שיטה לקבלת תאי סרטן השחלות ראשיים מתוך דגימות מוצקים

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבודד ולאפיין תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות קליניות מוצקות. זה מושג על ידי איסוף תחילה של דגימת הגידול בשחלה והנחתה בצלחת פטרי. השלב השני הוא לחתוך את הדגימה לחתיכות ולהעביר את החלקים לצינור חרוטי עם ריאגנטים לעיכול לדגירה.

לאחר מכן, תמיסת התאים מועברת דרך מסנן שבו נאספים רק התאים לצורך צנטריפוגה, השלב האחרון הוא להשליך את הסופרנטנט ולהשעות מחדש את התאים במדיה לדגירה למשך הלילה. בסופו של דבר, תאי סרטן השחלות האפיתל יגדלו בתרבית במשך שבועות, מה שמאפשר יישומים במורד הזרם. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום סרטן השחלות, כגון מהי אפשרות הטיפול הטובה ביותר עבור כל מטופלת בנפרד.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על הטיפול בסרטן השחלות מכיוון שהיא מאפשרת לנו להשתמש בתרביות תאים מציאותיות יותר, הרגישות מאוד למניפולציה גנטית ושימושיות יותר לבדיקות סקר תרופות. כדי להתחיל, יש להוסיף 500 מיליליטר של דלקוס, עיטים מותאמים, מדיום או DMEM עם 10% סרום בקר עוברי או FBS ו-1% פניצילין, סטרפטומיצין או ps. אחסן את המדיום בארבע מעלות צלזיוס.

אספו את הדגימה מחדר הניתוח והעבירו אותה על קרח למעבדה שעדיין בתוך המיכל המועבר. הנח את הדגימה במכסה בטיחות ביולוגי. העבירו את הדגימה מצינור חרוטי של 50 מיליליטר לצלחת פטרי בגודל 60 מילימטר על 60 מילימטר המכילה 10 מיליליטר PBS קר כקרח.

לאחר מכן, בעזרת סכין גילוח סטרילי נוסף, חותכים את הדגימה לשני מילימטר או חתיכות קטנות יותר. לאחר מכן טפל ב-DMEM עם צינור הדבקת דיסק בצינור חרוטי של 15 ליטר. מעבירים את הרקמות הטחונות לצינור התערובת DMEM dispa two.

לאחר מכן דגרו את הדגימה ב-5% פחמן דו חמצני ו -37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. ערבבו ידנית את תמיסת התאים כל חמש דקות כדי להבטיח עיכול מיטבי. לאחר הדגירה, העבירו את תמיסת התאים דרך מסננת תאי רשת של 70 מיקרומטר המונחת על גבי צינור חרוטי של 50 מיליליטר.

הפעל בעדינות לחץ על הרשת באמצעות בוכנת מזרק, השליך כל רקמה לא קשורה שנותרה על גבי הרשת, ואסוף את תרחיף התאים שהתקבל בצינור החרוטי הסטרילי של 50 מיליליטר. לאחר מכן, צנטריפוגה. הצינור החרוטי ב -320 כפול G למשך שבע דקות בארבע מעלות צלזיוס.

השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את כדור התא ב-10 מיליליטר של DMEM המכיל 10% FBS ו-1% ps. לאחר מכן העבירו את תרחיף התא לצלחת פטרי ודגרו את התרחיף ב-5% פחמן דו חמצני ו-37 מעלות צלזיוס. שנה את המדיום 24 שעות לאחר הציפוי הראשוני כדי להסיר את הפסולת התאית ואת רוב האריתרוציטים הקיימים בתרבית.

לבסוף, החלף את המדיום כל שלושה ימים במשך השבועיים הבאים ולאחר מכן התרביות של תאי EOC ראשוניים מוכנות ליישומים במורד הזרם. מיד לאחר הציפוי. תאי סרטן השחלות האפיתל או תאי EOC מופיעים כתרחיפים של תאים בודדים ובגושים עם אריתרוציטים ופסולת תאים בשפע.

תרבית תאי EOC שלושה ימים לאחר הציפוי מראה אשכולות תאי EOC דביקים למחצה ופחות זיהום אריתרוציטים. שבוע לאחר הציפוי הראשוני, תרבית תאי ה-EOC הופכת למערבולת של תאים המתפשטים על פלסטיק תרבית הרקמה. ניתן לראות את המורפולוגיה האופיינית של אבן אפיתל בשכבה חד-שכבתית של תאי EOC לאחר 14 יום בתרבית.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבודד ולאפיין תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות קליניות מוצקות.