Name: הקלטת אלקטרו מ דרוזופילה Labellar טעם Sensilla (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-26T23:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: למדו כיצד למדוד תגובות פוטנציאל פעולה מנוירוני טעם בלבריים בדרוזופילה באמצעות הקלטה אלקטרופיזיולוגית. שיטה זו מאפשרת חקר עיבוד חושי של טעם ומנגנוני התנהגות אכילה בזבובי הפירות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי 1F31DC012985 NRSA predoctoral מענק (לRD) ועל ידי מענקי NIH כדי JC ברצוננו להודות לד&quot;ר Linnea וייס על הערות מועילות על כתב היד, ד&quot;ר יוסף ריאן לדמויות לעזרה באיסוף, וד&quot;ר פרדריק מריון-סקר לייעוץ טכני מועיל. אנחנו רוצים גם להכיר בהערות מועילות של ארבע ביקורות.

<ol><li>Glendinning, J. I., Jerud, A., Reinherz, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hungry+caterpillar%3A+an+analysis+of+how+carbohydrates+stimulate+feeding+in+Manduca+sexta%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+biology%22%5BJournal%5D)">The hungry caterpillar: an analysis of how carbohydrates stimulate feeding in Manduca sexta.</a> The Journal of experimental biology. 210, 3054-3067 (2007).</li>
<li>Yarmolinsky, D. A., Zuker, C. S., Ryba, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+sense+about+taste%3A+from+mammals+to+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Common sense about taste: from mammals to insects.</a> Cell. 139, 234-244 (2009).</li>
<li>Thistle, R., Cameron, P., Ghorayshi, A., Dennison, L., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+chemoreceptors+mediate+male-male+repulsion+and+male-female+attraction+during+Drosophila+courtship%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Contact chemoreceptors mediate male-male repulsion and male-female attraction during Drosophila courtship.</a> Cell. 149, 1140-1151 (2012).</li>
<li>Toda, H., Zhao, X., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+female+aphrodisiac+pheromone+activates+ppk23%28%2B%29+sensory+neurons+to+elicit+male+courtship+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+reports%22%5BJournal%5D)">The Drosophila female aphrodisiac pheromone activates ppk23(+) sensory neurons to elicit male courtship behavior.</a> Cell reports. 1, 599-607 (2012).</li>
<li>Lu, B., LaMora, A., Sun, Y., Welsh, M. J., Ben-Shahar, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ppk23-Dependent+chemosensory+functions+contribute+to+courtship+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">ppk23-Dependent chemosensory functions contribute to courtship behavior in Drosophila melanogaster.</a> PLoS Genet. 8, e1002587(2012).</li>
<li>Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organization+of+the+chemosensory+system+in+Drosophila+melanogaster%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+tissue+research%22%5BJournal%5D)">The organization of the chemosensory system in Drosophila melanogaster: a review.</a> Cell and tissue research. 275, 3-26 (1994).</li>
<li>Hiroi, M., Marion-Poll, F., Tanimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiated+response+to+sugars+among+labellar+chemosensilla+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Zoological+Science%22%5BJournal%5D)">Differentiated response to sugars among labellar chemosensilla in Drosophila.</a> Zoological Science. 19, 1009-1018 (2002).</li>
<li>Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Molecular+and+Cellular+Basis+of+Bitter+Taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The Molecular and Cellular Basis of Bitter Taste in Drosophila.</a> Neuron. 69, 258-272 (2011).</li>
<li>Falk, R., Bleiser-Avivi, N., Atidia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labellar+taste+organs+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">Labellar taste organs of Drosophila melanogaster.</a> Journal of Morphology. 150, 327-341 (1976).</li>
<li>Hiroi, M., Meunier, N., Marion-Poll, F., Tanimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+antagonistic+gustatory+receptor+neurons+responding+to+sweet-salty+and+bitter+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Two antagonistic gustatory receptor neurons responding to sweet-salty and bitter taste in Drosophila.</a> Journal of neurobiology. 61, 333-342 (2004).</li>
<li>Clyne, P. J., Warr, C. G., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candidate+taste+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y.%29%22%5BJournal%5D)">Candidate taste receptors in Drosophila.</a> Science (New York, N.Y.). 287, 1830-1834 (2000).</li>
<li>Cameron, P., Hiroi, M., Ngai, J., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+water+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for water taste in Drosophila.</a> Nature. 465, 91-95 (2010).</li>
<li>Croset, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ancient+protostome+origin+of+chemosensory+ionotropic+glutamate+receptors+and+the+evolution+of+insect+taste+and+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Ancient protostome origin of chemosensory ionotropic glutamate receptors and the evolution of insect taste and olfaction.</a> PLoS Genet. 6, e1001064(2010).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development (Cambridge, England). 118, 401-415 (1993).</li>
<li>Parks, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+genetics%22%5BJournal%5D)">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nature genetics. 36, 288-292 (2004).</li>
<li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+a+primary+chemoreceptor+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y.%29%22%5BJournal%5D)">Physiology of a primary chemoreceptor unit.</a> Science (New York, N.Y.). 122, 417-418 (1955).</li>
<li>Dahanukar, A., Lei, Y. T., Kwon, J. Y., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+Gr+genes+underlie+sugar+reception+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Two Gr genes underlie sugar reception in Drosophila.</a> Neuron. 56, 503-516 (2007).</li>
<li>Lee, Y., Kim, S. H., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Avoiding+DEET+through+insect+gustatory+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Avoiding DEET through insect gustatory receptors.</a> Neuron. 67, 555-561 (2010).</li>
