Name: פשוט ומהיר פרוטוקול למדידת שומנים ניטרלי בתאי אצות באמצעות הקרינה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: למד פרוטוקול פשוט ומהיר למדידת שומנים ניטרלי בתאי אצות באמצעות צביעת Nile Red. השיטה מאפשרת ניטור יעיל של ביצועי ביופרוססים בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות למדעי הטבע והנדסת מועצת מחקר של קנדה למתן תמיכה כספית לפרויקט זה.

1. בידוד של האצות יבשים ביומסה כדי לשמש תקנים לקריאות הקרינה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את נפח דגימה מהתרבות של אצות גוברת כי תספק לפחות 200 מ&quot;ג של ביומסה היבשה, 400-600 מ&quot;ג הוא עדיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה מדגם ב C ° 4 10 דקות ב 10,000 X גרם. בטל supernatant ולשטוף את הכדור עם נפח שווה של חיץ פוספט גיבש לאותו pH כתקשורת הצמיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.2 עבור סכום כולל של 3 שלבי כביסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re-להשעות גלולה במי דה המיונן ולהעביר לצלחת מראש שקל-לשקול. בואו יבש ב-C ° 50 ל48 שעות. הערה: ייבוש תחת ואקום יקטן זמן ייבוש וייבוש התרבות בטמפרטורות מעל 50 מעלות צלזיוס עלולה לגרום resuspension קשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבויות אצות חנות מיובשות בטמפרטורת חדר לשימוש עתידי. </li></ol> 2. כימות Gravimetric של שומנים ניטרלי בהקסאן הפקה (מעובד מתוך בליי ו4 דייר) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד כ 50 מ&quot;ג ביומסה של אצות יבשות בצלחת לשקול. הערה: המונים הנעים 40-80 מ&quot;ג יכולים לשמש ללא הפסד של שחזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר ביומסה למרגמה מראש נשטף עם הקסאן. במידת צורך, לשטוף את הצלחת לשקול עם כמות קטנה (1 מיליליטר) של הקסאן באמצעות פיפטה פסטר כדי להעביר לחלוטין ביומסה למרגמה. הערה: הקסאן הוא חומר נדיף והרעיל ביותר. זה חייב להיות מטופל במנדף עם בגדי מגן מתאימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטחון ביומסה של אצות למשך 5 דקות באמצעות העלי. בגין עם טחינה עדינה ולהגביר את העצימות בהדרגה. לטחון ביומסה למשחה עדינה וחלקה בתקופה 5 דקות. אם הקסאן העודף משמש בעת העברה ביומסה למרגמה, עדיף לחכות להקסאן להתאדות לפני הטחינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף כמה מיליליטר של הקסאן למרגמה ומערבבים את התערובת וכתוצאה מכך עם העלי עד שהוא הומוגני. ודא שכל פסולת התא דבקה בקירות של מורזפת הם דפקו חופשיים ותלויים בנוזל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את התערובת ההמונית הקסאן התאים לצינור צנטריפוגות. הערה: צינור צנטריפוגות חייב להיות או זכוכית או פולימר מתאים בקנה אחד עם הקסאן כמו טפלון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.4 ו2.5 עד שכל ביומסה הועברה לצינור צנטריפוגות (3-5x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה המדגם ב C ° 4 ל20 דקות ב 10,000 X גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות פיפטה את supernatant לתוך מתכת שקלה מראש לשקול מנה. אחסן במנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבצע חילוץ 2 nd הקסאן על ידי הוספת 3 מיליליטר של הקסאן לגלולה וvortexing במרץ דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.7 ו2.8. במידת צורך, להפעיל את הדגימות למשך 30 דקות בצנטריפוגות במהלך החילוץ השני כדי להבטיח את כל פסולת התא מתיישבת באופן מלא. קביעת מסה של שמן מופק gravimetrically לאחר הקסאן התאדה לחלוטין. </li></ol> 3. Fluorometric כימות של שומנים ניטרלי באמצעות הנילוס האדום (כreporטד על ידי דה לה הוז סיגלר ואח&#39;. 