Name: השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא Allogeneic T מסוג CD4 בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: חקור השתלת עור זנב בעכברים ללימוד דחיית תאי T מסוג CD4 ומנגנוני סבילות. שיטה זו מאפשרת מעקב יעיל בתגובות החיסון האלוגניות ללא הקרבת בעלי החיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי SNF PPOOA-_119204 ו-PPOOP3_144918 ל-S.W.R. אנו מודים ל-E. Palmer ול-B.T.H. Hausmann על העכברים והמומחיות הטכנית.

בפרסום הסרטון הזה ופרוטוקול, כל ההליכים בבעלי החיים נערכו בהתאם לפרוטוקול שאושר על ידי בעלי החיים Cantonal הרשות באזל, שוויץ. לבצע את כל ההליכים בתנאים שבם ניתן סטרילי. 1. הכנת הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי כל מכשירי הניתוח וגזה לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את הכרית החמה ולארגן את מכשירי ניתוח על השולחן (הטבלה של חומרים / שיטות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את תחבושות רצועת אצבע. החל וזלין על משטח הפצע עם מטלית כותנה (לוודא הגזה מכוסה לחלוטין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את העכברים ולנהל שיכוך כאבים עצירות 0.05 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף. שים לב: זה יספק שיכוך כאבים מייד לאחר השתלה. </li></ol> 2. הכנה של עור הזנב להשתלות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברי תורם (למשל, bm12 IA) לCO מחנק 2 ו-Disinfect הזנבות עם פתרון חיטוי לפני הכריתה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את הזנב עם הפס השחור על לוח פלסטיק נקי ולחתוך אותו לאורך ציר אורך הקו האמצעי, מה שהופך את החתך שטחי מעורב רק את שכבת העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשוך את העור מהזנב באמצעות מלקחיים מרתקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את עור הזנב בצלחת תרבית תאי 10 סנטימטר מלא ב10 מיליליטר HBSS. </li></ol> 3. הליך כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברי נמען (לדוגמא, C57BL / 6) על ידי שאיפה של פתרון isofluorane 3% בקופסא אינדוקציה שקופה. הערה: זה לוקח 3-5 דקות לעכבר כדי להגיע להרדמת מטוס כירורגית. השתמש במשחת וטרינר על עיניים כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העכבר על משטח החם ולהחיל isofluorane 1.5% באמצעות מסיכת פה ותחת של כל רפלקס בבעלי חיים על ידי בוהן צביטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את אתר הגב של עכברי הנמען (לדוגמא, C57BL / 6) ולהסיר שערות מזהמים באמצעות SW גזה יבשAB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא אתר השתלה מגולח עם פתרון מזוהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצבוט את העור עם מלקחיים באתר המרכז / ימין של dorsum ולהשתמש במספריים מעוגלים לעשות חתך עגול של כ 1 x 0.6 סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם דימום מתרחש, ולאחר מכן לנקות את הפצע עם מקלון צמר גפן סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את גודל החתך ולחתוך השתלה של הגודל המוערך מעור הזנב באמצעות האזמל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקצץ פינות לעגל את ההשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את ההשתלה באזמל, העודף יבש של HBSS על מקלון צמר גפן סטרילי ולמקם אותו במיטת השתל של עכבר הנמען. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הימנע מחופף של תורם ועור מארח ולהחיל דבק רקמות באזור המגע באופן בלעדי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל טיח ללא קמטים סביב המותניים העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל תחבושת לא אלסטי דבק כדי לתקן את הטיח לעכבר (3 מ&quot;מ עבר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך עם המספריים על 3 מ&quot;מ באתר הגחון העליון של התחבושת. הערה: זה הוא להימנע TRapping שיניו של העכבר בשלב ההתאוששות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את ההרדמה הפה המסכה ולשמור על העכברים המושתלים על כרית החימום עד ערה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחזור עכברים מושתלים לכלובים שלהם רק כאשר התאוששו באופן מלא ולהעריך את הניידות שלהם כדי להבטיח שהתחבושת לא הדוקה מדי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את כל מכשירי הניתוח עם אתנול 70% לפני שתמשיך בניתוח הבא. </li></ol> 4. טיפול שלאחר הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת סירופ המכיל אקמול למי השתייה (4 מ&quot;ג / מיליליטר) ולנהל אותו למשך 7 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור עכבר לחדר בעלי החיים ברגע שהיא התאוששה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקוב מקרוב אחר עכברים לסימנים קליניים כוללים דיכאון או שינויים אחרים התנהגותיים (אכילה או חוסר תנועה), מראה נורמלי (חוסר הטיפוח) או תנוחה (pilo-זקפה או יציבה כפופה) בפעם התחבושת היא במקום (שבוע 1). </li></ol> 5. הסרת תחבושת (6-7 ימים לאחר השתלה) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Anesthetize עכברים על ידי שאיפה של פתרון isofluorane 3% בקופסא שקופה אינדוקציה (ראה לעיל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך תחבושת וגבס עם מספריים עורק ובזהירות להסיר אותם. הערה: למנוע מתיחה של אתר ההשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על העכברים המושתלים לסימנים קליניים (ראה 4.3) ואת הציון לדחייה של שתלי עור (טבלת 1). הערה: מערכת ציון השתל מנצלת את מרקמי שיער השונים על עור הזנב בהשוואה לעור הגב. המראה של ההשתלה והדחייה שלה הוא מסווג ב3 כיתות. שתלי עור אלוגנאית (MHC II תואם, למשל, IA bm12) של C57BL / 6 עכברים עם מערכת חיסון תקין בדרך כלל נדחים בתוך 12-15 ימים לאחר השתלה (הנתונים שלו ו15-20). </li></ol>

