Name: דגם השת עצב איזוק של כאב נוירופתי בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: למדו כיצד ליצור מודל עכברים לכאב נוירופתי באמצעות השתלת חפת פוליאתילן סביב עצב השת. השיטה מאפשרת הערכת אלודיניה מכנית באמצעות בדיקת סיבי פון פריי ומדידת סף נסיגת הכף לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי המרכז הלאומי de la משוכלל ונדיר Scientifique (UPR3212 חוזה), אוניברסיטת שטרסבורג ועל ידי NARSAD לחוקר צעיר מענק מקרן המוח &amp; Behavior המחקר (לIY). עלויות פרסום נתמכות על ידי רשת Neurex (תכנית Interreg IV העליון הריין).

פרוטוקולים שאושרו על ידי &quot;Comité d&#39;en éthique matière d&#39;הניסויים animale דה שטרסבורג&quot; (CREMEAS). 1. Baseline מדידה של Paw נסיגת ספים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לעכברים להרגיל למתקנים של בעלי החיים ל10 ימים לפחות 2 שבועות לפני ביצוע הליכי הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרגיל את העכברים להגדרת בדיקות פון פריי ולהליך פון פריי המתוארות בסעיף 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הניתוח, להעריך את סף נסיגת כפה המכני עם חוטי פון פריי כפי שתואר בסעיף 4.3. הערה: חזור על התהליך בימים נפרדים לפחות עד שלושה ערכים ברציפות יציבים מתקבלים לסף נסיגת כפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצה את העכברים לקבוצות ניסוי השונים, כך שקבוצות אלה אינן בתחילה שונים לסף נסיגת כפה. </li></ol> 2. הליך ניתוח לקאף Implantatiעל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את בעלי החיים. הערה: משקל גוף עכבר צריך להיות מעל 20 גרם להליך החדרת שרוול המתואר להלן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החיה עם זריקת intraperitoneal של 4 מיליליטר / קילוגרם של תערובת של קטמין (17 מ&quot;ג / מיליליטר) ו xylazine (2.5 מ&quot;ג / מיליליטר) ב0.9% NaCl, המספק -45 דקות של הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את היעדר רפלקסים כפה על ידי צביטת כף אחורית עם פינצטה ולבדוק את היעדר רפלקסים העין לוודא כי בעלי החיים הוא בהרדמה מלאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את רגל ימין מהברך למפרק הירך באמצעות מכונת גילוח חשמלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ג&#39;ל נוזלי העין מגן לעיניים עם מקל אוזניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה על צידו השמאלי ולמקם את הגפיים אחוריות ממש על כרית קטנה ולשמור על הגפיים אחוריות זכות לכרית עם דבק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את שדה הניתוח עם כלורהקסידין ו70% אתנול באמצעות תחבושת או מקל אוזניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצא את עצם הירך באמצעות האצבע ולעשותחתך של כ 0.5 סנטימטר, במקביל לעצם הירך וכ 1.5 מ&quot;מ הקדמי לעצם הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את השרירים קרובים לעצם הירך עם שני מקלות autoclaved. הערות: אין לחתוך את השריר. בדרך כלל, את שכבות השרירים להפריד בקלות וללא דימום וגיד הנשה הוא לאחר מכן נראה לעין. במקרה של דימום, יש להשתמש במקל אוזני סטרילי כדי לספוג את הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס שני מקלות autoclaved מתחת לעצב השת לחשוף הסניף הראשי שלה, וללחלח את העצבים עם תמיסה סטרילית פיזיולוגית (0.9% NaCl). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את סעיף 2 מ&quot;מ סטרילי מוכן מראש של צינורות פיצול 20-PE פוליאתילן (שרוול), מזהה 0.38 מ&quot;מ / מ&quot;מ OD 1.09, בעזרת פלדת מקל מחודד ומהדק בולדוג. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את פלדת המקל המחודד לשרוול, שיהיה מעט לפתוח אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הפתיחה לרוחב השרוול, הכנס את בולדוג בקצה אחד של השרוול ומקביל לשרוול. סובב את בולדוג (180 מעלות) כך שהוא יקיים את השרוול על ידיצד שהוא ההפך לפתיחה לרוחב. סגור את בולדוג ולהסיר פלדת המקל המחודד. הערה: הסיבוב נעשה כדי לאפשר מחזיק בשרוול בעמדה מותאמת להחדרה, מהדק בולדוג גם עוזר לשמור על השרוול בחלקו פתוח. הדגם והגודל של מהדק בולדוג הם קריטיים עבור שלב זה של ההליך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לי הנסיין שני להחזיק את שני מקלות בעצב ובעדינות להפריד את המקלות כדי להקל על הגישה לקטע של עצב השת שאורכו כ -4 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את שרוול 2 מ&quot;מ סביב הסניף הראשי של העצב השת, החל על ידי הוספת חלק מהשרוול, כי הוא דיסטלי לבולדוג סביב החלק של העצב שהוא הפרוקסימלי לירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את השרוול בעדינות על ידי הפעלת לחץ על שני צדדים הדיסטלי שלה עם צבת, ללא סחיטה או שינוי הצורה של הצינור. הפעל את השרוול כדי לוודא שהוא סגור בצורה נכונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפרת את שנינות שכבת עור המגולחתקשרים כירורגית שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בצד השמאלי שלה בכלוב בבית נקי. שמור אותו תחת מנורת החום עד שהעכבר הוא ער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף מים נוספים ולהציב כמה אוכל ישירות בכלוב בבית. </li></ol> 3. הליך ניתוח לבקרת Sham <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את אותו הליך הניתוח כפי שתואר לעיל מהשלב 2.1 לשלב 2.9, ולאחר מכן פעל בצעדים 2.15-2.17. לבקרות אחיזת עיניים, להשמיט את הצעדים 2.10-2.14 כי רק דאגה החדרת השרוול. </li></ol> 4. פון פריי בדיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכברים בקופסות ברורות בודדות (7 ס&quot;מ X 9 ס&quot;מ X 7 ס&quot;מ) עם חורים, על צלחת מחוררת גבוהה של נירוסטה חלקה (MX 1 50 סנטימטר, 5 נקבי מעגל מ&quot;מ עם 2.5 מ&quot;מ בין גבולות ניקוב). הערה: עד 12 עכברים ניתן לבדוק במקביל על זה הגדרה. ניתן לבדוק בעלי חיים המופעלים ביום שלאחר הניתוח. עם זאת, 3 ימים של התאוששות מומלצים לצמצם את רגישות יתר לאחר הניתוח נצפה בבקרות אחיזת עיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לבעלים החיים כדי להרגיל ל15 דקות לפני הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את חוטי פון פריי אל פני השטח הפלנטרי של כל כף רגל אחורית בסדרה של כוחות עולים. הערות: חוטי פון פריי הם שערות פלסטיק בקטרים ​​מכוילים. הם ארוכים 5 ס&quot;מ והם קבועים באפליקטורים החזיק ביד. המהירות של יישום נימה, את מידת כיפוף ואת משך הזמן של היישום יכולה להשפיע על ערכי הסף שמתקבלים בבדיקה זו 3. בהליך הנוכחי בעכברים, החוטים המשמשים לרוב הם 0.16, 0.4, 0.6, 1, 1.4, 2, 4, 6, 8, ו10 גרם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את נימה שנבחרה אל פני השטח הפלנטרי של כף רגל השמאל עד לנימה פשוט מתכופפת. לחזור על התהליך שלושה עד חמש פעמים ברציפות, ולאחר מכן לעשות את אותו הדבר לכפה הימנית. ברגע שהנימה נבדקה בשני כפות, לבדוק את החיה הבאה. הערות: יש להימנע מגבולות לרוחב כף שיכולה להיות רגישים יותר. התגובה הצפויה היא כפהנסיגה, רתיעה פתאומית או ליקוק כפות. קחו למשל את התגובה כחיובית אם לפחות שלוש תגובות צפויות הם נצפו מתוך חמישה ניסויים. כפה נתון תמיד נבדקה שלוש פעמים, אבל את התגובה הרביעית והחמישיים הניסויים נעשים רק אם 1 או 2 (ים) הייתה (היו) שנצפה במהלך שלושת המבחנים הראשונים. בעכברי C57BL/6J, להתחיל בדיקות טרום ניתוח עם נימה 1.4 גרם. לאחר ניתוח, להתחיל את הבדיקות עם נימה 0.4 גרם. אם תשובה חיובית הוא ציין עם נימה בדקה הראשונה, לבדוק את החוט בכוח נמוך יותר (במקום גדול יותר) בכל צעד של 4.3.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את אותו חוט לבעלי החיים הבאים על פי הנוהל 4.3.1. ברגע שכל בעלי החיים שנבדקו, להתחיל שוב על החיה הראשונה עם נימה הבאה של כוח גדול יותר. חזור על התהליך עד שכל העכברים לתת תשובה חיובית. הערות: מבחן כל חיה עד שני חוטים ברציפות לתת תשובה חיובית. קחו למשל את ערך גרם של חוט הלהט הנמוך שנתן תשובה חיובית כשנינות כפהסף hdrawal לחיה הזו. </li></ol></li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

