Name: טכניקת השתלות Murine Heterotopic לב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-08T23:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: למד את טכניקת השתלת הלב ההטרוטופית בעכברים, הכוללת קטיפת לב תורם, יצירת אתר השתלה ואנסטומוזה עורקית וורידית. שיטה זו מאפשרת מעקב יומיומי אחר בריאות ההשתלה באמצעות מישוש.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לד&quot;ר Biagio Pietra לעבודה הקודמת שלו במעבדה שלנו.

כל בעלי החיים ששוכנו בתנאי הפתוגן ללא באוניברסיטת מתקן בעלי החיים קולורדו ברברה מרכז דייוויס תחת אישור IACUC וטופלו על פי הנחיות NIH. עומק ההרדמה נשפט על ידי קמצוץ הבוהן בתחילה ועל ידי שמירה על קצב נשימה ברגע שהחל את ההליך. 1. תורם לב קציר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את עכבר התורם על ידי הזרקת pentobarbital (60 מ&quot;ג / קילוגרם IP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשתק את העכבר על ידי ריסון 4-way וקליפ הפרווה. לנגב את העור עם אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לנתח את העור, פותח את חלל הבטן על ידי ביצוע חתך רוחבי נחות רק לסרעפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הסרעפת אחורית לכניסת costal והרם את בית החזה הקדמי anteriorly וsuperiorly חושף את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרחב את עובי מלא לחתוך את חלל בית החזה לרוחב האחורי בצדדים ימני והשמאליים של החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד אתנחות וריד נבוב (IVC) ולמקם את תפר רופף 5-0 משי סביב IVC בסמוך לכניסתה לעלייה הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1.0 סמ&quot;ק של 4 ° C מלוחים heparinized (200 u / סמ&quot;ק) לIVC, ולאחר מכן לקשור את הכלי עם תפר משי 5-0 ולהתחלק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את הווריד הנבוב מעולה תקין (rSVC) באופן דומה ולקשור עם 5-0 תפר משי ולהתחלק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות מגלגל את הלב לכיוון הצד הימני של החיות ולבודד את הווריד הנבוב מעולה השאיר (lSVC), ולקשור עם תפר משי 5-0 ולחלק חושף את עורק הריאה השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את הלב תחת גזה רטובה תוך התימוס בוטה גזור מהעורק הראשי הריאתי (PA) והשמאל וסניפי הרשות הפלסטינית הנכונים ועולה קשת אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בוטה לנתח אב העורקים קשת החופשית של הרקמות הסובבות. מיקרו המספריים משמשים לחלק את הפרוקסימלי אב העורקים לעורק זרוע-cephalic תקין, כלומר לא צריכה להיות שום סניפים בין הלב והחלוקהנקודה של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק זה של קשת אב העורקים מהווה את השרוול העורקי לתהליך השתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משקף את שרוול אב העורקים inferiorly לחשוף את תא המטען של הרשות הפלסטינית וסניפי ימין ועל השמאל ברשות הפלסטינית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בוטה לנתח סניפי הרשות הפלסטינית ימין ועל שמאל מהרקמות הסובבות כרחוקה מלב ככל האפשר. זה מאפשר לנתיחה קלה של תא המטען של הרשות הפלסטינית מרקמות הסובבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את תא המטען של הרשות הפלסטינית כdistally כהפרוקסימלי אפשרי, רק כדי הסתעפותה. חלק זה של עורק הריאה מהווה את השרוול ורידית לתהליך השתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח תפר משי 5-0 סביב הבסיס של הלב והעניבה. הלב לאחר מכן לחתוך חופשי בבסיס, והניח ב4 מלוח מעלות צלזיוס. זמן קציר כולל הוא כ. 10-15 דקות. </li></ol> 2. טכניקה שתל לב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את עכברי נמען עם pentobarbital (60 מ&quot;ג / קילוגרם מינון ראשוני ה-IP, אם נדרש 25 מ&quot;ג / קילוגרם המינון משלים IP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפ הפרווה ולשתק את העכבר על ידי ריסון 4 כיוונים ומכין את העור עם povidone-יוד ולעטוף בצורה סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך בבטן קו האמצע אנכי 2 סנטימטר ולהיכנס לחלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחזור בי המעי superiorly ומוחצן על החזה. שמור עטוף בגזה סטרילית לחה (תמיסת מלח סטרילית) לאורך כל המקרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את אב העורקים בבטן ונחות וריד נבוב (IVC) מתחת לכלי הכליות ומקום 4-0 קשרי כותנה סביב אב העורקים וIVC מעולה אז נחותים לאתר ההשקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות כל כלי המותני בתחום ולקשור עם 10-0 תפר ניילון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קשר קשרי הכותנה, ראשון ואחרי נחותים על ידי מעולה. בדרך זו קצת דם נשמרים באב העורקים עושים aortotomy קל יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טופס aortotomy עם מחט 30 G כדי להיכנס ללומן של אב העורקים. להאריך את החתך עם מספריים מיקרו קנס באורך של כ -2 מ&quot;מ. חתך זה הוא עשה בקו ישר לאורך זמן רבציר itudinal של כלי השיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קץ להשקת צד של אב העורקים התורם לאב העורקים הנמען באופנה הבאה. הנח תפר שהות תפר 10-0 ניילון באב העורקים ותורם לזווית הנחותה של החתך באב העורקים הנמען והעניבה. מניחים ניילון 10-0 שני מול הראשון באב העורקים התורמים והפינה מעולה של החתך באב העורקים ובעניבה בבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קו תפר פועל ממעולה לנחות בקיר לרוחב של אב העורקים ולקשור נגד תפר השהות הניח בעבר. הקפד להביא intimas (משטח כלי פנימי) יחד כמו שאתה תופר. אז תפר את הצד המדיאלי באופנת ריצה ובעניבה. התפר הראשון ואחרון בכל צד צריך להיות ממוקם קרוב לתפרי השהות ככל האפשר. אז שואף להיות 3 תפרים במרווחים שווים בין שני אלה עושים בסך הכל 5 תפרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קץ להשקת צד של עורק הריאה התורם למקבל IVC באופנה הבאה. Punctיור IVC עם מחט G 30 ולהרחיב את החתך עבור כ. 2 מ&quot;מ עם מספריים מיקרו בסדר. חתך זה הוא עשה בקו ישר לאורך ציר האורך של כלי השיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את עורק הריאה התורם לפינה הנחות של החתך בIVC עם 10-0 ניילון. מניחים ניילון 10-0 שני מול הראשון בעורק התורם והפינה מעולה של החתך בIVC והעניבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קו תפר פועל בין עורק הריאה וIVC ועניבה. התפר הראשון ואחרון בכל צד צריך להיות ממוקם קרוב לתפרי השהות ככל האפשר. אז שואף להיות 5 תפרים במרווחים שווים בין שני אלה עושים בסך הכל 7 תפרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את זרימת דיסטלי 4-0 הכותנה העניבה מחדש הקמת ורידים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע עצירת דימום של ההשקה הוורידים נצפתה עניבת הכותנה הפרוקסימלי 4-0 הוא התיר בהדרגה וההשקה העורק נצפתה לעצירת דימום. כאשר שני anastomoses נחשב מאובטח, להסיר את גotton קושר מהעכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את המעי בבטן. דופן הבטן סגורה בשתי שכבות באמצעות 5-0 תפר משי באופנת ריצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל בולוס 1.0 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית, חמה נורמלית לתוך הבטן כהחייאת נוזלים במועד הסגירה, ו0.8 מיליליטר של תמיסת מלח רגילה מוזרק מתחת לעור לאחר ניתוח. אין צעדים תומכים נוספים נדרשים במהלך הניתוח. לשחזר את החיה על שמיכה מחממת. זמן שתל כולל הוא כ. 90-120 דקות למתחילים, דקות 45-60 עם ניסיון. לנהל שיכוך כאבים עצירות, 0.05 מ&quot;ג / קילוגרם, SC, 0.1-0.2 מיליליטר בתחילת ההליך ובכל שעה 6-12 ל72 מנותחות שעה. </li></ol> 3. הערכת שתל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכת תפקוד שתל מדי יום על ידי מישוש טרנס בטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את העכבר כאילו היו שיש לתת זריקת intraperitoneal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ בעדינות את קצה אצבע על קיר הבטן ולברר את str המכותength וסדירות של השתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן איכות מישוש ציון מ4 (משרעת ותדירות נורמליות) ל -0 (לא מכות דחו שתל). </li></ol> הערות חשובות: כל המכשירים הם מעוקרים, כפפות סטריליות שחוקות לאורך כל ההליך, והוא שמר על שדה סטרילי. הניתוחים התורמים והמקבל מבוצעים תוך השימוש במיקרוסקופ הפעלה. ודא שanastomoses הם &quot;נקי&quot;. כלומר, שיחזור קירותיו לא נתפסו בעת ביצוע תפרים. זה יגרום להתכווצות משמעותית לזרום שתגרום יותר סביר בשתל נכשל, ובמקרים קיצוניים לאחורית גפי שיתוק. כמו כן, חשוב וחיוני שעובי מלא עובר כולל adventitia כלי הדם ואינטימה של מחט תפר מושגות. Evertion של הקצוות גם מבטיח כי יש קשר אינטימה לאינטימה, אשר מסייע באיטום וריפוי של anastomoses. עוד עובדה חשובה וחיוניאו הוא להבטיח כי המתח של קווי תפר בהשקה הוא גם אופטימלי. רפוי מדי ולא תהיה דליפה בלתי הפיכה, הדוק מדי וצרות לזרום יגרמו. אם בצד העורקים זה יביא זלוף הלקוי של השתל, אם בצד ורידי לב צפוף יגרום.