<ol><li>Mahillo, B., Carmona, M., Álvarez, M., White, S., Noel, L., Matesanz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Data+in+Organ+Donation+and+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22transplantation%22%5BJournal%5D)">Global Data in Organ Donation and Transplantation.</a> transplantation. 92 (10), 1069-1074 (2011).</li>
<li>Halleck, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+perspectives+of+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+proceedings%22%5BJournal%5D)">New perspectives of immunosuppression.</a> Transplantation proceedings. 45 (3), 1224-1231 (2013).</li>
<li>Wood, K. J., Bushell, A., Jones, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+unresponsiveness+to+alloantigen+in+vivo.+a+role+for+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+reviews%22%5BJournal%5D)">Immunologic unresponsiveness to alloantigen in vivo. a role for regulatory T cells.</a> Immunological reviews. 241 (1), 119-132 (2011).</li>
<li>Sykes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+tolerance%3A+mechanisms+and+application+in+clinical+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Immune tolerance: mechanisms and application in clinical transplantation.</a> Journal of Internal Medicine. 262 (3), 288-310 (2007).</li>
<li>McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+allograft+rejection.%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Skin allograft rejection.</a> Current protocols in immunology. , (2009).</li>
<li>McKenzie, I. F., Morgan, G. M., Sandrin, M. S., Michaelides, M. M., Melvold, R. W., Kohn, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B6.C-H-2bm12.+A+new+H-2+mutation+in+the+I+region+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">B6.C-H-2bm12. A new H-2 mutation in the I region in the mouse.</a> The Journal of experimental medicine. 150 (6), 1323-1338 (1979).</li>
<li>McIntyre, K. R., Seidman, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleotide+sequence+of+mutant+I-A+beta+bm12+gene+is+evidence+for+genetic+exchange+between+mouse+immune+response+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nucleotide sequence of mutant I-A beta bm12 gene is evidence for genetic exchange between mouse immune response genes.</a> Nature. 308 (5959), 551-553 (1984).</li>
<li>Stuart, P. M., Beck-Maier, B., Melvold, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Provocation+of+skin+graft+rejection+across+murine+class+II+differences+by+non--bone-marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Provocation of skin graft rejection across murine class II differences by non--bone-marrow-derived cells.</a> Transplantation. 37 (4), 393-396 (1984).</li>
<li>Hausmann, B., Palmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+selection+through+a+motif+in+the+alphabeta+T+cell+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Positive selection through a motif in the alphabeta T cell receptor.</a> Science. 281 (5378), 835-838 (1998).</li>
<li>Bill, J., Ronchese, F., Germain, R. N., Palmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+mutant+amino+acids+to+alloantigenicity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">The contribution of mutant amino acids to alloantigenicity.</a> The Journal of experimental medicine. 170 (3), (1989).</li>
<li>Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+and+tolerance+for+clinical+organ+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression and tolerance for clinical organ allografts.</a> Current Opinion in Immunology. 1 (6), 1174-1177 (1989).</li>
<li>Rosenberg, A. S., Singer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+basis+of+skin+allograft+rejection%3A+an+in+vivo+model+of+immune-mediated+tissue+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cellular basis of skin allograft rejection: an in vivo model of immune-mediated tissue destruction.</a> Annual Review of Immunology. 10, 333-358 (1992).</li>
