicol+with+fluid+and+electrolyte+therapy+cures+terminally+ill+green+tree+frogs+%28Litoria+caerulea%29+with+chytridiomycosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Zoo+Wildlife+Med%22%5BJournal%5D)">Chloramphenicol with fluid and electrolyte therapy cures terminally ill green tree frogs (Litoria caerulea) with chytridiomycosis.</a> J. Zoo Wildlife Med. 43 (2), 330-337 (2012).</li>
</ol>

המחבר מצהיר שום אינטרסים כלכליים מתחרים.

שימוש בפרוטוקול זה היינו יכול בצורה בטוחה ויעיל להפחית את מינון טיפול ובזמן טיפול itraconazole עבור BD ב דו חיים. המינון הנמוך ביותר לטיפול והזמן (0.0025% במשך שישה ימים) היה טיפול מוצלח לט הנגוע subclinically nebulifer. היעילות של שני מינונים נמוכים יותר וזמן טיפול להדגים את הצורך בניסויים קליניים לטיפול לטיפולי זיהום BD, כפי שיש כיום אין טיפולים יעילים ובטוחים לשימוש לכל המינים ומעמדות גיל של דו חיים. <p class="jove_content" style=";text-a...

דו חיים כיום חווים את הירידה הגדולה ביותר במגוון הביולוגי של כל מיני חוליות 1. Chytridiomycosis, מחלת עור הנגרמת על ידי פטריית dendrobatidis chytrid Batrachochytrium הפתוגן (BD), היא אחד מהגורמים העיקריים לירידות הדרמטיות הללו 2 BD הוא פתוגן הגרוע ביותר על שיא בגרימת אובדן מגוון ביולוגי:. זה מדביק מעל 600 מינים של דו חיים ויש לו גרם לירידות בלמעלה -300 מינים, מתוכם רבים ככל 200 מינים הפכו בסכנת הכחדה או שנכחד 2,3. פטריית chytrid דוחי לא לארח ספציפית ולא ברור מה איכויות של המארח לאפשר לזיהום Bd להתקדם ולגרום למחלות קשות. Chytridiomycosis גורם למוות ע&quot;י שיבוש תעלות יונים בעור, וכתוצאה מכך אובדן אלקטרוליטים ואי ספיקת לב 4. כמו כן, supernatant Bd (לא מכיל zoospores BD) גורם לתגובה חיסונית בראשנים 5 leadinחוקרים גרם להאמין Bd מייצר רעיל תוצר 6. מכיוון שמינים רבים הם במהירות בירידה, מושבות אבטחה בשבי ותוכניות רבייה הן אמצעי שימור חשוב, ועשויות להיות חבל ההצלה רק לכמה מינים. הקמת ותחזוקה של מושבות ללא מחלה היא אתגר עבור מתקני דוחי ניהול. השיטות כימותרפיות הנוכחיות לטיפול בדלקות BD, למרות יעיל, יכולות להזיק לבעלי החיים שטופלו, ואין שיטת טיפול אחת הייתה מוצלחת בין זנים וסוגים של דו חיים גיל 7. מספר מחקרים קליניים של טיפולים לזיהום Bd בוצעו 7. שלוש שיטות הנפוצות ביותר של טיפול הן טיפול בחום, כלורמפניקול וitraconazole. טיפול בחום הוא אפשרות טיפול nonchemotherapeutic שנראה שיש מעט תופעות לוואי, ניתן להשתמש בם בשלבי חייו מרובים, והוא generברית יעילה. בניסוי טיפול, Chatfield וריצ&#39;רדס-זאוואצקי 8 מצאו כי 96% מבעלי החיים שטופלו פינו זיהומים לאחר ששוכן ב30 מעלות צלזיוס במשך 10 ימים. למרות שהמשפט הזה לא היה 100% מוצלח, זה מספק בסיס לאחרים כדי להעריך טיפול בחום למיניהם. טיפול בחום, אם כי יעיל למינים רבים, אינו מעשי עבור מינים רבים אלפיני שלא יכול להישאר בטמפרטורות גבוהות לזמן ממושך. כלורמפניקול, אנטיבקטריאלי, שמש בהצלחה לטיפול בBd במינים רבים, ומעכב את צמיחת פטרייה במבחנה. כאנטיבקטריאלי, כלורמפניקול