Name: מבחני חוש הריח למודלי עכבר של ניווניות מחלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: למדו להעריך תפקוד חוש הריח בעכברים באמצעות מבחני פליטה קבורה ומבחני התרגלות. שיטות אלו מאפשרות לחוקרים לבחון מודלים גנטיים של מחלות ניווניות ולהעריך תרופות פוטנציאליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרוטוקול זה עוקב אחר כל ההנחיות והתקנות לטיפול ושימוש בבעלי חיים שנקבעו על ידי IACUC באוניברסיטת סינסינטי. עבודה זו ממומנת על ידי NIH/NINDS NS07722 ומרכז משפחת גרדנר למחלת פרקינסון והפרעות תנועה.

כל הצעדים של פרוטוקול מעקב הטיפול בבעלי החיים ולהשתמש בהנחיות והתקנות שנקבעו על ידי IACUC של אוניברסיטת סינסינטי. .1 שיקולים כלליים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במידת האפשר, לבדוק עכברים במהלך השלב הפעיל שלהם במחזור הכהה. בדרך כלל, לבצע בדיקה תחת אור נמוך ושעה לפחות 1 למחזור הכהה. עם זאת, אם בדיקה במחזור הכהה היא לא ריאלי, לבצע את כל שלוש הבדיקות במהלך מחזור האור. זכור כי מרחרחים פעמים עלול לגרום לירידה כאשר עכברים שנבדקו במהלך מחזור השינה שלהם. הערה: בעוד שניתן לבצע הבדיקות במהלך מחזור שנת העכברים עשויים להראות פחות עניין בגלולה נקברה, בלוקים, או מחסנית ריחנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להקטין את ההשפעה של רמזי חוש הריח בחוץ, ללבוש זוג בסיס של כפפות בכל העת לאורך כל בדיקה ולאחר מכן למקם זוג נקי של כפפות על זוג הבסיס לכל עכבר וכל ניסוי. ככלל, במקרה של ספק, לשים על סט נקי של כפפות. האם קופסא של כפפות לקרואily זמין כיוון שהם יהיו שונה בתדירות גבוהה. הערה: אנו משתמשים בכפפות ניטריל לכל הטיפול בבעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חומרי ניקוי בדיקה וכלובים בין נושאים עם חומר חיטוי / עיקור הסוכן הוא גם צעד חשוב בסוללה זו של בדיקות על מנת לצמצם את הפוטנציאל להפצת מחלה, כמו גם להסיר את רמזי חוש הריח לא רצויים. </li></ol> מבחן גלולה קבור .2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפחות יומיים לפני הבדיקה, להקליט את המשקל של כל עכבר ולאחר מכן מזון להגביל 90% ממשקל גוף. לפני הבדיקה ובמהלך הגבלת מזון, לתת לכל עכבר 1-2 חתיכות של כדורים לשימוש במהלך הבדיקה (למשל, פיסת דגנים ממותקים). לא לדלג על השלב הזה, כי עכברי neophobic עם אוכל ולא יכולים לחפש את הכדור במהלך הבדיקה אם הם לא אכלו את כדורים בעבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכל ימי המבחן, להרגיל עכברים עבור שעה 1 לפני בדיקה על ידי הצבת את הכלוב שלהם בחדר הבדיקות עם לא בקבוק מים או מזין בב. ביתם בכלוב בבית שלהם רק עם מכסה העליון של מסנן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך התרגלות, למלא כלוב עכבר נקי ~ 3 סנטימטר גבוה עם מצעים נקיים ביצוע מסוימים המצעים מופץ באופן שווה לאורך כל הכלוב. להגדיר טיימר למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות שעה 1 של התרגלות, לקבור 1 גלולה דגני 0.5 סנטימטר ממותק מתחת למצעים, כך שהוא אינו נראה לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את עכבר המבחן מהכלוב בבית שלה, למקם אותו במרכז כלוב המבחן, למקם את המכסה העליון של מסנן בכלוב ולהתחיל את הטיימר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעצור את שעון העצר כאשר העכבר חושף את גלולה ומתחיל לאכול אותו. שים לב לזמן לחשוף את גלולה נקברה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם העכבר אינו מוצא את גלולה תוך 5 דקות, בסופו של המשפט ולציין ציון של 300 שניות לעכבר ש. הזז את הכדור לחלק העליון של המיטה ולכן יש עכבר גישה אליו, ולאפשר לעכבר לאכול את הכדור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות המשפט, להחזיר את העכבר לכלוב בבית שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוקן את המצעים מכלוב המבחן ולנקות את גגיל עם תמיסת ניקוי חדר בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על השלבים 2.4-2.9 לכל עכבר, ולשנות את הכפפות לפני ואחרי כל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי כל העכברים נבדקו, לתת להם מספיק מזון כדי לשמור אותם ב90% במשקל גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תבצע את הבדיקות בימים 2-5 באותה צורה כמו היום מבחן 1 עם חריג אחד; לקבור את הכדור במקום אחר בכלוב לכל ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הבדיקה 6, לבצע את הניסוי גלולה משטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניסוי גלולה המשטח, לפי אותו הנוהל ליום מבחן 1 אבל במקום לקבור את הכדור מתחת למקום זה במצעים על גבי המצעים. רשום את הזמן לעכבר כדי למצוא ולהתחיל לאכול את הכדור. </li></ol> מבחן בלוק 3 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנפרד לשכן עכברים בכלובים נקיים ומניח 5 בלוקים בכלוב (שכותרתו AE), שינוי כפפות לפני הקמת כל כלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את שעה מבחן 24 מאוחר יותר. הזז עכברי מבחן לאזור הבדיקה, להסיר את סל בקבוק מים ומזין, ולמקם את אלl 5 בלוקים מהכלוב יחד עם קומץ של מצעים לתוך שקית פלסטיק שכותרתו עם זיהוי של בעל החיים. מניחים את שקית הפלסטיק האטום על גבי הכלוב בביתו של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרגיל את החיות בכלוב בבית שלהם בלי בקבוק המים, בן מזין, ובלוקים עבור שעה 