שיטה לקבלת תאי סרטן השחלות ראשיים מתוך דגימות מוצקים
4 בפברואר 2014
מחקר זה מתאר שיטה מפורטת לבידוד ואפיון של תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות קליניות מוצקות. דגימות קליניות בסרטן השחלות חשופים לעיכול אנזימטי לקבל סרטן קיימא, ללא פיברובלסטים אפיתל השחלות תאים (EOC) מתאים במיוחד עבור יישומים במורד הזרם.
המטרה הכוללת של הליך זה היא לבודד ולאפיין תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות קליניות מוצקות. זה מושג על ידי איסוף תחילה של דגימת הגידול בשחלה והנחתה בצלחת פטרי. השלב השני הוא לחתוך את הדגימה לחתיכות ולהעביר את החלקים לצינור חרוטי עם ריאגנטים לעיכול לדגירה.
לאחר מכן, תמיסת התאים מועברת דרך מסנן שבו נאספים רק התאים לצורך צנטריפוגה, השלב האחרון הוא להשליך את הסופרנטנט ולהשעות מחדש את התאים במדיה לדגירה למשך הלילה. בסופו של דבר, תאי סרטן השחלות האפיתל יגדלו בתרבית במשך שבועות, מה שמאפשר יישומים במורד הזרם. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום סרטן השחלות, כגון מהי אפשרות הטיפול הטובה ביותר עבור כל מטופלת בנפרד.
ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על הטיפול בסרטן השחלות מכיוון שהיא מאפשרת לנו להשתמש בתרביות תאים מציאותיות יותר, הרגישות מאוד למניפולציה גנטית ושימושיות יותר לבדיקות סקר תרופות. כדי להתחיל, יש להוסיף 500 מיליליטר של דלקוס, עיטים מותאמים, מדיום או DMEM עם 10% סרום בקר עוברי או FBS ו-1% פניצילין, סטרפטומיצין או ps. אחסן את המדיום בארבע מעלות צלזיוס.
אספו את הדגימה מחדר הניתוח והעבירו אותה על קרח למעבדה שעדיין בתוך המיכל המועבר. הנח את הדגימה במכסה בטיחות ביולוגי. העבירו את הדגימה מצינור חרוטי של 50 מיליליטר לצלחת פטרי בגודל 60 מילימטר על 60 מילימטר המכילה 10 מיליליטר PBS קר כקרח.
לאחר מכן, בעזרת סכין גילוח סטרילי נוסף, חותכים את הדגימה לשני מילימטר או חתיכות קטנות יותר. לאחר מכן טפל ב-DMEM עם צינור הדבקת דיסק בצינור חרוטי של 15 ליטר. מעבירים את הרקמות הטחונות לצינור התערובת DMEM dispa two.
לאחר מכן דגרו את הדגימה ב-5% פחמן דו חמצני ו -37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. ערבבו ידנית את תמיסת התאים כל חמש דקות כדי להבטיח עיכול מיטבי. לאחר הדגירה, העבירו את תמיסת התאים דרך מסננת תאי רשת של 70 מיקרומטר המונחת על גבי צינור חרוטי של 50 מיליליטר.
הפעל בעדינות לחץ על הרשת באמצעות בוכנת מזרק, השליך כל רקמה לא קשורה שנותרה על גבי הרשת, ואסוף את תרחיף התאים שהתקבל בצינור החרוטי הסטרילי של 50 מיליליטר. לאחר מכן, צנטריפוגה. הצינור החרוטי ב -320 כפול G למשך שבע דקות בארבע מעלות צלזיוס.
השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את כדור התא ב-10 מיליליטר של DMEM המכיל 10% FBS ו-1% ps. לאחר מכן העבירו את תרחיף התא לצלחת פטרי ודגרו את התרחיף ב-5% פחמן דו חמצני ו-37 מעלות צלזיוס. שנה את המדיום 24 שעות לאחר הציפוי הראשוני כדי להסיר את הפסולת התאית ואת רוב האריתרוציטים הקיימים בתרבית.
