פיתוח של Hydrogel Amelogenin-chitosan עבור במבחנה אמייל לצמיחה מחודשת עם ממשק צפוף

המטרה הכוללת של הליך זה היא לפתח פרוטוקול לייצור AMLO והידרוג'ל צ'יטוזן לשחזור אמייל שטחי. זה מושג על ידי הכנת פרוסות שיניים חרוטות תחילה. בשלב השני מכינים AMLO טרי והידרוג'ל קיטאן.

לאחר מכן, מורחים את ההידרוג'ל AMLO והכיתן על פני פרוסת השן. לבסוף, אמייל השן גדל מחדש עם הידרוג'ל AMLO chizen ברוק מלאכותי. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בטיפול קולי ובשקע ננו כדי להעריך את החוזק המכני של השכבה החדשה שנוצרה ואת קשירתה לאמייל טבעי.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על פיתוח טכנולוגיה מאשר כאשר מיושמים על אמייל השן הפגוע, הן במבוגרים והן בילדים, עוצרת נגע עששת מוקדם, בונה מחדש את אובדן האמייל עקב עששת, משמרת את מבנה השן ומונעת התקדמות של עששת. מי שידגים את ההליך יהיה ד"ר צ'יטאר אחד, פוסט-דוקטורנט מהמעבדה שלי. התחל בבחירת טוחנת שלישית אנושית ללא עששת משוחזרת.

השתמש במסור יהלום מקורר מים במהירות נמוכה כדי לחתוך את הכתר לאורך לפרוסות בעובי שני מילימטרים, ולאחר מכן הסר את חלק השורש של הטוחנת באופן קולי. נקו את הפרוסות במשך שתי דקות ולאחר מכן שטפו אותן במים המיוננים שלוש פעמים כדי לדמות נגעים שחיקתיים. חרטו את שתי הפרוסות בחומצה זרחתית 30% למשך 30 שניות.

לאחר מכן שטפו אותם מיד במים המיוננים. ואז באולטרסאונד. מנקים שוב את הפרוסות החרוטות למשך שתי דקות ושוטפים אותן במים המיוננים.

שלוש פעמים נוספות. להכנת תמיסת המלאי של קאזאן. ראשית ממיסים 1% משקל לנפח, קאזאן בתמיסת חומצה אצטית בנפח 1%, ולאחר מכן מערבבים ב-80 מעלות צלזיוס למשך הלילה.

לאחר קירור התמיסה לטמפרטורת החדר, מסננים את ה-esan דרך מסנן של 0.45 מיקרומטר, ולאחר מכן מוסיפים נתרן הידרוקסיד מולארי אחד כדי להתאים את ה-pH ל-5.0. להכנת תמיסת מלאי הסידן והפוספט, שקלו את הסידן כלורי וערבבו תמיסה של 0.1 מולאר. לאחר מכן, מערבל את התמיסה עד שהיא מתנקה והתאם את ערך ה-pH ל-11 עם נתרן הידרוקסיד מולארי אחד.

לאחר מכן שקלו את דיבה נתרן פוספט. מערבבים תמיסה טוחנת 0.1 ומערבולת עד שהתמיסה צלולה. להכנת ההידרוג'ל AMLO Genin kaizan, הוסף 960 מיקרוליטר מתמיסת ה-1% esan הטרייה שהוכנה לצינור המכיל 200 מיקרוגרם של חזיר רקומביננטי AMLO genin.

לאחר מכן מערבל את התמיסה עד שהיא נקייה. כעת, הוסיפו 25 מיקרוליטר של תמיסת סידן כלוריד 0.1 מולארית, ואחריה 15 מיקרוליטר של תמיסת נתרן פוספט דיבה 0.1 מולרית לתמיסת האוזן המכילה AMLO. מערבל את התמיסה למשך חמש דקות.

לאחר מכן הוסף בזהירות נתרן הידרוקסיד מולארי אחד כדי להתאים את ה-pH של תמיסת AMLO ואוזן ל-6.5 AMLO ואוזן הידרוג'ל ייווצר כאשר ערך ה-pH יגיע ל-6.5 כדי ליזום צמיחה מחודשת של אמייל ב-AMLO andaz, הידרוג'ל. ראשית, התאם את ה-pH של תמיסת הרוק המלאכותית ל-7.0 עם נתרן הידרוקסיד מולארי אחד, ואחסן את התמיסה בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן השתמש במזרק כדי למרוח כ-20 מיקרוליטר של AMLO והידרוג'ל צ'יזן על פרוסת השן בקצה, ולהניח אותו בחומר ייבוש בטמפרטורת החדר.