11) הערה: רק 10 μl של השעיה אצות ב5 גר &#39;/ ליטר נחוץ לקריאת הקרינה. באופן כללי, בידוד של יומסה של אצות יבשות מ1.5 מיליליטר של מרק התרבות הוא יותר מהדרוש. כמו כן, עוצמת האור של המנורה בספקטרופוטומטר יכולה לפגוע לאורך זמן. מומלץ לכלול בתקנים בכל ניסוי, כדי להבטיח ששינויים במכשיר לא מוסיפים שגיאה מיותרת למדידות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון הנילוס אדום בריכוז של 10 / מיקרוגרם מיליליטר מומס באתנול כיתה מגיב אלכוהול. אחסן את הפתרון הזה בחושך ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון אתנול 30% (v / v) במים וחנות deionized ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את כל הדגימות של אצות באותו הריכוז ביומסה (5 גר &#39;/ ליטר מומלץ) ובדיוק באותה צורה כמו בסטנדרטים המשמשים במדידה. עושה זאת על ידי שני דוגמאות מיובשות מראש המתלים בכמות המתאימהשל חיץ פוספט (dibasic אשלגן זרחה 0.6 גר &#39;/ ל&#39;, monobasic 1.4 גר &#39;/ L אשלגן פוספט), או התאמת הריכוז של תרבות של אצות גדלה עד 5 גר&#39; / ליטר עם חיץ פוספט לאחר מדידת העכירות. הערה: לעתים קרובות יש מדידות שבוצעו בתרביות של אצות חיות שגיאה גדולה יותר הקשורים בהם בהתאם לדיוק של עקומת כיול עכירות. Resuspending דגימות יבשות עשוי לדרוש השימוש בhomogenizer לפזר ביומסה באופן מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל דגימה, לערבב 80 μl של פתרון אתנול 30%, 10 μl של פתרון הנילוס האדום, ו10 μl של השעיה אצות בבאר אחד של צלחת 96 היטב. כדי להסביר כראוי לשונות של מדידת הקרינה, לבצע 5 חזרות של כל דגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל עקום כיול של שתי נקודות עם סטנדרטים שהוכנו קודם לכן על מנת לתת דין וחשבון לוריאציות היום יום במכשיר וההכנה. הכן את הסטנדרטים למדידת הקרינה באמצעות sהליך ame כדוגמאות. הערה: באופן כללי שתי נקודות מספיקות לכיול של המכשיר, ניתן להפעיל שלוש נקודות כדי לאמת את הליניאריות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע מדידות הקרינה בספקטרופוטומטר צלחת קורא רב גם. התנאים הבאים נמצאו להניב תוצאות עקביות ביותר 11: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנער ב1,200 סל&quot;ד, מסלול 3 מ&quot;מ, ל30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על 40 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנער ב1,200 סל&quot;ד, מסלול 3 מ&quot;מ, ל30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא הקרינה, עירור ב 530 ננומטר, פליטה ב 604 ננומטר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמיר את מדידות הקרינה לתוכן שמן באמצעות התוצאות מהסטנדרטים הפנימיים. </li></ol> 4. טכניקת מיקרוסקופ פלואורסצנטי הערה: הפרוטוקול מכתים המתואר בסעיף 3 מיועד לניתוח כמוני, אבל זה גם יכול להיות שימושי כדי לספק ייצוגים חזותיים של טכניקות המבוסס על כתם במשך pu החינוכי וההמחשהrposes. כדי להפיק תמונות של הקרינה מדגם אחד דורש מיקרוסקופ אופטי עם מקורות שידור ותאורת epifluorescence נוסף מסורתיים. מסנני אור עירור והפליטה בטווח 530 ננומטר (ירוק) ו604 ננומטר (אדום), בהתאמה, יש צורך בכתם האדום הנילוס, כמו גם מצלמה מותקנת מיקרוסקופ עם התוכנה נלווית. התמונות מוצגות במחקר זה (איור 1) נרכשו באמצעות מיקרוסקופ שדה בהיר מצויד במצלמה ומונוכרום ליחידת ממיר RGB. ההליך להפקת תמונות הקרינה הנילוס אדום שימוש בכלים אלה הוא המפורטים להלן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מדגם תרבות עם הכתם האדום הנילוס על פי סעיף 3 לפרוטוקול. הערה: מדגם בטווח ריכוז 5 גר &#39;/ ליטר מייצר שקופיות של צפיפות תאים נאותה ללא צפיפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השלים שלב 3.6 של הפרוטוקול מכתים, להכין שקופיות מיקרוסקופ של מדגם מעובד על פי נהלי מעבדה סטנדרטיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל עם מיקרוסקופ במצב שידור, טען את השקופיות שהוכנו למיקרוסקופ, ולאתר את התאים בהגדלה הרצויה (תמונות מוצגות במאמר זה נרכשו במטרה 100X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהתמקד, לעבור למיקרוסקופ מהעברה למצב תאורת epifluorescence. מקור האור צריך להיות עכשיו מגיע ישירות מהעדשה האובייקטיבית (זה יכול להיות אישר באופן חזותי על ידי התבוננות במרחב שבין השקופיות והעדשה האובייקטיבית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מסנן עירור ירוק למקור האור ומסנן פליטת אדום לתוך נתיב תצפית האור; הקרינה של התאים המוכתמים צריכה עכשיו להיות גלויה ישירות דרך העינית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבור את מצב תצפית מיקרוסקופ מהעינית למצלמה המותקן ומשתמש בתוכנת צפייה ללכוד תמונה של תאי fluorescing. בהתאם לרגישות של המצלמה, המדגם לא ייתכן בתחילה מופיע בחלון התצוגה המקדימה (כלומר המסךלהיות שחור); כדי לתקן את זה, להתאים את זמן החשיפה ורווח של המצלמה לרמה שבה התאים גלויים. הגדרות ספציפיות תשתנה עם מכשירים, ציוד וסוגי תאים. </li></ol>