המודל &quot;השרוול&quot; פותח בתחילה בחולדות כדי להשיג פגיעת התכווצות כרונית סטנדרטית ולשעתק עם ההשתלה של אזיקים רבים ברחבי העצב השת 6. לאחר מכן הוא עבר שינוי כדי להשתיל שרוול אחד 7,8, למרות שחלק מקבוצות המחקר עדיין להשתמש בהכנסת שרוול מספר 19-22. לאחר מכן הוא הותאם לעכברי 9,23, שפתחו את האפשרות להשתמש בבעלי חיים מהונדסים. השרוול הוא בדרך כלל ארוך 2 מ&quot;מ, אך אורכים אחרים יש גם שימשו בחולדות 22. צינורות פוליאתילן תלויים במינים: PE-20 בעכברים 9, ו-PE-60 24,25 או PE-90 7,8,26,27 בחולדות. אלודיניה מכאנית נמדדת עם שערות פון פריי. בבדיקה זו, הערכים מוחלטים לערכי סף נסיגת כפה עשויים להיות תלויים במשטח שעליו עומד בעלי החיים 28 או על משך הזמן של נימה כיפוף 3, אך גורמים אלה לאלהשפיע על זיהוי של אלודיניה נוירופתי. מודל &quot;השרוול&quot; הוא עניין למחקר של מנגנוני כאב נוירופתי. זה היה בשימוש ללמוד שינויים מורפולוגיים בסיבי myelinated וunmyelinated 6,29, ושינויים תפקודיים בעצב סנסורי, afferents הראשונית ותאי עצב בעמוד השדרה 19,21,22,30-35. זה אפשר הפגנה כי הפעלת גליה ושינוי מרכזי בשיפוע אניון העצבי להשתתף בשינויים בפעילות ובתגובות של נוירונים nociceptive השדרה ובאלודיניה נוירופתי 24,36-38. ההשפעה של קולטני גלוטמט 7,39-41, של קולטנים אופיואידים 16,42-45 ושל קולטנים ניקוטינית 46 הייתה גם למדה במודל זה. עניין נוסף של המודל הוא את תגובתה לטיפולים השוטפים בכאב עצבי, כלומר., gabapentinoids ותרופות נוגדות דיכאון. בדומה לתצפיות קליניות: gabapentinoids להציג שניn פעולה אקוטית לטווח קצרה במשככי כאבים במינון גבוה ועכב ספגה פעולה להקלה שהוא ציין לאחר כמה ימים של טיפול, תרופות טריציקליות וספיגה חוזרת של סרוטונין ונוראדרנלין יש מעכבים שום אפקט משכך כאבים חריפים במינון רלוונטי אבל הם מציגים עכבו נגרמו להקלה פעולה שדורשת 1 עד 2 שבועות של טיפול, ופלואוקסטין מעכבי הספיגה החוזרת של סרוטונין אינה יעילה 16. המודל הוא אפוא ראוי ללמוד את המנגנון המולקולרי שבבסיס טיפולים אלה 16-18,44,45,47, אשר עשויים לחשוף את המטרות טיפוליות חדשות לבדיקה בחולים 48-51. לבסוף, המודל גם מאפשר הלימוד של השלכות anxiodepressive בכאב עצבי. מבחינה קלינית, תוצאות אלה משפיעות על כשליש מחולי כאב נוירופתי אך preclinically פחות למדו מההיבטים חושיים של כאב. במודל זה, התפתחות כמו חרדה והדיכאון תלוי זמןפנוטיפים כמו sive-נוכח 52 והמנגנון הקשור ובכך ניתן לטפל. האזיקים תקניים ונהלים במודל של עכברים זה בכאב עצבי לגרום השתנות interindividual נמוכות לאלודיניה מכאנית. האפשרות להשתמש בבעלי חיים מהונדסים גנטי 17,18,44-47,52, אלודיניה לטווח הארוכה, התגובה לטיפולים בשימוש קלינית ואת הפיתוח של סימפטומים anxiodepressive תלוי הזמן להפוך את המודל הזה מתאים ללימוד ההיבטים השונים ו השלכות של כאב נוירופתי והטיפולים שלה, שכבר הביאו מידע רב ערך בתחום זה של מחקר.