לאחר שעתיים, הוסף 300 PPM של נתרן פלואוריד לתמיסת הרוק, ולאחר מכן העביר את פרוסת השן לכוס המכילה 30 מיליליטר של התמיסה. מכסים את הכוס בנייר אלומיניום ואז מכניסים את הכוס לתנור בחום של 37 מעלות צלזיוס. לבסוף, הסר את פרוסת השן לאחר שלושה עד שבעה ימים והניח אותה בחומר ייבוש בטמפרטורת החדר עד לייבוש לאחר תיקון על ידי AMLO והידרוג'ל צ'יזן למשך שבעה ימים, שכבה דמוית אמייל בעובי של 15 מיקרומטר נוצרת על משטח האמייל החרוט.

השכבה החדשה שגדלה עשויה ממערכים מסודרים מאוד של גבישים בקוטר של כ-50 ננומטר הגדלים באופן מועדף לאורך ציר הים בניצב לפני השטח. שימו לב שהגבישים דמויי המחט הללו מאורגנים בצרורות הדומים ליחידות הבסיסיות של האמייל הטבעי. תמונת עקיפה אלקטרונית של האזור שנבחר של השכבה המתוקנת מציגה דפוס בצורת קשת החושף יישור היררכי של הגבישים החדשים שגדלו.

לאורך ניתוח עקיפה של קרני רנטגן בכיוון 0 0 2 מאשר כי השכבה החדשה שגדלה מורכבת מתיאבון, אשר מיושרים לאורך ציר C הקריסטלוגרפי בהתאם למיקרוסקופ האלקטרונים הסורק ותצפיות עקיפה אלקטרונית באזור נבחר בתמונה זו, מוצג המיקרו-מבנה של הממשק בין השכבה החדשה שגדלה לאמייל הטבעי. שימו לב שהגבישים החדשים שגדלו לא גדלו באותו כיוון כמו קריסטל האמייל המקורי, וכי צמיחת התיאבון בתיווך החלבון מביאה לכיוון מאונך של הגבישים החדשים שגדלו ביחס לגבישי האמייל הטבעיים. אין פער נראה לעין בממשק בין השכבה החדשה שגדלה למצע האמייל.

בקנה מידה ננומטרי, האמייל והגבישים שגדלו מחדש התמזגו יחד ליצירת ממשק חלק. לאחר 10 דקות של טיפול קולי, השכבה החדשה שגדלה בהידרוג'ל AMLO Genin chito עדיין קשורה היטב למשטח האמייל והמבנה המאורגן נשמר לדגימה שטופלה בהידרוג'ל tizen ללא am mologen. עם זאת, נצפה פער גדול בין האמייל לשכבה המתוקנת כדי להבחין בבירור בין השכבה החדשה שגדלה לבין האמייל הטבעי.

בניסוי זה, הג'נין AMLO בשכבה החדשה שגדלה סומן באופן פלואורסצנטי חיסוני, נוכחותו של גנין AMLO אושרה לאחר מכן על ידי הקרינה הירוקה בתוך השכבה החדשה שגדלה. כפי שמוצג בגרף לאחר תחריט חומצה, הקשיות והמודול של משטח האמייל יורדים בכמעט 98% ו-88% בהתאמה. קבוצת הביקורת שטופלה בהידרוג'ל אוזן ללא AMLO genin מדגימה שיפור מוגבל הן בקשיות והן במודולוס.

לעומת זאת, לאחר מינרליזציה בהידרוג'ל AMLO ואוזן, נצפתה עלייה של כמעט פי ארבעה במודול ופי תשע בקשיות לאחר התפתחותו. ב-VI והערכה נוספת במודלים, ניתן להרחיב פרוטוקול זה לתכנון טכנולוגיה לטיפול בפגם באנאם כגון מרחק עששת מוקדם ושחיקה. אנונימי.