Name: RNAscope עבור באתרו איתור של נגיף הפפילומה אנושי תעתיק פעיל בראש וצוואר קשקש קרצינומה של תאים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-11T18:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: למדו את שיטת RNAscope לאיתור תעתיק פעיל של נגיף הפפילומה האנושי בקרצינומה קשקשית של ראש וצוואר. טכניקת ה-hybridization in situ מאפשרת הדמיה רגישה של mRNA E6/E7 בתאי גידול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

נתמך בחלקו על ידי מענק NIH (R43/44CA122444) ומענק DOD BRCP (W81XWH-06-1-0682) לי.ל..

1. לדוגמא, ציוד, ומגיבים הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים דגימת רקמה לגושים של 3-4 מ&quot;מ בעובי, לתקן ב10% פורמלין שנאגרו ניטראלי הטרי ל16-32 שעות בטמפרטורת חדר (25 ° C) ולהטביע בפרפין. חותכים FFPE למקטעים בעובי מיקרומטר 5 ± 1 מלוקי FFPE, הר סעיפים בשקופיות ואוויר יבש. הערה: ניתן לאחסן את השקופיות בטמפרטורת חדר מתחת להתייבשות לתקופה של עד 3 חודשים. שקופיות הרקמה הרכובים צריכים להיות אפויות ביבשה מעל ב60 מעלות צלזיוס במשך שעה 1 לפני assay RNAscope. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא הכלאה תנור ל40 ° C. מניחים נייר humidifying בבקרת לחות מגש. הוסף 50 dH מיליליטר 2 O לנייר humidifying להרטיב אותו לחלוטין. הכנס את מגש המכוסה לתנור לprewarm לפחות 30 דקות לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך 700 מיליליטר 1x Pretreat 2 פתרון (10 NL, חיץ ציטרט pH 6) על ידי דילול 10x Pretreatment פתרון בDH 2 O. מחממים את פתרון 1x Pretreat 2 לרתיחה ומייntain הטמפרטורה בין C ° 100-104 תוך מניעת יתר הרתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות 3 L 1x הצפת לשטוף (SSC 0.1x) על ידי דילול prewarmed 50x הצפת לשטוף ב DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין 2 x 200 מיליליטר של קסילן ו2 x 200 מיליליטר של EtOH 100% לdeparaffinization מתחת למכסת מנוע קטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 50% פתרון מכתים Hematoxylin ומגיב bluing (0.01% מים אמוניה) להודעה הכתמה מתחת למכסה המנוע קטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 200 מיליליטר של קסילן, 200% מיליליטר של 70, ו -2 x 200 מיליליטר של EtOH 100% להתייבשות מתחת למכסת מנוע קטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיקות Prewarm יעד ב40 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ולהביא RTU איתור מגיב ערכה לטמפרטורת חדר, כוללים RTU Amp1, Amp2, AMP3, Amp4, Amp 5, בראון, וAmp6-בראון, למעט DAB אב הצבע בראון ובראון-B . </li></ol> 2. RNAscope Assay Deparaffinization והתייבשות לאחר אפייה, deparaffinize סעיפי רקמות בקסילן במשך דקות 2 x 5 עם תסיסה מתמדת, ומייבשבEtOH 100% עבור 2 x 3 דקות עם תסיסה תכופה. אוויר יבש למשך 5 דקות ולצייר מחסום הידרופובי סביב קטע הרקמה עם הידרופובי מכשול פן. Pretreatments <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם 1 Pretreat 10 דקות ב RT למרווית פעילות peroxidase אנדוגני, לשטוף ב DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם Pretreat 2 לשמור על טמפרטורת רתיחה במשך 15 דקות לאחזור RNA, לשטוף פעמיים ב DH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם Pretreat 3 ל30 דקות ב40 ° C לעיכול חלבון בתנור HybEZ, לשטוף פעמיים ב DH 2 O. </li></ol> יעד Probe הכלאה בדיקות יעד בריכת 7 HPV-HR כוללות: HPV16, 18, 31 ב, 33, 35, 52, ו58. הוספת בדיקות HPV, יוביקוויטין C (UBC) ובדיקות dapB גן חיידקים בנפרד על שלושה סעיפי רקמות adjacently. להכליא ב40 מעלות צלזיוס בתנור במשך 2שעה, ואז לשטוף במאגר 1x לשטוף עבור 2 x 2 דקות ב RT. אות הגברה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם Amp1 (מגבר) ל30 דקות ב40 ° C, Amp2 (מפחית רקע) ל15 דקות ב 40 ° C, AMP3 (מגבר) ל30 דקות ב40 מעלות צלזיוס, וAmp4 (בדיקה תווית) ל15 דקות ב40 מעלות צלזיוס בתנור HybEZ. לאחר כל שלב הכלאה, יש לשטוף במאגר 1x לשטוף עבור 2 x 2 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפי רקמות עם Amp5 ל30 דקות וAmp6 15 דקות ב RT. לאחר כל שלב דגירה, לשטוף במאגר 1x לשטוף עבור 2 x 2 דקות ב RT. </li></ol> זיהוי אות דגירה סעיפי רקמות עם 1:01 תערובת DAB על ידי ערבוב נפח שווה של בראון, ובראון-B עבור 10 דקות ב RT, לשטוף פעמיים ב DH 2 O. Counterstaining <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; חלקי רקמת כתם עם 50% פתרון Hematoxylin למשך 2 דקות ב RT, לשטוף עם DH 2 O עד שקופיות ברורות ואילו רקמות יישארו סגולות. טובלים מחליק לתוך אמוניה 0.01% ב DH 2 O ל5x ואחריו עם 5 מטבלים ב DH 2 O. השמה Slide מייבש את חלקי רקמות ב70%, 100%, וEtOH 100% עבור 2 דקות כל אחד, קסילן במשך 5 דקות, לעלות עם תקשורת הרכבה מבוססת קסילן.