<ol><li>Chisti, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodiesel+from+microalgae%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Adv%22%5BJournal%5D)">Biodiesel from microalgae.</a> Biotechnol. Adv. 25, 294-306 (2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((National+Algal+Biofuels+Technology+Roadmap.+Energy+Efficiency+%26+Renewable+Energy%5BTitle%5D)+AND+%22U.S.+Department+of+Energy%2C+Office+of+Energy+Efficiency+and+Renewable+Energy%2C+Biomass+Program%22%5BJournal%5D)">National Algal Biofuels Technology Roadmap. Energy Efficiency & Renewable Energy.</a> U.S. Department of Energy, Office of Energy Efficiency and Renewable Energy, Biomass Program. , Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www1.eere.energy.gov/bioenergy/pdfs/algal_biofuels_roadmap.pdf">http://www1.eere.energy.gov/bioenergy/pdfs/algal_biofuels_roadmap.pdf</a> (2010).</li>
<li>de la Hoz Siegler, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+microalgal+productivity+using+an+adaptive%2C+non-linear+model+based+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresour.+Technol%22%5BJournal%5D)">Optimization of microalgal productivity using an adaptive, non-linear model based strategy.</a> Bioresour. Technol. 104, 537-546 (2012).</li>
<li>Bligh, E. G., Dyer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid+method+of+total+lipid+extraction+and+purification%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Biochem.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A Rapid method of total lipid extraction and purification.</a> Can. J. Biochem. Physiol. 37, 911-917 (1959).</li>
<li>Hara, A., Radin, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+extraction+of+tissues+with+a+low-toxicity+solvent%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Lipid extraction of tissues with a low-toxicity solvent.</a> Anal. Biochem. 90, 420-426 (1978).</li>
<li>Han, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+methods+used+for+microalgal+lipid-content+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Energ.+Procedia%22%5BJournal%5D)">Review of methods used for microalgal lipid-content analysis.</a> Energ. Procedia. 12, 944-950 (2011).</li>
<li>Pino, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+high+throughput+microscopic+assessment+of+fat+mass+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Biochemical and high throughput microscopic assessment of fat mass in Caenorhabditis elegans.</a> J. Vis. Exp. (73), (2013).</li>
<li>Sitepu, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+high-throughput+Nile+red+fluorescence+assay+for+estimating+intracellular+lipids+in+a+variety+of+yeast+species%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Meth%22%5BJournal%5D)">An improved high-throughput Nile red fluorescence assay for estimating intracellular lipids in a variety of yeast species.</a> J. Microbiol. Meth. 91, 321-328 (2012).</li>
<li>Izard, J., Limberger, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+screening+method+for+quantitation+of+bacterial+cell+lipids+from+whole+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Meth%22%5BJournal%5D)">Rapid screening method for quantitation of bacterial cell lipids from whole cells.</a> J. Microbiol. Meth. 55, 411-418 (2003).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+throughput+Nile+red+method+for+quantitative+measurement+of+neutral+lipids+in+microalgae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Meth%22%5BJournal%5D)">A high throughput Nile red method for quantitative measurement of neutral lipids in microalgae.</a> J. Microbiol. Meth. 77, 41-47 (2009).</li>
<li>de la Hoz Siegler, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+reliability+of+fluorescence-based+neutral+lipid+content+measurements+in+microalgal+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Algal+Res%22%5BJournal%5D)">Improving the reliability of fluorescence-based neutral lipid content measurements in microalgal cultures.</a> Algal Res. 1, 176-184 (2012).</li>
<li>de la Jara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+determination+of+lipid+content+in+a+marine+dinoflagellate%2C+Crypthecodinium+cohnii%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phycol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric determination of lipid content in a marine dinoflagellate, Crypthecodinium cohnii.</a> J. Appl. Phycol. 15, 433-438 (2003).</li>
<li>Elsey, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+measurement+of+microalgal+neutral+lipids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Meth%22%5BJournal%5D)">Fluorescent measurement of microalgal neutral lipids.</a> J. Microbiol. Meth. 68, 639-642 (2007).</li>
<li>Feng, G. -D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+FT-IR+and+Nile+Red+methods+for+microalgal+lipid+characterization+and+biomass+composition+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresour.+Technol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of FT-IR and Nile Red methods for microalgal lipid characterization and biomass composition determination.</a> Bioresour. Technol. 128, 107-112 (2013).</li>
<li>Guzmán, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimate+by+means+of+flow+cytometry+of+variation+in+composition+of+fatty+acids+from+Tetraselmis+suecica+in+response+to+culture+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Aquacult.+Int%22%5BJournal%5D)">Estimate by means of flow cytometry of variation in composition of fatty acids from Tetraselmis suecica in response to culture conditions.</a> Aquacult. Int. 18, 189-199 (2010).</li>
<li>Huang, G. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+screening+method+for+lipid+production+in+alga+based+on+Nile+red+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Biomass+Bioenerg%22%5BJournal%5D)">Rapid screening method for lipid production in alga based on Nile red fluorescence.</a> Biomass Bioenerg. 33, 1386-1392 (2009).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+method+for+the+determination+of+lipid+from+the+green+alga+Botryococcus+braunii%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Tech%22%5BJournal%5D)">Rapid method for the determination of lipid from the green alga Botryococcus braunii.</a> Biotechnol. Tech. 12, 553-556 (1998).</li>
<li>Montero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+high-lipid+content+strains+of+the+marine+microalga+Tetraselmis+suecica+for+biodiesel+production+by+flow+cytometry+and+single-cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phycol%22%5BJournal%5D)">Isolation of high-lipid content strains of the marine microalga Tetraselmis suecica for biodiesel production by flow cytometry and single-cell sorting.</a> J. Appl. Phycol. 23, 1053-1057 (2011).</li>
<li>Vigeolas, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+partial+characterization+of+mutants+with+elevated+lipid+content+in+Chlorella+sorokiniana+and+Scenedesmus+obliquus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Isolation and partial characterization of mutants with elevated lipid content in Chlorella sorokiniana and Scenedesmus obliquus.</a> J. Biotechnol. 162, 3-12 (2012).</li>
<li>Bertozzini, E., et al. Application of the standard addition method for the absolute quantification of neutral lipids in microalgae using Nile red. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBertozzini%2C+E+%22J.+Microbiol.+Meth%22">J. Microbiol. Meth</a>. 87, 17-23 (2011).</li>
<li>Kou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+measurement+of+lipid+content+in+the+model+organism+Chlamydomonas+reinhardtii%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phycol%22%5BJournal%5D)">Fluorescent measurement of lipid content in the model organism Chlamydomonas reinhardtii.</a> J. Appl. Phycol. , 1-9 (2013).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