<li>Kingsley, C. I., Nadig, S. N., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+tolerance%3A+lessons+from+experimental+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+international+%3A+official+journal+of+the+European+Society+for+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transplantation tolerance: lessons from experimental rodent models.</a> Transplant international : official journal of the European Society for Organ Transplantation. 20 (10), 828-841 (2007).</li>
<li>Larsen, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+acceptance+of+skin+and+cardiac+allografts+after+blocking+CD40+and+CD28+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Long-term acceptance of skin and cardiac allografts after blocking CD40 and CD28 pathways.</a> Nature. 381 (6581), 434-438 (1996).</li>
<li>Tomura, M., Nakatani, I., Murachi, M., Tai, X. G., Toyo-oka, K., Fujiwara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+allograft+responses+induced+by+interleukin-6%2C+which+selectively+modulates+interferon-gamma+but+not+interleukin-2+production%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Suppression of allograft responses induced by interleukin-6, which selectively modulates interferon-gamma but not interleukin-2 production.</a> Transplantation. 64 (5), 757-763 (1997).</li>
<li>Ring, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+is+necessary+for+initiating+the+acute+rejection+of+major+histocompatibility+complex+class+II-disparate+skin+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma is necessary for initiating the acute rejection of major histocompatibility complex class II-disparate skin allografts.</a> Transplantation. 67 (10), 1362-1365 (1999).</li>
<li>Rosenberg, A. S., Finbloom, D. S., Maniero, T. G., Vander Meide, P. H., Singer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+prolongation+of+MHC+class+II+disparate+skin+allografts+by+in+vivo+administration+of+anti-IFN-gamma+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Specific prolongation of MHC class II disparate skin allografts by in vivo administration of anti-IFN-gamma monoclonal antibody.</a> Journal of immunology. 144 (12), 4648-4650 (1950).</li>
<li>Goes, N., Sims, T., Urmson, J., Vincent, D., Ramassar, V., Halloran, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disturbed+MHC+regulation+in+the+IFN-gamma+knockout+mouse.+Evidence+for+three+states+of+MHC+expression+with+distinct+roles+for+IFN-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Disturbed MHC regulation in the IFN-gamma knockout mouse. Evidence for three states of MHC expression with distinct roles for IFN-gamma.</a> Journal of immunology. 155 (10), 4559-4566 (1995).</li>
<li>Surquin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-4+deficiency+prevents+eosinophilic+rejection+and+uncovers+a+role+for+neutrophils+in+the+rejection+of+MHC+class+II+disparate+skin+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">IL-4 deficiency prevents eosinophilic rejection and uncovers a role for neutrophils in the rejection of MHC class II disparate skin grafts.</a> Transplantation. 80 (10), 1485-1492 (2005).</li>
<li>Gaylo, A. E., Laux, K. S., Batzel, E. J., Berg, M. E., Field, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+rejection+of+MHC+class+II-disparate+skin+allografts+in+mice+treated+with+farnesyltransferase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+immunology%22%5BJournal%5D)">Delayed rejection of MHC class II-disparate skin allografts in mice treated with farnesyltransferase inhibitors.</a> Transplant immunology. 20 (3), 163-170 (2009).</li>
<li>Bose, A., Inoue, Y., Kokko, K. E., Lakkis, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+perforin+down-regulates+CD4+and+CD8+T+cell-mediated+immune+responses+to+a+transplanted+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: perforin down-regulates CD4 and CD8 T cell-mediated immune responses to a transplanted organ.</a> Journal of immunology. 170 (4), 1611-1614 (2003).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