<ol><li>Parkin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+health+burden+of+infection-associated+cancers+in+the+year+2002%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">The global health burden of infection-associated cancers in the year 2002.</a> Int. J. Cancer. 118 (12), 3030-3044 (2006).</li>
<li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+papillomavirus+and+rising+oropharyngeal+cancer+incidence+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Human papillomavirus and rising oropharyngeal cancer incidence in the United States.</a> J. Clin. Oncol. 29 (32), 4294-4301 (2011).</li>
<li>Ang, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+papillomavirus+and+survival+of+patients+with+oropharyngeal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Human papillomavirus and survival of patients with oropharyngeal cancer.</a> N. Engl. J. Med. 363 (1), 24-35 (2010).</li>
<li>Smeets, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+algorithm+for+reliable+detection+of+human+papillomavirus+in+paraffin+embedded+head+and+neck+cancer+specimen%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">A novel algorithm for reliable detection of human papillomavirus in paraffin embedded head and neck cancer specimen.</a> Int. J. Cancer. 121 (11), 2465-2472 (2007).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAscope%3A+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Diagn%22%5BJournal%5D)">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J. Mol. Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+regulation+of+NRG1+isoform+expression+by+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Specific regulation of NRG1 isoform expression by neuronal activity.</a> J. Neurosci. 31 (23), 8491-8501 (2011).</li>
<li>Yan, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intestinal+stem+cell+markers+Bmi1+and+Lgr5+identify+two+functionally+distinct+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">The intestinal stem cell markers Bmi1 and Lgr5 identify two functionally distinct populations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (2), 466-471 (2012).</li>
<li>Payne, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+circulating+tumour+cell+detection+using+multiplex+RNA+in+situ+hybridisation+predicts+progression-free+survival+in+metastatic+breast+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Viable circulating tumour cell detection using multiplex RNA in situ hybridisation predicts progression-free survival in metastatic breast cancer patients.</a> Br. J. Cancer. 106 (11), 1790-1797 (2012).</li>
<li>Bordeaux, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+in+situ+measurement+of+estrogen+receptor+mRNA+predicts+response+to+tamoxifen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Quantitative in situ measurement of estrogen receptor mRNA predicts response to tamoxifen.</a> PLoS One. 7 (5), (2012).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+quantitative+RNA+in+situ+hybridization+for+resolution+of+equivocal+and+heterogeneous+ERBB2+%28HER2%29+status+in+invasive+breast+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Diagn%22%5BJournal%5D)">Automated quantitative RNA in situ hybridization for resolution of equivocal and heterogeneous ERBB2 (HER2) status in invasive breast carcinoma.</a> J. Mol. Diagn. 15 (2), 210-219 (2013).</li>
<li>Tubbs, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+RNA+in+situ+Hybridization+for+Detection+of+Restricted+Clonal+Expression+of+Low+Abundance+Immunoglobulin+Light+Chain+mRNA+in+B-Cell+Lymphoproliferative+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive RNA in situ Hybridization for Detection of Restricted Clonal Expression of Low Abundance Immunoglobulin Light Chain mRNA in B-Cell Lymphoproliferative Disorders.</a> Am. J. Surg. Pathol. In press, (2013).</li>
<li>Ukpo, O. C., Flanagan, J. J., Ma, X. J., Luo, Y., Thorstad, W. L., Lewis, J. S. Jr. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-risk+human+papillomavirus+E6%2FE7+mRNA+detection+by+a+novel+in+situ+hybridization+assay+strongly+correlates+with+p16+expression+and+patient+outcomes+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg.+Pathol%22%5BJournal%5D)">High-risk human papillomavirus E6/E7 mRNA detection by a novel in situ hybridization assay strongly correlates with p16 expression and patient outcomes in oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Am. J. Surg. Pathol. 35 (9), 1343-1350 (2011).</li>
<li>Lewis, J. S. Jr., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptionally-active+high-risk+human+papillomavirus+is+rare+in+oral+cavity+and+laryngeal%2Fhypopharyngeal+squamous+cell+carcinomas--a+tissue+microarray+study+utilizing+E6%2FE7+mRNA+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Histopathology%22%5BJournal%5D)">Transcriptionally-active high-risk human papillomavirus is rare in oral cavity and laryngeal/hypopharyngeal squamous cell carcinomas--a tissue microarray study utilizing E6/E7 mRNA in situ hybridization.</a> Histopathology. 60 (6), 982-991 (2012).</li>
<li>Lewis, J. S. Jr., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+p16+staining+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma%3A+extent+and+pattern+correlate+with+human+papillomavirus+RNA+status%5BTitle%5D)+AND+%22Mod.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Partial p16 staining in oropharyngeal squamous cell carcinoma: extent and pattern correlate with human papillomavirus RNA status.</a> Mod. Pathol. 25 (9), 1212-1220 (2012).</li>
<li>Bishop, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+transcriptionally+active+high-risk+HPV+in+patients+with+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+as+visualized+by+a+novel+E6%2FE7+mRNA+in+situ+hybridization+method%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Detection of transcriptionally active high-risk HPV in patients with head and neck squamous cell carcinoma as visualized by a novel E6/E7 mRNA in situ hybridization method.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36 (12), 1874-1882 (2012).</li>
<li>Schache AG,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+novel+diagnostic+standard+in+HPV-positive+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Validation of a novel diagnostic standard in HPV-positive oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Br. J. Cancer. 108 (6), 1332-1339 (2013).</li>
<li>Mehrad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Papillary+Squamous+Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck%3A+Clinicopathologic+and+Molecular+Features+With+Special+Reference+to+Human+Papillomavirus%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg.+Pathol.+Jun%22%5BJournal%5D)">Papillary Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck: Clinicopathologic and Molecular Features With Special Reference to Human Papillomavirus.</a> Am. J. Surg. Pathol. Jun. , (2013).</li>
<li>Jordan, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+methods+for+oropharyngeal+cancer+HPV+status+determination+in+US+cooperative+group+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Validation of methods for oropharyngeal cancer HPV status determination in US cooperative group trials.</a> Am. J. Surg. Pathol. 36, 945-954 (2012).</li>
<li>Hammond, M. E., et al. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer (unabridged version). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHammond%2C+ME+%22Arch.+Pathol.+Lab.+Med%22">Arch. Pathol. Lab. Med</a>. 134 (7), 48-72 (2010).</li>
</ol>