1 לפני הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות כפפות בין כל כלוב, כך שהריחות אינם מוחלפים בין בעלי חיים / בלוקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשורה כלובי העכבר לצד זה על שולחן עם לפחות 10 סנטימטר בין כל כלוב. מקם מצלמת וידאו, כך שהחלק הקדמי של הכלוב (לא בצד של הכלוב הארוך) הוא בתצוגה ברורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כיוונת את הטיימר ל30 שניות ותווית כרטיס עם הפרטים החשובים הניסוי (תאריך, מזהה עכבר, משפט, וכו &#39;). קלטת וידאו את התווית של 2-3 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר בלוקים לספירה משקית הניילון עם זיהוי של העכבר ושלמקם אותם באמצע הכלוב, כך שהם נראים בבירור במצלמת הווידאו. ודא שיש ~ 1 סנטימטר oחלל f בין כל אחד מהגושים. הנח את החלק העליון של המסנן חזרה על הכלוב. התחל את הטיימר וקלטת וידאו ל30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 30 שניות, לעצור את ההקלטה ולהסיר בלוקים מהכלוב ומניח בחזרה לשקית הניילון אותם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות כפפות ולאחר מכן לעבור לעכבר הבא, חוזר על אותו התהליך המשמש לניסוי הראשון. לעשות את זה עבור הסכום כולל של 6 ניסויים עבור כל עכבר כדי לוודא שיש מרווח בין משפט של ~ 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על המשפט ה -7, לפי אותו הנוהל לניסויים 1-6 למעט במקום הצבת הבלוק D מכלוב משלו של העכבר להוסיף E בלוק מהכלוב של עכבר אחר כך העכבר חשוף ללוקים, B, C ומשלה כלוב שלו בבית וE בלוק מהכלוב של עכבר אחר. שים לב בספר המעבדה הבלוק שE כל עכבר חשוף ולחלופי שבי E בלוק ממוקמת בכלוב של כל עכבר (למשל, ABCE או AEBC). קח E בלוק מעכבר מאותו המין, אך לא מcagemate מקורי. ויdeotape ל30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות 7 הניסויים, לחזור בעלי חיים לכלוב נקי חדש עם cagemates המקורי שלהם. בלוקים נקיים המשמשים במבחן עם חומר ניקוי עדין ומים ולאפשר לאוויר יבש לשימוש בבדיקות מאוחרות יותר. </li></ol> .4 הרגלה / Dishabituation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את בדיקת ההתרגלות / dishabituation באופן דומה למבחן הבלוק אך במקום להשתמש בלוקים שיש לי הריח של עכבר, להשתמש במחסניות רקמה מחזיקות כותנה בניחוח זוגות שונים של תמציות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הפעולות 3.1-3.4 שימוש במחסנית אחת, ללא בישום רקמה במקום בלוקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרגיל עכברים בחדר הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מחסניות רקמה ריחנית בחדר נפרד. מניחים כדור צמר גפן קטן לתוך מחסנית נקייה ולאחר מכן להוסיף 5 μl של תמצית (למשל, תמצית שקדים) לכותנה. הצמד עליון מחסנית על הכותנה והמקום בתיבה ייעודית או בתיק שכותרתו עם ריח ש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות את אותו הדבר ו ההליךאו ריח שני (למשל, תמצית אניס). לשנות כפפות בין טיפול בריחות שונים. ודא כדור צמר גפן הוא עטוף לגמרי במחסנית הרקמה. הערה: חשוף סיבים מכדור צמר גפן עלולים לגרום לבעלי החיים יש עניין בכדור צמר גפן למטרות קינון ולא הריח עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, בצע את הפעולות 3.6-3.10 באמצעות מחסנית אחת ריחנית רקמה בששת הניסויים הראשונים, ואת מחסנית הרקמה הריחנית השנייה לניסוי השביעי. </li></ol> .5 ניתוח של סרטוני וידאו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבלוק ובדיקות ההתרגלות / dishabituation, יש לי עיוור מדרג לתנאי ניסוי למדוד את המשך הזמן מרחרח כל בלוק, עם מרחרח מוגדר כמגע האף עם בלוק ש. אם תרצה, למדוד התנהגויות אחרות כגון זמן להתקרב לבלוק הרומן (E) במהלך ניסיון 7 ופעילות כוללת (מספר התנועות שנעשו לאורכה ורוחבה של כלוב בבית) במהלך כל ניסוי. ציון המשך הזמן מרחרחזמן ד להתקרב מקלטת הווידאו באמצעות שעון עצר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדומה לכך, לבדיקת ההתרגלות / dishabituation, יש לי עיוור מדרג לתנאי ניסוי למדוד את המשך הזמן מרחרח את המחסנית, הזמן להתקרב למחסנית, והפעילות של תנועה. </li></ol> .6 סטטיסטיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את הבדיקה גלולה נקברה באמצעות סטטיסטיקה פרמטרית כי חביון למצוא גלולה ציונים נוטים להראות ההטרוגניות של שונות. ממוצע חביון לאתר את הכדור על פני ימים 3-5 ולאחר מכן להשוות בין קבוצות של עכברים באמצעות Mann-Whitney U-מבחן. באופן דומה, לחלק גלולה פני השטח של המבחן, לנתח חביון למצוא גלולה באמצעות Mann-Whitney U-מבחן כדי להשוות גנוטיפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדיקת הבלוק, לנתח את הנתונים מ7 משפט (הקדמה של הבלוק בניחוח הרומן). בדרך כלל, מעסיק ניתוחים פרמטרית לדין וחשבון על ההטרוגניות של שונות. על מנת לנתח את ההבדלים בזמן בילה מרחרח הבלוק רומן דואר כמו גם זמן לפנות ללוקים לקבוצות ניסוי שונים, להשתמש בMann-Whitney U-המבחן. השתמש בבדיקת דרגה חתומה Wilcoxon כדי להשוות את משך זמן מרחרח את בלוק הרומן לעת בילה מרחרח את הלוקים המוכרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למבחן ההתרגלות / dishabituation, פרמטרי התנהלות מנתח בניסויים 1, 6 ו -7, בדומה למחקרים קודמים 20. אם עכברים להפגין לא מעט על מנת מרחרח, להשתמש ניתוחים פרמטרית. </li></ol>