<li>Descoins, C., Marion-Poll, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+responses+of+gustatory+sensilla+of+Mamestra+brassicae+%28Lepidoptera%2C+Noctuidae%29+larvae+to+three+ecdysteroids%3A+ecdysone%2C+20-hydroxyecdysone+and+ponasterone%5BTitle%5D)+AND+%22A.+J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological responses of gustatory sensilla of Mamestra brassicae (Lepidoptera, Noctuidae) larvae to three ecdysteroids: ecdysone, 20-hydroxyecdysone and ponasterone.</a> A. J Insect Physiol. 45, 871-876 (1999).</li>
<li>Glendinning, J. I., Davis, A., Ramaswamy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+different+taste+cells+and+signaling+pathways+to+the+discrimination+of+%22bitter%22+taste+stimuli+by+an+insect%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Contribution of different taste cells and signaling pathways to the discrimination of "bitter" taste stimuli by an insect.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 7281-7287 (2002).</li>
<li>Sanford, J. L., Shields, V. D., Dickens, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gustatory+receptor+neuron+responds+to+DEET+and+other+insect+repellents+in+the+yellow-fever+mosquito%2C+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Die+Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Gustatory receptor neuron responds to DEET and other insect repellents in the yellow-fever mosquito, Aedes aegypti.</a> Die Naturwissenschaften. 100, 269-273 (2013).</li>
<li>Merivee, E., Must, A., Milius, M., Luik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+identification+of+the+sugar+cell+in+antennal+taste+sensilla+of+the+predatory+ground+beetle+Pterostichus+aethiops%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological identification of the sugar cell in antennal taste sensilla of the predatory ground beetle Pterostichus aethiops.</a> J Insect Physiol. 53, 377-384 (2007).</li>
<li>Popescu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+and+central+projections+of+gustatory+receptor+neurons+on+the+antenna+of+the+noctuid+moth+Spodoptera+littoralis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+comparative+physiology.+A%2C+Neuroethology%22%5BJournal%5D)">Function and central projections of gustatory receptor neurons on the antenna of the noctuid moth Spodoptera littoralis.</a> Journal of comparative physiology. A, Neuroethology. 199, 403-416 (2013).</li>
<li>Marion-Poll, F., Der Pers, J. V. an <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Un-filtered+recordings+from+insect+taste+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Entomologia+Experimentalis+et+Applicata%22%5BJournal%5D)">Un-filtered recordings from insect taste sensilla.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 80, 113-115 (1996).</li>
<li>Wieczorek, H., Wolff, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+labellar+sugar+receptor+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A.+Neuroethol+Sens.+Neural+Behav.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The labellar sugar receptor of Drosophila.</a> J. Comp. Physiol. A. Neuroethol Sens. Neural Behav. Physiol. 164, 825-834 (1989).</li>
<li>Morita, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+spike+potentials+in+contact+chemosensory+hairs+of+insects.+III.+D.C.+stimulation+and+generator+potential+of+labellar+chemoreceptor+of+calliphora%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cellular+and+comparative+physiology%22%5BJournal%5D)">Initiation of spike potentials in contact chemosensory hairs of insects. III. D.C. stimulation and generator potential of labellar chemoreceptor of calliphora.</a> Journal of cellular and comparative physiology. 54, 189-204 (1959).</li>
<li>Lacaille, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inhibitory+sex+pheromone+tastes+bitter+for+Drosophila+males%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An inhibitory sex pheromone tastes bitter for Drosophila males.</a> PLoS One. 2, e661(2007).</li>
<li>Benton, R., Dahanukar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+recording+from+Drosophila+taste+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+protocols%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological recording from Drosophila taste sensilla.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2011, 839-850 (2011).</li>
<li>Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+sensillum+recordings+in+the+insects+Drosophila+melanogaster+and+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Single sensillum recordings in the insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae.</a> J. Vis. Exp. , e1725(2010).</li>
<li>Axon Instruments. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+Axon+Guide+for+Electrophysiology+%26+Biophysics+Laboratory+Techniques%22">The Axon Guide for Electrophysiology & Biophysics Laboratory Techniques</a>. , (1993).</li>
<li>Fujishiro, N., Kijima, H., Morita, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impulse+frequency+and+action+potential+amplitude+in+labellar+chemosensory+neurones+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+insect+physiology%22%5BJournal%5D)">Impulse frequency and action potential amplitude in labellar chemosensory neurones of Drosophila melanogaster.</a> Journal of insect physiology. 30, 317-325 (1984).</li>
<li>Marion-Poll, F., Tobin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Software+filter+for+detecting+spikes+superimposed+on+a+fluctuating+baseline%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Software filter for detecting spikes superimposed on a fluctuating baseline.</a> Journal of neuroscience. 37, 1-6 (1991).</li>
<li>Meunier, N., Marion-Poll, F., Lansky, P., Rospars, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+the+individual+firing+frequencies+of+two+neurons+recorded+with+a+single+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Estimation of the individual firing frequencies of two neurons recorded with a single electrode.</a> Chem Senses. 28, 671-679 (2003).</li>
<li>Marion-Poll Lab Website. , Available from: 
 
