הערכה של סובלנות hyperalgesia ומשככי כאבים הנגרם מורפיום בעכברים באמצעות שיטות nociceptive תרמיים ומכאניות
July 29th, 2014
אנו מתארים פרוטוקול לבחון את התפתחותם של hyperalgesia מושרה אופיואידים וסובלנות בעכברים. המבוסס על המדידה של תגובות nociceptive תרמיים ומכאניות של בעלי חיים תמימים וטופל במורפיום, היא מאפשרת לכמת את העלייה ברגישות לכאב (hyperalgesia) ולהפחית בכאבים (סובלנות) הקשורים לממשל אופיום כרוני.
המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לצפות בהתפתחות של היפרלגזיה הנגרמת על ידי אופיואידים וסבילות למשככי כאבים בעכברים. זה מושג על ידי מדידת התגובות התרמיות והמכניות של עכברים נאיביים לאחר מתן מורפיום לאורך מהלך זמן ביום האפס כצעד שני. סף הכאב נמדד מדי יום לפני מתן מורפיום ביום השביעי.
ההשפעה המשכך כאבים של מורפיום נמדדת שוב לאורך זמן כדי לחשוף את התפתחות הסבילות למשככי כאבים. מתקבלות תוצאות המראות עלייה ברגישות לכאב כמו גם התפתחות של סבילות למשככי כאבים. לאחר מתן מורפיום חוזר.
למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי התפתחות רגישות יתר לכאב וסבילות למשככי כאבים אצל עכברים מרובים. לאחר טיפול כרוני באופיאטים, ניתן ליישם אותו גם על אופיאטים אחרים או עכברים מהונדסים גנטית. מדגים את ההליך יהיה סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי כדי למזער שיכוך כאבים הנגרם על ידי לחץ, עכברים מטופלים במשך חמש דקות בכל יום ומרגילים אותם עד שהם נכנסים בחופשיות לתוך המרסן.
לאחר ההתרגלות, התחל את בדיקת טבילת הזנב על ידי הגדרת התרמוסטט ל-48 מעלות צלזיוס. הכנס בעדינות את העכבר לתוך המסנן. לאחר ריסון כראוי, טבלו את שני שליש הקצה הבולט של זנבו באמבט המים והתחילו את הכרונומטר.
הבחנה בין תגובה נוסיספטיבית לתגובה נוסיספטיבית היא מרכיב מרכזי בהליך זה. בוררות ופרקטיקה נכונה הם קריטיים להצלחה. עקוב אחר תנועת החיה ועצור את הכרונומטר.
ברגע שהעכבר מושך את זנבו מהמים החמים, רשום את חביון הנסיגה. החזירו את העכבר לכלוב שלו ובדקו את החיה הבאה עד סוף הסדרה תוך שמירה על אותו סדר. חזור על מדידות התגובה הנוסיספטיבית פעמיים נוספות.
חביון התגובה הנוסיספטיבית בשניות עבור כל עכבר נקבע כערך הממוצע עבור שלוש קביעות עוקבות. לבדיקת לחץ הזנב, ראשית הכנס בעדינות את העכבר לתוך המסנן ומקם את זנבו מתחת לקצה הקונטי של ה-JMetter האנאלי. לאחר שנמצא במקום, לחץ על מתג כף הרגל כדי להפעיל לחץ הולך וגובר באופן אחיד על החלק הפרוקסימלי של הזנב.
בסימן הראשון לתגובה נוסיספטיבית, משוך את הקצה. תגובות נוסיספטיביות עשויות לכלול חריקות או נסיגה של הזנב. רשום את הכוח הנוכחי בגרמים שמעורר את התגובה הנוסיספטיבית.
חזור על מדד זה על החלקים החציוניים והדיסטליים של הזנב של אותו עכבר במרווחים של 32, החזר את החיה לכלוב הבית שלה וחזור על שלבים אלה עד שכל העכברים ייבדקו. ראשית, הגדירו שתי קבוצות של בעלי חיים עם ערכי נוסיספציה ממוצעים דומים. לאחר מכן, מדוד ורשום את משקל הגוף של כל בעל חיים.
לאחר הקמת קבוצות המלח והמורפיום, הכינו תמיסת מורפיום במי מלח פיזיולוגיים למתן תת עורי. מדוד את חביון התגובה הנוסיספטיבית הן במבחני טבילת הזנב והן במבחני לחץ הזנב, ורשום אותם כזמן 0.0 עבור כל קבוצה. לאחר מכן, הזריק מורפיום או מי מלח לכל בעל חיים בהתאם לקבוצה שלו.
לאחר 30 דקות, התחל לתעד תגובות נוסיספטיביות בכל בעל חיים. שימו לב היטב לערכי החיתוך מכיוון שסביר להניח שעכברים לא יגיבו לגירויים המזיקים בנקודת זמן מוקדמת זו. בהיעדר תגובה נוסיספטיבית, נעשה שימוש בניתוק של 25 שניות כדי למנוע נזק לרקמות תוך שמירה על אותו סדר בדיקה.