לבסוף, החלף את המדיום כל שלושה ימים במשך השבועיים הבאים ולאחר מכן התרביות של תאי EOC ראשוניים מוכנות ליישומים במורד הזרם. מיד לאחר הציפוי. תאי סרטן השחלות האפיתל או תאי EOC מופיעים כתרחיפים של תאים בודדים ובגושים עם אריתרוציטים ופסולת תאים בשפע.
תרבית תאי EOC שלושה ימים לאחר הציפוי מראה אשכולות תאי EOC דביקים למחצה ופחות זיהום אריתרוציטים. שבוע לאחר הציפוי הראשוני, תרבית תאי ה-EOC הופכת למערבולת של תאים המתפשטים על פלסטיק תרבית הרקמה. ניתן לראות את המורפולוגיה האופיינית של אבן אפיתל בשכבה חד-שכבתית של תאי EOC לאחר 14 יום בתרבית.
לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבודד ולאפיין תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות קליניות מוצקות.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מחקר זה מתאר שיטה מפורטת לבידוד ואפיון של תאי סרטן שחלה ראשוניים מדגימות קליניות מוצקות. ההליך מאפשר גידול של תאי סרטן שחלה אפיתליאליים בתרבית, ובכך מקל על יישומים המשכיים.
מרכיבי המחקר המרכזיים
תחום מדעי
- אונקולוגיה
- ביולוגיה של התא
- מחקר קליני
רקע
- סרטן השחלה הוא בעיה בריאותית משמעותית עם אפשרויות טיפול מורכבות.
- בידוד של תאי סרטן חיוניים הוא קריטי עבור רפואה מותאמת אישית.
- שיטות נוכחיות עשויות שלא להניב תאי סרטן שחלה אפיתליאליים טהורים.
- מחקר זה נועד לשפר את תהליך הבידוד למשם השגת תוצאות מחקר טובות יותר.
מטרת המחקר
- בידוד תאי סרטן שחלה ראשוניים מדגימות קליניות.
- אפיון התאים המבודדים עבור יישומים נוספים.
- שיפור ההבנה של אפשרויות הטיפול עבור חולות סרטן שחלה.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- איסוף דגימות של גידולי שחלה.
- עיכול אנזימטי של דגימות רקמה.
- סינון לבידוד תאים חיים.
- סנטריפוגציה והשעיה מחדש במצע גידול.
תוצאות עיקריות
- בידוד מוצלח של תאי סרטן שחלות אפיתליאליים ללא פיברובלסטים.
- ניתן לתרבית את התאים במשך שבועות, מה שמאפשר מחקר מעמיק.
- השיטה מספקת מקור אמין של תאי סרטן לצורך מחקר.
- פוטנציאל לתכנון אסטרטגיות טיפול מותאמות אישית.
מסקנות
- השיטה המתוארת יעילה לבידוד תאי סרטן השחלה.
- היא תומכת במחקרים נוספים על טיפולים בסרטן השחלה.
- מחקרים עתידיים יכולים להתבסס על שיטה זו כדי לשפר את תוצאות הטיפול במטופלים.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
הקמה של תאי סרטן שחלה ראשוניים מדגימות קליניות מוצקות מאפשרת יצירת מודלים רלוונטיים לחולה, המפחיתים את ההסתמכות על שורות תאים שעברו מעברים רבים (passaged) עם ארטיפקטים גנטיים מצטברים. גישה זו תומכת בהפחתת סיכונים מכניסטיים באישור מטרות (target validation) על ידי שימור ההטרוגניות של הגידול והביולוגיה הספציפית לאתר מנגעים ראשוניים או גרורתיים. התרביות המתקבלות מספקות מקור מתחדש לסריקות המשך, ובכך משפרות את רמת הביטחון החזויית בקבלת החלטות טרום-קליניות.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביו-פרמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- ערך מדעי: מאפשר בחינה של היפותזות טיפוליות באמצעות תאים המשקפים את הפרופיל הגנטי והפנוטיפי של הדגימה הקלינית המקורית.
- ערך תפעולי: מפחית עמימות מכניסטית על ידי הימנעות מארטיפקטים הקשורים לקווי תאים שעברו מעברים (passages) ממושכים.