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343 (1973).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3%2C000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123 (2001).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Surg%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> J Invest Surg. 26 (4), 223 (2013).</li>
<li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+suture+technique+in+a+mouse+heart+transplant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Modified suture technique in a mouse heart transplant model.</a> Asian J Surg. 34 (2), 86 (2011).</li>
<li>Mao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+knotless+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">A novel and knotless technique for heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> J Heart Lung Transplant. 28 (10), 1102 (2009).</li>
<li>Csencsits, K. L., Bishop, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+alloreactive+CD4%2B+and+CD8%2B+T+cells%3A+there%27s+more+to+it+than+MHC+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Contrasting alloreactive CD4+ and CD8+ T cells: there's more to it than MHC restriction.</a> Am J Transplant. 3 (2), 107 (2003).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nat Protoc. 2 (3), 471 (2007).</li>
<li>Linfert, D., Chowdhry, T., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocytes+and+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Rev%22%5BJournal%5D)">Lymphocytes and ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Rev. 23 (1), (2009).</li>
<li>Grazia, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+cardiac+allograft+rejection+by+directly+cytotoxic+CD4+T+cells%3A+parallel+requirements+for+Fas+and+perforin%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Acute cardiac allograft rejection by directly cytotoxic CD4 T cells: parallel requirements for Fas and perforin.</a> Transplantation. 89 (1), 33 (2010).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), (2007).</li>
<li>Plenter, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Society+for+Surgical+Research.+45th+Annual+Congress%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> European Society for Surgical Research. 45th Annual Congress. , (2010).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

טכניקה ניתוחית זו אינה קלה לשלוט, אבל ברגע שמשתלט עליו היא כלי מחקר רב עצמה. החוקר / המנתח מתוגמל על ידי עקביות של טכניקה ועל ידי תשומת לב לפרטים. הסבלנות במהלך שלב הלמידה היא מפתח. כפי שפורסם על ידי Niimi 3, בסיועם של כלי למידה מבוססת וידאו זה לוקח בממוצע של 11 ניסיונות להשגת ההליך המוצלח הראשון ו78 ניסיונות להשיג שיעור הצלחה 90%. וידאו הפכו לכלי חשוב בהוראת הניתוח 11,12. פתרון בעיות דימום מanastomoses עלול להתרחש וזה כנראה עקב או חוסר המתח נכון בתפרים, או מעט מדי תפרים. בעוד קרישת גרימת סוכן כגון Gelfoam יכולה להיות שימושית לצמצום דליפות, אנו ממליצים שהמנתח צריך להסתמך על טכניקה טובה. לב אינו פועם צפוף הוא נפוץ ביותר עקב anastomoses כי הם הדוקים מדי, במיוחד בצד הוורידים. הלא beating, שתל אינו perfused נגרם בדרך כלל על ידי בועות אוויר שנסעה לאחד מהעורקים הכליליים. זה חשוב לשמור על שדה לח לרטוב, כדי למנוע את כניסתם של בועות לתוך כלי הדם. מגבלות של הטכניקה טכניקה זו אינה מתאימה אם חוקר רוצה לחקור השפעות על תפקוד לב באופן מלא. שיחייב טכניקת השתלת orthotopic, שעד כה הוכיחה את הבלתי אפשרית לביצוע. משמעות ביחס לשיטות קיימות אם האדם רוצה לחקור את ההשפעות על השתלת vascularized באופן מלא, מוצקה איבר בעכבר, ולאחר מכן את מודל הלב הוא כנראה הפשוט ביותר כדי לשלוט. מודלים עכבר של ריאות, כליה והשתלה כבד אכן קיימים, אבל הם הרבה יותר קשים ללמוד ומושלמים. שלבים קריטיים במסגרת הפרוטוקול זה חשוב ביותר, כי עמ &#39;עובי מלאהתחת כולל adventitia כלי הדם ואינטימה של מחט תפר מושגות. Evertion של הקצוות גם מבטיח כי יש קשר אינטימה לאינטימה, אשר מסייע באיטום וריפוי של anastomoses. גורם חשוב וחיוני נוסף הוא להבטיח שהמתח של קווי תפר בהשקה הוא גם אופטימלי. רפוי מדי ולא תהיה דליפה בלתי הפיכה, הדוק מדי וצרות לזרום יגרמו. אם בצד העורקים זה יביא זלוף הלקוי של השתל, אם בצד ורידי לב צפוף יגרום. מעל לכל, חזרה, עקביות של הליך ואת תשומת לב מתמדת לפרטים תניב תוצאות מצוינות ונתונים fundable ופרסום.