לא לתקוף את הפטרייה באופן ספציפי, אבל כבר ידוע לגרום לאפופטוזיס בתאי אוקריוטים 9. זה כבר העריך כי טיפול כלורמפניקול גורם אפופטוזיס בעור, הרג המנבגים תאיים, למרות שמנגנון פעולה המדויק אינו ידוע. למרות שאף ניסוי קליני כבר נערך, ולכןמינון וזמן טיפול לא הוערכו, פרוטוקולי טיפול הנוכחיים בדרך כלל דורשים טבילה לשבועות עד ארבעה שבועות 10,11, מה שהופך את הטיפול הזה מעשי עבור דו חיים יבשתיים. כלורמפניקול גם היה מוגבל במדינות מסוימות לשימוש וטרינרים כי חשיפה של בני אדם נמצאת קשורה לצורה נדירה של אנמיה אפלסטית 12. Itraconazole, פטריות azole, היא בשימוש נרחב ביותר לטיפול בזיהום בBd דו חיים בשבי. הפרוטוקול הנפוץ ביותר הוא חיות רחצה בפתרון itraconazole 0.01% במשך חמש דקות ביום במשך 11 ימים רצופים. פרוטוקול זה נגזר מסטנדרטים המשמשים לניהול של יונקים, ו, בעוד יעיל לדו חיים, הוא אינו מבוסס על ניסויים קליניים בדו חיים 11,13. פרוטוקול זה יכול לגרום לתופעות לוואי שליליות במינים מסוימים, במיוחד בסוג רנא ובראשנים וmetamorphs האחרון 11.טיפול ראשן היה מוצלח באמצעות ריכוז נמוך בהרבה (0.0005%) של itraconazole, אבל היה קשור עם depigmentation 14. ריכוז זהה זה trialed על metamorphs האחרון ונמצא כי הוא נכשל בטיפול בזיהום 15. מכיוון שקיימת סיכון לתופעות לוואי שלילי עם טיפול itraconazole, כמה מתרגלים השתמשו מחצית הריכוז הרגיל (0.005%) ל11 ימים רצופים ומצאו את זה כדי להיות מוצלח בריפוי דלקות Bd 16. המחקר הנוכחי הוא סיכום של ניסוי קליני לטיפול באמצעות itraconazole לטיפול בזיהום Bd 15. הפרוטוקול מתאר ניסיון למצוא את הזמן וטיפול במינון הנמוך ביותר שהוא גם בטוח ויעיל לטיפול בבעלי חיים נגועים Bd עם itraconazole. בעלי חיים המשמשים במחקר זה היו metamorphs האחרון של קרפדות חוף מפרץ, Incilius nebulifer.

<table><tbody><tr><td>0.1% איטרקונזול מימי, Sporonox</td><td>Janssen Pharmaceutica Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640-500</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-1</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP510-100</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328-500</td><td></td></tr><tr><td>צמר גפן סטרילי</td><td>ציוד רפואי וחוטים</td><td>MW113</td><td></td></tr><tr><td>1.5 מ"ל מיקרו-צינורות</td><td>Sarstedt</td><td>73.703.217</td><td></td></tr><tr><td>Qiagen DNEasy ערכת דם ורקמות</td><td>Qiagen</td><td>69581</td><td></td></tr><tr><td>7500 בזמן אמת PCR</td><td>Applied Biosystems</td><td>4351104</td><td></td></tr><tr><td>VIC IPC</td><td>Applied Biosystems</td><td>4308323</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Applied Biosystems</td><td>AM2618</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Invitrogen</td><td>30391023</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Invitrogen</td><td>Q10029</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>CLS430589</td><td></td></tr></tbody></table>