כאב נוירופטי הוא בדרך כלל כרוני, והוא נוצר כתוצאה מפגיעה או מחלה הפוגעת במערכת החושית. שינויי הסתגלותי בעצב סנסורי פצוע ולאורך מסלול nociceptive השלם בתוך מערכת העצבים המרכזית להשתתף בתסמונת מורכבת זו. מודלים שונים פותחו במכרסמים לחקר כאב נוירופתי והטיפולים שלה 1-3. בהתבסס על בעלות אטיולוגיה ידועה, המודלים של מטרת כאב נוירופתי במחקו polyneuropathy נצפה בסוכרת, הפציעות לעצבים היקפיים, הפציעות המרכזיות, העצב המשולש, נוירופתיה רצופה לכימותרפיה, עצבי פוסט herpetic, וכו &#39;מודלים שונים של פגיעה עצבית היקפית במכרסמים להתמקד בעצב השת. מודלים אלה תלויים בדחיסה ו / או במקטע של עצב זה. ואכן, העצב השת מאפשר ניתוח קל יחסית ומאפשר לבדיקות המבוססות על רפלקסים נסיגת כפה. מוdels של דחיסת עצב כרונית כולל לדוגמא: פציעה הכרונית התכווצות (CCI) 4,5, עצב השת אוזקים 6-9, קשירה החלקית השת עצב (PSL) 10, קשירת השדרה העצב (SNL) 11, או נפוצה קשירת עצב peroneal 12. מודלים המכונים &quot;פגיעה חסכה עצבים&quot; (SNI) גם נמצאים בשימוש נרחב. הם מורכבים מקשירה וaxotomy של שתיים מתוך שלושה סניפי המסוף של העצב השת הדוקים, ואילו הסניף השלישי נותר בשלמותה 13-15. המודלים השונים של כאב נוירופתי, הממקדים את העצב השת, לגרום לאלודיניה מכאנית כרונית (תגובת nociceptive לבדרך כלל גירוי שאינו nociceptive) על כף הרגל האחורית הפצועה. הנה, את הליך הניתוח מפורט עבור &quot;מודל השרוול&quot; בכאב עצבי בעכברים הוא תאר. זה מורכב בהשתלה של שרוול פוליאתילן סביב הסניף הראשי של העצב השת 6-9. השימוש בדואר של סיבי פון פריי מתוארים גם. סיבים אלה מאפשרים הערכת אלודיניה מכאנית אשר היא סימפטום nociceptive לאורך זמן הווה במודל זה.

<table><tbody><tr><td>PE-20 צינורות פוליאתילן</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>PY2-59-8323</td><td>מפוצל לפני הניתוח</td></tr><tr><td>קטמין</td><td>Centravet</td><td>IMA004</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין HCl</td><td>Sigma</td><td>X1251</td><td>מוכן טרי לפני הניתוח</td></tr><tr><td>Ocry-gel</td><td>Centravet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pliers</td><td>FST</td><td>11003-12</td><td>52.5 מ"מ ישר</td></tr><tr><td>מהדק בולדוג</td><td>FST</td><td>p130 18038-45</td><td></td></tr><tr><td>צלחת מחוררת</td><td>CTTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פון פריי חוטים</td><td>Bioseb</td><td>NC-12775</td><td></td></tr></tbody></table>

דגם השת עצב איזוק של כאב נוירופתי בעכברים

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

כאב נוירופטי נובע כתוצאה מנגע או מחלה הפוגעת במערכת החושית. תוצאות תסמונת זו משינויי הסתגלותי בעצב סנסורי פצוע ולאורך מסלול nociceptive השלם בתוך מערכת העצבים המרכזית. זה בדרך כלל כרוני ומאתגר לטיפול. על מנת ללמוד בכאב נוירופתי והטיפולים שלה, מודלים שונים פותחו במכרסמים. מודלים אלה נובעים מבעלות אטיולוגיה ידועה, ובכך מתרבים פציעות היקפי עצבים, פציעות מרכזיות, וחילוף חומרים, נוירופתיה זיהומיות או הקשורות לכימותרפיה. מודלים עכבריים של פגיעה עצבית היקפית לעתים קרובות למקד את גיד הנשה אשר קל לגישה ומאפשר בדיקות nociceptive בכף הרגל האחורית. מודלים אלה מסתמכים על דחיסה ו / או סעיף. הנה, את הליך הניתוח מפורט עבור &quot;מודל השרוול&quot; בכאב עצבי בעכברים הוא תאר. במודל זה, שרוול של צינורות פוליאתילן PE-20 באורך סטנדרטי (2 מ&quot;מ) הוא באופן חד צדדי implanted סביב הסניף הראשי של העצב השת. זה גורם אלודיניה מכאנית לטווח ארוך, כלומר., תגובת nociceptive לגירוי בדרך כלל אינו nociceptive שיכול להיות מוערך על ידי שימוש בחוטי פון פריי. חוץ מהניתוחים ובדיקות מפורטים, העניין של מודל זה לחקר מנגנון עצבי של כאב, לחקר כאב נוירופתי היבטים חושיים וanxiodepressive, ולמחקר של טיפולים בכאב נוירופתי גם דן.

