קביעת הפעילות של תנועה הספונטנית ב Melanogaster דרוזופילה

המטרה הכוללת של הליך זה היא לכמת פעילות תנועה ספונטנית של זבובי פירות. זה מושג על ידי איסוף והזדקנות של זבובי ניסוי. השלב השני הוא להקים מוניטור אוכלוסייה בחממה מבוקרת טמפרטורה ולהוריד את התוכנה המתאימה.

לאחר מכן, הזבובים מועברים לקבצי זכוכית ואז ממוקמים בתוך מוניטורים של אוכלוסייה שבהם מנוהלים מוניטור הפעילות. השלב האחרון הוא ניתוח הנתונים. בסופו של דבר, מנטרי אוכלוסייה משמשים כדי להראות הבדלים בפעילות גופנית ספונטנית של זבובים.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון ציר גיאוגרפי שלילי, הוא בכך שהיא מאפשרת רישום רציף פשוט, אמין ואובייקטיבי של פעילות גופנית ספונטנית של אוכלוסיות מרובות של זבובים. שיטה זו יכולה לסייע לנו לקבוע כיצד מניפולציות שונות משפיעות על זבובים. פעילות גופנית ספונטנית המדגימה את ההליך תהיה סוזן קובסקי, עוזרת מעבדה ממעבדה להתחיל להכין מזון לפי השלבים המפורטים בפרוטוקול הטקסט הנלווה ולתת לו להתקרר עם ערבוב מתמיד על פלטה חמה.

הכניסו חמישה מיליליטר מזון לכל בקבוקון זכוכית צר, וודאו שכמות המזון נמוכה מהטבעת הנמוכה ביותר של האוכלוסייה. עקוב לאחר שהמזון מתקרר לטמפרטורת החדר. מכסים את הבקבוקונים בתקעי ספוג ושומרים אותם על ארבע מעלות צלזיוס עד שבועיים.

מחממים את הבקבוקונים לטמפרטורת החדר לפני השימוש. לאחר מכן גדל קנטון S עף בבקבוקוני פלסטיק עם מזון מעבדה סטנדרטי. שמור את הבקבוקונים בתא מבוקר טמפרטורה לח בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס במחזור חושך בהיר של 12 שעות.

זבובים בוגרים צלולים מהבקבוקונים בבוקר. לאחר מכן הפרד זבובים שזה עתה נסגרו לפי מין על כרית פחמן דו חמצני תוך שמונה שעות לאחר הוולו כדי לוודא שנקבות הזבובים בתולות. הכינו 10 בקבוקונים של זבובי הורים על ידי הנחת זכר ונקבה בתולים בני חמישה עד 10 ימים.

עף בבקבוקון מזון סטנדרטי עם כמה גרגרי שמרים. שמור את הזבובים באינקובטור בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס עם מחזור חושך בהיר של 12 שעות למשך יומיים. העבירו את הזבובים לבקבוקון פלסטיק חדש כל יומיים ושמרו את הבקבוקונים עם הביצים המתקבלות באינקובטור בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן לנקות ולהשליך את הזבובים שהוא סגר במהלך היום הראשון ולהחזיר את הבקבוקונים לאינקובטור כדי לאסוף אוכלוסיית זבובים מסונכרנת יותר ביום השני. לאחר מכן, על כרית פחמן דו חמצני, אספו במהירות 25 זכרים ו-25 נקבות זבובים לכל בקבוקון עם כף מתכת תוך 24 שעות. רשמו את יום ה-ELO על הבקבוקון.

הרכיבו לפחות חמישה בקבוקוני Replicate כל אחד. לקבוצות ניסוי וביקורת. שמור את הבקבוקונים בתאי סביבה מבוקרי טמפרטורה בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס עם מחזור חושך בהיר של 12 שעות.

העבירו את הזבובים לבקבוקון פלסטיק חדש כל יומיים למשך 10 ימים. באמצעות משפך ממקמים את מנטרי האוכלוסייה באינקובטור מבוקר טמפרטורה. לאחר מכן, חבר כל צג עם כבל טלפון בעל ארבעה חוטים ליחידת ממשק אספקת החשמל או ל-PSU באמצעות מפצל בעל חמישה כיוונים.