ריכוז itraconazole מופחת ומשכים מצליחים בטיפול<em&gt; dendrobatidis batrachochytrium</em&gt; זיהום בדו

Reduced Itraconazole Concentration and Durations Are Successful in Treating Batrachochytrium dendrobatidis Infection in Amphibians

דו חיים חווים את הירידה הגדולה ביותר מכל סוג חוליות וגורם מוביל לירידות אלה הוא הפתוגן פטרייתי, dendrobatidis Batrachochytrium (BD), מה שגורם chytridiomycosis המחלה. מושבות הבטחה השבויה חשובות בעולם עבור מיני דוחי מאוימים ועשויות להיות חבל ההצלה רק לאלה באיום קריטי של הכחדה. שמירה על מושבות ללא מחלה היא בראש סדר עדיפויות של מנהלים בשבי, עדיין טיפולים יעילים ובטוחים לכל מינים ובכל שלבי חיים לא זוהו. הטיפול הכימותרפי בשימוש נרחב ביותר הוא itraconazole, אם כי המינון נפוץ יכול להזיק לאנשים מסוימים ומינים. ביצענו ניסוי טיפול קליני להעריך האם מינון נמוך יותר ובטוח יותר, אך אפקטיבי של itraconazole אפשר היה לציין לרפא זיהומי Bd. מצאנו כי על ידי הפחתת ריכוז הטיפול .01-.0025% וצמצום משך הטיפול מ11ימים -6 5 אמבטיות דקות, צפרדעים יכולים להירפא של זיהום Bd עם תופעות לוואי ותמותה הקשורים לטיפול פחות פחות.

טיפול Itraconazole נחשב מוצלח אם כל בעלי החיים היו BD-שליליים ארבעה שבועות לאחר הטיפול הסתיים. לפני הטיפול החל, כשבועיים לאחר החיסון, כל בעלי החיים מחוסן-BD היו נגועים, עם מטען ממוצע zoospore של 1,121.7 (± 17.34), בעוד ארבעה שבועות לאחר הטיפול הסתיים, חיות בקרת BD-החיוביות היו עומס zoospore ממוצע של 16,765.12 ( ± 14643.08). הטיפול בIncilius nebulifer (n = 15) היה מוצלח באמצעות ...

זיהום dendrobatidis Batrachochytrium בדו חיים ניתן למנוע באמצעות ריכוז מופחת (0.0025%) ומשך זמן קצר יותר (אמבטיות של חמש דקות לשישה ימים) של itraconazole מ משמשים בדרך כלל. תמותה ותופעות לוואי שלילי פחות פחות נצפו באמצעות פרוטוקול טיפול שונה זה.

ריכוז Itraconazole מופחת ומשכים מצליחים בטיפול<em&gt; Dendrobatidis Batrachochytrium</em&gt; זיהום בדו