בעידן שבו ניתן לבצע השתלות כליה, ריאות, כבד ולבלב בעכברים, אבן הפינה של השתלת איברים בסיסית ומחקר אימונולוגיה מאז 1973 1-4 נשאר המודל להשתלת לב heterotopic בעכבר. בשנים שחלפו כמה מאמרים שפורסמו מפרטים 5,6 שיפורים / חידודים להליך זה. כמודל של השתלה בעיקר vascularized איברים מוצקים הליך זה הוא ראשון במעלה. שולט ברגע שהליך זה משאיל את עצמו למחקר לתגובות אלוגנאית דחיית 7, הפיתוח של vasculopathies הכרוני 8 והמנגנונים של reperfusion איסכמיה פציעה 9. המפתחות ללמידת הליך זה בהצלחה הם בדיוק כמו כל ניתוח אחר, סבלנות מצד המאמן והמתאמן ותשומת הלב לפרטים. בתחילתו של התהליך למנתח החדש ימצא לא כיהיי יבלה שעות רבות בכל השתלה. הניסיון הוא צבר, פעמים כירורגית, ולכן איסכמיה, יהיו להפחית באופן דרסטי. שימת לב לפרטים של כל שלב ושלב במוקדם או במאוחר תוביל להצלחה. בעוד שהמורה יכול לעשות כמיטב יכולתם כדי להעביר הלאה, ולצפות מראש, את כל הנפילות הבור אפשריות שעשויות להיות נתקלים במהלך ניתוחים אלה, החניך &quot;יצירתי&quot; סביר להניח שימצא כמה משלהם! היסודות של ההליך הם כדלקמן. התורם עולה קשת אב העורקים הוא מקצה לצד anastomosed לאב העורקים בבטן הנמען ועורק הריאה התורם הוא מקצה לצד anastomosed לוריד נמען הבטן הנחות הנבוב (IVC). דם זורם מאב עורקי הנמען בצורה מדרדר דרך אב עורקי התורם לעורקים הכליליים. ברגע שהדם זרם דרך המערכת כלילית הוא מנקז לתוך העלייה הימנית דרך הסינוס כלילית, נשאב לתוך החדר ממני ולאחר מכן דרך עורק הריאה לנמען IVC. בדרך זו המערכת כלילית מסופקת דם העורקי וקצב סינוס חוזר לשתל בתוך 1-2 דקות של reperfusion. מאז התאים השמאליים של הלב הם בעצם לחץ טעון מתחת לקיר החופשי של החדר השמאלי יהיה התנוון לאורך זמן.

<table><tbody><tr><td><חזק>מכשיר</חזק></td><td><חזק>רובוז #</חזק></td><td><חזק>כלים מדעיים עדינים #</חזק></td><td><חזק>ארוכירורגי #</חזק></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו-כריתה ישרים #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו-ניתוחים מעוקלים #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים משונן מעוקל</td><td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas מספריים מיקרו ניתוחים, קצרים</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>מספריים מיקרו ניתוחים, ישרים, חדים, ארוכים</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr>מחזיק <td></td><td></td><td>מחט ידית קפיץ מיקרו</td><td>11.549.15</td></tr><tr><td>מלקחיים ישרים נגד יתושים</td><td>91308-12</td><td></td>מספריים מיקרו ניתוחים, ישרים, קהים <td></td></tr><tr><td></td><td>RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו-ניתוחים, מעוקלים, קהים</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו מפסק</td><td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מגש מכשירים, 10 אינץ' x 6 &frac12; &rdquo; x ו-frac34; "</td><td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תפר משי, 5/0, סליל 22.5 מ'</td><td>18020-50</td><td></td>10/0 ניילון T4A10Q07 5/0 כפפות E19A05N משי ביוג'ל מבית Medex Supply Drapes Precept, #64-9012-9 מזרקים B-D 1 סמ"ק אינסולין, #329424 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים</td><td></td> לכותנה <td>פישר-מותג, #23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>ספוגיות פובידון-יוד</td><td>PDI, #B40600</td><td></td>4/0 קשרי כותנה כותנה ביתית חיטוי עם מכשירים <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