האצות המשמשות בעקומה סטנדרטית חייבים להיות אותו המין טיפח באותם תנאים ניסיוניים כמו אלה שנמדדו. שינויים משמעותיים בהרכב תקשורת, טכניקת טיפוח, ופרוטוקול מכתים יכולים להשפיע על עוצמת קריאת הקרינה. חילוץ הקסאן (המתואר בסעיפי 1 ו -2) שימש כדי לקבוע את תוכן שומנים הניטרלי של דגימות בשימוש בעקומה סטנדרטית. עבור מדידות עוצמת הקרינה מדויקות, כל הדגימות חייבת להיות מנותחות באותו הריכוז ביומסה (5 גר &#39;/ ליטר היה בשימוש במחקר זה). תכולת שמן ולאחר מכן ניתן לקבוע בקלות על ידי השוואה לעקומה ...

בשל יכולתם כדי לאחסן גופי שומנים בדם בתנאי לחץ מסוימים, אצות קיבלו תשומת לב רבה בשנים האחרונות כמקור דלק מתחדש פוטנציאל 1,2. שומנים ניטראליים יכולים להסביר מעל 60% מהמשקל היבש של התאים בתנאי גידול מתאימים 3. עם זאת, התעשייה אין פרוטוקול סטנדרטי פשוט, נקי, מהיר, אמין ולכמת תוכן שומנים של תאי אצות על מנת לפקח כראוי ביצועי Bioprocess, לנתח תרבויות, ומסך לזנים חדשים. שיטת gravimetric בליי-דייר שפותחה לפני כמה שנים 50 נותרת בין הטכניקות הנפוצות ביותר בשימוש כיום 4,5. בעוד הליך זה הוא פשוט, אמין, וקל לביצוע, זה זמן רב, מחייב כרכי מדגם גדולים, ועושה שימוש בחומרים רעילים. זה לא מעשי לניתוח דגימות רבות מריצת תסיסה או הקרנה לזנים עשיר בנפט חדש. בשיטות אחרות יש בeen מפותח, אבל בדרך כלל דורש ציוד מתקדם ולא תוקננו 6. אלטרנטיבה שצברה עניין רב היא כתם הנילוס האדום. הנילוס האדום, צבע שהמאיר מעדיף בסביבות שאינן קוטביות, בו נעשה שימוש כדי לזהות או לכמת גופי שומנים באורגניזמים שונים, כולל נמטודות 7, 8 שמרים, חיידקים 9, ואצות 10-19. טכניקות ראשוניות מעורבת הנילוס האדום היו בעיקר איכותיות או חצי כמותית, המשלבות את הכתם עם spectrophotometry היחיד קובט או cytometry זרימה. בנוסף, יש כמה סוגים של אצות כגון אצות ירוקות בארות תא עבות המכילות בעיקר בלתי חדירים לצבע, שהגביל את הטווח של הטכניקה 10. השיפורים אחרונים בשיטת צביעת הנילוס האדומה כבר דיווחו העוקפים את החסרונות הראשוניים של הפרוטוקול 10,11. מכתים את התאים בנוכחות קארier ממס כגון DMSO 10 או 10,11 אתנול linearizes הקשר בין תכולת שמן וספיג, המאפשר מדידות כמותיות אמינות. הממס עוזר permeabilize קרום התא, כך שמולקולות הנילוס האדומים יכולות לעבור דרכו. בנוסף, שילוב ספקטרופוטומטר עם יכולות קריאת מיקרו צלחת מאפשר פרוטוקולי תפוקה גבוהים המתאימים לניתוח כמוני. בפירוט שמאמר זה שיטה פשוטה למדידת תכולת שמן של תאי אצות על ידי צביעת תרבויות עם הנילוס האדום בנוכחות של אתנול, ממס מתון. על מנת אופן מדויק ביותר להסביר את רעש רקע במדידות, עקומת סטנדרט מקשרת עוצמת הקרינה לתוכן שמן היא פותח באמצעות תאי אצות של הרכב נפט ידוע. השיטה מותאמת מפרוטוקולים שפורסמו בעבר 10,11. באמצעות ספקטרופוטומטר 96 היטב, אחד הוא מסוגל לנתח את אותה הכמות של דגימות בשעה thaלא היה לוקח ימים כדי לפקח על ידי שיטות gravimetric. יתר על כן, על ידי כיול באמצעות מדגמים מייצגים של מיני אצות הרצויים בשיטה זו מייצרת מדידות מדויקות יחסית אשר מתייחסות ישירות לפירוש. קיימים פרוטוקולים רבים מתאר שיטות של מכתים את האצות עם הנילוס האדום מותאמים לזנים ויישומים שונים; הפרוטוקול המובא כאן פותח במקור על ידי דה לה הוז סיגלר ואח&#39;. 11 לprotothecoides Auxenochlorella, vulgaris כלורלה, dimorphus Scenedesmus, וobliquus Scenedesmus, למרות שסביר להניח מתאים למינים רבים נוספים וכיתות. זה תוכנן עם היישום הספציפי של ביצועי Bioprocess ניטור וזה עובד באותה המידה גם עבור דגימות מיובשות בעבר ודגימות רטובות מתרבות הולך וגדל.