Amphibians are experiencing the greatest decline of any vertebrate class and a leading cause of these declines is a fungal pathogen, Batrachochytrium ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לטפל בדו-מינתיים שנדבקו בפטריית ה-Kitt של הדו-מינתיים, Bera key tridium, dendro, he או BD, באמצעות כימותרפיה אנטי-פטרייתית מסוג triazole. מטרה זו מושגת תחילה על ידי גידול תרביתי של BD והדבקת בעלי חיים עם הפתוגן הפטרייתי. השלב השני הוא בדיקת בעלי החיים באמצעות הפקת DNA וביצוע QPCR על swabs של העור כדי לוודא זיהום ב-BD.בשלב הבא, מטפלים בבעלי החיים הזוהים על ידי רחצה בתמיסת econazole בריכוז 0.0025% למשך חמש דקות ביום, במשך שישה ימים. השלב הסופי הוא ניטור מצב הזיהום של בעלי החיים המטופלים באמצעות ביצוע אנליזת QPCR מדגיסות (swaps) של העור למשך ארבעה שבועות לפחות לאחר סיום הטיפול כדי להבטיח טיפול מוצלח בבעל החיים; הליך זה מדגים כי ריכוז מופחת וזמן טיפול קצר יותר של נוגד הפטריות itraconazole יעילים לטיפול בבעלי חיים שנדבקו ב-bd. היתרון המרכזי בשימוש במשטר טיפולי זה על פני מינון הטיפול המומלץ, שהוא תמיסת itraconazole בריכוז 0.01% למשך 11 ימים, הוא שריכוז מופחת של רבע מהמינון המומלץ וקיצור זמן הטיפול לשישה ימים עדיין יעילים לריפוי זיהום BD, ובמקביל ממזערים את תופעות הלוואי השליליות הנובעות מהשימוש במינון הטיפולי המומלץ.לאחר דגירה של ה-BD במצע צמיחה מסוג tritone broth כפי שפורט בפרוטוקול הטקסט ובדיקת תנועת נבגי ה-Zo, הצפו כל צלחת בחמישה מיליליטרים של מי ברז מיושני

reduced-itraconazole-concentration-durations-are-successful-treating

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מחקר זה כלל שיטות לחשוף תופעות על שורת דגי המודל הבאה שינוי בהרכב קהילות Microbiome עור בטן באמצעות אנטיביוטיקה.

בחינת פנוטיפים מארח ב<em&gt; Affinis Gambusia</em&gt; בעקבות טיפול אנטיביוטי

מודלים מערכתיים ומקומיים של זיהום דג זברה לנגיף שפעת אנושי A. באמצעות מודל זיהום מערכתי, ניתן להשתמש בדג הזברה לבדיקת תרופות אנטי-ויראליות. באמצעות מודל זיהום מקומי, ניתן להשתמש בדג הזברה כדי לאפיין את תגובות תאי החיסון של המארח.

באמצעות מודלי דג זברה של נגיף שפעת A האדם למסך תרופות אנטי ולאפיין מארח תגובות תא חיסון

פתחנו מערכת הקרנה מודולרית תפוקה גבוהה לגילוי תרכובות רומן נגד שחפת Mycobacterium, מיקוד תאי ב-המרק גובר חיידקים כמו גם רעילה לתאים נגד התא המארח היונק.

מערכת לסינון יעילות Cytotoxicity של מעכבי מיקוד תאי<em&gt; שחפת Mycobacterium</em

פרוטוקול זה מתאר את השימוש sump מטליות וניתוח בוצה של דג זברה מערכות, מה שמוביל גילוי מוגברת בהשוואה לשימוש הבלעדי של זקיפים לזהות פתוגנים כגון Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp.  Pseudocapillaria tomentosa. מערכת לפקח tomentosa פ ביצים בהסגר גם מוצע.

הקרנת איכות הסביבה של Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. Pseudocapillaria tomentosa במערכות דג זברה

מאמר זה מסכם את תכונות התכנון ואת האפקטיביות של מערכות הטיפול המטפלות במי גשמים עירוניים ובזרמת השקיה כדי להסיר חומרי הדברה ומזהמים אחרים הקשורים לרעילות מימית.

מערכות טיפול צמחי להסרת מזהמים המשויכים לרעלת פני המים בחקלאות ובנוף העירוני

אנחנו לכמת מוות תאי אפידרמיס של צפרדעים עם צ'יטרידיומיקוסיס באמצעות שתי שיטות. ראשית, אנו משתמשים dUTP טרנספראז בתיווך מסוף ניק labelling-סוף (TUNEL) בחיי עיר היסטולוגיה כדי לקבוע את ההבדלים בין בעלי חיים נגועים קליניות, נגוע. שנית, אנו מבצעים ניתוח סדרות זמן של אפופטוזיס על זיהום באמצעות ניתוח חלבון קספאז 3/7.

