Name: קביעת הפעילות של תנועה הספונטנית ב Melanogaster דרוזופילה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-10T16:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: למדו כיצד לכמת פעילות תנועה ספונטנית ב-Drosophila melanogaster באמצעות מוניטורים אינפרא-אדומים ותוכנת ניתוח נתונים. פרוטוקול זה מאפשר מדידה מדויקת של פעילות פיזית בזבובי פירות בתנאים מבוקרים לחקר נוירומדע והתנהגות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מהמכון הלאומי לבריאות (AG023088 לBR).

הערה: זן קנטון-S הוא קו הרקע הסטנדרטי פראי מהסוג שהתקבל ממרכז מלאי בלומינגטון. 1. הכנת מזון ומתכון ל1,000 מיליליטר של מזון הערה: סעיף זה מתאר את הפרוטוקול להכנת מזון. סירי מתכת גדולים משמשים להכנה כ -18 L של מזון בכל פעם. הפרוטוקול המתואר כאן הוא צמצומים ומשתמש 1,000 מיליליטר H 2 O. מזון autoclaved פעמיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 113 סוכרוז גרם ו28 שמרי בירה גרם ב643 מיליליטר מים. עזוב את המרכיבים על סט צלחת חם ב ° C25 עם בר ומערבב לערבב ברחבי 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון מזון החיטוי במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את קמח תירס 49 גרם ו8.1 אגר גרם ב268 מיליליטר מים ומוסיפים לתערובת מזון autoclaved המתוארת בשלב 1.2. מערבבים היטב בכף גדולה או מקצף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תערובת מזון החיטוי במשך עוד 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המזון על צלחת ולתת להתקרר עם ערבוב מתמיד עם בר ומערבב. אניf יש להוסיף פתרונות נוספים למזון, כגון mifepristone (RU486), לשמור את האוכל על פלטה חשמלית שהוקמה על 60 מעלות צלזיוס ולהוסיף פתרון כאשר המזון מגיע לטמפרטורה הנדרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים 2.4 tegosept גרם ב10.7 מיליליטר EtOH 100% ולשמור על צלחת קרה עם בוחש לפזר לחלוטין ומערבבים במשך כ 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת פתרון tegosept למזון כאשר הטמפרטורה של מזון היא 60 מעלות צלזיוס ומערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במשאבה או דיספנסר למזון לשפוך על 10 מיליליטר של מזון לתוך בקבוקון רחב. באמצעות דיספנסר למזון אפשר לשפוך מזון בו זמנית ל100 בקבוקונים רחבים, פלסטיק (מגש 1) בכל פעם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסה את צלוחיות עם Kimwipes ובד גבינה ולהשאיר מזון בטמפרטורת חדר למשך שעה 12-24 כדי להתקרר. שמור את המזון על 4 מעלות צלזיוס ולהשתמש בתוך 3-4 שבועות. לחמם את המזון לטמפרטורת חדר לפני השימוש לעבודה לטוס. </li></ol> 2. הכנת בקבוקי זכוכית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין אוכל על פי הפרוטוקול המפורט בשלב 1. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aliquot 5 מיליליטר של מזון לכל בקבוקון צר, זכוכית, המהווה את הגודל הנכון עבור צגי האוכלוסייה. סכום זה של מזון צריך להיות נמוך מספיק כדי להיות מתחת לטבעת הנמוכה ביותר של מסך האוכלוסייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי האוכל מתקרר לטמפרטורת חדר לכסות את צלוחיות עם אטמי ספוג ולשמור אותם על 4 מעלות צלזיוס עד 2 שבועות. בגלל כמות המזון בבקבוקון היא נמוכה למדי, עדיף להשתמש במזון בתוך שבוע או שבועות כדי למנוע כל ייבוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את הבקבוקונים לטמפרטורת חדר לפני השימוש. </li></ol> 3. תחזוקה של הזבובים ההורים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדל את הזבובים בבקבוקוני פלסטיק רחבים עם אוכל מעבדה סטנדרטי ולשמור את הבקבוקונים בתא סביבתי humidified, בטמפרטורה מבוקרת של 25 מעלות צלזיוס בשעתי אור 12 / מחזור כהה. תקופת שעון הקיץ מתחילה בשעת 6:00 בבוקר במעבדה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בבוקר למבוגרים ברורים עף מהבקבוקונים שממנו זבובי הורים ייגבו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף לנשור eclosed החדשים ולהפריד אותם לפי מין על CO 2 משטח תוך 8 שעות לאחר eclosion לוודא כי נקבות הזבוב הן בתולות. זבובים להתחיל להזדווג 8 שעות לאחר eclosion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר זבובי זכרים ונקבות הבתולה הם בין 5 ל 10 ימים של גיל, לשים 10 זכרים ו10 זבובים נשיים בבקבוקון