הנתונים באים לידי ביטוי כממוצע ± SEM. ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות ניתוח רב גורם של שונות (ANOVA) או מבחני t מזווגים בהתאם לעיצוב ניסיוני. לניתוחים אלו, קבוצות ניתוח הדמה וחפת וכן תמיסת מלח לעומת טיפולים תרופתיים נחשבו כגורמים בין הקבוצות. בעת צורך, ניתוחים חוזרים ונשנים מידה שימשו לנתונים כמובן זמן. השוואות post hoc-בוצעו באמצעות מבחן דאנקן. מובהקות סטטיסטיים נחשבת בעמ &#39;&lt;0.05. בעת השימוש בהליכים המתוארים לעיל, תוצאות השתלת השרוול באלודיניה ipsilateral כפי שמודגמים באיור 1. ברגע שהעכבר רגיל להליך הבדיקה, ערכי סף נסיגת כפה במבחן פון פריי יישארו יציבים לאורך זמן והם אינו מושפע מההליך הכירורגי כשלעצמה, כפי שמודגם בבעלי חיים שאם. זה צריך עם זאת להיותיצוין, כי אלודיניה לאחר ניתוח חולף בדרך כלל ניתן שנצפתה בעכברים שאם. כאשר אלודיניה זה נוכח, תגובת נסיגת הכפה חוזרת לבסיס לאחר כמה ימים לאחר ניתוח. בעכברי חפת, אלודיניה ipsilateral הוא כבר נמצא בניתוח שלאחר הימים הראשונים ונשמרה במשך יותר מ 2 חודשים (ראו 9, ואיור 1; F8, 344 = 29.5, p &lt;0.001). אלודיניה-Induced השרוול נשארה ipsilateral בעכברי C57BL/6J כאשר הוא נמדד על ידי בדיקת פון פריי כפי שתואר לעיל, אבל בתנאים אחרים נוכחות של אלודיניה על הכף הנגדית יכולה להיות גם ציינה 8. הערכים מוחלטים לנקודת התחלה הם בדרך כלל בין 4 ל 6 גרם בעכברי C57BL/6J, אבל פרוטוקול הבדיקה עשוי להשפיע על ערכים אלה. תרופות נוגדות דיכאון טריציקליות הם בין טיפולי קו הראשון קליניים לכאב נוירופתי. במודל זה, r nortriptyline התרופה נוגד דיכאון טריציקליות (5 מ&quot;ג / קילוגרם, intraperitoneal, פעמיים ביום)elieves אלודיניה נוירופתי לאחר כ -2 שבועות של טיפול, כפי שמודגם באיור 2 (F7, 91 = 15.3, p &lt;0.001; שלאחר מעשה: (CuffNor = Sham)&gt; CuffSal בp &lt;0.001 בימים 29-34). במינון זה, שום פעולת משכך כאבים חריפה של תרופות נוגדות דיכאון הוא ציין 16,17. כדי לחקות את ההקלה בכאב המתמשכת שקיימות בחולים שנטל תרופות מסוג זה, ניתן לבדוק את העכברים לפני מתן התרופה בבוקר ולא אחרי. הליך כזה מאפשר הערכה של השפעה לטווח ארוך על ידי דרוכה ימים קודמים של טיפול. במקרה זה, זה דורש 1 עד 2 שבועות של טיפול כדי לבחון הקלה מתמשכת של אלודיניה נוירופתי. כאשר הטיפול נקטע, הישנות נשמרת בדרך כלל בתוך 3 עד 4 ימים 18. לצד כמה תרופות נוגדות דיכאון, gabapentinoids הם הטיפולים ראשון הברירה האחרות לכאב נוירופתי. יש gabapentin פעולת משכך כאבים אקוטית וחולפת במודל זה 16, אבל זה גם מציג לון מתעכב ו<html> פעולת antiallodynic כאשר בודק את בעלי החיים בכל יום לפני מתן התרופה (p &lt;0.001 איור 3) שנמשך-g. פעולה זו היא מהירה יותר מאשר בתרופות נוגדות דיכאון. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1.jpg" /> ספי נסיגת כפת איור 1. מכאני במודל השרוול בכאב עצבי בעכברים. עכברי C57BL/6J זכר מבוגרים היו מורגלים להליך פון פריי עד בסיס יציב הושג (הבסיס מיוצג בשלב 0 בגרף). שני כפות נבדקו. עכברי קאף להציג אלודיניה מכאנית ipsilateral כהראה על ידי הספים הורידו נסיגת כפה (n = 10 לכל קבוצה). &quot;/&gt; Tp_upload/51608/51608fig2.jpg פעולת antiallodynic איור 2. מושהה של תרופות נוגדות דיכאון טריציקליות. אחרי שבועיים שלאחר ניתוח, עכברים קיבלו טיפול intraperitoneal פעמיים ביום (בוקר וערב) עם או NaCl 0.9% או 5 מ&quot;ג / hydrochloride nortriptyline קילוגרם (n = 5 או 6 לכל קבוצה ). מבחן פון פריי נעשה לפני הטיפול בבוקר. עם הליך זה, פעולת antiallodynic מאוחרת של nortriptyline הוא ציין, שדורש סביב 12 ימים של טיפול. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3.jpg" /> איור 3. פעולת Antiallodynic של gabapentinoid. אחרי שלושה שבועות שלאחר ניתוח, עכברים קיבלו טיפול intraperitoneal פעמיים ביום (בוקר וערב) עם או NaCl 0.9% או 10 מ&quot;ג / קילוגרם gabapentin (n = 5 לכל קבוצה). מבחן פון פריי נעשה לפני פינוק בוקרment. עם הליך זה, פעולת antiallodynic מתעכבת ומתמשכת של gabapentin הוא ציין. הנתונים מוצגים לפני תחילת הטיפולים וביום ה -6 של טיפולים.