טכניקת השתלות murine heterotopic לב

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

עכשיו זה יותר מארבעים שנה מאז טכניקה זו דווחה לראשונה על ידי קורי, וין וראסל. למרות שזה לקח כמה שנים למעבדות אחרות כדי להיות מיומנים ובלנצל את הטכניקה הזאת, עכשיו זה בשימוש נרחב על ידי מעבדות רבות ברחבי העולם. עידון משמעותי לטכניקה המקורית שפותח ודווח ב2001 על ידי Niimi. שתוארו כאן הם הטכניקות שהתפתחו במשך יותר מעשור בידיהם של שלושה מנתחים (Plenter, גרציה, Pietra) במרכז שלנו. כעת טכניקות אלו מועברות על דור צעיר של מנתחים וחוקרים. מבוסס במידה רבה על ניסיון Niimi, הנהלים המשמשים התפתחו בפרטים הקטנים - הפרטים שבו אנו נשתדל להתייחס כאן באופן כזה שאנשים אחרים יוכלו להשתמש במודל זה מאוד שימושי. כמו Niimi, מצאנו שוידאו סיוע ללמידה הוא משאב יקר ערך עבור המתחילים.

<html> הניצול של טכניקה ניתוחית זו פותח את הדרך לשני מחקרים פשוטים הישרדות שתל / דחייה, או פרוטוקולי ניסוי מורכבים למדי. במחקר המתואר בקצרה בתרשים שלהלן, בקשנו להגדיר את המעורבות, אם בכלל, של פאס ו / או perforin כמנגנונים של דחיית תאי T מסוג CD4 בתיווך לב. זה התאפשר על ידי המערך יוצא דופן של זני עכבר הזמינים כיום. תוצאות מראות כי הדחייה הישירה של allografts לב על ידי תאי T מסוג CD4 מפעיל דורשת תרומה החלופית של שתל ביטוי פאס וביטוי perforin תא T. למיטב ידיעתנו, זו ההפגנה הראשונה שפעילות cytolytic על ידי תאי T מסוג CD4 יכולה לשחק תפקיד מחייב לדחיית שתל חריפה העיקרית בגוף חי. &quot;/&gt; 1.jpg . איור 1 Perforin ופאס לייצג מחייב ומסלולים מקבילים של B6 T מסוג CD4 תא בתיווך דחיית לב, B6 PFPKO (perforin עקום החוצה), וGLD B6 תאים (לקויים פאס ליגנד) T מסוג CD4 נוצלו כדי לשקם סמרטוט B6 - / - מקבלי סוג C3H בר או C3H פאס הלקוי LPR allografts לב. הסרת פאס לבד (♦, p = NS לעומת שליטת Wt C3H + B6 תאי T מסוג CD4) מלב התורם או ההסרה או perforin לבד מתאי T מסוג CD4 (■, p = NS לעומת שליטת Wt C3H + B6 T מסוג CD4 תאים) לא בטלו דחייה. מעניין לציין, כי הסרת FasL ממפעיל תאי T מסוג CD4 עשתה דחיית עיכוב משמעותית (● p &lt;0.02 לעומת תאי Wt C3H + B6 T מסוג CD4, p &lt;0.01 לעומת תאי Wt C3H + B6 PFPKO T מסוג CD4, וp &lt;0.01 לעומת . LPR C3H + B6 תאי T מסוג CD4). עם זאת, רוב allografts עדיין דחה (4 מתוך 5). באופן משמעותי, להסרת בו זמנית של שני perforin התא התורם פאס וT מסוג CD4דחייה בטלה לחלוטין (○, p &lt;0.002 לעומת שליטת Wt C3H + B6 + תאי T מסוג CD4 +, B6 תאי T מסוג CD4 PFPKO, וLPR C3H Wt C3H B6 תאי T מסוג CD4). ביטול זה היה באופן משמעותי חזק יותר מההסרה בודדת של FasL תא T מסוג CD4 (○, p &lt;שליטה 0.003 לעומת C3H Wt + GLD B6 תאי T מסוג CD4). מגרציה ואח&#39; 10. הודפס מחדש באישור.