כל המחברים הם מועסקים על ידי ושל המניה באבחון מתקדם Cell, Inc

Assay RNAscope HPV אפשר להדמיה ישירה של E6/E7 mRNA באתרו בראש הקשורים לנגיף וקרצינומה של תאי קשקש בצוואר. Assay RNAscope תואם באופן מלא עם רקמת גידול קבוע באופן שיגרתי ומשמר את מורפולוגיה רקמות למתאמי histopathological (איור 2). יתרון מפתח של assay RNAscope על פני שיטות קונבנציונליות CISH הוא שזה דווקא מגביר את אותות ההכלאה (2B דמויות ו2E) ללא הגברת רעשי הרקע (2C דמויות ו2F). בפועל, הליך assay RNAscope HPV יכול להסתיים בתוך 8 שעות או בנוחות חילק במשך יומיים. Assay RNAscope HPV כבר בשימוש כדי לקבוע את מצב HPV בראש וקרצינומה של תאי קשקש צוואר 12-16, הוכחת רגישות 97% וסגוליות 93% באמצעות qRT-PCR כשיטת התייחסות 16. Chr הקונבנציונליISH omogenic לHR-HPV DNA הוא מאוד ספציפי, אבל יש לו רגישות של ~ 80% 12. מכתים immunohistochemical (IHC) לp16 הסמן הפונדקאי הסלולרי מדגים רגישות מעולה, אך עשוי להפיק תוצאות חיוביות כוזבות 15,18, במיוחד בסרטן הראש וצוואר nonoropharyngeal 15. השיטה הנוכחית &quot;תקן זהב&quot; של qRT-PCR לHPV E6/E7 mRNA זיהוי דורשת רקמות קפואים לתוצאות אופטימליות, והוא מורכב מבחינה טכנית, אשר מגבילה את השימוש בו למעבדת המחקר בלבד. בנוסף, הוא דורש מיצוי RNA שהופך אותו בלתי אפשרי, כדי לקשר בין ביטוי HR-HPV E6/E7 mRNA עם histopathology. ישנם מספר גורמים קריטיים להצלחה של assay RNAscope. ראשית, לקבלת התוצאות הטובות ביותר, צריכה להיות קבועות ברקמות 10% פורמלין שנאגרו ניטראלי הטרי בטמפרטורת חדר למשך שעה 16-32 פי הנחיות ASCO / CAP 19. שנית, תנור HybEZ מומלץ מאוד שכן הוא מאפשרזה שליטה אופטימלית של טמפרטורה ולחות להכלאת בדיקה וצעדי הגברה אות. שלישית, חשוב להסיר את מאגרי שיורי עודפים לפני כל צעד, אבל עדיין לשמור על קטע הרקמה מההתייבשות במהלך כל אחד מהשלבים הבאים. הליך RNAscope הידני שתואר כאן כבר אוטומטי לחלוטין על מערכת אוטומטית מכתים מסחרית שקופיות 10. זה אמור להקל מאוד סטנדרטיזציה של תנאי assay ועבודת כפות יקרות חיסכון במעבדות פתולוגיה קליניות. בנוסף, תוכנת ניתוח תמונה ייעודית פותחה 10 לזהות באופן אוטומטי את התאים ואותות מכתים בשקופית דיגיטלית, שאמורה לעזור לחסל את הסובייקטיביות ולשפר את שחזור בשערו. לסיכום, assay RNAscope HPV מזהה הנוכחות של תעתיקי HR-HPV E6/E7 mRNA באתרו ברקמות FFPE. יש לו עבודה כי הוא מכיר את labora פתולוגיה הקליניטורים על ידי התרת ההדמיה ישירות אלה בסעיפי רקמות. היא מציעה פלטפורמה אידיאלית לבחינה (FFPE) דגימות רקמה, ויכולה להיות מאומצת בקלות על ידי מעבדות פתולוגיה אבחון.