עם אוכל סטנדרטי וכמה גרגרים של שמרים פעילים על העליונה. הערה: בקרת הצפיפות של הזחלים על ידי שימוש באותו המספר של זבובים ולשמור אותם בבקבוקון ליומיים. תוספת של שמרים פעילים מקדמת ייצור ביצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הזבובים להזדווג ולהטיל את הביצים בחדר סביבתי בטמפרטורה מבוקרת ב25 ° C עם שעות אור 12 / מחזור כהה למשך 2 ימים. הגדרת 5-10 בקבוקונים של זבובי הורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הזבובים לבקבוקון פלסטיק חדש בכל יום אחר ולשמור את הבקבוקונים עם הביצים באינקובטור ב25 ° C. </li></ol> 4. אוסף של זבובים ניסויי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 9 ימים זבובים יתחילו eclose מהבקבוקונים שבי parentaזבובי l הטילו ביצים (שמתוארות בשלב 3.6.). וזורקים ברורים הזבובים שeclosed במהלך היום הראשון ולהחזיר את הבקבוקונים לחממה. רוב הזבובים eclosed ביום 1 הם נקבות. אוכלוסייה יותר מסונכרנת של זבובים תהיה eclose ביום 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך זבובי eclosed חדש 24 מקום שעות על 2 רפידות CO ולאסוף 25 זכר ונקבה 25 זבובים לבקבוקונים עם מכחול או כף מתכת. שמור על זבובים על 2 רפידות CO לתקופה קצרה של זמן כדי למזער השפעות של CO 2. רשום את יום eclosion על הבקבוקון. להרכיב לפחות 5 בקבוקונים לשכפל לניסוי ולקבוצת ביקורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הבקבוקונים בתאי סביבה בטמפרטורה מבוקרת ב25 ° C עם שעות אור 12 / מחזור כהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הזבובים לבקבוקון פלסטיק חדש בכל יום אחר באמצעות משפך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזדקן הזבובים עד שיגיע לגיל הרצוי לניסויים. </li></ol> 5. הגדרת צגי הניידות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח אתאוכלוסייה מנטרת בחממה בטמפרטורה מבוקרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חברו כל צג עם כבל טלפון 4 תיל לאספקת חשמל הממשק היחידה (PSIU) באמצעות מפצלי 5 כיוונים (רב קווים), שניתן לחבר עד 5 צגי פרט פתח אחד בPSIU. ראה איורים 1 א ו -2 ב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את PSIU לשקע קו מתח (100-240 V). חבר את מחבר פלט אספקת חשמל לאחד 2 שקעי PSIU הזדווגות. האור הירוק הסמוך מאיר בצבע ירוק כאשר הוא מחובר כמו שצריך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את PSIU לאפיק טורי האוניברסלי חומרה (USB). חבר את כבל ה-USB בין חומרת USB עם מקינטוש או PC של Windows להקלטת נתונים. זה יהיה הכי טוב שיש מחשב ייעודי רק לאיסוף נתונים מאז האוסף פועל במשך ימים בכל פעם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הורד את תוכנת ה-USB (PSIUdrivers.zip). תוכנת מנהל התקן ה-USB המשמשת את ממשק ספק כוח וצריך להוריד רק פעם אחת. זה מסנתזקישור נתונים בין תוכנת המחשב וצגי PSIU / פעילות. לשימוש במחשב ויציאת ה-COM עבור Macintosh משתמש ביציאה טורית פשוטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הורד את תוכנת המחשב למקינטוש OSX (Intel) או למחשב Windows תוכניות (XP/Vista/7) על ידי ביצוע הוראות הניתנות על ידי 308.pdf הערות יצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את תכנית המחשב ולהגדיר את התכנית על ידי לחיצה על העדפות, אורות או מוניטורים. התכנית תפעל עד שהמשתמש בוחר &quot;לפרוש&quot; כדי לעצור את התכנית. אם תכנית המחשב או כיבוי מחשב הצגים ימשיכו לספור הפרעות קורה, אבל הספירה לא תירשם עד שהשיקה מחדש את התכנית. במקרה שהקריאה הראשונה תכלול את כל הסעיפים מאז הפעם האחרונה PSIU שלח את הנתונים למחשב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר בכרטיסייה ההעדפות ולבחור את היציאה טורית, PSIU עבור מקינטוש ו-COM למחשב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את מרווח הקריאה שנע בין שניות, דקות או שעות. </li> &lt;li&gt; בחר צגים: לכל אחד יש צג מספר ייחודי הניתן על ידי היצרן. בחר טווח הצג שמתאים למספרים הניתנים לצגים על ידי היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיבת האורות: ודא שכל המסכים מחובר כהלכה, שמסומן על ידי אור ירוק בסמוך למספר לפקח על התוכנה. אור אדום מצביע על כך שהחיבור אבד, וקופסא שחורה מצביעה על כך שהמערכת כבויה או בצורה לא נכונה להגדיר. </li></ol> 6. הגדרת הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר בקבוקוני זכוכית המכילים מזון מ4 מעלות צלזיוס ולתת להם חמים לטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זבובי זכרים ונקבה נפרדים באותו הגיל על כרית CO 2. ללימודי הזדקנות זה אפשרי להתחיל את לימודי ניידות מוקדם ככל 3 ימים של גיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים 10 זכר או נקבת 10 זבובים לכל בקבוקון זכוכית המכיל מזון. השתמש לפחות שלוש צלוחיות עבור כל קו ניסיוני ובקרה של זבובים ולכל מין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור vials בצד שלהם, עד שהזבובים להתאושש מCO 2 כדי להבטיח את הזבובים לא להיתקע במזון. זבובים נפרדים בכ 8:00 ולהשאיר אותם במשך כשעה 2 בטמפרטורת חדר כדי להתאושש מCO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הבקבוקונים בתוך צגי האוכלוסייה שוכנו בחממות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את הנתונים שנאספו בשעות הראשונות שלאחר 24 לשים הזבובים לתוך החממה כדי לאפשר להם להסתגל לסביבה החדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הזבובים אחרי 3 או 4 ימים לבקבוקונים חדשים, כדי למנוע ייבוש של המזון. אם זבובים נוטים למוות או גיל 40 ימים ומעלה, עובר את הזבובים אחרי 2 ימים ולהשתמש בנתונים שנאספו ליום 2. כמו כן, להשתמש יותר משלושה בקבוקונים לכל קבוצה כדי להבטיח משכפל הולם. נתונים מצלוחיות עם זבובים מתים יש להתעלם ולא נכללו בניתוח. </li></ol> 7. ריצה מנטרת את הפעילות וחישוב הפעילות הספונטנית סה&quot;כ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר העדפות - המרווח לאיסוף נתונים &lt;.br /&gt; הערה: תוכנת המחשב מאפשרת איסוף של הנתונים במרווחי זמן הנעים בין 1 שני ל60 דקות. 10 ו30 תקופות דקות כבר נמצאו כדי לספק מידע מספיק על ניידות מבלי מספר עצום של נקודות זמן. בתקופת הזמן שנבחר, התכנית תשלח את הספירה הכוללת הנוכחית עבור כל צג למחשב ומתחילה לספור שוב מאפס. תכנית המחשב מאחסנת את הנתונים בתיקייה חדשה שנוצרה על ידי מערכת נתונים במחשב. נתונים שנאספו בכל צג מאוחסנים בנפרד, ומסמכי טקסט בודדים נוצרים לכל בקבוקון. הנתונים שנאספו ברציפות כל עוד פועלת התכנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף הניסוי, סריקת נתונים באמצעות FileScan110X עבור Macintosh OSX (Intel) או SystemMB108 לתכנית Windows PC (XP/Vista/7). הערה: תכנית הסריקה מבטלת קריאות כפולות ומוודא שההקלטות הושלמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הנתונים שנאספו במסגרת זמן וp ספציפיeriod ימים. בחר שם ניסיוני ולהעתיק את הקבצים מתיקיית הנתונים במחשב לצורך הניתוח. הערה: בשלב זה, ניתן לשנות את מרווחי פעילות והוסבו לאלה שונים. הנתונים המקוריים יישארו מאוחסנים בתיקיית הנתונים במחשב וניתן לאחזר כל עוד הם לא יימחקו. </li></ol> 8. ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העתק את הנתונים שנאספו בקבצי טקסט לעמודות של גיליונות אלקטרוניים של Excel לניתוח נתונים. נתונים שנאספו על ידי תוכנה זו נמצאים בעמודים, שמכילים מספרים המייצגים את הפעילות הכוללת בצג יחיד על פני תקופה של הזמן שנבחר על ידי החוקר. הערה: נתונים שנאספו עבור כל צג נמצאים בקבצי טקסט נפרדים. ישנן 32 עמודות עבור כל צג. שישה העמודים הראשונים ריקים ומכילים רק 0; הבא שלושה מכילים את הנתונים שנאספו בטבעת התחתונה, באמצע, ובטבעת העליונה. שאר הערוצים ניתן למחוק מכיוון שהם אינם מכילים את כל הנתונים. כל טבעת פלטיערך יחיד לכל זמן. ראה צילום מסך של הנתונים הגולמיים באיור 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את סך הפעילות תוך פרק זמן רצוי עבור כל צג שמייצג את הסכום של פעילות שנאסף בשלושה גבהים שונים של קרניים אינפרא אדומות. הערה: פרק הזמן שיכול לנוע בין כמה שעות, 24 שעות או כמה ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את הפעילות של תנועה הממוצעת וסטיית התקן בין 3 מסכי שמייצגים 3 משכפל ביולוגי. הערה: ניתן לנתח נתונים למובהקות סטטיסטיות על ידי שימוש במספר הבדיקות. מבחן t סטודנטים שני זנב של, ניתוח בכיוון אחד של שונות (ANOVA) ומבחן post hoc-Tukey HSD יכולים לשמש כדי לקבוע את ההשפעות של כמה מניפולציות גנטיות או סביבתיות ביום 24 שעות של פעילות של תנועה ספונטנית 16. ישנם מספר של תוכניות אחרות שניתן להשתמש בם וכבר פרסמו 17 בעבר. </li></ol>

