ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחקר נתמך בחלקו על ידי מענקי המחקר של ה-NIH R01 AR062173 ו-SHC 250862 ל-IEA. ES היא הזוכה במלגת NIH T32 CTSC קדם דוקטורט.

1. משלוח הידרודינמית של sRANKL MC-DNA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משלוח הידרודינמית דרך וריד זנב עכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את העכבר לפני ההזרקה לוריד זנב. לדלל sRANKL או חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) MC בפתרון של רינגר (טרום חם על 37 מעלות צלזיוס) בהיקף כולל של ~ 10% ממשקל גופו של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את העכבר בכלוב עבור 10 דקות לפני ההזרקה כדי מרחיב את כלי דם ולהפוך את הוורידים לרוחב (LVS) נראים לעין. לנטר את העכבר בזהירות כדי למנוע התייבשות והיפרתרמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהם LVS מורחבים ונראה לעין, להעביר את העכבר לעוצר ולהכניס את התקע רחוק מספיק לתוך החבית לרסן את התנועה. לפקח על העכבר לפעילות רגילה כגון נשימה. התאם את התקע של עוצר במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את אזור ההזרקה 3/4 מקצה הזנב עם אלכוהול לנגב. שימוש במחט G 27-30 להזרקה לוריד זנב עכבר. החזק את הזנב בחוזקה ביד אחת ולהכניס את המחט בלוריד הזנב. להפעיל לחץ על המזרק ולהשלים את הזריקה בתוך 5-7 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המחט מוריד הזנב ולהפעיל לחץ עם כדור צמר גפן באתר ההזרקה כדי לעצור את הדימום. לפקח על העכבר ל15-30 דקות, ולאחר מכן להעביר את העכבר בחזרה לביבר פעם אחת את קצב הנשימה מצטמצם לשיעור הרגיל שלו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אישור על ביטוי sRANKL המערכתי מאוס והכימות של העברת עכבר סרום TRACP5b ההודעה ג&#39;ין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את העכבר בכלוב ל5-10 דק כדי מרחיב את כלי דם ולגרום LVS גלוי. לנטר את העכבר בזהירות כדי למנוע התייבשות והיפרתרמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן עם להב לזנבו של העכבר באתר אחד אחורה מקצה הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף כ 100 μl דם בצינורות הפרדה בסרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה צינורות הפרדת סרום בטמפרטורת חדר למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה דגימות 10,000 XG במשך 5 דקות ולאסוף בסרום. Storסרום דואר ב-80 ° C לניתוח נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע sRANKL ELISA וassay TRACP5b סרום עכבר על דגימות סרום באמצעות ערכה זמינה מסחרית. </li></ol></li></ol> 2. דור Osteoclast במבחנה מBMMs מאוס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד וCulturing של BMMs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של השוקה ועצמות ירך: להרדים את עכבר התורם עם CO 2, ולחטא את הרגליים עם 70% אתנול. לנתח מעצם הערווה עד עצם calcaneus, כדי להסיר את עצמות ירך ושוקה בשלמותה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את העור ושרירים בזהירות מבלי לפגוע בעצמות. הנח עצם ירך ועצם שוקה מעובד בצלחת פטרי המכילה בופר פוספט (PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההסרה של מח עצם: חותכים את הקצה בצד אחד של עצמות הירך ושוקה ולשטוף את מח העצם לתוך צינור 50 מיליליטר באמצעות מזרק 1ml עם מחט 25 G, עמוס α-ממ המכיל 1% פניצילין / סטרפטומיצין (Osteoclast התרבות בינונית / OCM). </li><li&gt; מח עצם תהליך: לערבב ולהעביר השעיה מח עצם לצינור מיליליטר 50 חדש על ידי העברתו דרך מסננת תא ניילון 70 מיקרומטר. צנטריפוגה התאים ב XG 300 מחדש להשעות בα-ממ המכיל 1% פניצילין / סטרפטומיצין ו10% FBS (הבינוני Osteoclast תרבות / OCM (+)). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות של המקרופאגים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים באמצעות hemocytometer או דלפק תא אוטומטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת 1 x 10 6 תאים לכל גם לצלחת 6 היטב או 3 x 10 5 תאים לcoverslips זכוכית (5 מ&quot;מ) או פרוסות הדנטין להציב צלחת 96 היטב ולדגור על 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את כל אמצעי התקשורת המכילה תאים שאינם חסיד ודגירת תאים ב 37 ° C עם OCM הטרי (+) המכילה עכבר 25 ng / ml M-CSF ל48 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת לשאוב את כל התקשורת ודגירת תאים ב 37 ° C עם OCM הטרי (+) המכילה M-CSF עכבר 25 ng / ml, ו30 sRANKL עכבר ng / ml ליזום osteoclastogenesis. לחדש את התקשורת בכל 3 ימים, כנדרש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדל תאיםכ 6-8 ימים על מנת לייצר תאים רב גרעיניים ענק מסוגלים resorbing עצם. ברגע שהתאים multinucleated מופיעים, לבצע מלכודת (phosphatase חומצה עמיד tartrate) מכתים באמצעות ערכה זמינה מסחרית, וכאשר התבגרו באופן מלא, לבצע מבחני תפקודיים. דמיינו טבעות ה-F-אקטין על coverslips באמצעות כתם phalloidin ותמונה מצורפים לתאים הדנטין פרוסות ידי מיקרוסקופיית אלקטרונים (SEM) כפי שתואר לעיל 19. </li></ol></li></ol> 3. דור Osteoclast במבחנה מPBMCs האדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של PBMCs האדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 מיליליטר של Histopaque-1077 מראש חימם לתוך צינור 50 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסנן ויקוציטים ריק המתקבל מבנק דם עם PBS סטרילי לתוך צינור 50 מיליליטר (1:1 יחס של דם עם PBS). שכבת הדם המדולל על פתרון Histopaque לאט מאוד, ולוודא כי הדם לא לערבב עם Histopaque. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה דגימות XG 1000 עבור 20 דקות ב18 ° C. לעקובing צנטריפוגה, לבודד בזהירות את שכבת מעיל באפי הלבנה המכילה את תאי דם הלבנים ולהעביר לצינור מיליליטר 50 חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל תאים עם PBS ו צנטריפוגות שוב ב650 XG במשך 5 דקות כדי לאסוף את התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר supernatant ותאי resuspend ב OCM (-) תקשורת ולספור תאים באמצעות דלפק תא. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציפוי וCulturing PBMCs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת resuspend תאי OCM (+) וצלחת 8 x 10 6 תאים / מיליליטר לכל טוב בצלחת או 1 6 גם x 10 6 תאים / מיליליטר לכל טוב בצלחת 96 היטב. פלייט תאים על coverslips זכוכית (5 מ&quot;מ), כנדרש להדמית immunofluorescence כמו גם על פרוסות עצם מתאימות עבור מבחני ספיגת עצם כפי שתוארו לעיל 20. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדיה שינוי תרבות, חידוש התאים עם M-CSF האנושי כל 2-3 ימים או כפי שנדרש. לאחר מכן להמשיך לשלב בידול ביום 5 על ידי הוספת 30 / מיליליטר ng של sRANKL האנושי יחד עם 25 M-CSF ng / ml אדם בOCM (+) תקשורת ליזום osteoclastogenesהוא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדל תאים לכ 14-21 ימים על מנת לייצר תאים רב גרעיניים ענק. ברגע שהתאים multinucleated מופיעים, אז יכולים להיות שכותרתו תאים אלה למלכודת, וכשהתבגרו באופן מלא, ניתן לבצע מבחני תפקודיים. ניתן דמיינו טבעות ה-F-אקטין על coverslips באמצעות כתם phalloidin. המורפולוגיה של התאים ניתן לבדוק בתאים מצורפים הדנטין פרוסות ידי SEM. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Yelin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost+of+musculoskeletal+diseases%3A+impact+of+work+disability+and+functional+decline%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+rheumatology.+Supplement%22%5BJournal%5D)">Cost of musculoskeletal diseases: impact of work disability and functional decline.</a> The Journal of rheumatology. Supplement. 68, 8-11 (2003).</li>
<li>Boyce, B. F., Rosenberg, E., de Papp, A. E., Duong le, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+osteoclast%2C+bone+remodelling+and+treatment+of+metabolic+bone+disease%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">The osteoclast, bone remodelling and treatment of metabolic bone disease.</a> European journal of clinical investigation. 42, 1332-1341 (2012).</li>
<li>Lacey, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoprotegerin+ligand+is+a+cytokine+that+regulates+osteoclast+differentiation+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation.</a> Cell. 93, 165-176 (1998).</li>
<li>Mizuno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+overexpressing+soluble+osteoclast+differentiation+factor+%28sODF%29+exhibit+severe+osteoporosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bone+and+mineral+metabolism%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice overexpressing soluble osteoclast differentiation factor (sODF) exhibit severe osteoporosis.</a> Journal of bone and mineral metabolism. 20, 337-344 (2002).</li>
<li>Bucay, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((osteoprotegerin-deficient+mice+develop+early+onset+osteoporosis+and+arterial+calcification%5BTitle%5D)+AND+%22Gene.%2C+%26+development%22%5BJournal%5D)">osteoprotegerin-deficient mice develop early onset osteoporosis and arterial calcification.</a> Gene., & development. 12, 1260-1268 (1998).</li>
<li>Suda, T., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamic+gene+delivery%3A+its+principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+therapy%3A+the+journal+of+the+American+Society+of+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamic gene delivery: its principles and applications.</a> Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Therapy. 15, 2063-2069 (2007).</li>
<li>Wronski, T. J., Dann, L. M., Scott, K. S., Cintron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+effects+of+ovariectomy+and+aging+on+the+rat+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+tissue+international%22%5BJournal%5D)">Long-term effects of ovariectomy and aging on the rat skeleton.</a> Calcified tissue international. 45, 360-366 (1989).</li>
<li>Seto, H., Aoki, K., Kasugai, S., Ohya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trabecular+bone+turnover%2C+bone+marrow+cell+development%2C+and+gene+expression+of+bone+matrix+proteins+after+low+calcium+feeding+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Trabecular bone turnover, bone marrow cell development, and gene expression of bone matrix proteins after low calcium feeding in rats.</a> Bone. 25, 687-695 (1999).</li>
<li>Lelovas, P. P., Xanthos, T. T., Thoma, S. E., Lyritis, G. P., Dontas, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+laboratory+rat+as+an+animal+model+for+osteoporosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+medicine%22%5BJournal%5D)">The laboratory rat as an animal model for osteoporosis research.</a> Comparative medicine. 58, 424-430 (2008).</li>