חשבונות זיהום וירוס הפפילומה אנושי בסיכון גבוהה (HR-HPV) לכ 5% מכל מקרי הסרטן בעולם 1. השכיחות של סרטן הלוע התחתון הקשורים לנגיף גדלה בעשורים האחרונים, במיוחד בקרב גברים. קרצינומה חיובית ל-HPV הלוע התחתון של תאים קשקשיים (OPSCC) צפויה להוות רוב של כל סוגי סרטן הראש והצוואר בארצות הברית בשנים הבאות 20 2. קרצינומה של תאי קשקש הלוע התחתון הנגרמת על ידי HPV קשורה להישרדות נוחה, ומעמד HPV הגידול הוא גורם מנבא חזק ועצמאי להישרדות 3. ראיות להפעלת תעתיק של אונקוגנים נגיפיים E6 ו E7 נחשבת את תקן הזהב לנוכחות של HPV הרלוונטי קליני 4. עם זאת, זיהוי של E6/E7 mRNA מרקמת גידול טרי על ידי טכניקת RT-PCR הוא לא מעשי בפרקטיקה קלינית שגרתית והיה מוגבל למעבדות המחקר. לאחרונה, אנו havהדואר פיתח טכנולוגיה חדשה ISH RNA נקראת RNAscope, המאפשרת זיהוי זמנית בתאי אדם עם רגישות מולקולת RNA בודדת בדגימות פרפין הקבוע פורמלין מוטבעים רקמות (FFPE) 5-10. אנחנו סיפקנו שלושה קווים של ראיות לזיהוי מולקולה בודדת 5. ראשית, מערכת ההגברה ועיצוב אות הבדיקה RNAscope אפשרה זיהוי של עותק יחיד מטרות הדנ&quot;א הגנומי HER2 בהלה וSK-BR-3 שורות תאים. שנית, בהשוואה לאותות הדנ&quot;א הגנומי HER2, חלוקת עוצמות הניאון של נקודות אות HER2-mRNA בתאי הלה הייתה בקנה אחד עם מולקולה אחת לכל נקודה. שלישית, מספר נקודות אות HER2-mRNA לכל תא מתאים מקרוב את עותק מספר HER2-mRNA שהוערך על ידי assay כימות מבוסס פתרון, התומך בזיהוי מולקולה בודד נוסף. יתר על כן, counterstaining של גרעינים עם DAPI במיקרוסקופ פלואורסצנטי או עם hematoxylin במיקרוסקופ שדה בהיר מאפשר הדמיה של גרעינים בודדים, WHich בתורו מאפשר איתור וכימות של מטרות RNA על בסיס תא בודד 10. היכולת לנתח ביטוי גנים באתר בדגימות קליניות שגרתיות הופכת RNAscope פלטפורמה מבטיחה לפתולוגיה אבחון, במיוחד אלה מבוססי מבחני קטע רקמת FFPE 10,11. פיתחנו assay HPV מבוסס RNAscope לזהות E6/E7 mRNA של שבעה גנוטיפים בסיכון גבוה של HPV (HPV16, 18, 31 ב, 33, 35, 52, ו58) באמצעות בריכה של בדיקות גנוטיפ ספציפי. המחקרים האחרונים שלנו בOPSCC הראו כי assay RNAscope HPV הוא רגיש מאוד וספציפי בקביעת מעמד HPV על רקמות FFPE 12-17, וגם מודיע הפרוגנוזה בOPSCC 12,16. העיקרון של טכנולוגית RNAscope כבר תואר בעבר 5. כאן אנו מתארים פרוטוקול assay RNAscope המלא ולהדגים את השימוש בו בזיהוי של HR-HPV בסעיפי רקמת גידול FFPE.

<table><tbody><tr><td>SuperFrost Plus שקופיות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>HybEZ תנור, מגש ומתלה</td><td>אבחון תאים מתקדם</td><td>310011, 310012, 310014</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope 2.0 FFPE Reagent Kit - Brown</td><td>Advanced Cell Diagnostics</td><td>310035</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope HPV-HR7 Probe for HPV 16, 18, 31, 33, 35, 52 ו-58, E6/E7 mRNA</td><td>Advanced Cell Diagnostics</td><td>312351</td><td></td></tr><tr><td>ImmEdge מחסום הידרופובי</td><td>עט וקטור מעבדה</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>100% EtOH</td><td>אמריקאי מאסטר טק מדעי</td><td>ALREAGAL</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>X3P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>המטוקסילין של גיל I</td><td>מאסטר טק מדעי</td><td>אמריקאי HXGHE1LT</td><td></td></tr><tr><td>אמוניה הידרוקסיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>320145-500 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית 24 מ"מ x 50 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-545-F</td><td></td></tr><tr><td>פלטה חמה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>11-300-49SHP</td><td></td></tr><tr>תנור <td></td><td></td><td>ייבוש</td><td>מסוגל להחזיק טמפרטורה ב-60 פלוס; 1 & deg; אמבט</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> מים C <td>מסוגל להחזיק טמפרטורה ב-40 פלוס; 1 & deg; ג</td></tr></tbody></table>

rnascope עבור<em&gt; באתרו</em&gt; איתור של נגיף הפפילומה אנושי תעתיק פעיל בראש וצוואר קשקש קרצינומה של תאים