 	 <a target="_blank" href="http://taste.versailles.inra.fr/fred">http://taste.versailles.inra.fr/fred</a> (2013).</li>
<li>Meunier, N., Marion-Poll, F., Rospars, J. P., Tanimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+coding+of+bitter+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Peripheral coding of bitter taste in Drosophila.</a> Journal of neurobiology. 56, 139-152 (2003).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

sensilla Labellar להשתנות בקלות ההקלטה, בשל הבדלים במורפולוגיה וארגון אנטומיים. לפעמים Sensillum אינו מגיב לכל tastants, אפילו אחד, כי ידוע כדי לעורר תגובה חיובית. התדירות שבה זה קורה משתנה בהתאם לסוג Sensillum. sensilla L הם הכי מגיב באופן עקבי וקלים יחסית לגשת בשל אורכם. באופן כללי, sensilla S מגיבים באופן עקבי, אבל האורך הקצר שלהם והעמדה בlabellum ליצור קשר טוב מאתגר. אני sensilla ניתן לגשת בקלות רבה יותר, תלוי בזווית של ההכנה, עם זאת, הם לעתים קרובות יותר שאינם מגיבים. על כל ה...

חוש הטעם מאפשר חרקים כדי לזהות מגוון רחב של כימיקלים מסיסים וממלא תפקיד חשוב בקבלה של חומר מזין, או הדחייה של אחד מזיק או רעיל. טעם הוא חשב גם לשחק תפקיד בבחירת בן זוג, באמצעות זיהוי של פרומונים 1-5. תפקידים חשובים ומגוונים אלה הפכו את מערכת טעם החרקים יעד משכנע של חקירה כיצד מערכות חושיות לתרגם אותות סביבתיים לתפוקות התנהגותי רלוונטיות. היחידה העיקרית של מערכת טעם melanogaster דרוזופילה היא שיער הטעם, או Sensillum. מולקולות להיכנס Sensillum דרך נקבובית ב2,6 קצהו. Sensilla נמצא על labellum, הרגליים, מרווח הכנף, והלוע 6. על labellum, המספר והמיקום של sensilla הוא סטריאוטיפי. ישנם שלושה סוגים מורפולוגיים של sensilla מבוססים על אורך: הארוך (L), בינוני (אני), וקצר (S<html> ) Sensilla 7,8. כל Sensillum מכיל או שניים (אני מסוג) או ארבעה (L-ו-S-type) נוירונים קולט התעורר אצלם (GRNs) 9. GRNs שונה מגיב לסוגים שונים של גירויי טעם: מריר, סוכר, מלח וosmolarity 7,10 ולהביע תת שונה של קולטנים התעוררו אצל 8,11-13. רק אני וsensilla S-הסוג להכיל GRNs המר מגיב 8,10. פרויקט GRNs לגנגליון subesophageal (SOG) וההפעלה שלהם על ידי מולקולות טעם מועבר למערכת העצבים המרכזית גבוהה יותר לפענוח, וכתוצאה מכך תגובה התנהגותית 6. המספר הקטן יחסית של תאי עצב ורמת המוכנות לניתוח מולקולרי והתנהגותיות להפוך את המערכת לטעם דרוזופילה מודל מצוין לחקירה של מערכות התעוררו אצלם באופן כללי. קלות היחסית שבי המערכת ניתן להשפיע באמצעות מערכת ביטוי GAL4-כטב&quot;מ מוטציה גנטית או משמשת גם ככלי רב ערך 14,15. ontent &quot;&gt; בגלל sensilla אלה בולטים מפני שטח של labellum, הם