Nephrectomy דוגמנות קרצינומה ספונטני גרורתי של תאי כליות (mRCC) בעכברים בעקבות

המטרה הכוללת של הליך זה היא ליצור קרצינומה ספונטנית של תאי כליה גרורתיים הרלוונטית מבחינה קלינית. זה מושג על ידי הכנת תאי רקה לוק להשתלה. השלב השני הוא ביצוע השתלת תאי גידול כליה אורתוטופיים.

לאחר מכן, לאחר שהגידול גדל, הגידול הראשוני מוסר על ידי ביצוע כריתת כליה. השלב האחרון הוא לעקוב אחר התקדמות גרורות ספונטניות לאחר כריתת כליה ולהעריך את התפלגות המחלה במקומות שונים. בסופו של דבר, פרוטוקול זה מאפשר ניטור של מחלת קרצינומה של תאי כליה גרורתיים ספונטניים ומציע קו מנחה לסטנדרטיזציה של הערכת היעילות של טיפולים ניסיוניים.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון שיטות השתלת תאי גידול חוץ רחמיות, לרוב שטחיות או תת עוריות, הוא בכך שהיא מסכמת קרצינומה של תאי כליה או RCC כפי שהיא מופיעה בחולים, הכוללת את יכולתם של תאי הגידול להתפשט לשאר הגוף. ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על הטיפול בקרצינומה של תאי כליה מכיוון שהמחלה הגרורתית השיטתית היא הגורם העיקרי לתמותה בחולים. מודלים של עכברים בדרך כלל אינם מטפלים במחלה גרורתית ספונטנית שיכולה לפעמים לאחר כריתת כליה.

אם כי שיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי מחלת RCC גרורתית ספונטנית. ניתן ליישם אותו גם על סוגי סרטן אחרים שבהם הסרת גידול ראשונית אופיינית והגורם העיקרי לתמותה הוא הישנות מחלה גרורתית כירורגית. זה כולל בין היתר דגמים של שד ומלנומה.

בדרך כלל אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו בגלל הקושי למצוא את הכליה ולהבטיח שתאי הגידול יישארו מקומיים לאחר ההשתלה ולא ידלפו. ושנית, היעילות מבוצעת ביעילות ומאפשרת התאוששות לאחר הניתוח. לפני ההשתלה האורתוטופית גדלים לוציפראז עכבר מתויג תאי reca או תאי reka Luke כחד-שכבתי לשטף של 75% לאחר טריפסין, איזציה והשעיית resus ב-5% FBS המכיל צנטריפוגת מדיה, התאים חוזרים על עצמם שלוש פעמים עם שטיפה ב-PBS ואז משהים מחדש את התאים במדיה חופשית בסרום לריכוז של חמש פעמים 10 לרנקו לוק הרביעי לכל חמישה מיקרוליטרים של מדיה חופשית בסרום.

לאחר הרדמת עכבר ים מעי עם 2 עד 3% איזוף פלואור צבט את כף הרגל כדי לבדוק אם יש הרדמה מספקת לאחר מריחת משחה וטרינרית על העיניים למניעת התייבשות, הנח את העכבר בשכיבה צדדית ימנית וגלח את הצד השמאלי בין ארבע הגפיים האחוריות. לאחר מכן מרחו אלכוהול ויוד לאורך אזור המותני הגבי. השתמש במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך עור של סנטימטר אחד בכיוון האורך בין הצלע האחרונה למפרק הירך.

לאחר מכן השתמש במספריים לדיסקציה קהה כדי לשחרר את רקמת החיבור מתחת לעור. לאחר מכן, השתמש במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך של 0.5 סנטימטר בכיוון האורך בדופן הבטן. כעת השתמש במלקחיים מעוקלים כדי לדחוף בעדינות כלפי מטה סביב הפצע הפתוח.

זה מחצין את הכליה ומאפשר קיבוע עדין של האיבר לפני ההזרקה. טען מזרק המילטון עם חמישה מיקרוליטרים מתערובת התאים המוכנה להשתלה תת-קפסולרית שטחית. החזק את המחט במקביל לכליה המכוונת לאורך עם הקצה המשופע כלפי מעלה והכנס את המחט מתחת לקפסולת הכליה, אך מעל הפרנכימה.

לאחר שהמחט במקומה, הזרקו את כל התאים עד שנוצרת בועה לבנה קטנה. הסר לאט את המחט מהקפסולה והשתמש מיד באפליקטור סטרילי עם קצה כותנה כדי לחסום את מקום ההזרקה להשתלה תת-קפסולרית פנימית. החל מהצד של הכליה הנגדית לאתר ההשתלה הרצוי.

החזק את המחט עם הקצה המשופע כלפי מעלה ופנימה. הכנס אותו דרך החלק הפנימי של הכליה עד שהמחט נראית לעין, אך לא מנקב את החלל התת-קפסולרי בצד הרחוק. יש להזריק את התאים עד שנוצרת בועה לבנה ולנגב את מקום ההזרקה כדי למנוע דליפה.

החזר בעדינות את הכליה לחלל הגוף. סגור את דופן הבטן באמצעות תפר 5.0 ויקריל נספג. לאחר השלמת ההחלמה, החזיקו את שכבת העור יחד והניחו שניים עד שלושה קליפסים לפצע לפני ההחלמה.