כאב נוירופטי הוא תוצאה של פגיעה או מחלה המשפיעה על מערכת החושית. &quot;מודל השרוול&quot; בכאב עצבי בעכברים מורכב מההשתלה של שרוול פוליאתילן סביב הסניף הראשי של העצב השת. אלודיניה מכאנית נבדקה באמצעות חוטי פון פריי.

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להקים מודל עכבר לכאב נוירופתי בעקבות דחיסה של עצב פריפרי. לאחר הכנת בעל החיים לניתוח, חושף הענף הראשי של העצב הסיאטיק, ושרוול פוליאתילן מושחל סביב העצב. לאחר מכן נסגר הפצע.כדי לבחון את רגישות כף הרגל, העכברים מונחים בתוך קופסאות שקופות מעל לוח פלדה מחורר. לאחר מכן, מיושמים על כף הרגל סדרה של סיבי Von Fray הגדלים בהדרגה, עד שהבעל חיים מגיב באופן עקבי ללחץ. לבסוף, ניתן להבחין בנוכחות של אלודיניה מכנית ממושכת ואיפסילטרלית לכף הרגל המנותחת, על ידי שרטוט הספים המכניים שהתקבלו מבדיקת ה-Von Fray לאורך זמן.מודל זה יכול לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הכאב, כגון המנגנונים העומדים בבסיס כאב נוירופתי. ניתן להשתמש בו גם כדי לבחון טיפולים קיימים, לבדוק חומרים נוירופתים חדשים או לחקור השלכות חרדתיים-דיכאוניות של כאב נוירופתי. עם זאת, הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן השתלת השרוול היא שלב שקשה להסבירו ללא תמיכה חזותית.כדי להעריך את סף נסיגת כף הרגל המכני, ראשית מקמיים את העכברים להסתגלות בתוך קופסאות שקופות בודדות על פלטת פלדה מחוררת; עד 12 חיות ניסוי יכולות להיבדק במקביל במהלך הבדיקה. השתמשו בסיבי von Frey. שערות פלסטיק אלו, בעלות קטרים מכויילים, מחוברות למכשיר יישום ידני.בעת כיפוף, כל סיב מפעיל לחץ הפרופורציונלי לקוטרו. בעכברים, הסיבים הנפוצים ביותר בשימוש נעים בין 16 גרם ל-10 גרם. התחילו בלחץ הנמוך ביותר.בעת מדידת ספי המיועדים לבדיקת העכברים, יש להניח את הסיב על כף הרגל האחורית השמאלית עד שהסיבים מתחילים להתכופף. יש להימנע מהשוליים הלטרליים של כף הרגל, העשויים להיות רגישים יותר. בעל החיים מגיב להנחת הסיב.אם הכף נרתעת או נסוגה, חזור על היישום פעמיים נוספות, ואם בעל החיים מגיב לכל שלושת היישומים, בדוק את הכף השנייה. אחרת, יישם את הסיבים חמש פעמים בסך הכל לפני בדיקת הכף השנייה. בדוק כל עכבר ברצף עם סיב von Frey שנבחר, ולאחר מכן חזור על התהליך עם הסיב הבא.אם בעל חיים מגיב שלוש פעמים לאותו סיב, הדבר נחשב לתוצאה חיובית. כאשר שני סיבים רצופים מקבלים ציונים חיוביים, יש להפסיק את הבדיקה בכף רגל זו. סף נסיגת כף הרגל הוא הנמוך מבין שני ערכי הגרמים עבור עכבר נתון.ערכים אלו עשויים להיות שונים בין שתי כפות הרגליים. חזור על הליך זה מדי יום עד ששלושה ערכי סף רצופים לפחות יהיו יציבים. לאחר מכן, המשך בניתוח.רשמו את משקל החיה, שצריך להיות מעל 20 גרם, והרדימו אותה באמצעות קטמין וקסילזין. בדקו את היעדרה של כל רפלקס בכף הרגל או בעין. מרחו ג'ל הגנה על העיניים באמצעות מקלון.