השתלת עור היא שיטה בשימוש נרחבת ללימוד דחייה וסובלנות תלויה בתאי T. מאז מודל השתלת העור הוקם, כמה התאמות ושינויים כבר מיושמים. בהליך המתואר, השתלת עור זנב IA bm12 מתבצעת באמצעות גז הרדמה (isofluorane). השימוש בגז ההרדמה מקטין את הזמן של ביצוע והתאוששות עכברים, אשר מפחית את הלחץ על עכברים מושתלים. ההליך מעסיק דבק רקמות כדי לתקן את עור הזנב, הנוטה להתכרבל יותר מאוזן או רקמת עור גב. יתר על כן, חשוב לשטח את עור הזנב לפני חיתוך וחיתוך הקצוות כמו זה מפחית מסתלסל ומשפר את המיצ...

השתלה של איברים מוצקים כגון עור, לב וכליות היא כעת הליך סטנדרטי בפרקטיקה רפואית ברחבי העולם 1. ניתן לדחות איברים מושתלים בהצלחה על ידי הפעלה של מערכת חיסון הנמען, אשר מזהה את האנטיגנים histocompatibility העיקריים של התורם. חולים מושתלים ולכן זקוקים לטיפול בתרופות לדיכוי המערכת החיסונית 2. השתלה אלוגנאית עור בעכברים הוקמה על ידי מךוואר ועמיתיו בשנת 1955 והייתה מועיל לזיהוי המולקולות הממוקדות תיארו מאוחר יותר כמורכב histocompatibility מרכזי (MHC) אני בכיתה ו-II. מאז, מודל השתלת עור כבר שונה באופן רציף ומותאם לללמוד את התפקיד של תת תא T ואת הרלוונטיות של חומר כימי וביולוגית התערבות בדיכוי דחיית שתל 2-4. עור מהאוזן ותא המטען קשה יותר להכין ורגישים יותר לחוסר חמצן ונימק מאשר זנב עור-5; עם זאת,הליך ההשתלה הוא דומה. בנוסף הניטור של השתלות עור הזנב הוא קל בשל מרקם השיער האופייני לעור. מאמר זה מספק נוהל מפורט לכיתת MHC II השתלת עור זנב חוסר התאמה המאפשרת לחקר היבטים שונים של דחייה מסוג CD4 + T תא בתיווך של שתל וסובלנות בעכברים. המוטציה הטבעית שלוש הנקודות בMHC הכיתה השנייה ב IA מולקולה (הנקראת IA bm12) 6-9 די בכך כדי לגרום לדחייה של allografts עור בעכברי C57BL / 6 8. מולקולת bm12 IA מפעילה CD4 + T תאים עם קולטן תא αβ-T שונים (TCR) שרשרות מעכברי C57BL / 6, ביניהם תאי T Vα2Vβ8-TCR ספציפיים זוהו על מנת ליצור עכבר TCR-מהונדס 10. העברת המאמצת של תאי T Vα2Vβ8-TCR ספציפיים נעשתה שימוש כדי לבסס מודל דחייה בC57B עם מערכת החיסון החלשL / 6 RAG2 - / - העכברים מושתלים עם עור IA bm12. הבדלים גנטיים בין תורם למקבל להשפיע על התוצאה של קבלת השתלה ודחייה. ישנם סוגים שונים של השתלות: השתלות autografts הם מן הפרט הנמען עצמו; syngrafts וallografts הם השתלות מאנשים זהים מבחינה גנטית וגנטי שאינם קשורים בהתאמה. קבלה של השתלות איברים אלוגנאית שונות הוכח על ידי התערבות כימית וביולוגית בחולים ומודלי עכבר 11,3,4. בגישה בסיסית, עכברים שטופלו בנוגדן אנטי CD3 C57BL / 6 הראו הישרדות ממושכת של עור זנב-IA bm12 (נתונים שלא פורסמו). דלדול של CD4 + ו CD8 + T תאים לפני ההשתלה בעכברי נמען הביא לקבלה שלי בכיתה MHC והשני שתלי תואמים (חזון ב12). מעניין לציין, כי דחייה של שתלי עור תלוי בנוכחות של CD4 + </sup&gt; תאי T (חזון ב12). במודל זה, מיקוד אינטראקציות ספציפיות בין תאי מערכת החיסון שונים על ידי חסימת מולקולות costimulatory עם נוגדנים או דיכוי עם תאי T רגולטוריים עלול לגרום סובלנות (נתונים שלא פורסמו). ואכן, החסימה גם CD40 CD28 והובילה לסובלנות של שתל עור לטווח ארוך 13,14. השתלת עור הזנב היא קלה לביצוע וקל לניטור בהשוואה להשתלה של איברים אחרים. בנוסף, השתלות עור הזנב הן קלים להכנה והם פחות רגישים לאיסכמיה מאשר רקמות עור אחרות. בניגוד להרדמה מוזרקת, השימוש בגז הרדמה (isofluorane) במהלך השתלה מקצר גם את ההליך והתאוששות נמען זמן. קרלינג של השתלת עור הזנב, דבר שעלול להוביל לריפוי פצע שלם ודחיית שתל, נמנע על ידי יישום של דבק רקמות. יתר על כן, מודל השתלת עור זנב IA bm12 בלעדי מפעיל CD4 <sup&gt; + תאי T בשתי מערכת חיסון ומערכת חיסון חלש עכברים (של אותו רקע גנטי) להקל על הפרשנות של התוצאות. פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר אמין, לשחזור ומעקב בקלות, המאפשר להתערבות כימית וביולוגית. המודל מיועד לחקירת אינדוקציה דחייה וסובלנות של השתלות עור הזנב.