<ol><li>Hawkes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+neurodegenerative+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Otorhinolaryngol%22%5BJournal%5D)">Olfaction in neurodegenerative disorder.</a> Adv. Otorhinolaryngol. 63, 133-151 (2006).</li>
<li>Ward, C., Hess, W., Calne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+impairment+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Olfactory impairment in Parkinson's disease.</a> Neurology. 33, 943-946 (1983).</li>
<li>Doty, R., Stern, M., Pfeiffer, C., Gollomp, S., Hurtig, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+olfactory+dysfunction+in+early+stage+treated+and+untreated+idiopathic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurol.+Neurosurg.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Bilateral olfactory dysfunction in early stage treated and untreated idiopathic Parkinson's disease.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 55, 138-142 (1992).</li>
<li>Doty, R., Deems, D., Stellar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+dysfunction+in+parkinsonism%3A+a+general+deficit+unrelated+to+neurologic+signs%2C+disease+stage%2C+or+disease+duration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Olfactory dysfunction in parkinsonism: a general deficit unrelated to neurologic signs, disease stage, or disease duration.</a> Neurology. 38, 1237-1244 (1988).</li>
<li>Tissingh, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+olfaction+in+de+novo+and+treated+Parkinson%27s+disease%3A+possible+implications+for+early+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Movement+Disorders%22%5BJournal%5D)">Loss of olfaction in de novo and treated Parkinson's disease: possible implications for early diagnosis.</a> Movement Disorders. 16 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Montgomery, E., Baker, K., Lyons, K., Koller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+performance+on+the+PD+test+battery+by+asymptomatic+first-degree+relatives%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Abnormal performance on the PD test battery by asymptomatic first-degree relatives.</a> Neurology. 52, 757-762 (1999).</li>
<li>Berendse, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subclinical+dopaminergic+dysfunction+in+asymptomatic+Parkinson%27s+disease+patients%27+relatives+with+a+decreased+sense+of+smell%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Subclinical dopaminergic dysfunction in asymptomatic Parkinson's disease patients' relatives with a decreased sense of smell.</a> Ann. Neurol. 50 (1), 34-41 (2001).</li>
<li>Ponsen, M., Stoffers, D., Booij, J., van Eck-Smit, B., Wolters, E., Berendse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+hyposmia+as+a+preclinical+sign+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Idiopathic hyposmia as a preclinical sign of Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 56, 173-181 (2004).</li>
<li>Langston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Parkinson%27s+complex%3A+parkinsonism+is+just+the+tip+of+the+iceberg%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">The Parkinson's complex: parkinsonism is just the tip of the iceberg.</a> Ann. Neurol. 59 (4), 591-596 (2006).</li>
<li>Ross, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+olfactory+dysfunction+with+risk+for+future+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Association of olfactory dysfunction with risk for future Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 63, 167-173 (2008).</li>
<li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+progressive+sensorimotor+anomalies+in+mice+overexpressing+wild-type+human+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human alpha-synuclein.</a> J. Neurosci. 24, 9434-9440 (2004).</li>
<li>Fleming, S., Ekhator, O., Ghisays, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+sensorimotor+function+in+mouse+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessment of sensorimotor function in mouse models of Parkinson's disease.</a> J. Vis. Exp. , e50303(2013).</li>
<li>Schallert, T., Tillerson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intervention+strategies+for+degeneration+of+DA+neurons+in+parkinsonism%3A+Optimizing+behavioral+assessment+of+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Central+Nervous+System+Diseases%22%5BJournal%5D)">Intervention strategies for degeneration of DA neurons in parkinsonism: Optimizing behavioral assessment of outcome.</a> Central Nervous System Diseases. , 131-151 (2000).</li>
<li>Whishaw, I., O'Connor, W., Dunnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contributions+of+motor+cortex%2C+nigrostriatal+dopamine+and+caudate-putamen+to+skilled+forelimb+use+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">The contributions of motor cortex, nigrostriatal dopamine and caudate-putamen to skilled forelimb use in the rat.</a> Brain. 109 (5), 805-843 (1986).</li>
<li>Schwarting, R., Huston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unilateral+6-hydroxydopamine+lesion+model+in+behavioral+brain+research.+Analysis+of+functional+deficits%2C+recovery+and+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The unilateral 6-hydroxydopamine lesion model in behavioral brain research. Analysis of functional deficits, recovery and treatments.</a> Prog Neurobiol. 49 (3), 215-266 (1996).</li>
<li>Glasl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pink1-deficiency+in+mice+impairs+gait%2C+olfaction+and+serotonergic+innervation+of+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Pink1-deficiency in mice impairs gait, olfaction and serotonergic innervation of the olfactory bulb.</a> Experimental Neurology. 235, 214-227 (2012).</li>
<li>Kim, Y., Lussier, S., Rane, A., Choi, S., Andersen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+dopaminergic+glutathione+depletion+in+an+%CE%B1-synuclein+transgenic+mouse+model+results+in+age-related+olfactory+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Inducible dopaminergic glutathione depletion in an α-synuclein transgenic mouse model results in age-related olfactory dysfunction.</a> Neuroscience. 172, 379-386 (2011).</li>
<li>Fleming, S., Tetreault, N., Mulligan, C., Huston, C., Masliah, E., Chesselet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+deficits+in+mice+overexpressing+human+wildtype+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory deficits in mice overexpressing human wildtype alpha-synuclein.</a> The European Journal of Neuroscience. 28 (2), 247-256 (2008).</li>
<li>Nuber, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+progressive+dopaminergic+phenotype+associated+with+neurotoxic+conversion+of+%CE%B1-synuclein+in+BAC-transgenic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">A progressive dopaminergic phenotype associated with neurotoxic conversion of α-synuclein in BAC-transgenic rats.</a> Brain. 136 (2), 412-432 (2013).</li>
<li>Macknin, J., Higuchi, M., Lee, V., Trojanowski, J., Doty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+dysfunction+occurs+in+transgenic+mice+overexpressing+human+tau+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Olfactory dysfunction occurs in transgenic mice overexpressing human tau protein.</a> Brain Res. 1000, 174-178 (2004).</li>
<li>Lazic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+abnormalities+in+Huntington%27s+disease%3A+decreased+plasticity+in+the+primary+olfactory+cortex+of+R6%2F1+transgenic+mice+and+reduced+olfactory+discrimination+in+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Olfactory abnormalities in Huntington's disease: decreased plasticity in the primary olfactory cortex of R6/1 transgenic mice and reduced olfactory discrimination in patients.</a> Brain Res. 1151, 219-226 (2007).</li>
<li>Wesson, D., Wilson, D., Nixon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+olfactory+dysfunction+be+used+as+a+biomarker+of+Alzheimer%27s+disease%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Should olfactory dysfunction be used as a biomarker of Alzheimer's disease?</a> Expert Review of Neurotherapeutics. 10 (5), 633-635 (2010).</li>
<li>Taylor, T., Caudle, W., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VMAT2-deficient+mice+display+nigral+and+extranigral+pathology+and+motor+and+nonmotor+symptoms+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">VMAT2-deficient mice display nigral and extranigral pathology and motor and nonmotor symptoms of Parkinson's disease.</a> Parkinsons Dis. 2011, 124-165 (2011).</li>
<li>Tillerson, J., Caudle, W., Parent, J., Gong, C., Schallert, T., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+discrimination+deficits+in+mice+lacking+the+dopamine+transporter+or+the+D2+dopamine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Olfactory discrimination deficits in mice lacking the dopamine transporter or the D2 dopamine receptor.</a> Behav. Brain Res. 172, 97-105 (2006).</li>
<li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pilot+trial+of+the+microtubule-interacting+peptide+%28NAP%29+in+mice+overexpressing+alpha-synuclein+shows+improvement+in+motor+function+and+reduction+of+alpha-synuclein+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A pilot trial of the microtubule-interacting peptide (NAP) in mice overexpressing alpha-synuclein shows improvement in motor function and reduction of alpha-synuclein inclusions.</a> Mol. Cell. Neurosci. 4, 597-606 (2011).</li>
<li>Crawley, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawley%2C+J+%22What%27s+Wrong+with+My+Mouse%3F+Behavioral+Phenotyping+of+Transgenic+and+Knockout+Mice%22">What's Wrong with My Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice</a>. , Wiley-Liss. NY. (2000).</li>
<li>Nathan, B., Yost, J., Litherland, M., Struble, R., Switzer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+function+in+apoE+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Olfactory function in apoE knockout mice.</a> Behav. Brain Res. 150, 1-7 (2004).</li>
<li>Spinetta, M. A simple and sensitive odor recognition test for rats and mice detects retrograde amnesia caused by ethanol or other drugs that interfere with memory consolidation. Society for Neuroscience. , Washington, D.C. (2005).</li>
<li>Spinetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol-induced+retrograde+memory+impairment+in+rats%3A+prevention+by+caffeine%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Alcohol-induced retrograde memory impairment in rats: prevention by caffeine.</a> Psychopharmacology. 201 (3), 361-371 (2008).</li>
<li>Bielsky, I., Hu, S., Szegda, K., Westphal, H., Young, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+impairment+in+social+recognition+and+reduction+in+anxiety-like+behavior+in+vasopressin+V1a+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Profound impairment in social recognition and reduction in anxiety-like behavior in vasopressin V1a receptor knockout mice.</a> Neuropsychopharmacology. 29, 483-493 (2004).</li>
</ol>

