מבחני חוש הריח למודלי עכבר של ניווניות מחלות

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעריך את תפקוד הריח בעכברים. זה מושג על ידי הכנסת העכברים תחילה להגבלת מזון או דיור פרטני. השלב השני הוא הכנת גירוי הריח, הקמת חדר הבדיקות והרגלת העכברים לאזור הבדיקה כדי שניתן יהיה לבצע את הבדיקות.

לאחר מכן, ערכו את הליכי הבדיקה על העכברים ונתחו את הנתונים שהוקלטו בסרטון. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בבדיקות אלה כדי למדוד את יכולות הריח במודלים גנטיים של עכברים של מחלות ניווניות ובמחקרי תרופות קליניים לבדיקת טיפולים פוטנציאליים. למרות שליקויי ריח מתועדים היטב במחלות ניווניות, חוש הריח אינו נמדד באופן שגרתי במודלים רבים של מחלות.

לכן, המטרה שלנו היא להרכיב סוללת בדיקות למדידת היבטים מרובים של חוש הריח והעכברים שניתן ליישם בקלות בניסוי. בדיקות אלו יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח הקשורות לקשר בין מחלות ניווניות, פתולוגיה וחוש הריח, כמו גם לסייע בזיהוי הפוטנציאל הטיפולי של תרכובות חדשות. כדי להתחיל בהליך זה, תן לעכבר כדור אחד עד שניים לשימוש במהלך הבדיקה מדי יום.

לאחר מכן לפחות יומיים לפני הבדיקה, רשום את משקל העכבר ולאחר מכן מזון מוגבל ל-90% ממשקל גופו בכל ימי הבדיקה. הרגיל את העכבר במשך שעה אחת לפני הבדיקה על ידי הצבת הכלוב הביתי בחדר הבדיקה עם מכסה עליון של מסנן בלבד. במהלך המגורים יש למלא כלוב נקי במצעים נקיים לגובה של שלושה סנטימטרים ולוודא שהמצעים מפוזרים באופן שווה בכל הכלוב.

קברו כדור דגנים ממותק אחד 0.5 סנטימטרים מתחת למצעים בכלוב הבדיקה כך שהוא לא נראה לעין. לאחר מכן, העבירו את העכבר מהכלוב הביתי שלו לכלוב הבדיקה והניחו מכסה עליון של פילטר על הכלוב. התחל לספור לאחור חמש דקות עם טיימר.

עצור את הטיימר כאשר העכבר חושף את הגלולה ומתחיל לאכול אותה. אם העכבר לא מוצא את הגלולה תוך חמש דקות, סיים את הניסיון ורשום ציון של 300 שניות עבור אותו עכבר. העבר את הגלולה לחלק העליון של המצעים כדי לאפשר לעכבר לאכול אותה.

לאחר המשפט, החזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו. כעת רוקנו את המצעים מכלוב הבדיקה ונקו את הכלוב בתמיסת ניקוי. חזור על ההליך עבור כל עכבר והחלף כפפות לפני ואחרי כל עכבר.

לאחר מכן תנו לעכבר מספיק מזון כדי לשמור על 90% ממשקל הגוף. בצע את הבדיקה ביום השני עד החמישי באותו אופן כמו ביום הבדיקה הראשון, אך קבור את הגלולה במקום אחר בכלוב עבור כל ניסוי בבדיקה. ביום השישי, במקום לשאת את הכדור מתחת למצעים, הניחו אותו על גבי המצעים.

רשום את הזמן שבו העכבר מצא ומתחיל לאכול את הכדור בשלב זה. הנח חמישה בלוקים המסומנים A עד E בכלוב הבית הנקי של העכבר למשך 24 שעות. למחרת ושעה לפני הבדיקה, הוציאו את בקבוק המים ואת פח ההאכלה והעבירו את כל חמשת הבלוקים מהכלוב יחד עם חופן מצעים לשקית ניילון עם הכיתוב המזהה של בעל החיים.