<table><tbody><tr><td>בטדין תמיסה סטנדרטית</td><td>Mundipharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צמר גפן</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>31025060</td><td></td></tr><tr><td>Dafalgan , UPSA</td><td>בריסטול מאיירס סקוויב UPSA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>רצועות אצבעות Hansaplast</td><td>Beierdorf AG</td><td>REF.76861</td><td></td></tr><tr><td>דבק רקמות היסטואקריל</td><td>בראון</td><td>REF.1050052</td><td></td></tr><tr><td>לויקוטייפ קלאסי , 2 ס"מ x 10 מ'</td><td>BSN Medical SAS</td><td>REF.02204-00</td><td></td></tr><tr><td>PBS, תמיסת מלח חוצצת פוספט, pH 7.4</td><td>Invitrogen</td><td>10010015</td><td>GIBCO</td></tr><tr><td>גזה סטרילית, 5 x 5 ס"מ, 8 שכבות</td><td>MaiMed GmbH</td><td>21010</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים בתבנית צרה</td><td>FST</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קשתית עדינה מעוגלת</td><td>FST</td><td>14095-11</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קשתית עדינה</td><td>FST</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מאיו</td><td>FST</td><td>14010-15</td><td></td></tr><tr><td>קצה כדורי מספריים לעורקים 11.5 ס"מ</td><td>FST</td><td>14080-11</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לרקמות</td><td>FST</td><td>11021-14</td><td></td></tr><tr><td>להב כירורגי מס' 20</td><td>Swann-Morton LTD</td><td>3006</td><td></td></tr><tr><td>ידיות להב כירורגי</td> מפלדת פחמן מזרק <td>Swann-Morton LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, 1 מ"ל</td><td>ARTSANA</td><td></td><td>חד פעמי</td></tr><tr><td>Temgesic, בופרנורפין</td><td>ESSEX Chemie AG</td><td></td><td>0.3 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>כלי תרבית רקמות 10 ס"מ, 60.1 ס"מ2</td><td>TPP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>וזלין</td><td>Vifor SA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כרית חמה</td><td>סוליס</td><td></td><td>סוג 223</td></tr></tbody></table>

השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא allogeneic t מסוג cd4 בעכברים

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

חקר תגובות תאי T והשלכותיהן במהלך זיהוי אלו-אנטיגן דורש מודל המאפשר להבחין בין תאי T תורמים לתאי T מארחים, לנטר בקלות את השתל ולהתאים את המערכת כדי לענות על שאלות אימונולוגיות שונות. מדאוור ועמיתיו הקימו השתלת עור זנב-זנב אלוגנית בעכברים ב-1955. מאז, מודל השתלת העור שונה והותאם ללא הרף כדי לענות על שאלות ספציפיות. השימוש בעור זנב הופך את המודל הזה לקל לציון לדחיית השתל, אינו דורש הכנה נרחבת או הרדמה עמוקה, ישים לבעלי חיים מכל הרקע הגנטי, מונע נמק איסכמי ומאפשר התערבות כימית וביולוגית. 
באופן כללי, גם תאי T אלוגניים CD4+ וגם CD8+ אחראים לדחיית השתלות מכיוון שהם מזהים אנטיגנים של תאימות היסטולוגית עיקרית לא תואמים מזני עכברים שונים. תוארו מספר מודלים להפעלת תאי T אלוגניים בעכברים מושתלי עור. הזיהוי של מולקולות קומפלקס תאימות היסטולוגית (MHC) מסוג I ו-II בזני עכברים שונים כולל עכברי C57BL/6 היה צעד חשוב לקראת הבנה ולימוד תגובות בתיווך תאי T. במודל השתלת עור הזנב המתואר כאן, מוטציה תלת-נקודתית (I-Abm12) בחריץ מציג האנטיגן של מולקולת MHC-class II (I-Ab) מספיקה כדי לגרום להפעלה אלוגנית חזקה של תאי CD4+ T בעכברי C57BL/6. השתלות עור מעכברי I-Abm12 בעכברי C57BL/6 נדחות תוך 12-15 יום, בעוד שתלים סינגניים מתקבלים עד 100 ימים. היעדר תאי T (עכברי CD3-/- ו-Rag2-/-) מאפשר קבלת שתלי עור עד 100 ימים, שניתן להתגבר עליהם על ידי העברת 2 x 104 תאי T מסוג פרא או טרנסגני. תאי T שהועברו באימוץ מתרבים ומייצרים IFN-γ בעכברי Rag2-/- מושתלים ב-I-Abm12.