עושים מטרות מעולים לאלקטרופיזיולוגיה. ירי GRNs ניתן לנטר באמצעות הקלטה תאית. מבחינה היסטורית, שיטת ההקלטה בצד הקיר, אשר משתמשת באלקטרודת זכוכית מוכנסת לתוך Sensillum להקליט פעילות עצבית, 26 כבר בשימוש. עם זאת, שיטה זו היא מאתגרת מבחינה טכנית לביצוע, וקשה להקליט במשך זמן רב מהכנה. שיטת טיפ ההקלטה, המודדת את התגובה של נוירונים עם אלקטרודה ש בו זמנית מספק tastant, הפכה מאז את שיטת הבחירה 9,16. זה נוצל כדי לחקור את מערכת הטעם של melanogaster דרוזופילה 8,10,17,18 כמו גם מספר מיני חרקים האחרים 19-23. יש לו כבר הקל באופן משמעותי על ידי הפיתוח של מגבר tastePROBE, שהתגבר על אחד החסרונות העיקריים של שיטת טיפ ההקלטה ידי פיצוי עבורההבדל הגדול בין פוטנציאל אלקטרודה ההשוואתית וSensillum החרקים, המאפשר לפוטנציאל פעולת GRN שיירשם בלי הגברה או סינון 24 מוגזמות. התפתחות חשובה נוספת הייתה השימוש בציטרט tricholine כאלקטרוליט הקלטת 25. TCC מדכא תגובות מGRN osmolarity רגיש ולא לעורר את GRN מלח רגיש, מה שהופך את תגובות שנוצרו על ידי tastants המר וסוכר הרבה יותר קל לנתח 25. כאן אנו מתארים כיצד הקלטת קצה sensilla labellar דרוזופילה מתבצעת כיום במעבדה קרלסון. פרוטוקול זה יסביר כיצד להקים מתקן מתאים אלקטרופיזיולוגיה, כיצד להכין את הזבוב, וכיצד לבצע הקלטות טעם. אנו מציגים גם כמה נתונים נציג מתקבלים על ידי הקלטה מתת קבוצות של sensilla דרוזופילה, כמו גם כמה מבעיות נפוצות ופתרונות אפשריים שעשויים להיות נתקלו בעת שימוש זהטכניקה.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ זום סטריאו</td><td>אולימפוס</td><td>SZX12 DFPLFL1.6x עיניות PF: WHN10x-H/22</td><td>מסוגל להגדיל ~150X עם מעמד לשולחן למרחק עבודה ארוך מערכות</td></tr><tr><td>קינטיות</td><td>שולחן נגד רטט</td><td>ספסל Mate2210</td><td></td></tr><tr><td>מיקרומניפולטורים</td><td>Narishige</td><td>NMN-21</td><td></td></tr><tr><td>מעמדים מגנטיים</td><td>ENCO</td><td>דגם #625-0930</td><td></td></tr><tr><td>התייחסות מחזיק אלקטרודה</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>ESP/W-F10N</td><td>ניתן להרכבה על פיפטה סרולוגית של 5 מ"ל לטווח מורחב</td></tr><tr>מכשירי <td>דיוק עולמיים</td><td>של חוטי כסף</td><td>AGW1510</td><td>קוטר 0.3-0.5 מ"מ</td></tr><tr><td>מעמד</td><td></td><td></td> רטרט <td></td></tr><tr><td>גנרי יציאה צינור</td><td></td><td></td> פלסטיק <td>גנרי, קוטר 1 ס"מ</td></tr><tr><td>צינורות פלסטיק גמישים</td><td>Nalgene</td><td>8000-0060</td><td>דרגה VI 1/4 בקוטר פנימי&nbsp;</td></tr><tr><td>500 מ"ל בקבוק</td><td></td><td></td> חרוטי <td>גנרי, עם זרוע צד</td></tr><tr><td>משאבת אקווריום</td><td>Aquatic