יש לתת 500 מיקרוליטר של 0.9% נתרן כלורי ו-100 מיקרוליטר בופרנורפין תת עורית. 26 עד 30 יום לאחר ההשתלה, יש להרדים את בעל החיים ולחשוף את הכליה כמו קודם. לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להסיר בעדינות את רקמת השומן המחברת מקצה הכליה ולהסיר את בלוטת יותרת הכליה מקצה הגולגולת.

השתמש במלקחיים כדי לתפוס בעדינות את הכליה ולאחר מכן החלק תפר ויקריל 5.0 נספג סביב השופכן, עורק הכליה ווריד הכליה. לאחר מכן, קשרו לאט קשר כפול לאחר הידוק החוטים עם המוסטטים. השתמש במספריים כדי לחתוך מעל הקשר ולהסיר את הכליה.

לאחר הסרת הכליה, בדוק היטב אם יש דימום מהגאות, העורק וצרוב במידת הצורך. לאחר תפירת דופן גוף הבטן באמצעות ויקריל 5.0, השתמש בקליפסים לפצעים כדי לסגור את העור. עקוב אחר בעל החיים מדי יום לאיתור סימני מצוקה, דימום או ניידות מוגבלת.

לאחר המתת חסד של בעל החיים, השתמש במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך שמתחיל מעל השופכה וממשיך במעלה חלל בית החזה עד ללסת התחתונה. השתמש במספריים קהים כדי להפריד את העור משריר דופן הבטן. לאחר מכן, חתכו את העור לאורך הידיים והרגליים וקילפו לאט את העור

בדוק מקרוב את פאשיה העור ואת דופן הבטן לאיתור גושים. לאחר מכן בדוק את בלוטות הלימפה השטחיות. בצע חתך בדופן הבטן וחתוך לאורך הצד הצדדי השמאלי והימני עד לסרעפת.

עם חתך אופקי אחד. הסר את החלק הקדמי של דופן הבטן כדי לחשוף את הקרביים. בדוק את המראה הבלתי מופרע של הקרביים לאיתור גידולים בולטים ביותר.

שימו לב גם לתכולת הקיבה והמעיים לעדויות למזון או לדימום. ציון חזותי של כל איבר עבור נוכחות או היעדר גידול בעבודה מתוך רשימת בדיקה של 22 אתרים, ציונים נערכים בטבלה עבור בעלי החיים בקבוצה מסוימת כדי להשוות את התפלגות המחלה. כעת הסר בזהירות את הכבד ושטוף אותו עם PBS.

לאחר מכן בדוק אותו לאיתור גידולים גסים או חריגות ודרג אותו כמו קודם. לאחר מכן המשך להסיר ולקלוע את הטחול, הכליה והלבלב. לאחר מכן, בדוק את בלוטות הלימפה בבטן, כולל בלוטות הלימפה המותניות, הכליות והמזנטריות.

לאחר הערכת הסרעפת לאיתור עדות להתפשטות גרורתית, יש להסיר את הסרעפת ולבצע שני חתכים רוחביים בחלל בית החזה, להסיר את החלק הקדמי כדי לחשוף את הריאות והלב, להרים בעדינות את הוושט ולחתוך את קנה הנשימה מעל הלב. לאחר הסרת הריאות והלב, העריכו את הרקמות לאיתור גושים. לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי לסחוט את הלב.

חוסר עקביות קפיצית עשוי להצביע על נוכחות של גידול. לבסוף, השתמש במספריים כירורגיים כדי לחתוך באופן ליניארי דרך הגולגולת. הסר בעדינות חתיכות קטנות של גולגולת עד שכל המוח נחשף.

נעשה שימוש במערכת ניקוד חזותית כדי להעריך מחלות, התפלגות וחומרת המחלה בחמש קבוצות שונות של בעלי חיים. קבוצות אלה הראו היקף וחומרה שונים של המחלה. מדידה נוספת המורכבת מהדמיה ביולוגית מיד לאחר ההקרבה שימשה להערכה כמותית של נגעים גרורתיים מיקרו ומקרו.

לאחר שליטה בשתי ההשתלות, כריתת כליה או נתיחה יכולה להיעשות תוך חמש עד 10 דקות לכל בעל חיים אם היא נעשית כראוי. לבחון האם תגובות הטיפול יהיו שונות בין סוגי תאי גידול גרורתי. תאים מקרצינומה של תאי כליה גרורתיים.

כיום משתמשים בחולים להשתלה ישירות בבעלי חיים כדי להעריך את צמיחת המחלה המקומית והגרורתית לאחר התפתחותה. טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום RCC לחקור את התקדמות המחלה הרלוונטית מבחינה קלינית ואת התגובות לטיפול. בפרט, האם תגובות אלה שונות בהתאם למחלה מקומית ראשונית או לצמיחה גרורתית ספונטנית.

אל תשכח שעבודה עם בעלי חיים זעירים שעוברים ניתוחים מרובים דורשת הקפדה על הנחיות פרוטוקול מוסדיות של בעלי חיים, ותנאים סטריליים. נוחות והתאוששות של בעלי חיים הם משתנים קריטיים לביצוע נכון של הליך זה.