<table><tbody><tr><td>משקל</td><td></td><td></td><td></td>יבש</tr><tr><td>25 מ"ל פיפטות חד פעמיות</td><td>פישר</td><td>13-676-10K</td><td></td></tr><tr><td>נורת פיפטה</td><td>פישר</td><td>13-681-51</td><td></td></tr><tr><td>40 מ"ל צינורות צנטריפוגה טפלון של נלג'ין</td><td>פישר</td><td>05-562-16A</td><td>טפלון דרוש לכלים</td></tr><tr><td>במשקל הקסאן (פוליפרופילן)</td><td>פישר</td><td>2-202B</td><td></td></tr><tr><td>1.5 מ"ל מיקרוצנטריפוגה צינורות</td><td>פישר</td><td>05-408-129</td><td></td></tr> תנור ייבוש <tr><td>צנטריפוגה</td><td>Sorvall</td><td>RC6plus</td><td></td></tr><tr><td>(Fisher 625D)</td><td>פישר</td><td>13-254-2</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני אחסון</td><td>פישר</td><td>0337-4</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה ספסל (Eppendorf 5415D)</td><td>פישר</td><td>05-40-100</td><td></td></tr><tr><td>כימות גרבימטרי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>טיט חרסינה (קורסטק)</td><td>פישר</td><td>12-961A</td><td></td></tr><tr><td>עלי חרסינה (קורסטק)</td><td>פישר</td><td>12-961-5A</td><td></td></tr><tr><td>40 מ"ל צינורות צנטריפוגה (FEP)</td><td>פישר</td><td>05-562-16A</td><td>יכול להשתמש גם בצינורות זכוכית</td></tr><tr><td>פיפטות זכוכית פסטר</td><td>פישר</td><td>13-678-20C</td><td></td></tr><tr><td>כלי אלומיניום במשקל פישר</td><td></td><td>08-732-101</td><td></td></tr><tr><td>Hexanes</td><td>Fisher</td><td>H292-4</td><td></td></tr><tr><td>כימות פלואורומטרי של תכולת</td><td></td><td></td><td></td>שמן</tr><tr><td>קורא צלחות פלואורסצנטי רב בארות</td><td>Thermo Lab Systems</td> תוכנת קורא <td>פלואורוסקאן Ascent</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Systems</td><td>תוכנת עלייה 2.6</td><td></td></tr><tr><td>COSTAR 96 צלחת באר עם תחתית עגולה</td><td>פישר</td><td>06-443-2</td><td></td></tr><tr><td>נילוס אדום</td><td>סיגמא</td><td>N3013-100MG</td><td></td></tr><tr><td>אתנול (דרגת ריאגנט אלכוהול)</td><td>פישר</td><td>AC65109-0020</td><td></td></tr><tr><td>הדמיה תאים</td><td></td><td></td><td></td>פלואורסצנטיים</tr><tr><td>Leica DMRXA2 (או שווה ערך) מיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>DMRXA2</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ</td><td>פישר</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי מיקרוסקופ מחליק</td><td>פישר</td><td>12-541B</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה</td><td>Qimaging</td><td>Retiga Ex</td><td></td></tr><tr><td>Imaging תוכנה</td><td>Qimaging</td><td>QCapture v.1.1.8</td><td></td></tr></tbody></table>

פשוט ומהיר פרוטוקול למדידת שומנים ניטרלי בתאי אצות באמצעות הקרינה

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

אצות נחשבות מועמדים מצוינים למקורות דלק מתחדשים בשל יכולות אחסון שומנים הטבעיים שלהם. ניטור חזק של תהליכי תסיסה של אצות והקרנה לזנים עשירים בנפט חדש מחייב פרוטוקול מהיר ואמין לקביעת תוכן שומנים תאיים. שיטות קיימות כיום מסתמכות במידה רבה על שיטות gravimetric כדי לקבוע תכולת שמן, טכניקות שפותחו לפני עשרות שנים, כי הם זמן רב ודורשות כמויות מדגם גדולות. במאמר זה, הנילוס האדום, צבע פלואורסצנטי שכבר נעשה שימוש כדי לזהות את נוכחותם של גופי שומנים בסוגים רבים של אורגניזמים, הוא שולב בפרוטוקול פשוט, מהיר, ואמין למדידת התוכן הניטרלי שומנים של protothecoides Auxenochlorella, ירוק אצה. השיטה משתמשת אתנול, ממס מתון יחסית, לpermeabilize קרום התא לפני הצביעה ו96 גם מיקרו צלחת כדי להגדיל את קיבולת המדגם במהלך מדידות עוצמת הקרינה. זה כבר עיצובאד עם היישום הספציפי של ביצועי Bioprocess הניטור. דגימות מיובשות בעבר או דוגמאות חיות מתרבות הולך וגדל ניתן להשתמש בassay.

תאי אצות נציג מוכתמים בצבע אדום הנילוס מתוארים באיור 1. החלקים A ו-B של תמונות תצוגת איור 1 א protothecoides גדל בחנקן עודף, מה שמוביל להצטברות שומנים תאית נמוכה מאוד. בחלקי C ו-D, דגימות של א &#39; protothecoides גדל תחת מגבלת חנקן מוצג. תחת תאורת שידור, גופי השומנים של התא יכולים להיות דמיינו עם בדיקה מדוקדקת של איור 1 ג, שבו הם מופיעים כמבנים עגולים מבריקים ומהווים את רוב נפח ...