Gardens</td><td>משאבת אוויר 2000</td><td></td></tr><tr><td>מקור אור סיבים אופטיים</td><td>דולן-ג'נר תעשיות</td><td>סיבים-לייט 2100</td><td></td></tr><tr><td>כרטיס לבן/נייר</td><td>Whatman</td><td>1001-110</td><td></td></tr><tr><td>מערכת רכישה דיגיטלית</td><td>Syntech</td><td>IDAC-4</td><td>אלטרנטיבה: National Instruments NI-6251 &nbsp;</td></tr><tr><td>Headstage</td><td>Syntech</td><td>DTP-1</td><td>Tasteprobe</td></tr><tr><td>Tasteprobe מגבר</td><td>Syntech</td><td>DTP-1</td><td>Tasteprobe</td></tr><tr><td>קליפים תנין</td><td>Grainger</td><td>1XWN7</td><td>כל מותג הוא בסדר</td></tr><tr>חוט <td></td><td></td><td>חשמל מבודד</td><td>גנרי</td></tr><tr><td>זהב מחבר פינים</td><td>World Precision Instruments</td><td>5482</td><td></td></tr><tr><td>מחשב</td> <td>אישיVostro של Dell</td><td></td><td>בודק תאימות למערכת רכישה דיגיטלית ולתוכנה</td></tr><tr><td>תוכנת רכישה</td><td>Syntech</td><td>Autospike</td><td>Autospike פועל עם IDAC-4; לחלופין, השתמש ב-LabView עם רדיד אלומיניום NI-6251</td></tr><tr><td>ו/או כלוב</td><td></td><td></td> פאראדיי <td>סיכוך רעשים אלקטרומגנטי</td></tr><tr><td>נימי זכוכית בורוסיליקט</td> World <td>Precision Instruments</td><td>1B100F-4</td><td></td></tr><tr><td>מושך פיפטה</td><td>Sutter Instrument Company</td><td>דגם P-87 Flaming/Brown Micropipette Puller</td><td></td></tr><tr><td>Beadle ו-Ephrussi Ringer Solution</td><td></td><td></td><td>ראה מתכון בסעיף הפרוטוקול</td></tr><tr><td>Tricholine citrate, 65%&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T0252-100G</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>VMZ 1x-4x</td><td>מסוגל להגדלה של פי 10-40</td></tr><tr><td>דלי</td><td></td><td></td> קרח <td>גנרי</td></tr><tr><td>p200 קצות</td><td></td><td></td> פיפטה <td>גנרי</td></tr><tr><td>מחט עמוד השדרה</td><td>Terumo</td><td>SN*2590</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק</td><td>Beckton-Dickenson</td><td>301025</td><td></td></tr><tr><td>שואב זבובים</td><td></td><td></td><td>מורכב מקצות פיפטה P1000, צינורות פלסטיק גמישים ורשת</td></tr><tr><td>דוגמנות חימר</td><td></td><td></td><td>מלקחיים גנריים</td></tr><tr><td></td><td>כלי מדע עדינים מאת Dumont</td><td>11252-00</td><td>#5SF (טיפים עדינים במיוחד)</td></tr><tr><td>מזרק 10 מ"ל</td> צינורות פלסטיק <td>Beckton-Dickinson</td><td>301029</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Tygon</td><td>R-3603</td><td></td></tr></tbody></table>