כתב היד מתארת ​​את הצעדים הנדרשים כדי לבצע את השתלת לב heterotopic בעכבר.

טכניקת השתלות Murine Heterotopic לב

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבצע ולהעריך את תקינותו של השתלת לב הטרוטופית בעכבר. מטרה זו מושגת תחילה על ידי הוצאה זהירה של לב התורם. בשלב השני, אתר השתלת הגרט פשוט מכין באופן כירורגי בתוך המקבל כדי לאפשר מרחב מספיק להשתלת רקמת התורם.בשלב הבא, לב התורם מושתל באמצעות יצירת אנסטומוזיס עורקי וורידי. בשלב הסופי, מאמתים את ההמוסטזיס של קווי התפרים הווסקולריים לפני סגירת הרסיפיאנט. לבסוף, ניתן לנטר את בריאות השתל באמצעות מישוש יומי להערכת ההשפעות של גורמים שונים על הישרדות השתל מהתורם.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון ששלבי האנסטומוזה קשים ללמידה. מתיחות התפרים חייבת להיות מדויקת כדי למנוע דליפות והצרות של זרימת הדם. כדי להוציא את לב התורם, ראשית יש לקבע את חיית התורם המורדמת באמצעות רסני קיבוע ארבע-כיווניים.לאחר גזיזת הפרווה, נגב את העור באלכוהול. לאחר הסרת העור בדיסקציה, בצע חתך רוחבי ממש מתחת לסרעפת. כדי לפתוח את חלל הבטן, חתוך את הסרעפת מאחור להחדרה הצלועית.בצעו חתך בעומק מלא של חלל בית החזה האחורי-צדי בצד שמאל ובצד ימין של החזה, בדלו את הווריד הנבוב התחתון (IVC), ולאחר מכן הניחו תפר משי רופף במידה 5-0 סביב ה-IVC בסמוך לנקודת הכניסה שלו לעלייה הימנית. מזריקו לתוך ה-IVC נפח של 1 cc של תמיסת saline בהפרינה בטמפרטורה של 4 °C, קשרו את כלי הדם באמצעות תפר המשי במידה 5-0 ובצעו חיתוך.לאחר קשירה ותפירה של הווריד הצווארי העליון (superior vena cava) הימני באופן דומה, גלגלו בעדינות את הלב לכיוון צדו הימני של בעל החיים, ובודדו וקשרו את הווריד הצווארי העליון השמאלי תוך חשיפת העורק הריאתי השמאלי. כעת, קבעו את הלב תחת גזה רטובה, ובצעו דיסקציה קהה להרחקת הטימוס מהעורק הריאתי הראשי, מענפי העורק הריאתי השמאלי והימני, ומקשת האבירטים העולה. שחררו את קשת האבירטים מרקמות הסביבה, ולאחר מכן השתמשו במספרי מיקרו כדי לחתוך את האבירטים פרוקסימלית לעורק הצווארי-זרועי (brachial cephalic artery) הימני, עד שלא יישארו ענפים בין הלב לנקודת החיתוך של האבירטים.חלק זה של קשת האאורטה מהווה את השרוול העורקי לתהליך ההשתלה. לאחר מכן, הדף את שרוול האאורטה כלפי מטה כדי לחשוף את גזע העורק הריאתי ואת הענפים השמאלי והימני של העורק הריאתי. לאחר מכן, בצע דיסקציה קהה לענפי העורק הריאתי השמאלי והימני מהרקמות הסובבות, רחוק ככל האפשר מהלב.חלק את גזע העורק הריאתי רחוק ככל האפשר מהלב, מיד פרוקסימלית לפיצולו, כדי ליצור את השרוול הוורידי (venous cuff) לתהליך ההשתלה. לאחר מכן, קשור תפר משי במידה 5-0 סביב בסיס הלב. חתוך את הרקמה בבסיס והעבר את הרקמה שהוסרה למלחים (saline) בטמפרטורה של 4°C.זמן ההוצאה הכולל הוא כ-10 עד 15 דקות עד להשתלת לב התורם. לאחר הרדמה וקיבוע של חיית הרכיבה, נגב את העור באמצעות פובידון יוד ושטוף בין לבין באלכוהול או במים סטריליים. חזור על פעולה זו שלוש פעמים, ולאחר מכן כסה את אזור הניתוח באופן סטרילי.לאחר מכן, התחילו את הפרוצדורה בביצוע חתך בטן אנכי של שני סנטימטרים בקו האמצע. כדי להיכנס לחלל הבטן, התיכו את המעיים כלפי מעלה והוציאו את הרקמה אל בית החזה, תוך עטיפתה בגזה סטרילית טבולה בתמיסת סלין סטרילית. לאחר מכן, בודדו את אבי העורקים הבטני (abdominal aorta) ואת הווריד הנבוב התחתון (inferior vena cava) מתחת לכלי הדם הכליתיים, והניחו ארבעה קשרי כותנה במידה 0 סביב הרקמה, תחילה מעל ואז מתחת לאתר האנסטומוזיס.