פרוטוקול פשוט כדי לקבוע את תוכן שומנים הניטרלי של תאי אצות באמצעות הליך מכתים הנילוס אדום מתואר. טכניקה לחיסכון בזמן זה מציעה אלטרנטיבה לפרוטוקולי כימות מסורתיים מבוסס gravimetric שומנים בדם. זה תוכנן עבור היישום הספציפי של ביצועי Bioprocess הניטור.

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא למדוד את תכולת הליפידים הניטרליים של תאי אצות באמצעות צבע הפלואורסצנציה Nile red. דבר זה מושג תחילה על ידי השעיה של התאים בתמיסת אתנול כדי להפוך את דופן התא וממברנת התא לחדירות. בשלב שני מתווסף צבע הפלואורסצנציה Nile red, החודר לתאים ונצבר באזורים הבלתי פולריים של התא, כולל בגופי הליפידים הניטרליים.בשלב הבא, הדגימות נחשפות למקור אור עירור של 530 nanometers, הגורם ל-Nile red שנספג בגופי השומן הניטרליים לפלוט פלואורסצנציה באורך גל של 604 nanometers. תוצאות מתקבלות בקנה מידה רחב על ידי ביצוע הבדיקות האינדיבידואליות בלוחית מיקרו-בארים (micro well multipl) ושימוש בספקטרופוטומטר להפקת קריאות פלואורסצנציה מהירות. הקריאות מראות קשר ליניארי בין תכולת השומן הניטרלי של תאי האצות לבין עוצמת מדידת הפלואורסצנציה.ניתן להמיר מדידות פלואורסצנציה לתכולת שמן באמצעות עקומת כיול שהוכנה עם תאים בעלי הרכב שמן ידוע. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני פרוטוקולים קיימים, כגון שיטת ה-Blydire הגרווימטרית, הוא שהיא מאפשרת קביעה מהירה של תכולת ליפידים ניטרליים תוך שימוש בחומרים הזמינים ברוב המעבדות. שיטה זו מספקת משוב מיידי על ביצועי הביו-תהליך במהלך גידול אצות.בנוסף, התפוקה הגבוהה המאפשרת קריאה באמצעות פלטת 96 בארות היא אידיאלית למחקרי סריקה ולניסויי פקטורים. אף ששיטה זו עברה אופטימיזציה עבור chlorella ו-S. Desus, ניתן להתאימה בקלות לניתוח של מיני אצות אחרים. כדי להתחיל, הוצאו נפח דגימה מתרבית האצות הצומחת שיספק לפחות 200 milligrams של ביומסה יבשה.עדיף להשתמש ב-400 עד 600 milligrams. סבב את הדגימה בצנטריפוגה בטמפרטורה של 4 °C למשך 10 דקות ב-10,000 ×g, השלף את הנוזל העליון (supernatant) ושטוף את המשקע (pellet) בנפח שווה של בופר פוספט שהוכן באותו pH של מצע הגידול.חזור על תהליך זה עבור סך של שלושה שלבי שטיפה. השהה מחדש את המשקע במים דה-יוניים והעבר אותו לכלי שקילה שנשקל מראש. הנח לדגימה להתייבש בטמפרטורה של 50 °C למשך 48 שעות.ניתן לאחסן את תרביות האצות המיובשות בטמפרטורת החדר לשימוש עתידי. מודדים כ-50 milligrams של ביומסה של אצות מיובשות לצלוחית שקילה. מעבירים את הביומסה למכתש שנשטף מראש ב-hexane במידת הצורך, ושוטפים את צלוחית השקילה בכמות קטנה של hexane באמצעות פיפטה כדי להעביר את כל הביומסה למכתש.בשלב הבא, טחנו את הביומסה של האצות במשך חמש דקות באמצעות עלי. התחילו בטחינה עדינה והגבירו בהדרגה את העוצמה. טחנו את הביומסה עד לקבלת משחה חלקה ועדינה.במהלך פרק הזמן של חמש דקות, הוסיפו מספר מיליליטרים של hexane למכתש וערבבו את התערובת (slurry) שהתקבלה בעזרת העלי כדי להומוגן אותה. ודאו שכל שאריות התאים שנדבקו לדפנות המכתש הופרדו והושעו בנוזל. לאחר מכן, העבירו את תערובת ה-hexane ומסות התאים לשפופרת צנטריפוגה תואמת.חזור על הפעולה שלוש עד חמש פעמים עד שכל הביומסה תועבר למבחנה לצנטריפוגה. צנטריפוג את הדגימה בטמפרטורה של 4 °C למשך 20 דקות ב-10,000 ×g. לאחר הצנטריפוגה, העבר בזהירות באמצעות פיפט את הנוזל העליון (supernatant) לכלי שקילה ממתכת שנשקל מראש, אותו ניתן לאחסן במנדף.בצעו מיצוי שני עם הקסאן על ידי הוספת 3 mL של הקסאן למשקע וערבוב נמרץ במכשיר וורטקס (vortex). חזרו על תהליך הצנטריפוגה והעברת הנוזל העליון (supernatant) למשך דקה אחת. קבעו את מסת השמן שמוצתה באופן גרבימטרי לאחר שההקסאן התאדה לחלוטין.לצורך כימות פלואורומטרי, הכין את כל דגימות האצות בריכוז מסה ביולוגית זהה ובאותה אופן שבו הוכנו התקנים המשמשים למדידה. בצע זאת על ידי תליה של דגימות מיובשות מראש בכמות המתאימה של בופר פוספט. במידת הצורך, השתמש בהומוגניזר כדי להקל על תליה מחדש של תאי אצות מיובשים.