אין לנו ניגודי אינטרסים.

כל אחת מהבדיקות שתוארו במחקר זה למדוד היבטים שונים של תפקוד חוש הריח בעכברים. המבחן גלולה נקבר מודד את היבט המוטיבציה מזון של olfaction, בודק את היכולת של רעב (מזון המוגבל, לא נשללו מזון) עכברים כדי לזהות פיסת הדגנים ממותקים נקברו תחת מצעים טעימה. מבחן הבלוק מודד יותר של ההיבט החברתי של פונקצית חוש הריח, בדיקת היכולת של עכברים להבחין בין הריח שלהם וזה של conspecific. מבחן ההתרגלות / dishabituation מעריך את היכולת של העכבר כדי להפלות בין ריחות בלתי מזיקים מוכרים ורומן,. שימוש בבדיקות מרובות היא חשובה בעת אפיון מודל חדש, כי חריגות במוטיבציה מזון או פחד יכולות לתרום להבדלים שנצפו בעכברים שעברו מוטציה בהשוואה לקבוצת ביקורת. לדוגמא, אם רק מבחן הבלוק מתבצע וירידה ברחרוח של הבלוק שהריח של עכבר אחר הוא ציין, לא ברור אם יש olfactגירעון אורים או תגובת פחד משופרת לconspecific שעשויה להוביל להימנעות מבלוק ש. כאשר בדיקות מרובות מבוצעות וגירעונות הם נצפו בכל הבדיקות, זה מאוד תומך פרשנות של ירידת ערך חוש הריח. עם זאת, אם הבדלים הם נצפו במבחן אחד בלבד, אך לא לאחרים אז ייתכן שיש ירידת ערך חוש הריח עדינה יותר אבל זה יהיה חיוני כדי לשלול הסברים אחרים (כלומר, פחד משופר או מוטיבציה מזון מופחתת). גורמים חשובים נוספים שכדאי לזכור כאשר בודקים עכברי פונקצית חוש הריח כוללים מתח הרקע ומין של העכברים. זני רקע גנטי שונים (כלומר, C57BL / 6, DBA, וכו &#39;) יכולים להיות השפעה עמוקה על התנהגות עכבר ולכן, מומלץ להתאים את כל פרוטוקול בעכברי wildtype מאותו הרקע לפני ביצוע הניסוי כולו. מומלץ גם שזכר ונקבות עכברים להיבדק בנפרד זה מזה בגלל מערכת חוש הריח הגברית היא גבוההly רגיש לנקבות בזיהוי ייחום וחוש הריח של נשים בייחום יכול להפריע לביצועים בכל שלושת המבחנים. כמה צעדים קריטיים למעקב כאשר בודקים olfaction בעכברים. חשוב להיות מודע לריחות הנסיין מציג לבעלי החיים. לבישת כפפות לנהלים משתנה חיוני ותכוף של כפפות בין בעלי החיים נדרש. זה תמיד טוב להתאמן לניסוי לא ללבוש בושם או בושם בימי בדיקות olfaction. בעוד חלקים מסוימים של ההליך הם בלתי גמישים, יש חלקים אחרים שיכול להיות שונה ומותאמים, מבלי להקטין את תוקפו או רגישות של הבדיקה. לדוגמא, מספר מחקרי התרגלות ניתן להגדיל או להקטין בהתאם לזן של עכברים שנבדק וכמה מהר הם להרגיל לגירויים. המגבלה העיקרית של הבדיקות הללו היא שהם כולם מונעים על ידי צורה כלשהי של מוטיבציה, יהיה זה מזון או חברתי, מה שהופך אתזה קשה לשלוט לחלוטין את חריגות במוטיבציה כהסבר כאשר תגובה שינו נצפתה. זה יכול להיות ממוזער על ידי ניתוח פרמטרים נוספים, כגון פעילות במהלך בדיקה והזמן להתקרב גירויים. ברגע שמשתלט עליו, הבדיקות יכולות לשמש בקלות בבדיקת הפנוטיפ של דגמי עכבר רומן של מחלה ניוונית של מערכת עצבים. בנוסף, הבדיקות שיש בכח הגבוה ביותר ניתן לכלול במחקרים פרה בדיקת תרופות פוטנציאליות (לדוגמא ראה נ&quot;צ. 25).