הקלטת אלקטרו מ<em&gt; דרוזופילה</em&gt; labellar טעם sensilla

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

תגובת הטעם ההיקפית של חרקים יכולה להיחקר בעוצמה עם טכניקות אלקטרו. השיטה המתוארת כאן מאפשרת לחוקר כדי למדוד את תגובות התעוררו אצלם באופן ישיר וכמותית, המשקף את הקלט החושי שמערכת העצבים של החרקים מקבלת מגירויי טעם בסביבתו. פרוטוקול זה מתאר את כל השלבים העיקריים בביצוע טכניקה זו. השלבים הקריטיים בהרכבת מתקן אלקטרופיזיולוגיה, כגון מבחר של ציוד דרוש וסביבה מתאימה להקלטה, מסומנים. אנו גם מתארים כיצד להתכונן להקלטה על ידי ביצוע אלקטרודות התייחסות והקלטה מתאימות, ופתרונות tastant. אנו מתארים בפירוט את השיטה המשמשת להכנת החרקים על ידי החדרת אלקטרודה התייחסות זכוכית לתוך הזבוב על מנת לשתק את חוטם. אנחנו מראים עקבות של הדחפים החשמליים שנורו על ידי נוירונים טעם בתגובה לסוכר ומתחם מרים. היבטים של הפרוטוקול הם לאechnically מאתגר וכוללים תיאור נרחב של כמה אתגרים משותפים טכניים שעשויים להיות נתקלו, כגון חוסר אות או רעש מוגזם במערכת, ופתרונות אפשריים. הטכניקה יש מגבלות, כגון חוסר היכולת לספק גירויי temporally מורכבים, להתבונן ברקע הירי מייד לפני גירוי משלוח, או להשתמש בתרכובות טעם לא מסיסים במים בנוחות. למרות מגבלות אלה, בטכניקה זו (כולל שינויים קלים בהפניה בפרוטוקול) היא תקן, הליך מקובל באופן רחב להקלטת תגובות עצביות דרוזופילה לטעום תרכובות.