חזור על המדידות הנוסיספטיביות כל 30 דקות עד 3.5 שעות לאחר ההזרקה לטיפול כרוני במורפיום. השג ערכי היום הראשון על ידי מדידת התגובה הנוסיספטיבית של בעלי החיים ב-TIT וב-TPT כפי שהודגם קודם לכן. הכינו תמיסת מורפיום טרייה.
יש לתת זריקות מורפיום או מי מלח בהתאם למשימה הקבוצתית ולאפשר לבעלי החיים לנוח עד למחרת. למחרת, מדדו תגובות נוסיספטיביות ב-TIT וב-TPT לפני מתן סבב זריקות שני. חזור על שלבים אלה כל יום במשך שישה ימים.
ביום השביעי, העריכו משככי כאבים הנגרמת על ידי מורפיום. על פי פרדיגמת מהלך הזמן שהודגמה מוקדם יותר במבחן טבילת הזנב, ההשפעה המשכך כאבים המקסימלית של מורפיום הושגה לאחר 30 דקות. עם זאת, במבחן לחץ הזנב, ההשפעה המקסימלית הושגה לאחר 60 דקות בהשוואה לבקרות שהוזרקו במי מלח.
תוצאות אלה מראות כי זריקות מורפיום יומיות לאורך תקופת טיפול של שבעה ימים גרמו לירידה משמעותית ומתקדמת של ערכי הכאב הבסיסיים התרמיים והמכניים. לאחר טיפול כרוני, הערך הנוסיספטיבי הבסיסי בעכברים שטופלו במורפיום היה נמוך משמעותית מזה של עכברי ביקורת שהוזרקו במי מלח. בעקבות מורפיום חריף, התגובה הנוציספטיבית של הקבוצה שטופלה במורפיום כרוני עלתה באופן משמעותי, אך עלתה רק במעט על הערך הנוציספטיבי הבסיסי של הביקורת שהוזרקה במי מלח.
עכברים שנמדדו ב-30 דקות ב-TIT ו-TPT וב-60 דקות ב-TIT כאן ערכי סף נוסיספטיביים שנמדדו 30 דקות לאחר הזרקת מי מלח או מורפיום משורטטים ליום האפס והיום השביעי לאחר ההתפתחות. טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום חקר הכאב לחקור את ההשפעה של התערבות פרמקולוגית גנטית בהתפתחות רגישות יתר לכאב וסבילות למשככי כאבים הנגרמת על ידי מתן מורפיום כרוני.
סקירה כללית
המחקר הנוכחי מציג פרוטוקול לחקר היפרלגזיה הנגרמת על ידי אופיואידים ואת סובלנות למשככי כאבים בעכברים. על ידי מדידת תגובות נוצפטיביות תרמיות ומכניות, הפרוטוקול מכמת את השינויים ברגישות לכאב ובאנלגזיה לאחר מתן כרוני של מורפין.
רכיבי מחקר עיקריים
תחום המדע
- מדעי המוח
- פרמקולוגיה
- מדעי ההתנהגות
רקע
- היפרלגזיה הנגרמת על ידי אופיואידים היא תופעה בה חולים חווים רגישות מוגברת לכאב בעקבות טיפול באופיואידים.
- סובלנות למשככי כאבים מתרחשת כאשר האפקטיביות של האופיואידים פוחתת לאורך זמן.
- הבנת מנגנונים אלו חיונית לשיפור אסטרטגיות ניהול הכאב.
- מחקר זה משתמש במודל של עכברים כדי לחקור את ההשפעות הללו בסביבה מבוקרת.
מטרת המחקר
- לצפות בהתפתחות היפרלגזיה הנגרמת על ידי אופיואידים בעכברים.
- למדוד את סובלנות למשככי הכאבים שנובעת ממתן כרוני של מורפין.
- לספק תובנות לגבי מנגנונים של רגישות יתר לכאב.
שיטות בהן נעשה שימוש
- העכברים טופלו במורפין ותגובות הנוצפטיביות שלהם נמדדו באמצעות בדיקות טבילה של הזנב ולחץ על הזנב.
- המדידות נלקחו מדי יום על פני תקופה של שבעה ימים כדי להעריך שינויים ברגישות לכאב.
- שני הספים התרמיים והמכניים הוערכו כדי לכמת את ההיפרלגזיה והסובלנות.
- התוצאות הושוו בין קבוצות בקרה שטופלו במורפין לבין קבוצות בקרה שקיבלו תמיסת מלח.
תוצאות עיקריות
- טיפול כרוני במורפין הביא לעלייה משמעותית ברגישות לכאב.
- סובלנות למשככי כאבים נצפתה, עם יעילות מופחתת של המורפין לאורך זמן.
- המדידות הראו הורדה הדרגתית של הספים הנוצפטיביים בעכברים שטופלו במורפין.
- הממצאים תומכים בהשערה כי שימוש כרוני באופיואידים מוביל להיפרלגזיה ולסובלנות.
מסקנות
- המחקר מספק שיטה אמינה להערכת היפרלגזיה הנגרמת על ידי אופיואידים וסובלנות למשככי כאבים בעכברים.
- התוצאות מדגישות את הצורך בניהול זהיר של טיפולים באופיואידים כדי למנוע רגישות מוגברת לכאב.
- הפרוטוקול יכול להתאים למחקר נוסף על אופיואידים אחרים או שינויים גנטיים.