תפקוד לקוי של חוש הריח קשור למספר ההפרעות ניווניות כוללים מחלת פרקינסון (PD), מחלת אלצהיימר, ומחלת הנטינגטון 1. בפ&quot;ד, ליקויי חוש הריח כוללים גירעונות בזיהוי ריח, זיהוי, ואפליה ונמצאים בעד 70-95% מחולי 2-5. גירעונות אלה יכולים להקדים את הסימפטומים מוטורי קרדינל של PD בשיעור של עד 4 שנים, מצביעים על כך שתפקוד לקוי של חוש הריח עשוי לאותת המוקדמים של PD 6-10 השלבים. ההתרחשות המוקדמת של גירעונות חוש הריח בפ&quot;ד הובילה לעניין רב בתפקוד הלקוי של חוש הריח והמנגנונים הבסיסיים מעורבים ב. במחקרים פרה במכרסמים, בעיות בתפקוד חוש הריח יכול להיות מדד תוצאה רגיש לחזות את הפוטנציאל הטיפולי של אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. בדיקות רבות תוכננו ושימוש נרחב לאפיין ליקויים הסנסורית במודלים של מכרסמים של PD ולtest את הפוטנציאל הטיפולי של טיפולים חדשניים 11-15. למרות גירעונות חוש הריח מתועדים היטב בPD, פונקצית חוש הריח לא נמדדת באופן שגרתי בדגמים רבים. השקפה זו משתנה אם כי עם הגילוי של צורות גנטיות של מחלת הפרקינסון והרעיון מקובל יותר שפ&quot;ד הוא הפרעה מערכתית המשפיעה על יותר מאשר רק פונקציה הסנסורית. נכון לעכשיו, יש מספר רב של מחקרים בעכברי מודל גנטיים של מחלת הפרקינסון והפרעות ניווניות אחרות שכוללים כעת ניתוח של olfaction באפיון 16-24. לאור ההתעניינות הגובר של בעיות בתפקוד חוש הריח בהפרעות ניווניות, ביקשתי להרכיב סוללה של בדיקות חוש הריח, שניתן להשתמש כדי לאפיין מודלים רומן של ניוון מוחיים, כמו גם טיפולי שינוי מחלה פוטנציאל מבחן במחקרים פרה. הבדיקות שתוארו במחקר הנוכחי נעשו שימוש בשני אפיון ומחקרים פרה 18,25. בדיקות highlighted במחקר זה הוכח להיות רגיש באיתור בעיות בתפקוד חוש הריח במודל של עכברי overexpressing אלפא סינוקלאין לעתים קרובות מנוצל למחלת פרקינסון 18. הם כוללים את המבחן נקבר גלולה 26,27, גרסה מותאמת של מבחן הבלוק 23,24,28,29, ומבחן ההתרגלות / dishabituation 30. חשוב לציין כי יש מספר עיבודים של הבדיקות שתוארו במחקר זה, כי הם אמצעים רגישים של תפקוד חוש הריח בעכברים, אלה מודגשים במחקר זה הם בדיקות המעבדה שלנו יש הכי הרבה הניסיון עם ומשתמשת באופן שיגרתי.