בגישה ראשונה C57BL / 6 עכברים הושתלו עם allografts bm12 IA וsyngrafts ב IA. לאחר הסרת תחבושת, שתל סימנים גלויים של ריפוי פצע בלי סגירה של הקשר באזור C57BL / 6 עכברים (איור 1 א). לאחר הסרת תחבושת, דלקת בתיווך תאי CD4 + T הובילה להופעתו של אזורי נמקים (כתמים אדומים) והדחייה של allografts bm12 IA בעכברי C57BL / 6 בתוך 13 ימים לאחר ההשתלה (איור 1 ב-C, סמלים מלאים), בעוד syngrafts היו נסבל עד 100 ימים <strong...

השתלת עור זנב היא מודל רב עוצמה לחקר דחייה תלויה בתאי T והשראת סבילות במהלך תגובות חיסוניות אלוגניות בעכברים. היתרונות של פרוטוקול זה הם ניתוח פולשני קל, וקלות ניטור ללא צורך להקריב את העכבר המקבל.

השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא Allogeneic T מסוג CD4 בעכברים

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

המטרה הכוללת של הפרוצדורה הבאה היא לבצע השתלת עור זנב. כדי לחקור דחייה המתווכת תאי T או השראת סבילות במודל של עכבר, הדבר משיג תחילה על ידי קצירת עור הזנב מעכבר תורם. בשלב השני, אתר ההשתלה מוכן בבעל החיים המקבל.בשלב הבא, השתל מושתל ומקובע באמצעות דבק לרקמות ותחבושת כשלב סופי. התחבושת מוסרת ביום השביעי לאחר ההשתלה והשתל מקבל ציון. לבסוף, ניתן לחקור את התגובה האלואימונית המתווכת על ידי תאי T.טכניקה זו להשתלת עור זנב מספקת מודל רב עוצמה לחקר דחייה תלוית T-cells והשראת טולרנטיות במהלך תגובות חיסוניות אלוגניות בעכברים. לפני תחילת הפרוצדורה, פתחו את תחבישי הרצועות לאצבעות ומרחו וזלין על רפידות הפצע באמצעות מקל צמר גפן, תוך וידאי שכל הגזה מכוסה לחלוטין. לאחר מכן, חטאו את הזנב של עכבר תורם שהורדם עם תמיסת חיטוי.לאחר מכן, מקמו את הזנב על לוח פלסטיק נקי. הפכו את הפס השחור העליון כלפי מטה ובצעו חתך שטחי לאורכי דרך העור לאורך קו האמצע של הזנב. השתמשו בפינסטות תפיסה כדי לקלף את העור, ולאחר מכן מקמו את הרקמה בצלחת תרבית תאים של 10 סנטימטר המלאה ב-10 מיליליטר של HBSS.גלחו את האזור הגבי (dorsal) של עכבר מקבל שהורדם והשתמשו בפיסת גזה יבשה כדי להסיר שערות שנותרו. לאחר חיטוי של אתר ההשתלה המגולח בתמיסה אספטית, צבטו את העור בעזרת פינצטה במרכז הצד הימני של הגב והשתמשו במספריים מעוקלים כדי לבצע חתך עגול בקוטר של כ-1 על ידי 0.6 סנטימטרים. לאחר מכן, השתמשו בסכין מנתחים (scalpel) כדי לחתוך שתל מעור הזנב שהוסר מהתורם, תוך קיטום הפינות כדי להעגיל את הרקמה; העמיסו את השתל על הסכין וספגו את עודפי ה-HBSS בעזרת מקלון צמר סטרילי.לאחר מכן, הנח את הרקמה המיובשת על מצע השתלה של העכבר המקבל. הימנע מחפיפה בין עור התורם לעור המארח, ומריח דבק רקמות אך ורק על אזור המגע. לאחר מכן, כרך תחבושת ללא קמטים סביב מותניו של העכבר והחלק תחבושת דביקה לא-אלסטית כדי לקבע את התחבושת לגופו של העכבר, ובכך למנוע מהעכבר לתפוס את התחבושת בשיניו.במהלך ההתאוששות, בצעו חתך של שלושה מילימטרים בצד הבטני העליון של הרקמה. לאחר התאוששות מלאה על משטח חימום, החזירו את החיה שעברה השתלה לכלוב שלה והעריכו את יכולת הניידות שלה. כדי להבטיח שהתחבושת אינה הדוקה מדי, טפלו בעכבר באמצעות סירופ פאראצטמול במי השתייה של החיה למשך שבעה ימים.