זהו כלי דם מותניים כלשהם בשדה הניתוח וקשרו אותם בחוט ניילון 10 T. תפרו, ולאחר מכן קשרו תחילה את הקשירה התחתונה מכותנה, ואחריה את העליונה, כדי להשאיר כמות מסוימת של דם באאורטה להקלה על ביצוע האוטוטומיה של ה-A. לאחר הידוק הקשרים, היכנסו ללומן של האאורטה באמצעות מחט בנפח 30 gauge.לאחר מכן, השתמשו במספרי מיקרו עדינים כדי להרחיב את החתך לאורך של כ-שני מילימטרים בקו ישר לאורך הציר האורכי של כלי הדם. כעת, הניחו תפר ניילון 10-0. בצעו תפר קיבוע (Stay stitch) באורטה התורמת ובזווית התחתונה של החתך באורטה המקבלת, כדי לבצע אנסטומוזה מקצה לצד (end to side anastomosis) של האורטה התורמת לאורטה המקבלת.לאחר קשירת התפר, מקמו תפר ניילון 10 T שני מול הראשון באורטה התורמת ובפינה העליונה של החתך ובאורטה הבטנית, וקשרו גם תפר זה. כאשר התפר השני במקומו, בצעו קו תפר רציף מהחלק העליון לתחתון בדופן הצדית של האורטה, תוך הקפדה על קירוב האינטימה וקשירתה אל תפר העיגון שהוצב קודם לכן. לאחר מכן, תפרו את הצד המדיאלי באופן רציף וקשרו אותו, כאשר התפרים הראשונים והאחרונים בכל צד ימוקמו קרוב ככל האפשר לתפרי העיגון.שאפו להניח שלוש תפרים במרווחים שווים בין שני אלה, כך שיהיו חמישה תפרים בסך הכל. לאחר מכן, כדי לבצע אנסטומוזיס מקצה לצד של העורק הריאתי התורם לווריד הנבוב התחתון (IVC) של הרסיפיינט, דקרו תחילה את ה-IVC באמצעות מחט 30 gauge, ולאחר מכן השתמשו במספרי מיקרו עדינים כדי להרחיב את החתך בכשני מילימטרים בקו ישר לאורך הציר האורכי של כלי הדם. לאחר מכן, קשרו את העורק הריאתי התורם לפינה התחתונה של החתך ב-IVC באמצעות חוט ניילון 10 knot.מקם תפר ניילון 10 שני מול הראשון בעורק התורם ובפינה העליונה של החתך ב-IVC הבטני וקשור. לאחר מכן, בצע תפר רציף בין העורק הריאתי ל-IVC וקשור אותו, כאשר התפר הראשון והאחרון בכל צד ממוקמים קרוב ככל האפשר לתפרי הקיבוע. שאף להניח חמישה תפרים במרווחים שווים בין השניים, כך שיהיו שבעה תפרים בסך הכל.כעת שחררו את קשירת הכותנה הדיסטלית מסוג OTT כדי להחזיר את הזרימה הוורידית. לאחר שווידאתם המוסטזיס באנסטומוזה הוורידית, שחררו בהדרגה את קשירת הכותנה הפרוקסימלית מסוג OTT ובדקו אם קיימת המוסטזיס באנסטומוזה העורקית. כאשר שתי האנסטומוזות נחשבות למאובטחות, הסירו את קשירות הכותנה מהעכבר, החזירו את המעי לבטן וסגרו את דופן הבטן בשתי שכבות באמצעות משי 5-0.באופן רציף, הגש בולוס של 1 mL של סליין נורמלי סטרילי וחמים אל תוך הבטן לצורך החייאת נוזלים בעת הסגירה, והזרק 0.8 mL של סליין נורמלי תת-עורית. לבסוף, כדי להעריך את תפקוד השבץ באמצעות מישוש טראנס-אבדומינלי יומי, רסן את העכבר כפי שנעשה בהזרקה אינטריפרוטוניאלית. לאחר מכן, לחץ בעדינות את קצה האצבע המורה כנגד דופן הבטן כדי לקבוע את עוצמת הפעימה והסדירות של השבץ.העניקו לאיכות המישוש ציון שבין ארבע עבור אמפליטודה ותדירות נורמליות, לאפס עבור השתלה נדחית שאינה פועמת. טכניקה כירורגית זו מקלה הן על מחקרי הישרדות פשוטים של השתלה והן על פרוטוקולים ניסיוניים מורכבים. לדוגמה, בניסוי מייצג זה, נבדקה המעורבות של fast ו/או perforin כמנגנונים של דחיית לב המתווכת על ידי תאי T חיוביים ל-CD four.התוצאות מדגימות כי הדחייה הישירה של השתלי לב אלוגרפטיים על ידי תאי T אפקטורים חיוביים ל-CD4 דורשת תרומה חלופית של ביטוי graft fast וביטוי T-cell perran, דבר המצביע לראשונה על כך שפעילות ציטולית של תאי T חיוביים ל-CD4 יכולה למלא תפקיד הכרחי בדחייה אקוטית ראשונית של השתל אלוגרפטי in vivo. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו יש להניח את התפרים באנסטומוזיס כדי להשיג השתל לב פועם ובריא.