עבור כל דגימה, ערבבו 80 µL של תמיסת ethanol 30% מוכנה, 10 µL של תמיסת Nile red מוכנה ו-10 µL של תרחיף אצות בתוך באער אחת של פלטת 96 באערים. כדי להתחשב כראוי בשונות של מדידת הפלואורסצנציה, בצעו חמישה חזרות לכל דגימה. לאחר מכן, הריצו עקומת כיול של שתי נקודות עם תמיסות סטנדרט שהוכנו מראש.על מנת להתחשב בשינויים היומיים במכשיר ובהכנה לביצוע מדידות פלואורסצנציה בספקטרופוטומטר עם קורא רב-בארים, הגדירו את הפרמטרים לניעור במהירות של 1,200 RPM ובמסלול מעגלי של שלושה מילימטרים למשך 30 שניות, ולאחריו דגירה בטמפרטורה של 40 °C למשך 10 דקות. בצעו ניעור נוסף במהירות של 1,200 RPM ובמסלול מעגלי של שלושה מילימטרים למשך 30 שניות, והגדירו רישום פלואורסצנציה עם עירור ב-530 nanometers ופליטה ב-604 nanometers. בשלב הסופי, התחילו את ההרצה.המיר את מדידות הפלואורסצנציה לתוכן שמן באמצעות התוצאות מהסטנדרטים הפנימיים לצורך ביצוע מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. השתמש בדגימה שהוכנה עם צבע Nile red כדי להכין למשטח מיקרוסקופ של דגימת התהליך בהתאם לנהלי מעבדה סטנדרטיים. החל מהמיקרוסקופ במצב תמסורת (transmission mode), טען את המשטח שהוכן לתוך המיקרוסקופ ואתר את התאים בהגדלה הרצויה.לאחר המיקוד, העבר את המיקרוסקופ ממצב תאורה בשידור (transmission) למצב תאורה פלואורסצנטית אפי-פלואורסצנטית (epi fluorescence). מקור האור אמור להגיע כעת ישירות מהעדשה האובייקטיבית, דבר שניתן לאשר חזותית על ידי התבוננות בחלל שבין הזכוכית למסלול העדשה האובייקטיבית. הכנס מסנן עירור ירוק למקור האור ומסנן פליטה אדום למסלול אור התצפית.הפלואורסצנציה של התאים הצבועים אמורה להיות כעת גלויה ישירות דרך העינית. העבירו את מצב התצפית של המיקרוסקופ מהעינית למצלמה המותקנת והשתמשו בתוכנת תצוגה כדי לצלם תמונה של התאים הפלואורסצנטיים. הגדרות ספציפיות ישתנו בהתאם למכשירים, לציוד ולסוגי התאים.בתמונות מוצגים תאי אצות מייצגים שצבעו בצבע Nile red; נראה כי גידול של prothe בעודף חנקן מוביל להצטברות נמוכה מאוד של ליפידים תוך-תאיים, בניגוד לדגימות של OIDs שגודלו תחת הגבלה של חנקן. תחת תאורה בשידור (transmission illumination), ניתן להבחין בגופי הליפידים של התאים בבדיקה מעמיקה, כאשר הם נראים כמבנים מעגליים מבריקים ומהווים את רוב נפח התא. התאים המוצגים כאן מכילים רק 5% שמן לפי משקל יבש ואינם מכילים רמות משמעותיות של גופי ליפידים כאשר הם מוצגים בתנאי התאורה המתאימים.ההבדלים בדגימות אלו מודגשים. התאים הדלים בשמן נראים כטבעות פלואורסצנטיות עם גופים כהים, בעוד שהתאים העשירים בשמן מציגים זוהר כתום-אדום בהיר במקומות שבהם הצטברו גופי ליפידים. Nile red יפגין פלואורסצנציה באורכי גל שונים בהתאם לנוכחות של ליפידים ניטרליים, פוספוליפידים הממוקמים בדופן התא וחלבונים תאיים לא פולריים, וזו הסיבה שהתאים הדלים בשמן נראים כטבעות פלואורסצנטיות עם גופים כהים.חוסר ספציפיות זה הוא גם הגורם לרמת הפלואורסצנציה ברקע במהלך מדידות הספקטרופוטומטר של ליפידים ניטרליים; תחת התנאים המותאמים של הבדיקה, ניתן להשיג בקלות עקומות כיול עם ערכי R square הגבוהים מ-0.980. הקשר בין תכולת השמן בתאים לבין הפלואורסצנציה הופך ללא-לינארי אם התאים נצבעים בתמיסה שאין בה ממס נשא כגון אתנול. הנתונים המוצגים כאן הם בעלי R square של 0.395, והתקבלו על ידי ביצוע הפרוטוקול בתמיסת 0%אתנול.לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו ב-15 עד 20 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, קריטי להבטיח שכל הדגימות הוכנו בריכוז ביומסה זהה. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי אופן מדידת תכולת הליפידים הניטרליים של תאי algal באמצעות פרוטוקולי מיצוי ב-hexane מסורתיים ומבצע פרוצדורת הצביעה הפלואורסצנטית הפשוטה יותר ב-NAL red.

a-simple-rapid-protocol-for-measuring-neutral-lipids-algal-cells

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

אנחנו מציגים את assay מהיר הקרינה מבוססי המנטרת את קצב מרווה פלואורסצנציה כמדד לפעילות ערוץ gramicidin. ערוצי gramicidin משמשים מתמרים כוח מולקולרית כדי לעקוב אחר שינויים במאפייני bilayer שומנים כמו חש ידי חלבונים bilayer פורש.