- ערך חיזוי: תומך במיון תיקי הפיתוח באמצעות תיקוף מטרות עם הפחתת סיכונים ביולוגית במערכת הרלוונטית למחלה.
סריקה ופיתוח בדיקות
- ערך מדעי: ייצור תאי סרטן שחלות אפיתליאליים המתאימים לסריקת תרופות תוך שמירה על תכונות תומורגניות.
- ערך תפעולי: אספקת תרחיפי תאים סטנדרטיים וניתנים לשחזור לאחר עיכול אנזימטי וסינון.
- יכולת הרחבה: מאפשר הכנה של מספר תרביות ראשוניות מדגימות מגוונות עבור בדיקות אסיי במקביל.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- המשכיות תרגומית: מגשרת בין שלב הגילוי לעבודות פרה-קליניות באמצעות שימוש בתאים שהופקו ישירות מדגימות של חולים.
- התאמה של סמנים ביולוגיים: תומכת בהערכה של מטרות וסמנים ביולוגיים בהקשר המשקף את הגידול של החולה.
- קידום מותאם סיכון: מספקת מידע לקבלת החלטות לגבי המשך או הפסקת הפיתוח (go/no-go) בהתבסס על תגובות בתאים ראשוניים המנבאות טוב יותר תוצאות קליניות.
שילוב תהליכי עבודה וצינור עיבוד (Pipeline)
השיטה משתלבת ברצף הגילוי, מהביולוגיה המוקדמת ועד לזיהוי מובילים (lead identification), ומספקת תאים ראשוניים המשפרים את הרלוונטיות של מאמצי הסריקה והתיקוף במורד הזרם.
- ביולוגיה של הגילוי: תומכת בבדיקת השערות ובבירור מסלולים באמצעות תאים בעלי מאפיינים ספציפיים לגידול שלמים.
- סריקה: מספקת תאי אפיתל ראשוניים של סרטן השחלה המוכנים לבדיקה, עם צמיחה ומורפולוגיה הניתנות לכימות לצורך הערכת תרכובות.
- אנליזה: מאפשרת מדידה של תגובה לתרופות, שגשוג ושינויים פנוטיפיים במערכת יציבה גנטית בעלת מספר מעברים נמוך.
- מחקר תרגומי: שומרת על רלוונטיות קלינית באמצעות גזירה ישירה מדגימות, ובכך תומכת בתיקוף של סמנים ביולוגיים ומטרות טיפוליות.
- שימוש חוזר ארגוני: מבססת פלטפורמה הניתנה לשימוש חוזר להפקת תרביות ראשוניות מדגימות מגוונות, ובכך מפחיתה את התלות בקווי תאים סופיים.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון בחיזוי באמצעות שימוש בתאים המשקפים את ההטרוגניות והביולוגיה של הגידול המקורי.
- ערך תפעולי: מבטיח שחזוריות באמצעות שלבים סטנדרטיים של עיכול אנזימטי, סינון והנחלת תרבית.
- ערך אסטרטגי: משפר את היעילות ההונית על ידי הפחתת הסיכון לכישלון בשלבים מאוחרים, הודות לתיקוף טוב יותר של מטרות טרום-קליניות.
- השפעה על הפורטפוליו: מאפשר תעדוף של מועמדים מותאם סיכון, בהתבסס על פעילות בתאים ראשוניים המופקים מחולים.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות בטיפול ברקמה סטרילית, עיכול אנזימטי וטכניקות של תרביות תאים ראשוניות.
- תלוי בגישה לדגימות טריות או משומרות כהלכה של גידולי שחלה שנאספו בתנאים סטריליים.
- מחייב ציוד לצנטריפוגה, סינון ותרבית, כולל מCב קבלה למתקני בטיחות ביולוגית ואינקובטורי CO2.
- כולל אופטימיזציה של זמן העיכול והפירוק המכני כדי למקסם את התבואה האפיתליאלית תוך מזעור זיהום של פיברובלסטים.
- מוגבל על ידי זמינות וחיוניות הדגימה, העשויים להשתנות בהתאם לעיתוי הניתוח ושל תנאי ההובלה.