לאחר מכן הרגילו את בעל החיים בכלוב הביתי שלו ללא פח ההזנה של בקבוק המים, וחסימות למשך שעה אחת לפני הבדיקה. כעת, סדרו את כל כלובי העכברים על שולחן עם לפחות 10 סנטימטרים בין הכלובים. לאחר מכן סמן את הכרטיס עם פרטי הניסוי החשובים וצלם את התווית בווידאו למשך שתיים-שלוש שניות.

הסר בלוקים A עד D משקית הניילון עם הזיהוי של העכבר, והנח אותם באמצע הכלוב כך שהם נראים בבירור במצלמת הווידאו. וודאו שיש כסנטימטר אחד של רווח בין הבלוקים. כעת הנח את החלק העליון של המסנן בחזרה על הכלוב.

הפעל את הטיימר וקלטת הווידאו למשך 30 שניות. לאחר 30 שניות, הפסק את ההקלטה. הסר את הקוביות מהכלוב והנח אותן מחוץ לכלוב בין הניסיונות.

החלף כפפות ולאחר מכן עבור לעכבר הבא. בצע זאת בסך הכל שישה ניסיונות עבור כל עכבר, וודא שיש מרווח בין ניסויים של כחמש דקות. בניסיון השביעי, הסר את בלוק D מהכלוב שלו והוסף בלוק E מהכלוב של עכבר אחר.

כך שאם העכבר נחשף לבלוק A, B ו-C מהכלוב הביתי שלו ובלוק E מהכלוב של עכבר אחר בספר המעבדה שאליו נחשף כל עכבר בבלוק E והמיקום החלופי של בלוק E.In כלוב של כל עכבר, קלט וידאו למשך 30 שניות. לאחר שבעת הניסויים, החזירו את החיה למד נקי חדש עם חבריה המקוריים לכלוב. נקו את הבלוקים ששימשו בבדיקה עם חומר ניקוי עדין ומים והניחו להם להתייבש באוויר לשימוש בבדיקות מאוחרות יותר, בצע את בדיקת ההתרגלות באופן דומה לבדיקת החסימה.

אבל במקום להשתמש בלוקים שיש להם ריח של עכבר, השתמשו במחסניות טישו המחזיקות כותנה בניחוח של זוגות תמציות שונות. לאחר מכן הרגיל את העכבר בחדר הבדיקה. הכן את מחסניות הרקמות הריחניות בחדר נפרד.

מניחים צמר גפן קטן במחסנית נקייה ואז מוסיפים חמישה מיקרוליטר תמצית לכותנה. הצמד את החלק העליון של המחסנית מעל הכותנה והניח בקופסה או שקית ייעודית עם תווית עם ניחוח זה. החלף כפפות בין טיפול בריחות.

לאחר מכן בצע את הנהלים בבדיקת הבלוק באמצעות סנט אחד, מחסנית רקמות בששת הניסויים הראשונים והסנט השני מחסנית טישו בניסוי השביעי. איור זה מראה את ההשהיה למציאת הגלולה בסוג הבר ואת שני עכברי הנוקאאוט A TP 13 A במבחן הגלולה הקבורה. איור זה מראה את הזמן לרחרח את בלוק הבלוק החדש E במבחן החסימה בין הסוג הפראי לשני עכברי נוקאאוט של ATP 13 A.

וזה בינתיים לרחרח מחסנית מוסכמת בעכברים מסוג פרא לאורך שישה ניסיונות והכנסת מחסנית עם הריח החדש בניסוי 7 במבחן ההתרגלות. בעת ביצוע סוללת בדיקות זו, חשוב לזכור לנקוט בכל האמצעים כדי להפחית את כל רמזי הריח החיצוניים. החליפו תמיד את הכפפות בתדירות גבוהה ככל האפשר, והימנעו מללבוש בושם או קולון.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להעריך את תפקוד הריח ומודלים עכבריים של מחלות ניווניות באמצעות סוללת בדיקות פשוטות זו.