RNAscope for In situ Detection of Transcriptionally Active Human Papillomavirus in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

&quot;תקן הזהב&quot; לגילוי HPV בשעור הוא ההפגנה של HPV בסיכון גבוה תעתיק הפעיל ברקמת גידול. עם זאת, זיהוי של E6/E7 mRNA על ידי תגובה כמותית הפוכה שעתוק פולימראז שרשרת (qRT-PCR) דורש מיצוי RNA שהורס את הקשר רקמת הגידול קריטי עבור מתאם מורפולוגיים וכבר קשה להיות מאומצים בפרקטיקה קלינית שגרתית. RNA שפותח לאחרונה שלנו בטכנולוגית הכלאה באתר, RNAscope, מאפשר הדמיה ישירה של RNA ב, רקמות קבועות פורמלין פרפין, מוטבע (FFPE) עם רגישות מולקולה בודדת ורזולוציה תא בודדת, המאפשרת רגיש מאוד וספציפי בניתוח באתרו של כל סמן ביולוגי RNA בדגימות קליניות שגרתיות. Assay RNAscope HPV נועד לזהות את ה-mRNA E6/E7 של שבעה גנוטיפים HPV בסיכון גבוה (HPV16, 18, 31 ב, 33, 35, 52, ו58) באמצעות בריכה של בדיקות גנוטיפ ספציפי. זה הוכיח רגישות מעולהוספציפיות נגד השיטה הנוכחית &quot;תקן זהב&quot; של גילוי E6/E7 mRNA ידי qRT-PCR. מצב HPV נקבע על ידי RNAscope הוא מאוד פרוגנוסטיים של תוצאה קלינית בחולי סרטן הלוע התחתון.

זרימת העבודה assay RNAscope HPV יש assay RNAscope זרימת עבודה יעילה מאוד, כי הוא דומה לIHC (איור 1). היא מורכבת מארבעה שלבים עיקריים: pretreatments, הכלאה, amplifications אות, וזיהוי. היא מעסיקה אסטרטגיית עיצוב חללית ייחודית המבטיחה הגברה אות באיכות גבוהה 5. ב assay RNAscope HPV, שבעה סטי הבדיקה HR-HPV הם אספו, כל מוכרים על ידי אותה מערכת ההגברה האות קשורה לחזרה peroxidase (HRP). אותות הכלאה ספציפיים מזוהים כמו משקעים חומים שהוקמו על ידי HRP זרז תגובת chromogenic באמצעות DAB כמצע, אשר ניתן דמיינו בקלות על ידי מיקרוסקופ שדה בהיר הסטנדרטי. מכתים נציג לאיתור HPV איור 2 מראה תמונות דוגמא מסעיפי FFPE מוכתמים של ראש וצוואר קרצינומה של תאי קשקש. במקרה חיובי ל-HPV (איור2A יור), בדיקות HR-HPV זוהו אותות punctate חזקים במיוחד בתאים הסרטניים. הבדיקה UBC זוהתה אותות cytoplasmic punctate רבים בשני תאים סרטניים ותאים סטרומה (איור 2). הבדיקה dapB גן החיידקים הפגינה רקע נקי (איור 2 ג). במקרה של HPV שלילי, שניהם הבדיקה HR-HPV ובדיקת dapB זוהו שום אותות (2D דמויות ו2F), ואילו אותות חזקים התגלו באמצעות הבדיקה UBC (2E איור). ב assay זה, UBC משמש בקרה חיובית כלהעריך איכות RNA רקמות וdapB כביקורת שלילית לאותות מרקע. הניקוד לקביעת מעמד HPV כרוך לבחון את כל שלוש שקופיות לכל מקרה ומקרה. רמת הצביעה בשקופית הביקורת השלילית שקופיות (dapB) משמשת כרף קבלה: חיוביות HPV מוגדרת על ידי הנוכחות של cytoplasmic punctate ו / או כתמים גרעיניים שהיו מעל לאות בשקופית dabpB. <pclass = &quot;jove_content&quot; עבור: לשמור-together.within-page = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig1.jpg" /> איור 1. תרשים זרימה של assay RNAscope. איור של זרימת העבודה assay RNAscope. Assay RNAscope מכיל 4 שלבים עיקריים, pretreatments, הכלאת בדיקה היעד, הגברה אות וזיהוי אותות. הליך assay כולו יכול להסתיים ב8 שעות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig1highres.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.</a> <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51426/51426fig2.jpg" /> איור 2. תמונות דוגמא של שקופיות צבעוניות RNAscope. (בקרה שלילית) סעיפי FFPE מוכתמים עם בדיקות לHR-HPV, UBC (בקרה חיובית) וdapBמשני מקרי HNSCC. AC. מקרה חיובי ל-HPV. , ביטוי HR-HPV E6/E7 mRNA בתאי גידול. הבלעה, הגדלה 40X להראות אותות punctate. B ו-C) סעיפי רקמות סמוכים מראים מכתים חיובי UBC (B) ושלילי לdapB (C), בהתאמה. מקרה HPV שלילי) DF. ד) לא מכתים עבור HPV E6/E7 mRNA בדומה לביקורת השלילית dapB (F). E) UBC מכתים חיובי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51426/51426fig2highres.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.</a>

הנוכחות של HPV בסיכון גבוה ברקמת גידול ראש והצוואר קשורה בתוצאות טובות. RNA שפותח לאחרונה בטכניקת הכלאה באתר שנקרא RNAscope מאפשר הדמיה ישירה של HPV E6/E7 mRNA בסעיפי רקמות FFPE.