<table><tbody><tr><td>Cap'n Crunch</td><td>שיבולת שועל קוואקר</td><td>30000065310</td><td></td></tr><tr><td>קוביות עץ</td><td>Lara's Crafts</td><td>10144</td><td></td></tr><tr><td>תמצית בטעם שקדים</td><td>תמצית טעם אניס</td><td>011110664716</td><td></td>קרוגר</tr> תמצית <tr><td>טעם</td><td></td> בננה <td>קרוגר</td> 011110615619 <td></td></tr> תמצית <tr><td>בטעם קוקוס</td><td>קרוגר</td><td>011110669919</td><td></td></tr> תמצית <tr><td>בטעם קוקוס</td> תמצית טעם לימון <td>Kroger</td><td>011110669889</td><td></td></tr><tr><td>תמצית בטעם תפוז</td><td></td> Kroger <td></td> 011110669957 מחסניות רקמות Kroger 0011110669964 <td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z672122-500EA</td><td>מיוצר על ידי Simport no: M490-2</td></tr><tr><td>כדורי כותנה</td><td>Kroger</td><td>11110793119</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> כלובי עכבר Ancare <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>19 x 29 x 12.7 ס"מ</td></tr><tr><td>מצלמת וידיאו</td><td>Sony</td><td>HDR-HC9</td><td></td></tr><tr><td>קלטות MiniDV</td><td>Sony DVC פרימיום</td><td>27242523432</td><td>הפעלה ארוכה של 60 דקות</td></tr></tbody></table>

מבחני חוש הריח למודלי עכבר של ניווניות מחלות

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

במחלות נוירודגנרטיביות רבות ובמיוחד במחלת פרקינסון, ליקויים בחוש הריח מדווחים כמתרחשים בשלב מוקדם בתהליך המחלה ועשויים להוות סמן התנהגותי שימושי לגילוי מוקדם. גילוי מוקדם יותר של מחלות נוירודגנרטיביות הוא מטרה מרכזית בתחום מכיוון שזה הזמן שבו לטיפולים נוירו-פרוטקטיביים יש את הפוטנציאל הטוב ביותר להיות יעילים. לכן, במחקרים פרה-קליניים הבודקים אסטרטגיות נוירו-פרוטקטיביות חדשות במודלים של מכרסמים של מחלות ניווניות, הערכת חוש הריח יכולה להיות שימושית מאוד בקביעת הפוטנציאל הטיפולי של תרכובות ותרגום למרפאה. במחקר הנוכחי אנו מתארים סוללה של מבחני ריח שימושיים במדידת תפקוד הריח בעכברים. המבחנים שהוצגו במחקר זה נבחרו מכיוון שהם מודדים יכולות ריח בעכברים הקשורים לריחות מזון, ריחות חברתיים וריחות לא חברתיים. בדיקות אלו הוכחו כשימושיות באפיון מודלים גנטיים חדשים של עכברים של מחלת פרקינסון כמו גם בבדיקת טיפולים פוטנציאליים לשינוי מחלה.

גלולה, בלוק, ובדיקות ההתרגלות / dishabituation נקברו כל הערכות יתרון מאוד של olfaction בעכברים. באמצעות בדיקות אלה, מצאנו שינויים משמעותיים בolfaction במודלים מרובים עכבר הגנטי של מחלת פרקינסון, כוללים overexpressing אלפא סינוקלאין (Thy1-aSyn) 18 ועכברים נוקאאוט Atp13a2. שני עכברי נוקאאוט Thy1-aSyn וAtp13a2 להימשך זמן רב יותר כדי למצוא את גלולה נקברה בהשוואה לביקורות 18. איורים 1-3 נתונים להראות שנאספו מעכברי wildtype ונוקאאוט Atp13a2. במבחן גלולה נקבר, עכברי נוקאאוט Atp13a2 להראות מוגברים חביון למצוא גלולה נקברה בהשוואה לעכברי wildtype שליטה (איור 1). בבדיקת בלוק שני wildtype והעכברים נוקאאוט Atp13a2 לרחרח בלוק הרומן מהכלוב של עכבר אחר בהשוואה לרחובות מהכלוב בבית שלהם (איור 2). בעכברי wildtype מבחן ההתרגלות / dishabituation להראות התרגלות לריח אחד ו לאחר מכן עלה מרחרחים כאשר ריח רומן הוא הציג (איור 3). <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig1highres.jpg" width="500"> איור 1 קבור גלולה מבחן. חביון למצוא גלולה בwildtype (n = 10) וAtp13a2 KO (n = 14) בשעה 20-27 מ 'של גיל. * P &lt;0.05, Mann-Whitney U. <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig2highres.jpg" width="500"> מבחן בלוק איור 2 זמן מרחרח את בלוק הרומן (E) במבחן הבלוק בwildtype (n = 10) וAtp13a2 KO (n = 12) נקבות עכברים ב20 -. 27m של גיל. ΔΔ מייצג p &lt;0.01 לעומת בלוקים, B, C ומאותו גנוטיפ. Mann-Whitney U. "Src =" / קבצים / ftp_upload / 51,804 / "width =" 51804fig3highres.jpg 500 "/&gt; איור מבחן .3 הרגלה / dishabituation. זמן ממוצע מרחרח מחסנית ריחנית בעכברי wildtype (גיל 9 מ ', n = 7) על פני 6 ניסויים וכניסתה של מחסנית עם ניחוח רומן לדין 7.

ליקוי בתפקוד הריח הוא מאפיין שכיח בהפרעות ניווניות רבות כולל מחלות פרקינסון, אלצהיימר והנטינגטון. במאמר הנוכחי אנו מתארים קבוצה של מבחנים להערכת הבחנה וזיהוי חוש הריח בעכברים שניתן להשתמש בהם כדי למדוד יכולות ריח במודלים של עכברים של מחלות ניווניות.