איור 5 א מציג את התגובה של Sensillum L לסוכר, סוכרוז. אותו Sensillum אינו מגיב למתחם המר, berberine. איור 5 מראה כי Sensillum סוג I, אשר מכיל תאי עצב מגיב מרים, מציג קוצים גדולים המשרעת בתגובה לberberine, וקוצי משרעת קטנים יותר בתגובה לסוכרוז. L sensilla להציג תגובת רקע מינימאלית לשליטת הממס, TCC, בזמן שאני sensilla להציג כמעט שום תגובה לTCC (איור 5). לקבלת מידע נוסף על תגובות מלח ומים של GRNs labellar, עיין Hiroi 10. <...

פרוטוקול זה מתאר הקלטה תאית מתגובות פוטנציאל הפעולה שנורו על ידי נוירונים טעם labellar בדרוזופילה.

הקלטת אלקטרו מ<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Labellar טעם Sensilla

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא למדוד תגובות של רגישי טעם בודדים על השפה של דרוזופילה (drosophila). דבר זה מושג תחילה על ידי בניית מערך אלקטרופיזיולוגי והצבת כל הציוד הדרוש. השלב השני הוא הכנת הזבוב להקלטה.בשלב הבא, מעבּרים גירוי של lum בודד באמצעות תרכובת טעם, בעוד התגובה העצבית נרשמת בו-זמנית. לבסוף, נעשה שימוש בהקלטה אלקטרופיזיולוגית של קצה (tip recording) מ-label silla בודדים כדי להראות את התגובות של taste illa לתרכובות טעם שונות. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן שלבי הכנת הזבוב יכולים להיות מאתגרים מבחינה טכנית וקשים ללמידה.בפרוצדורה זו, אספו זבובים שזה עתה בקעו (ELOs) מתרביות זבובים המתוחזקות היטב. לאחר מכן, השאירו אותם להתבגר במשך חמישה עד 10 ימים בבקבוקוני תרבית טריים לפני הרישום; לפני הכנת הזבובים, קררו את פלטת המיקרוסקופ על קרח למשך 15 עד 30 דקות. לאחר מכן, מלאו מחדש את אלקטרודת הייחוס מזכוכית בתמיסת B ו-e.הקישו בעדינות להוצאת בועות אוויר כלשהן תחת מיקרוסקופ דיסקציה. השתמשו בפינצטה כדי לשבור חלק קטן מהקצה. לאחר מכן, השתמשו בפעולת נימיות כדי לשאוב בועות שנותרו ברקמה.לאחר מכן, החלק את אלקטרודת הייחוס המלאה ב-B ו-E מעל חוט מחזיק האלקטרודה, וכדי להיזהר שלא להחדיר בועות אוויר לאחר מכן, שאב זבוב לתוך טיפ של פיפט P 200. הנח אותו בתוך דלי קרח וקרר במשך 30 שניות עד דקה אחת.

electrophysiological-recording-from-drosophila-labellar-taste-sensilla

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כאן אנו מתארים שיטות אלקטרו למדידת בשידור סינפטי בצומת neuromuscular של הזחל תסיסנית. שחרור עורר היא יזמה באופן מלאכותי על ידי המרצת הנוירונים אקסונים מוטוריים, והעברת דרך NMJ ניתן למדוד התגובה postsynaptic עורר בשריר.

שיטות אלקטרו עבור הקלטה פוטנציאלים Synaptic מן NMJ של הזחלים תסיסנית

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

התגובות של אלקטרו עצב סנסורי חוש הריח כדי odorants ניתן למדוד חרקים באמצעות הקלטות sensillum יחיד. במאמר זה הווידאו נדגים כיצד לבצע הקלטות sensillum אחת האנטנות של זבוב החומץ...