RNAscope עבור<em&gt; באתרו</em&gt; איתור של נגיף הפפילומה אנושי תעתיק פעיל בראש וצוואר קשקש קרצינומה של תאים

The &#39;gold standard&#39; for oncogenic HPV detection is the demonstration of transcriptionally active high-risk HPV in tumor tissue. However, detection ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא להדגים זיהוי רגיש וספציפי של mRNA של E6 ו-E7 מ-HPV בעל סיכון גבוה בתאי גידול של סרטני ראש צוואר, באמצעות טכניקת RNA in situ hybridization חדישה הנקראת RNAscope. דבר זה מושג תחילה על ידי טיפול מקדימה בדגימות הרקמה שעל השקופיות בחום ובפרוטאז כדי להגביר את חדירות התאים ולאפשר גישה למשוף. כשלב שני, מדגריים את השקופיות עם תערובת משופי HPV המכוונת לשבעה סוגי HPV בעלי סיכון גבוה, אשר נספחת ל-mRNA של E6 ו-E7.בשלב הבא, הגבירו את אותות ההיברידיזציה על ידי היברידיזציה רצופית עם המגביר הקדם-מגבירי (pre amplifier amplifier) ועם גשש סימון המצומד ל-HRP. לאחר מכן, מזהים את האות באמצעות כרומוגן ומדמינים אותו תחת מיקרוסקופיית שדה בהיר (brightfield) סטנדרטית; התוצאות המתקבלות מראות אותות של HPV E6/E7 mRNA כשקיעות חומות נקודתיות בגידולים חיוביים ל-HPV, אך לא בגידולים שליליים ל-HPV. בדיקת ה-RNAscope משתמשת באסטרטגיית עיצוב גששים חדשנית ובלעדית להיברידיזציה ספציפית.היא מאפשרת ויזואליזציה של מולקולות בודדות וכמותיות של מטרות. טכנולוגיה זו סוללת את הדרך עבור חוקרים בתחומי מחקר הביומארקרים ופיתוח אמצעי אבחנה לזהות ולתקף ביומרקרים של RNA שהתגלו באמצעות מחקרי macro race או רצף דור הבא (next generation sequencing). רוב המדענים בעלי ניסיון קודם ב-IHC או ב-ISH יכולים לרכוש שיטה זו במהירות.כעת אדגים את כל תהליך העבודה תוך הדגשת השלבים המרכזיים כדי לסייע לכם להנחית את הטכניקה. דגימות הרקמה שייבדקו באמצעות טכניקת ה-RNA in situ hybridization הן מקובעות בפורמלין. חתכים טמירים בפראפין בעובי של 5 ± 1 מיקרון הועמדו על סליידים שעה אחת לפני הבדיקה.ייבשו את השקופיות בתנור ייבוש בטמפרטורה של 60 °C. בינתיים, הכינו את תנור ההכשרה (hybridization oven). הגבירו את הטמפרטורה ל-40 °C והניחו נייר הלחות במגש לבקרת הלחות.הוסיפו 50 milliliters של מים מזוקקים לנייר הלחות כדי להרטיבו לחלוטין. הכניסו את המגש המכוסה לתנור לחימום מוקדם למשך 30 דקות לפחות לפני השימוש. הכינו 700 milliliters של תמיסת pretreat two בריכוז one x על ידי דילול של תמיסת pretreatment בריכוז 10 x במים מזוקקים.חממו את תמיסת ה-one x pretreat two עד לרתיחה ושמרו על טמפרטורה שבין 100 ל-104 °C, תוך מניעת רתיחה יתרה. הכינו שלושה ליטרים של one x wash buffer על ידי דילול של prewarm 50 x wash buffer במים מזוקקים תחת מכסה פחמן.הכינו את ה-xylenes, 70% ethanol ו-100% ethanol לשם השלמת הסרת הפרפין (deparaffinization) והדהיה. הכינו תמיסת צביעה של 50% hematin ו-0.01% ammonia water או reagent לכחול (bluing reagent) לשלב שאחרי הצביעה. חממו מראש את הגונויות (probes) המטרה בטמפרטורה של 40 °C למשך 10 דקות.הביאו את כל ריאגנטי ערכת הגילוי ה-RTU לטמפרטורת החדר, למעט הכרומוגן DAB brown A ו-brown B. כדי להתחיל את הבדיקה, בצעו דה-פרליזציה (deparize) לפרוסות הרקמה האפויות ב-xylene פעמיים, למשך חמש דקות בכל פעם, תוך써 ערבול תדיר. בצעו דהידרציה ב-100% Ethanol פעמיים, למשך שלוש דקות בכל פעם, תוך ערבול תדיר.ייבשו באוויר במשך חמש דקות ולאחר מכן שרטטו מחסום הידרופובי מסביב לחתך הרקמה באמצעות עט למחסום הידרופובי. התחילו את טיפול המקדם של חתכי הרקמה על ידי הדגרה שלהם עם תמיסת pretreat one למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. פעולה זו תנטרל את פעילות הפרוקסידאז האנדוגנית.שטוף במים מזוקקים. לאחר מכן, חלץ RNA על ידי דגירה של חיתוכי הרקמה למשך 15 דקות עם תמיסת קדם-טיפול שניים, שהוחזקה בטמפרטורת רתיחה, ולאחר 15 דקות שטוף פעמיים במים מזוקקים לצורך עיכול חלבונים. טפל בחיתוכי הרקמה עם תמיסת קדם-טיפול שלוש ודגור בתנור ההיברידיזציה בטמפרטורה של 40 °C למשך 30 דקות.