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעריך את תפקוד הריח בעכברים. זה מושג על ידי הכנסת העכברים תחילה להגבלת מזון או דיור פרטני. השלב השני הוא הכנת גירוי הריח, הקמת חדר הבדיקות והרגלת העכברים לאזור הבדיקה כדי שניתן יהיה לבצע את הבדיקות.לאחר מכן, ערכו את הליכי הבדיקה על העכברים ונתחו את הנתונים שהוקלטו בסרטון. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בבדיקות אלה כדי למדוד את יכולות הריח במודלים גנטיים של עכברים של מחלות ניווניות ובמחקרי תרופות קליניים לבדיקת טיפולים פוטנציאליים. למרות שליקויי ריח מתועדים היטב במחלות ניווניות, חוש הריח אינו נמדד באופן שגרתי במודלים רבים של מחלות.לכן, המטרה שלנו היא להרכיב סוללת בדיקות למדידת היבטים מרובים של חוש הריח והעכברים שניתן ליישם בקלות בניסוי. בדיקות אלו יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח הקשורות לקשר בין מחלות ניווניות, פתולוגיה וחוש הריח, כמו גם לסייע בזיהוי הפוטנציאל הטיפולי של תרכובות חדשות. כדי להתחיל בהליך זה, תן לעכבר כדור אחד עד שניים לשימוש במהלך הבדיקה מדי יום.לאחר מכן לפחות יומיים לפני הבדיקה, רשום את משקל העכבר ולאחר מכן מזון מוגבל ל-90% ממשקל גופו בכל ימי הבדיקה. הרגיל את העכבר במשך שעה אחת לפני הבדיקה על ידי הצבת הכלוב הביתי בחדר הבדיקה עם מכסה עליון של מסנן בלבד. במהלך המגורים יש למלא כלוב נקי במצעים נקיים לגובה של שלושה סנטימטרים ולוודא שהמצעים מפוזרים באופן שווה בכל הכלוב.קברו כדור דגנים ממותק אחד 0.5 סנטימטרים מתחת למצעים בכלוב הבדיקה כך שהוא לא נראה לעין. לאחר מכן, העבירו את העכבר מהכלוב הביתי שלו לכלוב הבדיקה והניחו מכסה עליון של פילטר על הכלוב. התחל לספור לאחור חמש דקות עם טיימר.עצור את הטיימר כאשר העכבר חושף את הגלולה ומתחיל לאכול אותה. אם העכבר לא מוצא את הגלולה תוך חמש דקות, סיים את הניסיון ורשום ציון של 300 שניות עבור אותו עכבר. העבר את הגלולה לחלק העליון של המצעים כדי לאפשר לעכבר לאכול אותה.לאחר המשפט, החזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו. כעת רוקנו את המצעים מכלוב הבדיקה ונקו את הכלוב בתמיסת ניקוי. חזור על ההליך עבור כל עכבר והחלף כפפות לפני ואחרי כל עכבר.לאחר מכן תנו לעכבר מספיק מזון כדי לשמור על 90% ממשקל הגוף. בצע את הבדיקה ביום השני עד החמישי באותו אופן כמו ביום הבדיקה הראשון, אך קבור את הגלולה במקום אחר בכלוב עבור כל ניסוי בבדיקה. ביום השישי, במקום לשאת את הכדור מתחת למצעים, הניחו אותו על גבי המצעים.רשום את הזמן שבו העכבר מצא ומתחיל לאכול את הכדור בשלב זה. הנח חמישה בלוקים המסומנים A עד E בכלוב הבית הנקי של העכבר למשך 24 שעות. למחרת ושעה לפני הבדיקה, הוציאו את בקבוק המים ואת פח ההאכלה והעבירו את כל חמשת הבלוקים מהכלוב יחד עם חופן מצעים לשקית ניילון עם הכיתוב המזהה של בעל החיים.לאחר מכן הרגילו את בעל החיים בכלוב הביתי שלו ללא פח ההזנה של בקבוק המים, וחסימות למשך שעה אחת לפני הבדיקה. כעת, סדרו את כל כלובי העכברים על שולחן עם לפחות 10 סנטימטרים בין הכלובים. לאחר מכן סמן את הכרטיס עם פרטי הניסוי החשובים וצלם את התווית בווידאו למשך שתיים-שלוש שניות.הסר בלוקים A עד D משקית הניילון עם הזיהוי של העכבר, והנח אותם באמצע הכלוב כך שהם נראים בבירור במצלמת הווידאו. וודאו שיש כסנטימטר אחד של רווח בין הבלוקים. כעת הנח את החלק העליון של המסנן בחזרה על הכלוב.הפעל את הטיימר וקלטת הווידאו למשך 30 שניות. לאחר 30 שניות, הפסק את ההקלטה. הסר את הקוביות מהכלוב והנח אותן מחוץ לכלוב בין הניסיונות.החלף כפפות ולאחר מכן עבור לעכבר הבא. בצע זאת בסך הכל שישה ניסיונות עבור כל עכבר, וודא שיש מרווח בין ניסויים של כחמש דקות. בניסיון השביעי, הסר את בלוק D מהכלוב שלו והוסף בלוק E מהכלוב של עכבר אחר.כך שאם העכבר נחשף לבלוק A, B ו-C מהכלוב הביתי שלו ובלוק E מהכלוב של עכבר אחר בספר המעבדה שאליו נחשף כל עכבר בבלוק E והמיקום החלופי של בלוק E.In כלוב של כל עכבר, קלט וידאו למשך 30 שניות. לאחר שבעת הניסויים, החזירו את החיה למד נקי חדש עם חבריה המקוריים לכלוב. נקו את הבלוקים ששימשו בבדיקה עם חומר ניקוי עדין ומים והניחו להם להתייבש באוויר לשימוש בבדיקות מאוחרות יותר, בצע את בדיקת ההתרגלות באופן דומה לבדיקת החסימה.אבל במקום להשתמש בלוקים שיש להם ריח של עכבר, השתמשו במחסניות טישו המחזיקות כותנה בניחוח של זוגות תמציות שונות. לאחר מכן הרגיל את העכבר בחדר הבדיקה. הכן את מחסניות הרקמות הריחניות בחדר נפרד.מניחים צמר גפן קטן במחסנית נקייה ואז מוסיפים חמישה מיקרוליטר תמצית לכותנה. הצמד את החלק העליון של המחסנית מעל הכותנה והניח בקופסה או שקית ייעודית עם תווית עם ניחוח זה. החלף כפפות בין טיפול בריחות.לאחר מכן בצע את הנהלים בבדיקת הבלוק באמצעות סנט אחד, מחסנית רקמות בששת הניסויים הראשונים והסנט השני מחסנית טישו בניסוי השביעי. איור זה מראה את ההשהיה למציאת הגלולה בסוג הבר ואת שני עכברי הנוקאאוט A TP 13 A במבחן הגלולה הקבורה. איור זה מראה את הזמן לרחרח את בלוק הבלוק החדש E במבחן החסימה בין הסוג הפראי לשני עכברי נוקאאוט של ATP 13 A.וזה בינתיים לרחרח מחסנית מוסכמת בעכברים מסוג פרא לאורך שישה ניסיונות והכנסת מחסנית עם הריח החדש בניסוי 7 במבחן ההתרגלות. בעת ביצוע סוללת בדיקות זו, חשוב לזכור לנקוט בכל האמצעים כדי להפחית את כל רמזי הריח החיצוניים. החליפו תמיד את הכפפות בתדירות גבוהה ככל האפשר, והימנעו מללבוש בושם או קולון.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להעריך את תפקוד הריח ומודלים עכבריים של מחלות ניווניות באמצעות סוללת בדיקות פשוטות זו.