<ol><li>Ali, Y. O., Escala, W. E., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+Locomotor%2C+Learning%2C+and+Memory+Deficits+in+Drosophila+Models+of+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration.</a> J. Vis. Exp. 49, 2504(2011).</li>
<li>Jones, M. A., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+age-related+impairment+in+locomotor+and+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for age-related impairment in locomotor and behaviors.</a> Exp. Gerontol. 46 (5), 320-325 (2011).</li>
<li>Grotewiel, M. S., Martin, I., Bhandari, p, Cook-Wiends, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+senescence+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Functional senescence in Drosophila melanogaster.</a> Aging Res. Rev. 4 (3), 372-397 (2005).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Iterative+Negative+Geotaxis+%28RING%29%3A+a+New+Method+for+Assessing+Age-related+Locomotor+Decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid Iterative Negative Geotaxis (RING): a New Method for Assessing Age-related Locomotor Decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Nichols, C. D., Bechnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+assay+Drosophila+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J. Vis. Exp. 61, 3791 (2012).</li>
<li>Long, T. A., Rice, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+locomotor+activity+mediates+Intralocus+sexual+conflict+in+a+laboratory-adapted+population+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Adult locomotor activity mediates Intralocus sexual conflict in a laboratory-adapted population of Drosophila melanogaster.</a> Proc. Biol. Sci. 274 (1629), 3105-3112 (2007).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotor+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotor in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. 24 (24), 1096 (2009).</li>
<li>Marden, J. H., Rogina, B., Montooth, K. L., Helfand, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+tradeoff+between+aging+and+organismal+performance+of+Indy+long-lived+mutant+flies%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Conditional tradeoff between aging and organismal performance of Indy long-lived mutant flies.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100 (6), 3369-3372 (2003).</li>
<li>Grover, D., Yang, J., Tavaré, S., Tower, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+tracking+of+fly+movement+and+gene+expression+using+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous tracking of fly movement and gene expression using GFP.</a> BMC Biotechnol. 8, 93(2008).</li>
<li>Grover, D., Yang, J., Tavaré, S., Tower, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+tracking+of+movement+and+gene+expression+in+multiple+Drosophila+melanogaster+flies+using+GFP+and+DsRED+fluorescent+reporter+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Simultaneous tracking of movement and gene expression in multiple Drosophila melanogaster flies using GFP and DsRED fluorescent reporter transgenes.</a> BMC Res Notes. 2 (58), 1-11 (2009).</li>
<li>Ardekani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+tracking+and+behaviour+monitoring+of+multiple+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+R.+Soc.+Interface%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional tracking and behaviour monitoring of multiple fruit flies.</a> J. R. Soc. Interface. 10 (78), (2013).</li>
<li>Branson, K. A., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li>
<li>Zou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recording+Lifetime+Behavior+and+Movement+in+an+Invertebrate+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Recording Lifetime Behavior and Movement in an Invertebrate Model.</a> PLOS One. 6 (4), (2011).</li>
<li>Valente, D., Golani, I., Mitra, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+trajectory+of+Drosophila+melanogaster+in+a+circular+open+field+arena%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Analysis of the trajectory of Drosophila melanogaster in a circular open field arena.</a> PLoS One. 2 (10), 1083(2007).</li>
<li>Inan, O. T., Marcu, O., Sanchez, M. E., Bhattacharya, S., Kovacs, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+portable+system+for+monitoring+the+behavioral+activity+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A portable system for monitoring the behavioral activity of Drosophila.</a> J Neurosci. Methods. 202 (1), 45-52 (2011).</li>
<li>Parashar, V., Rogina, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((dSir2+mediates+the+increased+spontaneous+physical+activity+in+flies+on+calorie+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">dSir2 mediates the increased spontaneous physical activity in flies on calorie restriction.</a> Aging. 1 (6), 529-541 (2009).</li>
<li>Kaneuchi, T., Togawa, T., Matsuo, T., Fuyama, Y., Aigaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+measurement+of+H2O2+resistance+in+Drosophila+using+an+activity+monitor%5BTitle%5D)+AND+%22Biogerontology%22%5BJournal%5D)">Efficient measurement of H2O2 resistance in Drosophila using an activity monitor.</a> Biogerontology. 4 (3), 157-165 (2003).</li>
<li>Carey, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-specific+and+lifetime+behavior+patterns+in+Drosophila+melanogaster+and+the+Mediterranean+fruit+fly%2C+Ceratitis+capitata%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Age-specific and lifetime behavior patterns in Drosophila melanogaster and the Mediterranean fruit fly, Ceratitis capitata.</a> Exp. Gerontol. 41 (1), 93-97 (2006).</li>
<li>Rhodenizer, D., Martin, I., Bhandari, P., Pletcher, S. D., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+environmental+factors+impact+age-related+impairment+of+negative+geotaxis+in+Drosophila+by+altering+age-dependent+climbing+speed%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Genetic and environmental factors impact age-related impairment of negative geotaxis in Drosophila by altering age-dependent climbing speed.</a> Exp. Gerontol. 43 (8), 739-749 (2008).</li>
<li>Osterwalder, T., Yoon, K. S., White, B. H., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conditional+tissue-specific+transgene+expression+system+using+inducible+GAL4%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">A conditional tissue-specific transgene expression system using inducible GAL4.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98 (22), 12596-12601 (2001).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Chiu, J. C., Low, K. H., Pike, D. H., Yildirim, E., Edery, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+locomotor+activity+to+study+circadian+rhythms+and+sleep+parameters+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying locomotor activity to study circadian rhythms and sleep parameters in Drosophila.</a> J. Vis. Exp. 43, 2157(2010).</li>
<li>Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+activity+level+monitoring+using+the+Drosophila+Activity+Monitoring+%28DAM%29+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protoc%22%5BJournal%5D)">Locomotor activity level monitoring using the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System.</a> Cold Spring Harbor Protoc. 11, (2010).</li>
<li>Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPfeiffenberger%2C+C+%22Processing+circadian+data+collected+from+the+Drosophila+Activity+Monitoring+%28DAM%29+System.+Protoc%22">Processing circadian data collected from the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System. Protoc</a>. 11, Cold Spring Harbor. (2010).</li>
<li>Ardekani, R., Tavaré, S., Tower, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+senescence+in+Drosophila+using+video+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessing senescence in Drosophila using video tracking.</a> Methods Mol. Biol. 965, 501-516 (2013).</li>
</ol>