עם סיום הדגירה של 30 דקות, שטפו את נתחי הרקמה פעמיים במים מזוקקים. השלב הבא הוא היברידיזציה של הגשוש למטרה באמצעות מאגר גשושים המזהים את ה-mRNA של E6 ו-E7 של שבעה גנוטיפים של HPV בסיכון גבוה: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 52 ו-58. הוסיפו את גשוש ה-HPV, את גשוש ה-ubiquitin C ואת גשוש הגן הבקטריאלי DAP B בנפרד לשלושה נתחי רקמה סמוכים.בצעו היברידציה בטמפרטורה של 40 °C בתנור למשך שעתיים בסיום דגירה של שעתיים. שטפו את חתיכות הרקמה בתמיסת שטיפה פעמיים, למשך שתי דקות בכל פעם בטמפרטורת החדר, לצורך הגברת האות. התחילו בדגירה של חתיכות הרקמה עם ה-AMP one pre amplifier למשך 30 דקות בטמפרטורה של 40 °C בתנור להיברידציה.שטפו פעמיים בבופר שטיפה למשך שתי דקות בכל פעם בטמפרטורת החדר. השלבים הבאים להגברת האות כוללים דגירה של נתחי הרקמה עם הרכיבים הבאים בטמפרטורה של 40 °C למשך הזמן המצוין, עם שתי שטיפות בבופר שטיפה בטמפרטורת החדר. לאחר כל דגירה, השתמשו ב-AMP two background reducer למשך 15 דקות.הדגיתו את AMP three amplifier למשך 30 דקות ואת AMP four labeled probe למשך 15 דקות. לאחר מכן, הדגיתו את חתיכות הרקמה עם amp five למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר; לאחר שתי שטיפות ב-wash buffer, הדגיתו עם amp six למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן בצעו שתי שטיפות נוספות ב-wash buffer. לצורך גילוי האות, הכינו תערובת DAB ביחס של אחד לאחד על ידי ערבוב נפחים שווים של brown A ו-brown B. הוסיפו את התמיסה לשקופיות והדגיות למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.שטפו פעמיים במים מזוקקים. צבעו את חיתוכי הרקמה בצבע נגדי באמצעות תמיסת hematoxylin בריכוז 50% למשך שתי דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן שטפו במים מזוקקים עד שהשקופיות יהיו שקופות בעוד הרקמות נותרות סגולות. טבלו את השקופיות חמש פעמים במים עם Ammonia בריכוז 0.01%, ולאחר מכן טבלו חמש פעמים במים מזוקקים. ייבשו את חיתוכי הרקמה על ידי דגירה למשך שתי דקות בכל אחד מהשלבים הבאים: ethanol בריכוז 70%, ethanol בריכוז 100% ו-ethanol בריכוז 100%, ולאחר מכן ב-xylene למשך חמש דקות.לבסוף, הרכיבו את השקופיות באמצעות מדיום הרכבה מבוסס שילין. להלן דוגמאות של תמונות מחתכים מקובעים בפורמלין ומוטמעים בפרפין של קרצינומה של תאי קשקש של הראש והצוואר. במקרה החיובי ל-HPV, גששי ה-HR HPV זיהו אותות נקודתיים חזקים באופן ספציפי בתאי הגידול. הדבר נראה בבירור בתמונה המוגדלת בתוספת בהגדלה של 40x.גשש ה-UBC המשמש כביקורת חיובית זיהה אותות ציטופלזמיים נקודתיים רבים הן בתאי הגידול והן בתאי הסטרומה. בעוד שגשש ה-DAP B המשמש כביקורת שלילית הראה רקע נקי במקרה השלילי ל-HPV, ובמקרה זה לא זוהו אותות הן על ידי גשש ה-HR HPV והן על ידי גשש ה-DAP B, עם זאת זוהו אותות חזקים על ידי גשש ה-UBC. הדירוג לקביעת סטטוס HPV כולל בחינה של שלוש השקופיות עבור כל מקרה.רמת הצביעה בשקופית ביקורת השלילה DAP B משמשת כנקודת החיתוך; חיוביות ל-HPV מוגדרת על ידי נוכחות של צביעה נקודתית, ציטופלזמית ו/או גרעינית העולה על האות בשקופית DAP B. ניתן להשלים את בדיקת ה-RNA scope תוך שמונה שעות אם היא מבוצעת כראוי. קריטי להוסיף כמות מספיקה של תמיסה כדי לכסות את כל שטח הרקמה בכל שלב.חשוב גם להסיר שאריות של באפר על ידי נקישה של השקופיות בין השלבים, תוך שמירה על השקופיות בצבע לבן. ניתן להשתמש בטכנולוגיית rescope לזיהוי של למעשה כל סממני RNA בכל תא או רקמה של כל מין.

rnascope-for-situ-detection-transcriptionally-active-human

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אפיון של T-cell epitopes של פתוגנים הגורמים לזיהומים מקומיים, כגון נגיף הפפילומה האנושי, מהווה אתגר בשל מספרם המוגבל של תאי T במחזור הדם. בשיטה המתוארת, תאי T נדירים בודדו ואופיינו החל ממספר קטן מאוד של תאים.