לאחר מכן, גלחו את הרגל הימנית מהברך ועד לירך. מיקום את בעל החיים כך שהרגל האחורית הימנית מונחת על כרית קטנה, ואבטחו רגל זו באמצעות סרט הדבקה. חטאו את העור החשוף באמצעות chlorhexidine ו-70% ethanol.התחילו במישוש כדי למצוא את הירך (femur). לאחר מכן בצעו חתך של 0.5 סנטימטר במקביל לירך, כ-1.5 מילימטרים מאחורי הירך. כעת, באמצעות מקלות עיקור (autoclave sticks), הפרידו את השרירים סמוך לירך, אך אל תחתכו אותם.יש להבליט את הענף הראשי של עצב הסיאטיקה. במקרה של דימום, יש לוודא שסופגים אותו בעזרת מקלון עבור קבוצות הביקורת (sham controls). בכך מסתיימת הניתוח עבור העכברים שיקבלו את השרוול.החדירו שני מקלות מתחת לעצב הסיאטיק (sciatic nerve) כדי לחשוף את הענף הראשי של העצב. הוסיפו התזה של סליין פיזיולוגי כדי להמיץ את העצב. כעת אחזו ב-split cuff באמצעות מקל פלדה מחודד ותפס בולדוג (bulldog clamp).לאחר מכן, הכניסו את התפס (bulldog) וסובבו אותו ב-180 מעלות כך שיחזיק את השרוול במיקום הנגדי לפתיחה הצדית שלו. כעת, סגרו את התפס והוציאו את המקל המחודד. בשלב הבא, בקשו מעוזר להחזיק את שני המקלות מתחת לעצב ולהפריד ביניהם בעדינות.כדי לאפשר גישה לעצב, הכניסו את השרוול בעובי שני מילימטרים סביב הענף הראשי של עצב הסיאטיקה (sciatic nerve). התחילו בהכנסת החלק של השרוול המרוחק (distal) לתפסן הבולדוג (bulldog) סביב אותו חלק של העצב הקרוב (proximal) לירך. לאחר מכן, סגרו את השרוול בעדינות בעזרת פלייר כדי לוודא שהשרוול סגור כראוי.הפכו את העכבר. כעת, הסירו את המקלות ותפרו את העור לסגירה. באמצעות קשרי כירורגיה, העבירו את העכבר לכלוב בית נקי, והניחו את העכבר על צדו השמאלי.שמרו על חום בעזרת מנורת חימום עד להתעוררותו. הוסיפו מזון ומים נוספים לכלוב כדי שהעכבר יוכל להזין את עצמו. ניתן לבחון את בעלי החיים לבדיקת ספי סحب נמוכים ביום למחרת הניתוח, אך עדיף להמתין שלושה ימים כדי להפחית רגישות יתר לאחר הניתוח בפרוצדורה זו.עכברים שעברו הליך Cuff מפגינים אלודיניה איפסילטרלית למשך יותר מחודשיים בהשוואה לקבוצות ביקורת sham. טיפול בעכברים ב-5 mg/kg של nortriptyline, נוגד דיכאון טריציקלי, פעמיים ביום, מקל על האלודיניה הנוירופתית לאחר כשבועיים של טיפול.אם הטיפול הופסק, העכברים נטו בדרך כלל לחזור למצב ההתדרדרות תוך שלושה עד ארבעה ימים. מודל זה רגיש גם לטיפול אחר לכאב נוירופתי, Gabapentinoids. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לאתר את הענף הראשי של העצב הסיאטיק בעכברים תחת הרדמה ולהחדיר סביבו כיסוי.במודל זה של כאב נוירופתי, מבחן the one fray מאפשר בנוסף להעריך את הסף המכני ולבחון תגובות לתרופות.

the-sciatic-nerve-cuffing-model-of-neuropathic-pain-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פגיעה נחסך עצב מודל החיה מתואר כאן כמו במודל של עכברים של כאב נוירופטי היקפי הבאים denervation חלקית של עצב השת ידי lesioning הענפים השוקה משותף עצב peroneal, עוזבים את העצב sural שנותרו ללא פגע. שינוי ההתנהגות הנובעים allodynia מכני לכמת ידי חוטים פון פריי.