יש לנו מה למסור.

פעילות של תנועה ספונטנית של זבובים מושפעים מגורמים רבים כגון גיל, רקע גנטי, ומין 2,13,18,19. בנוסף, גורמים סביבתיים כגון תוכן הקלורי של מזון, בטמפרטורה של הסביבה, תוספת של תרופות שונות, ומחזור אור היום / הלילה יכולים להשפיע על פעילות זבוב. למשל, יש לי זבובי זכרים באותו הגיל פעילות גופנית ספונטנית גבוהה יותר בהשוואה לנשים (איור 1). לכן, זבובים מאותו הגיל והמין צריכים להיות בהשוואה זה לזה. כאשר בוחנים את ההשפעה של מניפולציות גנטיות על פעילות זבוב, כגון בי...

זבובי פירות, דרוזופילה melanogaster, שימשו כמודל אורגניזם רב ערך כדי ללמוד מנגנוני התנהגויות מורכבות, כגון למידה וזיכרון, אינטראקציה חברתית, תוקפנות, שימוש בסמים, שינה, תפקוד חושי, חיזור, הזדווגות ו1,2. התנהגות אחד שנחקרה באמצעות פרוטוקולים מרובים היא פעילות של תנועה ספונטנית. geotaxis השלילית הייתה אחת מהשיטות הראשונות שפותחו למדידת פעילות דרוזופילה, ופרוטוקול זה כולל מדידת אחוז של זבובים שמגיעים לגובה מסוים של הבקבוקון לאחר הזבובים הזדעזעו לחלק התחתון של 1,3 מיכל. לשיטה זו יתרונות של להיות פשוט, זול, ומאז היא אינה דורשת שום ציוד מיוחד אותו ניתן לבצע בכל מעבדה. זה כבר נעשה שימוש ככלי מיון רב ערך כדי ללמוד את ההשפעות של מניפולציות גנטיות שונות על לטוס ניידות 3. עם זאת, זה זמן ועבודה אינטנסיביתיש nd האפשרות של הטיה עקב טלטול משתנה של הבקבוקונים והקלטות אנושיות. שיטת geotaxis השלילית שופרה על ידי פיתוח השיטה המהיר איטרטיבי שלילי geotaxis (טבעת) 4,5, אשר לוקחת תמונות של הבקבוקונים לטוס הבאים רועד של הזבובים לתחתית. היתרון של פרוטוקול זה הוא הרגישות שלו ואת האפשרות של בדיקת מספר רב של בקבוקונים לטוס באותו הזמן. עם זאת, פרוטוקול זה עדיין יש לו את הפוטנציאל לטעויות אנושות, ורק מודד geotaxis השלילית. מעבדות אחרות השתמשו בתצפית פשוטה בבקבוקוני תרבות כדי לקבוע פעילות של תנועה 6. לאחרונה מספר מערכות הקלטת וידאו למדידת פעילות של תנועה זבוב פותחו. פרוטוקול ניטור וידאו אחד מספק זמן להסתגלות לפני הקלטת 7. השיטה שתוארה על ידי Slawson et al. משתמשת גם דופק אוויר להפסיק movemenלא עד לתחילת הקלטה, אשר עלול להיות גורם לחץ לבעלי החיים 7. שיטה זו מספקת מידע על מהירות ממוצעת, מהירות מקסימלית, לבזבז זמן בתנועה, וכו &#39;מערכת מעקב תלת ממדים אחר מודדת את המהירות המקסימלי של זבובים בודדים במהלך ~ 0.2 שניות של ההמראה טיסה חינם 8. פרוטוקול ניטור וידאו תלת ממדים משתמש זבובים להביע GFP ומספר רבים של מצלמות מצויד במסננים המאפשרים זיהוי של הקרינה כדי לקבוע לטוס ניידות 9. זבובים בפרוטוקול זה נוטים להפגין דפוסי טיסה גליליים, שהוא עלול להיות בגלל הצורה של תרבות דרוזופילה בקבוקונים 10. שיטה זו שופרה באמצעות כיפה המאפשרת מדידת תנועה ספונטנית של שני זבובים 11. שיטת תפוקה גבוהה המשתמשת במצלמה כדי לעקוב באופן אוטומטי ולכמת את ההתנהגות האישית וחברתית של דרוזופילה הייתה גם תיארתי 12. Zou etאל. פיתח מערכת התנהגותיות צג (BMS), שמשתמשת בשתי מצלמות בסיוע מחשב להקליט כל החיים התנהגות ותנועות כגון מנוחה, נעו, מעופפים, אכילה, שתייה, או מותם של פירות tephritid בודדים עף 13. מספר מערכות וידאו אחרות פותחו כדי לעקוב אחר פעילות התנהגותית זבוב 14,15. כאן אנו מתארים שיטה לכימות פעילות דרוזופילה שמנצלת צגי אוכלוסייה. צגים אלה הם שוכנו ובטמפרטורת חממות מבוקרת לחות ב ° C25 על מחזור אור היום והלילה 12 שעה. לכל אחד יש לפקח אוכלוסיית קרניים אינפרא אדומות הוצבו בטבעות ממוקמות בשלושה גבהים שונים. בכל פעם שזבוב עובר על פני הטבעות זה קוטע את הקרן אינפרא אדומה, אשר נרשמה על ידי מעבד שבאופן עצמאי רשומות וסופרת את הפעילות של זבובים בתוך הבקבוקון. מעבד טוען את הפעילות הכוללת בתוך הבקבוקון למחשב בinterva הגדרת המשתמשls שיכול להשתנות משנייה 1 עד 60 דקות. השיטה המתוארת כאן מספקת מספיק זמן לזבובים להסתגל לסביבה החדשה ומאפשרת מדידה בו זמנית של הפעילות של תנועה הספונטנית של כמה ש120 אוכלוסיות של זבובים. בנוסף, אנו מתארים הכנת האוכל, לעוף תחזוקה, הקמת צגי ניידות אוכלוסייה בחממות בטמפרטורה מבוקרת, וגורמים פוטנציאליים שעשויים להשפיע על תוצאות. שיטה זו יכולה לשמש כדי לחקור כיצד שינויים גנטיים או סביבתיים שונים משפיעים על הפעילות של תנועה ספונטנית של הזבובים.