olfactory-assays-for-mouse-models-of-neurodegenerative-disease

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

יסוד, המאפיינים הייחודיים של המערכת עדיין מכרסם הריח הובילו מחקר הגוברת בקרב ביולוגים. הערכה פשוטה יחסית של תפקידה הוא צריך גם אז. כאן אנו מתארים בדיקות רגישות לאפיון של רגישות העכבר העדפה הריח ו.

בדיקה התנהגותית חוש הריח של העכבר למבוגרים

בהפרעות ומחל פרקינסון תנועה באופן כללי, מבחני התנהגות רגישים ואמינים הם חיוניים לבדיקה הרפוי פוטנציאלי חדשה. כאן, אנו מתארים לניהול סוללה של בדיקות הסנסורית לעכברים שרגישים לדרגות שונות של פגיעה במערכת nigrostriatal ושימושית למחקרים פרה.

הערכת התפקוד הסנסורית בעכברי מודל של מחלת פרקינסון

כתב יד זה מתאר פרוטוקול לבחינת מערכת הריח של מכרסמים. מבחן ההתרגלות/אי-השבתה של חוש הריח יאפשר לחוקרים לקבוע אם עכבר מתרגל לריח המוצג שוב ושוב והאם העכבר מפגין חוסר התרגלות כאשר מוצג לו ריח חדש.

בדיקה לריח אפליה והרגלה בעכברים

אנו מציגים מבחן ריח פשוט ובלתי מוטה בעכברים. עם פרוטוקול זה ניתן להעריך אפליה, העדפה, הימנעות ורגישות לריח חדש בהשוואה למים במפגשים התנהגותיים בודדים. שיטה זו מיועדת לנסיין יחיד והניתוח מבוסס על עיבוד וידאו בעזרת מחשב.

פשוט וחוש ריח בדיקה לעכברים בסיוע מחשב

אנו מציגים את האתגרים הטכניים ופתרונות להשגת אמין פונקציונלי מגנטי תהודה הדמיה (fMRI) נתונים ממערכת חוש הריח האנושי האנושי. זה כולל שיקולים מיוחדים בעיצוב fMRI חוש הריח חוש הריח, תיאורים של רכישת נתונים fMRI עם OLfactometer תואם MRI, מבחר אודורנט, וכלי תוכנה מיוחדת לעיבוד נתונים לאחר.

ללא תשלום נשימה fMRI שיטה לחקר האדם חוש הריח פונקציה

תיאר כאן היא מבוימת, התנהגות ההקרנה התנהגותית שניתן להשתמש בהם כדי המסך עבור תרכובות כי התערוכה יעילות vivo על התנהגויות מוטוריות קוגניטיבית ופונקציונלית מודלים עכבר מהונדס של עמילואידוזיס β ו tauopathy. שיטות אלה מותאמות לתצוגת תרכובות עבור פעילות במשימות זיכרון לטווח קצר ולזיכרון עבודה.

הערכה של חלופה ספונטנית, זיהוי אובייקטים רומנטי ו Clbing איברים מודלים עכבר מהונדס של Amyloid-β ו נוירופתולוגיה טאו

מאמר זה מציג פרוטוקול עבור החקירה של שידור החברתית של העדפת מזון בעכברים. היתרונות ואת היישומים האפשריים עבור הליך זה, למשל, באיתור מוקדם שינויים במודלים של העכבר לספירה, מודגשים. לסיכום, נידונות פרשנות של התוצאות לאור פרטים קריטיים.

הערכה של שידור החברתית של התנהגויות העדפות מזון

כאן, אנחנו מאמנים עכברים בפעילות associative learning כדי לבדוק את ריח אפליה. פרוטוקול זה מאפשר גם במחקרים על למידה-induced שינויים מבניים במוח.

מבחן אובייקטיבי, לשחזור של למידה חוש הריח ואפליה בעכברים

מאמר זה מספק תיאור מפורט של מבחן המזון הקבור וניסוי אפליית ריח חברתי כדי להעריך את ההשפעות של חשיפה למזהמים סביבתיים בשאיפה על תפקוד חוש הריח בעכברים.

חקר ההשפעות של מזהמים סביבתיים בשאיפה על תפקוד חוש הריח בעכברים

פרוטוקול זה מתאר בניית אולפקטומטר לניסויי התנהגות חוש הריח. הוראות שלב אחר שלב, יחד עם תמונות, ניתנות על מנת להבטיח בנייה מוצלחת של האולפקטומטר. מידע לפתרון בעיות שנתקלו בהן במהלך התהליך כלול גם כן.

בניית אולפקטומטר לחקר התנהגות חוש הריח של מכרסמים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של בדיקת העדפת ריח המאפשר להעריך הטיות ריח שליליות כלפי גירוי ריח מעורר תיאבון ומרתיע כאחד במודלים של דיכאון בעכברים.

מבחן העדפת ריח למדידת הטיות הדוניות של חוש הריח במודלים של דיכאון בעכברים

למדו להעריך תפקוד חוש הריח בעכברים באמצעות מבחני פליטה קבורה ומבחני התרגלות. שיטות אלו מאפשרות לחוקרים לבחון מודלים גנטיים של מחלות ניווניות ולהעריך תרופות פוטנציאליות.

מבחני חוש הריח למודלי עכבר של ניווניות מחלות

גלה סרטונים נוספים