לאחר שישה עד שבעה ימים, השתמשו במספרי עורקים סטריליים כדי לגזור ולהסיר בזהירות את התחבושות, תוך הקפדה להימנע ממתיחה של אתר ההשתלה. לבסוף, עקבו אחר העכברים המשתולים כדי לזהות סימנים קליניים ודרגו את הדחייה של השתלי העור. בניסוי זה, עכברי C 57 BL six קיבלו השתלות של allografts מסוג IABM 12 והשתלות של IAB sin grafts.לאחר הסרת התחבושות, השתל הראה סימנים של ריפוי פצע ללא סגירה של אזור המגע בעכברי C 57 BL six. שבוע עד שבועיים לאחר מכן, דלקת המתווכת על ידי תאי T חיוביים ל-CD four הובילה להופעת אזורים נמקראים בתוך השתל. דחייה של השתלי ה-I A BM 12 allografts נצפתה בעכברי C 57 BL six בתוך 13 ימים מההשתלה.בעוד שהשתלי הסינ-גראפט (syn grafts) התקבלו במשך עד 100 ימים, דחייה של עור זנב עם אי-התאמה ב-MHC Class two תלויה בנוכחותם של תאי T אלוגנאיים חיוביים ל-CD four. לדוגמה, עכברים עם חסר בתאי T (CD three E knockout) ועכברים עם חסר בתאי T ו-B (RAG two knockout) מראים ריפוי פצעים מלא ומקבלים השתלי BM 12 למשך עד 100 ימים.קבלה של עור זנב עם אי-התאמה של IABM 12 מאפשרת את חקר תאי T חיוביים ל-CD4 אלוגנאיים ותפקודי האפקטור שלהם במודל עכבר ללא פתולוגיות מחלה חמורות. היתרון של מודל השתלת עור הזנב הזה הוא שניתן לבצע בקלות ניתוח תפקודי של תאי T חיוביים ל-CD4 באמצעות העברה אדופטיבית של תאי T חיוביים ל-CD4 ספציפיים לאנטיגן. בניסוי מייצג זה, העברה של 2×10⁴ תאי A BM טרנסגניים ספציפיים לאנטיגן הספיקה כדי להשרות דחייה של גרפטים של IABM 12 בעכברי rag2 knockout בתוך 13 ימים. נצפה כי תאי A BM המבטאים את שרשרת TCR מסוג V alpha 2 V beta 8 שגשגו באופן נרחב, כפי שנמדד בבדיקת דילול EFL 670, והפיקו IFN Gamma לאחר גירוי באמצעות PMA. לסיכום.נתונים אלו מדגימים כי רק מספר קטן של תאי T אלוגנאיים חיוביים ל-CD4 נדרשים כדי לדחות השתלות עור של A BM 12, מה שהופך דגם זה לאידיאלי עבור ניתוח של תאי T אלוגנאיים בהיעדר פתולוגיה חמורה. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן ביצוע השתלת עור בזנב וניטור מוצלח של דחיית השתל.

transplantation-tail-skin-to-study-allogeneic-cd4-t-cell-responses

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

השתלה אלוגנאית העור הוא מודל סטנדרטי לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. זה וידאו המאמר מספק הדרכה ויזואלית של כל צעד מעורב בביצוע BALB/c--&gt; השתלת C57BL / 6 העור.

השתלת עור Murine

השתלת מח עצם Murine היא טכניקה בשימוש נרחב ללמוד מנגנונים אימונולוגיים המסדירים את מחלת שתל נגד מארח בבני אדם. היכולת לעקוב אחר דפוסי סחר בתא...

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

סרטון זה מדגים את השראת מחלת השתל נגד המאכסן של המעי, GvHD, בעכבר מושתל המוקרן באופן קטלני באמצעות תאי גזע המטופויטיים אלוגניים ולימפוציטים מסוג T אלוריאקטיביים מעוררי GvHD. פרוטוקול זה מסייע לבסס מודל GvHD חמור במעי כדי להבין את מנגנון המחלה ולפתח אפשרויות טיפוליות חדשניות.