<table><tbody><tr><td>סוכרוז FCC מזון בדרגה 100 פאונד,</td> <td>פישר סיינטיפיק MP ביומדיקל</td><td>ICN90471380</td><td></td></tr><tr><td>Brewer' s Yeast</td><td>Fisher Scientific MP Biomedicals</td><td>ICN90331280</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Agar Fine</td><td>SciMart</td><td>DR-820-25F</td><td></td></tr><tr><td>קמח תירס</td><td>פישר Scientific MP Biomedicals</td><td>ICN90141125</td><td></td></tr><tr><td>Methyl4-hydroxybenzoate, tegosept</td><td>Sigma</td><td>H5501-5KG</td><td></td></tr><tr><td>EtOH</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Active Dry</td><td>Yeast Fisher Scientific</td><td>ICN10140001</td><td></td></tr><tr><td>Fly CO2 pad</td><td>LabScientific</td><td>BGSU-7</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סטריאו</td><td>אולימפוס</td><td>SZ40</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila פחמן דו חמצני (CO2) מיכל</td><td>Airgas</td><td>UN1013</td><td></td></tr><tr><td>מברשת צבע קטנה לדחיפת הזבובים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>בקבוקון מעטפת רחב</td><td>Fischer Scientific</td><td>AS519</td><td></td></tr><tr><td>Buzzplugs לבקבוקוני פלסטיק רחבים</td><td>Fischer Scientific</td><td>AS275</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני זכוכית (25 x 95 מ"מ)</td> <td>Fischer Scientific Kimble 60931-8</td><td>AS-574</td><td></td></tr><tr><td>פקקי ספוג לבקבוקוני זכוכית</td><td>SciMart</td><td>DR-750</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Food Dispenser</td><td>Applied Scientific (Fischer מדעי)</td><td>AS780Q</td><td></td></tr><tr><td>DPM Drosophila מוניטור אוכלוסייה</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספק כוח DC עם כבל קו</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PSIU9 יחידת ממשק אספקת החשמל</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כבלי טלפון ומפצלי 5 כיוונים</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חומרת אפיק טורי אוניברסלי (USB)</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחשב Macintosh או Windows עם יציאת</td><td></td><td></td><td></td>UCB</tr><tr><td>תוכנה לרכישת נתונים DAMSystem308X עבור Macintoch OSX (Intel)</td><td>www.trikinetics.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAMSystem308 Data Acquisition Software for Windows PC (XP/Vista/7)</td><td>www.trikinetics.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>תוכנת DAMFileScan108X עבור Macintosh</td><td></td><td></td><td></td>www.trikinetics.com</tr><tr><td>תוכנת DAMFileScan108X למחשב Windows (XP/Vista/7)</td><td>www.trikinetics.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוכנת USB (PSIUdrivers.zip)www.trikinetics.com</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>DAMSystem Notes 308</td><td><a href="http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf">(http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf</a></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

קביעת הפעילות של תנועה הספונטנית ב<em&gt; melanogaster דרוזופילה</em

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

melanogaster דרוזופילה שמש כאורגניזם מודל מצוין ללמוד מניפולציות סביבתיות וגנטיות המשפיעות על התנהגות. התנהגות כזו היא פעילות של תנועה ספונטנית. כאן אנו מתארים הפרוטוקול שלנו אשר מנצל צגי אוכלוסיית דרוזופילה ומערכת מעקב המאפשרת ניטור רציף של הפעילות של תנועה הספונטנית של זבובים במשך כמה ימים בכל פעם. שיטה זו היא פשוטה, אמינה, ואובייקטיבית וניתן להשתמש בם כדי לבחון את השפעות הזדקנות, מין, שינויים בתוכן הקלורי של מזון, תוספת של תרופות, או מניפולציות גנטיות המחקות מחלות אנושיות.

<html> הפעילות של תנועה הספונטנית בדרוזופילה תלויה במין זבוב (איור 3 א), כמות קלוריות של המזון (איור 3 ב) ומחזור האור / חושך. ברגע שהאור כבוי פעילות זבוב מקטינה באופן דרמטי. איור 3A ממחיש 24 שעות הקלטת הפעילות של תנועה של זבובי זכרים ונקבות. כוכבית על ציר ה-x מציין את הזמן שבו האור היה כבוי והמעבר למחזור כהה. איור 3 ממחיש את סטיית התקן בין הפעילות של תנועה הספונטנית הממוצעת שנאספו בשלושה צגי אוכלוסייה לזכר...

תסיסנית שימושית בלומדת מניפולציות גנטיות או סביבתיות המשפיעות על התנהגויות כמו פעילות של תנועה ספונטנית. כאן אנו מתארים פרוטוקול אשר מנצל צגים עם קרניים אינפרא אדומות ותוכנות לניתוח נתונים לכמת פעילות של תנועה ספונטנית.