שימוש dUTP בתיווך טרנספראז מסוף מבחני סיום ניק-תוויות (TUNEL) ו קספאז 3/7 כדי למדוד מות תאים באפידרמיס של צפרדעים עם צ'יטרידיומיקוסיס

המחקר של ביולוגיה אמפיבי מספק מידע רב ערך על תהליכים הרבייה, פיסיולוגיים, embryological והתפתחותיים הנוהגים אורגניזמים של קבוצות מטקתיות רבות. כאן, אנו מציגים מדריך מקיף על מתודולוגיות שונות, כי ניתן להשתמש כדי ללמוד שליטה בשחלות וניטור דו-חיים.

טכניקות הרבייה ניטור ובקרה של השחלות

פרוטוקול מבוסס צלחת מיקרוטיטר 96-well המשתמש ב-2,3-ביס(2-מתוקסי-4-ניטרו-5-סולפופניל)-5-קרבוקסילייד-2H-tetrazolium (XTT) מתואר כאן, כדי לחקור את השפעת הנוגדנים על ביופילמים שנוצרו על ידי C. tropicalis. ניתן להשתמש בפרוטוקול in vitro זה כדי לבדוק את ההשפעה של תרכובות אנטי-פטרייתיות חדשות פוטנציאליות על הפעילות המטבולית של תאי מין קנדידה בביופילמים.

בדיקת הפחתה מסיסה המבוססת על טטרזוליום להערכת השפעת נוגדנים על ביופילמים של קנדידה טרופיקליס

זוהי שיטה לדגימה ובידוד של חיידקים הניתנים לתרבות מהמיקרוביוטה העורית של סלמנדרות פלתודונטיות אירופאיות (סוג Speleomantes). כאן, אנו מציגים פרוטוקול לדגימת עור סלמנדרה עם ספוגיות ועיבודם באמצעות גישות ניתנות לתרבות. אנו מתארים דגימה, בידוד והקמה של תרבית אקסנית עם אפיון זן חיידקים.

בידוד וזיהוי זני חיידקים מעורם של דו-חיים יבשתיים

תכנון חלבונים כרוך בבניית רצפי חומצות אמינו ושילוב מוטיבים ספציפיים ליצירת גרסאות פונקציונליות. גישה זו חיונית לפיתוח פפטידים אנטי-מיקרוביאליים (AMPs) כדי להילחם בפתוגנים עמידים לאנטיביוטיקה. מאמר זה מציג הליך לבניית חלבונים באמצעות כלים ביואינפורמטיים שונים.

יישום של I TASSER, trRosetta, UCSF Chimera, שרת HADDOCK ו-HEX loria עבור De Novo ו-In Silico Design של חלבונים

פרוטוקול זה מספק מדריך אופטימלי ומפורט לשימוש בפלנרית Schmidtea mediterranea כמערכת מודל לחקר אינטראקציות בין מארח לפתוגן במהלך זיהום פטרייתי. השיטה מתבססת על ההליך הקודם להדבקת פלאנרים בפתוגן הפטרייה האנושי Candida albicans, ומספקת הנחיות מפורטות לשיפור השחזוריות והעקביות הניסיונית.

פרוטוקול אופטימלי לזיהום קנדידה אלביקנס בשמידטאה ים-תיכון לחקר פתוגנזה פטרייתית והגנה על המאכסן

למד פרוטוקול טיפול מותאם ב-itraconazole לזיהום Batrachochytrium dendrobatidis בדו-חיים. גלה כיצד ריכוז מופחת ומשך קצר יותר מבטלים את הזיהום תוך צמצום תופעות לוואי ושיפור רווחת בעלי החיים.

ריכוז Itraconazole מופחת ומשכים מצליחים בטיפול

גלה סרטונים נוספים