לאחר מכן חבר את כבל הטלפון ל-PSIU. חבר את ה-PSIU לשקע חשמל של 100 עד 240 וולט, וחבר את מחבר יציאת ספק הכוח לאחד מחיבורי ה-PSIU. לאחר מכן הורד את תוכנת ה-USB המשמשת את ה-PSIU כדי לסנתז קישור נתונים בין תוכנית המחשב ל-PSIU ולצגי הפעילות.

הפעל את התוכנית. ואז תחת העדפות. בחר את ה-PSU של היציאה הטורית עבור Macintosh.

לאחר מכן בחר את מרווח הקריאה. לאחר מכן, בחר את המסכים לפי מספר היצרן הייחודי שלהם. בחר את טווח הצג המתאים למספרים שניתנו לצגים.

ודא שכל המסכים מחוברים כהלכה על ידי חיפוש האור הירוק. נורה אדומה מציינת שהחיבור אבד. תיבה שחורה מציינת שהמערכת כבויה או שחיבור ה-USB לא נוצר כהלכה.

זבובים זכרים ונקבות נפרדים באותו גיל. על כרית פחמן דו חמצני, הניחו 10 זכרים ו-10 נקבות זבובים בטמפרטורת חדר נפרדת. זכוכית vi.

השתמש לפחות בשלושה בקבוקונים עבור כל קו ניסוי ובקרה, ועבור כל מין של זבובים, שמור את הבקבוקונים על צידיהם עד שהזבובים יתאוששו מפחמן דו חמצני כדי להבטיח שהם לא יתקעו במזון. השאירו אותם למשך שעתיים בטמפרטורת החדר כדי להתאושש מתחמוצת הפחמן. לאחר מכן הניחו את הבקבוקונים בתוך האוכלוסייה.

מוניטורים שוכנים בחממות. העבירו את הזבובים לאחר שלושה או ארבעה ימים לבקבוקונים חדשים כדי למנוע ייבוש מזון. בסיום הניסוי, סרוק את הנתונים כדי למנוע קריאות כפולות ולוודא שההקלטות הושלמו.

באמצעות סריקת קבצים 110 x, בחר את מרווח הזמן לאיסוף נתונים והשליך את הנתונים שנאספו במהלך 24 השעות הראשונות בפרק הזמן שנבחר. התוכנית תשלח את הספירה הכוללת הנוכחית עבור כל צג למחשב ותתחיל לספור שוב מאפס. לאחר מכן, בחר שם ניסיוני והעתק את הקבצים מתיקיית נתוני המחשב כדי לשמור את הנתונים.

התחל בניתוח נתונים על ידי העתקה קפדנית של הנתונים שנאספו בקבצי הטקסט לעמודות של גיליונות אלקטרוניים של Excel. לאחר מכן חשב את הפעילות הכוללת בפרק זמן רצוי עבור כל צג המייצג את סכום הפעילות שנאספה בשלושה גבהים שונים של קרני אינפרא אדום. לבסוף, קבע את הפעילות התנועתית הממוצעת ואת סטיית התקן בין שלושת המוניטורים המייצגים שלושה שכפולים ביולוגיים באמצעות מבחן ה-T של התלמיד בעל שני הזנבות.

פעילות תנועתית ספונטנית בדרוזופילה תלויה במין הזבוב ובמחזור החושך הבהיר. כפי שמודגם בגרף זה של הפעילות הממוצעת של זבובים זכרים ונקבות, החץ מסמן את המעבר מאור לחושך. כאשר נראית ירידה בפעילות, הפעילות הכוללת של זבובים זכרים בני 20 יום עולה כאשר הזבובים מקבלים מחצית מכמות המזון הסטנדרטי בדיאטה דלת קלוריות בהשוואה לירידה בפעילות של זבובים בדיאטה עתירת קלוריות.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לקבוע את הפעילות הגופנית הספונטנית של דרוזופילה. שיטה זו מועילה לקבוע כיצד גנטיקה שונה או מניפולציות סביבתיות משפיעות על פעילות הזבובים.