קביעת הפעילות של תנועה הספונטנית ב<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לכמת פעילות מוטורית ספונטנית של זבובים פירות. מטרה זו מושגת תחילה על ידי איסוף והזקנה של זבובים ניסוייים. השלב השני הוא הגדרת מוני אוכלוסייה בתוך אינקובטור בבקרת טמפרטורה והורדת התוכנה המתאימה.בשלב הבא, הזבובים מועברים לבקבוקוני זכוכית ולאחר מכן ממוקמים בתוך מסכי ניטור אוכלוסייה שבהם מופעלים מסכי ניטור הפעילות. השלב הסופי הוא ניתוח הנתונים. בסופו של דבר, מסכי ניטור אוכלוסייה משמשים להצגת הבדלים בפעילות פיזית ספונטנית של זבובים.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון negative geo axis, הוא שהיא מאפשרת תיעוד רציף, פשוט, אמין ואובייקטיבי של פעילות גופנית ספונטנית של אוכלוסיות זבובים מרובות. שיטה זו יכולה לסייע לנו לקבוע כיצד מניפולציות שונות משפיעות על הזבובים. את הפעילות הגופנית הספונטנית המדגימה את הפרוצדורה תבצע Suzanne Kowski, עוזרת מעבדה ממעבדה. כדי להתחיל, הכינו מזון בהתאם לשלבים המפורטים בפרוטוקול הטקסט המצורף והניחו לו להצטנן תוך ערבוב קבוע על פלטה חשמלית.העבירו מנה של חמישה מיליליטרים של מזון לכל מבחנה זכוכית צרה, וודאו שכמות המזון נמוכה מהטבעת התחתונה של האוכלוסייה. המתינו עד שהמזון יתקרר לטמפרטורת החדר. סגרו את המבחנות עם פקקי ספוג ושמרו אותן בטמפרטורה של ארבעה מעלות צלזיוס למשך עד שבועיים.יש לחמם את המבחנות לטמפרטורת החדר לפני השימוש. לאחר מכן, גדלו זבובים מסוג Canton S במבחנות פלסטיק עם מזון מעבדה סטנדרטי. שמרו את המבחנות בתא בעל בקרת טמפרטורה ולחות ב-25 degrees Celsius במחזור של 12 שעות אור וחושך.הסר את הזבובים הבוגרים מהמבחנות בבוקר. לאחר מכן, הפרד את הזבובים שזה עתה נסגרו לפי מין באמצעות פד פחמן דו-חמצני תוך שמונה שעות מהבקיעה כדי להבטיח שהזבובים הנקבות הן בתולות. הכן 10 מבחנות של זבובים הורים על ידי הנחת זכר ונקבה בתולים בני חמישה עד 10 ימים.זבובים בבקבוקון מזון סטנדרטי עם מספר גרגירי שמרים. יש להחזיק את הזבובים באינקובטור בטמפרטורה של 25 °C עם מחזור אור-חושך של 12 שעות למשך יומיים. יש להעביר את הזבובים לבקבוקון פלסטיק חדש מדי יומיים ולהחזיק את הבקבוקונים עם הביצים שהופקו באינקובטור בטמפרטורה של 25 °C.לאחר מכן, יש להסיר ולהשליך את הזבובים שבגרו במהלך היום הראשון ולהחזיר את המבחנות לאינקובטור כדי לאסוף אוכלוסיית זבובים מסונכרנת יותר ביום השני. לאחר מכן, על גבי משטח פחמן דו-חמצני, אסוף במהירות 25 זבובים זכרים ו-25 זבובים נקבות לכל מבחנה בעזרת כף מתכת בתוך 24 שעות. רשום את יום ה-ELO על המבחנה.הכינו לפחות חמישה מבחנות שכפול לכל קבוצה. עבור הקבוצות הניסיוניות וקבוצות הביקורת. שמרו את המבחנות בתאים סביבתיים בבקרת טמפרטורה של 25 °C עם מחזור אור-חושך של 12 שעות.העבירו את הזבובים לבקרי פלסטיק חדשים מדי יומיים למשך 10 ימים. באמצעות משפך, מקמו את מדדי האוכלוסייה באינקובטור בעל בקרת טמפרטורה. לאחר מכן, חברו כל מדד באמצעות כבל טלפון בעל ארבעה גידים ליחידת ממשק אספקת הכוח (PSIU) באמצעות מפצל חמישי.לאחר מכן, חברו את כבל הטלפון ל-PSIU. חברו את ה-PSIU לשקע חשמל של 100 עד 240 וולט, וחברו את מחבר המוצא של ספק הכוח לאחד מחיבורי ה-PSIU התואמים. לאחר מכן, הורידו את תוכנת ה-USB המשמשת את ה-PSIU ליצירת קישור נתונים בין תוכנית המחשב לבין ה-PSIU ומגשרי הפעילות.הפעל את התוכנה. לאחר מכן, תחת הגדרות (preferences), בחר בפורט הטורי PSIU עבור Macintosh.לאחר מכן, בחרו את מרווח הקריאה. בשלב הבא, בחרו את המדדים לפי מספר היצרן הייחודי שלהם. בחרו את טווח המדדים התואם למספרים שהוקצו למדדים.ודאו שכל המסכים מחוברים כראוי על ידי בדיקת הנורה הירוקה. נורה אדומה מעידה על כך שהחיבור אבד. תיבה שחורה מעידה על כך שהמערכת כבויה או שחיבור ה-USB לא בוצע כראוי.הפרידו זבובים זכרים ונקבות בני אותו גיל. על פד עם פחמן דו-חמצמני, העבירו 10 זבובים זכרים ו-10 זבובים נקבות לבקבוקוני זכוכית נפרדים בטמפרטורת החדר.השתמשו בלפחות שלושה מבחנות עבור כל קו ניסויי וביקורת, ועבור כל מין של זבובים, השאירו את המבחנות על צדן עד שהזבובים יתאוששו מהפחמן הדו-חמצני כדי להבטיח שהם לא ייתקעו במזון. השאירו אותם למשך שעתיים בטמפרטורת החדר כדי להתאושש מהפחמן הדו-חמצני. לאחר מכן, הניחו את המבחנות בתוך האוכלוסייה.שמרו את המדגריות בתוך האינקובטורים. העבירו את הזבובים למבחנות חדשות לאחר שלושה או ארבעה ימים כדי למנוע את התייבשות המצע. בסיום הניסוי, סרקו את הנתונים כדי להסיר קריאות כפולות ולהבטיח שהרישומים מלאים.בעזרת סריקת קובץ של 110 x, בחרו את הרווח לאיסוף נתונים והשליכו את הנתונים שנאספו במהלך 24 השעות הראשונות בפרק הזמן שנבחר. התוכנה תשלח למחשב את הספירה הכוללת הנוכחית עבור כל מדד ותתחיל לספור שוב מאפס. לאחר מכן, בחרו שם לניסוי והעתיקו את הקבצים מתיקיית הנתונים במחשב כדי לשמור את הנתונים.התחילו את ניתוח הנתונים על ידי העתקה מדויקת של הנתונים שנאספו מקבצי הטקסט לעמודות בגיליונות אלקטרוניים של Excel. לאחר מכן, חשבו את הפעילות הכוללת בפרק זמן רצוי עבור כל מדד, המייצגת את סכום הפעילות שנאספה משלושה גבהים שונים של קרני אינפרה-אדום. לבסוף, קבעו את ממוצע הפעילות המוטורית ואת סטיית התקן בין שלושת המדדים המייצגים שלושה חזרות ביולוגיות באמצעות מבחן t של Student דו-זנבי.פעילות מוטורית ספונטנית ב-drosophila תלויה במין הזבב ובמחזור האור-חושך. כפי שמוצג בגרף זה של הפעילות הממוצעת של זבובים זכרים ונקבות, החץ מסמן את המעבר מאור לחושך. במקום שבו נצפית ירידה בפעילות, הפעילות הכוללת של זבובים זכרים בני 20 יום עולה כאשר הזבובים מקבלים מחצית מכמות המזון הסטנדרטית בתזונה דלה בקלוריות, בהשוואה לפעילות המופחתת של זבובים בתזונה עשירה בקלוריות.לאחר צפייה בסרטון זה, תגיעו להבנה טובה של האופן שבו ניתן לקבוע את הפעילות הפיזית הספונטנית של drosophila. שיטה זו מסייעת לקבוע כיצד מניפולציות גנטיות או סביבתיות שונות משפיעות על פעילות הזבובים.