Sensillum הקלטות סינגל חרקים תסיסנית melanogaster ו אנופלס gambiae</em

מערכת סיבים הענק הוא מעגל עצבי פשוטה של...

הקלטות אלקטרו מתוך מסלול של סיבים ענק ד melanogaster</em

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול לרישום אלקטרופיזיולוגי של פעילות קולטני אור בעין של דרוזופילה משותקת, המאפשר מדידה מדויקת של שינויי מתח בתגובה לגירויי אור.

רישום אלקטרופיזיולוגי של תגובות מתח של פוטורצפטורים ברשתית דרוזופילה לגירויי אור

בסרטון זה, זבוב דרוזופילה חי מותקן בצינור למחקרים אלקטרופיזיולוגיים. אלקטרודות ממוקמות בבסיס הסנסילום כדי לרשום תגובות עצביות ספציפיות לפרומונים עם נוירוני קולטן הריח של הזבוב.

הקלטות אלקטרופיזיולוגיות של Drosophila Sensilla בתגובה לריחות נדיפים

הרגליים הקדמיות והפרובוסקיס של דרוזופילה מכילים רפרטואר עשיר של נוירונים חושיים טעמיים. כאן, אנו מציגים שיטה המשתמשת בהדמיית סידן כדי למדוד תגובות פיזיולוגיות מנוירונים חושיים ברגל הקדמית וחוטם של זבובים חיים ביישום אקסוגני של פרומון טעם.

מדידת תגובות פיזיולוגיות של<em&gt; תסיסנית</em&gt; עצב סנסורי כדי ליפידים פרומונים שימוש סידן הדמיה חיה

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להדגים כיצד להציג odorants של התנודתיות נמוכה להקלטת single-sensillum מ נוירונים קולטן תסיסנית חוש הריח המגיבים שרשרת פרומונים ארוכים שרשרת.

הקלטה אלקטרופיזיולוגית מ<em&gt; תסיסנית</em&gt; Trichoid Sensilla בתגובה ריחות של תנודתיות נמוכה

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי להקליט את הפעילות החשמלית יורד של מערכת העצבים המרכזית דרוזופילה melanogaster כדי לאפשר את עלות-יעיל ונוח בדיקה של סוכנים תרופתי, מוטציות גנטיות של חלבונים עצבית, ו/או את התפקיד של מסלולים פיזיולוגיים נחקרו.

הקלטה אלקטרופיזיולוגיות של פעילות מערכת העצבים המרכזית השלישית-לחלל דרוזופילה Melanogaster

שיטה נדירה של הקלטה אלקטרופיזיולוגית, הקלטת בסיס, מאפשרת ניתוח של תכונות של קידוד טעם שלא ניתן לבחון בשיטות הקלטה קונבנציונליות. הקלטה בסיסית מאפשרת גם ניתוח תגובות טעם לגירויים הידרופוביים שלא ניתן לחקור בשיטות אלקטרופיזיולוגיות מסורתיות.

הקלטת בסיס: טכניקה לניתוח תגובות של נוירוני טעם בדרוזופילה

גישת הדמיית סידן מאפשרת להקליט תגובות הנגרמות על ידי טעם במוחם של זבובים ערים בזמן שתמיסה מוחלת על התווית. תגובות טעם ראשוניות ב-Drosophila melanogaster משמשות כדוגמה, אך ניתן להתאים פרוטוקול זה לחקר נוירונים במורד הזרם או מינים אחרים.

ב Vivo הדמיית סידן של תגובות עצביות הנגרמות על ידי טעם בדרוזופילה בוגרת

למדו כיצד למדוד תגובות פוטנציאל פעולה מנוירוני טעם בלבריים בדרוזופילה באמצעות הקלטה אלקטרופיזיולוגית. שיטה זו מאפשרת חקר עיבוד חושי של טעם ומנגנוני התנהגות אכילה בזבובי הפירות.

הקלטת אלקטרו מ

גלה סרטונים נוספים