השראת מחלת השתל לעומת המאכסן במודלים של עכברים באמצעות השתלת מח עצם אלוגנית והשתלת תאים טחול

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשראת דלקת במעי הגס בעכברים על ידי העברה מאמצת של תאי Tגבוהים CD4+CD45RB סינגניים לנמענים חסרי תאי T ו-B. מאפיינים קליניים והיסטופתולוגיים מחקים מחלות מעי דלקתיות אנושיות. שיטה זו מאפשרת לחקור את התחלת דלקת המעי הגס והתקדמות המחלה.

אינדוקציה של Murine דלקת מעיים על ידי העברת המאמצת של מפעיל CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; גבוה</sup&gt; תאי T לעכברי immunodeficient

מודל הרומן הזה להשתלה הגפיים האחוריות orthotopic בתוך העכבר, החלת טכניקה השרוול הלא תפר עבור השקה סופר-כלי הדם, מספק כלי רב עוצמה עבור מחקר אימונולוגי מכניסטית in vivo הקשורים אלוגרפט מרוכבים vascularized (VCA).

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

המנגנונים ששולטים תנועתיות ביניים של תאי T מסוג CD4 מפעיל באתרים של דלקת הם יחסית לא ידועים. אנו מציגים גישה לא פולשנית לדמיין ולטפל בתאים במבחנה -primed CD4 T בדרמיס האוזן הדלקתית, המאפשר חקר את ההתנהגות הדינמית של תאים אלה באתרו.

הדמית תא CD4 T גירת ביניים בדרמיס המוסת

כתב יד זה מספק תיאור של המתודולוגיה המשמשת להקמת מודלים של עכברי התמרה-השתלה. ניתן תיאור מפורט של טעויות טכניות שיש להימנע מהן בעת ביצוע השתלות מח עצם. יש להשיג הבנה ברורה של החשיבות של טיטר ויראלי גבוה, טרנספקציה/התמרה והקרנה.

התמר-השתלה במודל עכבר של מחלה מיילופרוליפרטיבית

השתלת עור בעובי מלאת Murine היא מודל ומבוסס ללמוד דחייה בסביבת alloimmune. כאן, אנו מספקים הדרכה של כל שלב המעורב בביצוע BALB / ג - השתלת עור&gt; C57BL / 6 בעובי מלא.

השתלת עור בעובי מלא Murine

מתואר כאן היא שיטה לייצור ציטוקינים אקסוגניים בעכברים xenograft (PDX) נגזר החולה באמצעות הזרקה intraperitoneal שבועי של צינוקין transduced transromal שורה התא. שיטה זו מרחיבה את התועלת של PDX ומספקת את האפשרות עבור משלוח ציטוקינים אקסוגני חולף או מתמשכת במספר רב של מודלים PDX.

ביטוי של ציטוקינים אקסוגניים ב- Xenografts שמקורם בחולה באמצעות הזרקה באמצעות קו תאים סטרומל ציטוקינים

כאן אנו מציגים פרוטוקול השתלת גידול לאפיון לימפוציטים חודרים לגידולים שמקורם בגידול ובפריפריה במודל גידול בעכבר. מעקב ספציפי אחר זרם תאי מערכת החיסון שמקורם במקבל עם ציטומטריה של זרימה חושף את הדינמיקה של השינויים הפנוטיפיים והתפקודיים של תאים אלה במהלך תגובות חיסוניות אנטי-סרטניות.

השתלת גידול להערכת הדינמיקה של תאי T המסתננים לגידולים CD8+ בעכברים

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה וזעיר פולשנית להשתלה והדמיה של תאי NIT-1 בעכברים סוכרתיים שאינם שמנים (NOD) - עכברים משולבים בעלי כשל חיסוני חמור המאותגרים בטחול מטוהר מעכברי NOD סוכרתיים ספונטניים.

ניטור ביולומינסנטי של הישרדות השתל במודל העברה מאומץ של סוכרת אוטואימונית בעכברים

חקור השתלת עור זנב בעכברים ללימוד דחיית תאי T מסוג CD4 ומנגנוני סבילות. שיטה זו מאפשרת מעקב יעיל בתגובות החיסון האלוגניות ללא הקרבת בעלי החיים.

השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא Allogeneic T מסוג CD4 בעכברים

גלה סרטונים נוספים