Gramicidin מבוססי Assay פלואורסצנטי; לקביעת מולקולות קטנות פוטנציאל שינוי מאפייני bilayer ליפידים

סרטון זה מדגים פרוטוקול לזיהוי וכימות שומנים ניטרליים בתאי אצות על ידי צביעתם בצבע אדום הנילוס.

צביעה אדומה של הנילוס: טכניקה לזיהוי וכימות שומנים ניטרליים תוך-תאיים באצות

שיטה לקביעת תכולת חומצות שומן והרכב באצות המבוססות על הפרעה מכאנית של תאים, מיצוי שומנים מבוסס ממס, transesterification, וכימות וזיהוי של חומצות שומן באמצעות גז כרומטוגרפיה מתוארת. תקן פנימי tripentadecanoin משמש כדי לפצות על ההפסדים האפשריים בחילוץ וtransesterification שלם.

ניתוח התוכן של חומצות שומן והרכב בMicroalgae

השימוש בפלואורופורים להדמיה in vivo יכול להיות מוגבל מאוד על ידי אופסוניזציה, פינוי מהיר, רגישות זיהוי נמוכה והשפעות ציטוטוקסיות על המארח. אנקפסולציה של פלואורופורים בליפוזומים על ידי הידרציה ואקסטרוזיה מובילה לכיבוי והגנה פלואורסצנטיים המאפשרים הדמיה in vivo עם רגישות גילוי גבוהה.

הקרינה-מרווה של Fluorophore הקרוב אינפרא אדום-כמוס liposomal ככלי ל In vivo דימות אופטי

אנו מתארים בדיקה מבוססת פלואורסצנטית למדידת ערבול פוספוליפידים בליפוזומים חד-צדדיים גדולים שהורכבו מחדש עם אופסין.

Assay מבוסס-הקרינה של פעילות פוספוליפידים Scramblase

כאן, אנו מתארים את פרוטוקול כדי להשיג את השומנים droplet אינדקס (אינדקס LD) ללמוד את הדינמיקה של triacylglycerols בתאים בתרבית בניסויים תפוקה גבוהה. LD אינדקס וזמינותו היא שיטה קלה ומהימנה של המשתמשת BODIPY 493/503. Assay הזה אינו צריך שאיבת השומנים dispendious או ניתוח מיקרוסקופ.

השומנים נחישות אינדקס על-ידי קרינה פלואורסצנטית נוזלי השחזור של פטריות פתוגניות זקן התירס פחמון

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לבנות מעבדה-סולם בועה עמודה photobioreactors ולהשתמש בהן כדי microalgae תרבות. הוא מספק גם שיטה לקביעת שיעור הצמיחה תרבות ותוכן השומנים נייטרלי.

טיפוח של ירוק Microalgae בועה עמודה Photobioreactors ואת וזמינותו עבור ליפידים נייטרלי

פרוטוקול זה מתאר את הייצור של ליפוזומים וכיצד ניתן להשתמש בקיבוע על פני השטח ולעבור באופן אינדיבידואלי בצורה מקבילה מסיבית תוך שימוש במיקרוסקופיה פלואורסצנטית. הדבר מאפשר לכמת את הגודל והאחידות בין ליפוזומים בודדים של האוכלוסייה.

מיקרוסקופ כמותי מיקרופלואורסצנטית בודד מבוססי ליפומה שיטת הזיהוי של הומוגניות בין ליפוזומים בודדים

כאן, אנו מתארים פרוטוקולים באמצעות חיישני שומנים פלואורסצנטיים וליפוזומים כדי לקבוע אם חלבון מחלץ ומעביר פוספטידילסרין או פוספטידילינוזיטול 4-פוספט במבחנה.

מדידות מבוססות פלואורסצנטיות של פוספטידילסרין/פוספטידילינוזיטול 4-חילופי פוספט בין ממברנות

פרוטוקול זה מציג שיטת הדמיה פלואורסצנטית המשתמשת במחלקה של פלואורופורים ליפידים רגישים ל- pH כדי לעקוב אחר תנועת קרום השומנים במהלך אקסוציטוזה של התא ומחזור האנדוציטוזה.

מדידת תחלופת שומנים בממברנה עם ND6 אנלוגי פלואורסצנטי רגיש ל- pH

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הדמיה אוטופלואורסצנטית שלב אחר שלב והערכה של שינויים בחלבון פיקובילין באצות אדומות בהתבסס על אנליזה ספקטרלית. זוהי שיטה נטולת תוויות ולא הרסנית להערכת הסתגלות התאית לבתי גידול קיצוניים, כאשר רק חומר נדיר זמין ותאים גדלים לאט, או בכלל לא, בתנאי מעבדה.

הדמיה אוטופלואורסצנטית להערכת פיזיולוגיה של אצות אדומות

למד פרוטוקול פשוט ומהיר למדידת שומנים ניטרלי בתאי אצות באמצעות צביעת Nile Red. השיטה מאפשרת ניטור יעיל של ביצועי ביופרוססים בזמן אמת.

פשוט ומהיר פרוטוקול למדידת שומנים ניטרלי בתאי אצות באמצעות הקרינה

גלה סרטונים נוספים