determination-spontaneous-locomotor-activity-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

המחקר של התנהגות של תנועה...

וידאו ברזולוציה גבוהה של מעקב אחר תנועה של מבוגרים תסיסנית melanogaster

אנו מתארים נוהלי רישום פעילות של תנועה יומי של...

Assaying פעילות של תנועה כדי ללמוד בקצב היממה ושינה פרמטרים תסיסנית</em

סרטון זה מתאר שיטה פשוטה לכימות תנועת הזבובים ומציג את בדיקת הטיפוס שבוצעה. מבחן טיפוס הזבובים הוא מבחן כללי של תפקוד מוטורי המסתמך על תגובת גיאוטקסיס שלילית.

בדיקת טיפוס זבובים: שיטה לבדיקת תנועה כללית בדרוזופילה מלנוגסטר

סרטון זה מתאר כיצד לעקוב אחר זבובים ההולכים בחופשיות כדי להעריך את יכולת התנועה הכללית שלהם. הפרוטוקול המוצג מדגים את הגדרת הבדיקה וניתוח הנתונים באמצעות תוכנת מעקב וידאו.

מעקב אחר זבובים מהלכים בחופשיות: שיטה להערכת תנועה בדרוזופילה

סרטון וידאו זה מתאר את מערכת ניטור פעילות דרוזופילה (DAM) המשמשת למעקב אחר פעילות לוקומוטורית. חוקרים משתמשים בנתוני פעילות שנאספו מה-DAM כדי לחקור את השעון הביולוגי בזבובי פירות. סרטון הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לטעון זבובים במכשיר ולתעד נתוני פעילות עבור ניסויים צירקדיים.

דרוזופילה מוניטור פעילות (DAM): שיטה למדידת פעילות מוטורית בזבובים

שימוש במצלמת אינטרנט ושילוב של תוכנות חופשיות וזולות, ניתן לנתח דפוסי קטר בדרוזופילה melanogaster כדי לזהות הבדלים במהירות, מרחק, והזמן של פעילויות מוטוריות שונות.

שיטה בעלות נמוכה לניתוח כמו פעילות תפיסה ותנועה ב<em&gt; דרוזופילה</em

מחלת פרקינסון היא הפרעה ניוונית של מערכת עצבים, הנובעת מהניוון של נוירונים דופאמין במערכת העצבים המרכזית, גורמים לליקויי תנועה. מודלים Rotenone מחלת פרקינסון בדרוזופילה. מאמר זה מתאר שני מבחני המאפיינים את ליקויי תנועה הן ספונטניים ולהבהיל מושרים נגרמים על ידי rotenone.

שיטות כדי לאפיין ספונטניות ומושרות רתיעת תנועה במודל של מחלת פרקינסון מושרה Rotenone של<em&gt; דרוזופילה</em

דוח זה מתאר שיטה למדידת פעילות הזחלים של דרוזופילה באמצעות מוניטור פעילות הדרוזופילה TriKinetics. המכשיר משתמש בקרני אינפרא אדום כדי לזהות תנועות של עד 16 בעלי חיים בודדים. ניתן לנתח נתונים כדי לייצג פרמטרי תנועה כולל קצבים ומיקומי בעלי החיים בתוך תאי הבדיקה.

מדידה של הזחל פעילות ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; צג פעילות

הפרוטוקול הנוכחי מעריך את הפעילות המוטורית של דרוזופילה על ידי מעקב וניתוח תנועת הזבובים בזירה בעבודת יד באמצעות תוכנת קוד פתוח פיג'י, התואמת לתוספים לפלח פיקסלים של כל פריים בהתבסס על הקלטת וידאו בחדות גבוהה כדי לחשב פרמטרים של מהירות, מרחק וכו '.

טכניקה פשוטה להערכת פעילות לוקומוטורית בדרוזופילה

הפרוטוקול מציג שיטה בעלת תפוקה גבוהה וחסכונית להערכת רעילות עצבית בזבוב הפירות באמצעות כימות תפקוד לקומוטורי כחלופה למודלים מסורתיים של יונקים. מטרתו להעריך את ההשפעות הנוירוטוקסיות של תרכובות פרמצבטיות, גורמים סביבתיים או שינויים גנטיים באמצעות מודל רגיש, ניתן לשחזור וחיובי מבחינה אתית.

ניתוח התנהגותי של תפקוד לקומוטורי ב-Drosophila melanogaster כקריאה לרעילות עצבית

למדו כיצד לכמת פעילות תנועה ספונטנית ב-Drosophila melanogaster באמצעות מוניטורים אינפרא-אדומים ותוכנת ניתוח נתונים. פרוטוקול זה מאפשר מדידה מדויקת של פעילות פיזית בזבובי פירות בתנאים מבוקרים לחקר נוירומדע והתנהגות.

קביעת הפעילות של תנועה הספונטנית ב

גלה סרטונים נוספים