פגיעה ניצלו עצב (SNI) דגם Allodynia מכונות המושרה עכברים

בגלל הפשטות של ניתוח תוצאות התנהגותיות חזקים, היצרות כרונית של עצב השת הוא אחד מראש יחסני במודלים של בעלי חיים של כאב נוירופתי. תוך 24 שעות לאחר הניתוח, רגישות יתר לכאב הוא הקים ניתן למדוד כמותית באמצעות פריי פון aesthesiometer (מבחן מכני) ו מטר כאבים plantar (מבחן תרמית).

היצרות כרונית של העצב Sciatic ואת רגישות יתר לכאב בדיקה אצל חולדות

בסרטון זה, אנו מפתחים מודל עכבר in vivo לפלישה פריעצבית על ידי הזרקת תאי סרטן הלבלב לעצב הסיאטי. מודל זה מסייע לכמת את היקף הפלישה ולחקור את יחסי הגומלין בין תאים סרטניים ועצבים.

מודל הפלישה הפרי-עצבית של מורין: יצירת מודל In Vivo להדמיית פלישה פרי-עצבית בעצב הסיאטי של עכבר

מודל חיתוך רוחב העצב הטיביאלי הוא מודל נסבל היטב, אימות, ושחזור של ניוון שרירים שלד. הפרוטוקול כירורגית המודל מתואר והפגין בC57Black6 עכברים.

חיתוך רוחב עצב הטיביאלי - מודל סטנדרטי לניוון שרירים שלד מושרה denervation בעכברים

הניתוח המותאם הוא שיטה פשוטה למודל פגיעה עצבית חסכנית של עכבר או חולדה הדורשת רק קשירה אחת וחתך אחד כדי לפגוע הן בעצבים הפרוניאליים והן בעצבים הסוראליים.

מודל שונה של פגיעה עצבית ניצלת של כאב נוירופתי בעכברים

הבדיקה המכנית למניעת קונפליקטים משמשת כקריאה לא רפלקסיבית של רגישות לכאב בעכברים, שבה ניתן להשתמש כדי להבין טוב יותר תגובות רגשיות-מוטיבציוניות במגוון מודלים של כאב עכברים.

בדיקת הימנעות מקונפליקט מכני למדידת התנהגות כאב בעכברים

קשירת עצבים סיאטית חלקית גורמת לכאב נוירופתי כרוני מתמשך, המאופיין בתגובות מוגזמות לגירויים תרמיים ומכניים. מודל עכברי זה של כאב נוירופתי משמש בדרך כלל לחקר טיפולים חדשניים לניהול כאב. מאמר זה מתאר בפירוט את ההליך הכירורגי לשיפור התקינה והשחזור.

קשירת עצבים סיאטית חלקית: מודל עכברי של כאב נוירופתי כרוני לחקר ההשפעה האנטינוסיצפטיבית של טיפולים חדשניים

אנו מציגים פרוטוקול לשימוש במחט התת עורית של פו במודל של פגיעה כרונית בהיצרות כדי לגרום לכאב עצבי סיאטי בחולדות.

יעילות המחט התת עורית של פו על כאב עצבי סיאטי: שינויים התנהגותיים ואלקטרופיזיולוגיים במודל חולדה של פגיעת התכווצות כרונית

פגיעה כרונית בהיצרות של העצב האינפרא-אורביטלי הדיסטלי בעכברים גורמת לשינויים בהתנהגות ספונטנית (פעילות טיפוח פנים מוגברת) ובהתנהגות נוציפנסיבית בתגובה לגירוי מישושי (תגובתיות יתר לגירוי שיער פון פריי) המהווים סימנים לכאב מתמשך ולאלודיניה ומשמשים מודל לכאב נוירופתי טריגמינלי.

פגיעה כרונית בהיצרות של העצב האינפרא-אורביטלי הדיסטלי (DIoN-CCI) בעכברים לחקר כאב נוירופתי טריגמינלי

פרוטוקול זה מציג מודל חולדה הניתן לשחזור באמצעות עצבים תחושתיים כדי לחקות כאבי נוירומה אנושיים ולהעריך טיפולים כירורגיים, ומציע כלי רב ערך למחקר נוירומה תרגומית.

מודל מכרסם כירורגי חדשני לחקר אפשרויות טיפול בכאב נוירומה באמצעות עצבוב שרירים ממוקד דרך העצב הספנוס

למדו כיצד ליצור מודל עכברים לכאב נוירופתי באמצעות השתלת חפת פוליאתילן סביב עצב השת. השיטה מאפשרת הערכת אלודיניה מכנית באמצעות בדיקת סיבי פון פריי ומדידת סף נסיגת הכף לאורך זמן.

דגם השת עצב איזוק של כאב נוירופתי בעכברים

גלה סרטונים נוספים