השימוש באינטרפרון-γ Assay האנזים המקושר Immunospot לאפיין רומן T-cell אפיטופים של וירוס הפפילומה האנושי

סרטון זה מתאר אסטרטגיית הכלאה רציפה הכוללת הכלאה של גשושיות mRNA ל-mRNA מטרה ספציפי. לאחר הכלאת הגשושיות, הגברת האות מבוצעת כדי לשפר את הרזולוציה באמצעות הפחתת יחס אות לרעש במהלך RNA-CISH של דגימות היסטולוגיות.

הכלאת בדיקה והגברת אותות בהכלאה של RNA באתרו: טכניקה לאיתור רצפי RNA ספציפיים במקטעי רקמות

סרטון זה מציג את פרוטוקול זיהוי האותות במהלך הכלאה כרומוגנית של RNA באתרו. טכניקה זו יכולה לשמש לאבחון זיהום אונקוגן פעיל חזותית בדגימת רקמה שלמה.

RNA CISH Signal Detection: טכניקה לזיהוי אותות כרומוגניים במהלך הכלאה של RNA באתרו בדגימות רקמות שלמות

רטרווירוסים אנושיים אנדוגני (HERV), אשר תופסים 8% של הגנום האנושי, לשמור על יכולות קידוד נדירות אבל מאה אלף חזרות ארוכות מסוף (LTRs). Microarray Affymetrix מותאם אישית תוכנן כדי לזהות ביטוי לוקוס HERV הבודד והיה בשימוש ברקמות סרטן ערמונית כהוכחה של מושג למחקרים קליניים בעתיד.

זיהוי מבוסס microarray של פרט HERV לוקוסים ביטוי: בקשה לגילוי סמן ביולוגי בסרטן הערמונית

Multiparameter פלואורסצנטי אימונוהיסטוכימיה ניתן להשתמש כדי להעריך את המספר, הפצה יחסית, ולוקליזציה של אוכלוסיות תאים החיסון microenvironment הגידול. כתב היד מתאר את השימוש בטכניקה זו כדי לנתח תת-תאים של תאי T בסרטן הלוע.

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית ​​השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש

גנים Homeobox גנים הם גנים תקינה קשורה לעיתים קרובות עם גידולים האורגניזמים למבוגרים. . חקרנו שלהם ביטוי השוואתית מאת immunohistochemical וניתוח בזמן אמת PCR, mucosae האף נורמלי, דלקתיות, sinonasal neoplasms על מנת להשתמש בהם בתור מטרות אפשריות האבחון והטיפול.

זיהוי של OTX1 ו- OTX2 כמו שני סמנים מולקולריים אפשריים עבור קרצינומה Sinonasal ואת חוש הריח נוירובלסטומה

מוצג כאן פרוטוקול לוקליזציה של גושי ריאות באמצעות סימון צבע באמצעות גישה למחט טרנסת-טראומטית מנווטת אלקטרומגנטית. הטכניקה המתוארת כאן יכולה להתבצע בתקופה הפרי-אופרטיבית כדי לייעל לוקליזציה של הגולם ולעריכה מוצלחת בעת ביצוע ניתוח בית החזה זעיר פולשני.

לוקליזציה של גושים טרנסתורציים לניווט אלקטרומגנטי לניתוחי חזה זעיר פולשניים

כאן אנו מציגים שיטה ישימה לפיתוח מודל מאתר orthotopic של הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים. גידולים מדגימים הרלוונטית קלינית תכונות histopathological של המחלה, לרבות נמק, בידול המסכן, גרורות קטרי הסתננות המערכת החיסונית. עכברים נושאות לפתח תסמינים הרלוונטית קלינית כולל בבליעה, הלסת הזחה של ירידה במשקל.

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

וירוס הפפילומה האנושי (HPV) כרומוגניים בתוך היברידיזציה באתרו נחשב לאחד מתקני זהב לגילוי זיהום וירוס הפפילומה האנושי בתוך גידולים. זה מאפשר ויזואליזציה של HPV E6-E7 ביטוי mRNA עם לוקליזציה והערכה כמותית למחצה של האות שלה.

כרומוגניים היברידיזציה באתרו הכלי עבור אבחון הקשורות HPV וסרטן צוואר

הסיכות ולולאות של RNA יכולות לתפקד כצבעי יסוד לתמלול הפוכה (RT) בהיעדר התחל העצמי הספציפי ברצף, הפרעה למחקר של התעתיקים החופפים של התמלילים. פיתחנו טכניקה מסוגל לזהות את ה-RNA ספציפי סטרנד, ואנחנו השתמשנו בו כדי ללמוד HIV-1 antisense חלבון ASP.

זיהוי של וירוס הכשל החיסוני האנושי 1 (HIV-1) Antisense חלבון (ASP) תעתיקים בחולים על ידי סטרנד ספציפי-PCR

למדו את שיטת RNAscope לאיתור תעתיק פעיל של נגיף הפפילומה האנושי בקרצינומה קשקשית של ראש וצוואר. טכניקת ה-hybridization in situ מאפשרת הדמיה רגישה של mRNA E6/E7 בתאי גידול.

RNAscope עבור

גלה סרטונים נוספים