murine-heterotopic-heart-transplant-technique

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

מודל השתלת לב בצוואר הרחם העכברי הוא גם מתאים חיסוני, כמו גם מחקרי פציעת reperfusion איסכמיה. שינינו את התהליך תוך שימוש בטכניקת שרוול שאינו תפר וביצעו יותר מ 1,000 השתלות מוצלחות עם גישה זו.  במסמך זה, אנו מספקים פרטים נוספים בטכניקה זו כדי להשלים את הווידאו.

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

טכניקה מודגמת עבור ההליך המיקרו-כירורגי להשתלה הטרוטופית של לבבות בעכברים, כולל שיטות פשוטות לקצירת תורם ואנסטומוזיס של כלי הדם המקבל.

שיטה שונה לHeterotopic מאוס לב Transplantion

טכניקת השרוול מקצרת ומקלה על המודל של השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכברים על ידי הימנעות מאנסטומוזות תפרים מאתגרות מבחינה טכנית של כלי דם קטנים. הפרטים הטכניים המוצגים במאמר וידאו זה אמורים לאפשר לחוקרים לבסס מודל זה במעבדותיהם.

Heterotopic צוואר הרחם לב השתלה בעכברים

אנו מציגים גישה הצינור הפנימי לטכניקת השרוול של העכבר צוואר הרחם הטרוסקסואלים השתלת לב כדי לעזור אוורט הספינה על השרוול. שיתוף פעולה בין שני מנתחים. מנוסים מקצר את זמן...

אופטימיזציה של טכניקת השרוול עבור השתלת לב מוריין

טכניקה חדשנית לשחזור מעגל הדם במודל הטרוטופי של השתלת לב עכבר בטן מודגמת.

שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן

בפרוטוקול הנוכחי, מודל השתלת לב עכבר משמש לחקירת מנגנון דחיית אלוגרפט לבבי. במודל השתלת לב הטרוטופי זה, יעילות הניתוח משופרת, והישרדותם של שתלי לב מובטחת על ידי אנסטומוזה מקצה לקצה של צוואר הרחם של השתלת לב באמצעות טכניקת שרוול שונה.

טכניקת שרוול שונה למודל השתלת לב הטרוטופי של עכבר צוואר הרחם

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

המאמר הנוכחי מתאר טכניקה שונה להשתלת לב הטרוטופית וסקולרית עם טכניקה אספטית מעודכנת, שיכוך כאבים והרדמה.

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

פרוטוקול זה מציג טכניקת אנסטומוזה פשוטה מקצה לצד להשתלת לב צוואר הרחם בעכברים, ומספק מודל חזק וניתן לשחזור ללימוד אימונולוגיה של השתלות.

השתלת לב עכבר הטרוטופית צווארית באמצעות טכניקת אנסטומוזה מקצה לצד לחקר אימונולוגיה של השתלות

למד את טכניקת השתלת הלב ההטרוטופית בעכברים, הכוללת קטיפת לב תורם, יצירת אתר השתלה ואנסטומוזה עורקית וורידית. שיטה זו מאפשרת מעקב יומיומי אחר בריאות ההשתלה באמצעות מישוש.

טכניקת השתלות Murine Heterotopic לב

גלה סרטונים נוספים