<li>Sherman, B. M., West, J. H., Korenman, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+menopausal+transition%3A+analysis+of+LH%2C+FSH%2C+estradiol%2C+and+progesterone+concentrations+during+menstrual+cycles+of+older+women%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+endocrinology+and+metabolism%22%5BJournal%5D)">The menopausal transition: analysis of LH, FSH, estradiol, and progesterone concentrations during menstrual cycles of older women.</a> The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 42, 629-636 (1976).</li>
<li>Hughes, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+promotes+apoptosis+of+murine+osteoclasts+mediated+by+TGF-beta%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Estrogen promotes apoptosis of murine osteoclasts mediated by TGF-beta.</a> Nature medicine. 2, 1132-1136 (1996).</li>
<li>Kousteni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nongenotropic%2C+sex-nonspecific+signaling+through+the+estrogen+or+androgen+receptors%3A+dissociation+from+transcriptional+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Nongenotropic, sex-nonspecific signaling through the estrogen or androgen receptors: dissociation from transcriptional activity.</a> Cell. 104, 719-730 (2001).</li>
<li>Ominsky, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RANKL+inhibition+with+osteoprotegerin+increases+bone+strength+by+improving+cortical+and+trabecular+bone+architecture+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bone+and+mineral+research+%3A+the+official+journal+of+the+American+Society+for+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">RANKL inhibition with osteoprotegerin increases bone strength by improving cortical and trabecular bone architecture in ovariectomized rats.</a> Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research. 23, 672-682 (2008).</li>
<li>Kitazawa, R., Kimble, R. B., Vannice, J. L., Kung, V. T., Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1+receptor+antagonist+and+tumor+necrosis+factor+binding+protein+decrease+osteoclast+formation+and+bone+resorption+in+ovariectomized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1 receptor antagonist and tumor necrosis factor binding protein decrease osteoclast formation and bone resorption in ovariectomized mice.</a> The Journal of clinical investigation. 94, 2397-2406 (1994).</li>
<li>Weitzmann, M. N., Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+deficiency+and+bone+loss%3A+an+inflammatory+tale%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Estrogen deficiency and bone loss: an inflammatory tale.</a> The Journal of clinical investigation. 116, 1186-1194 (2006).</li>
<li>Suda, T., Nakamura, I., Jimi, E., Takahashi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+osteoclast+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of osteoclast function.</a> J Bone Miner Res. 12, 869-879 (1997).</li>
<li>Asagiri, M., Takayanagi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+understanding+of+osteoclast+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">The molecular understanding of osteoclast differentiation.</a> Bone. 40, 251-264 (2007).</li>
<li>Matsuzaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast+differentiation+factor+%28ODF%29+induces+osteoclast-like+cell+formation+in+human+peripheral+blood+mononuclear+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+biophysical+research+communications%22%5BJournal%5D)">Osteoclast differentiation factor (ODF) induces osteoclast-like cell formation in human peripheral blood mononuclear cell cultures.</a> Biochemical and biophysical research communications. 246, 199-204 (1998).</li>
<li>Adamopoulos, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synovial+fluid+macrophages+are+capable+of+osteoclast+formation+and+resorption%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">Synovial fluid macrophages are capable of osteoclast formation and resorption.</a> The Journal of pathology. 208, 35-43 (2006).</li>
<li>Adamopoulos, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-17A+upregulates+receptor+activator+of+NF-kappaB+on+osteoclast+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+researc.%2C+%26+therapy%22%5BJournal%5D)">Interleukin-17A upregulates receptor activator of NF-kappaB on osteoclast precursors.</a> Arthritis researc., & therapy. 12, (2010).</li>
<li>Jones, D., Glimcher, L. H., Aliprantis, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoimmunology+at+the+nexus+of+arthritis%2C+osteoporosis%2C+cancer%2C+and+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Osteoimmunology at the nexus of arthritis, osteoporosis, cancer, and infection.</a> J Clin Invest. 121, 2534-2542 (2011).</li>
<li>Sato, K., Takayanagi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclasts%2C+rheumatoid+arthritis%2C+and+osteoimmunology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Osteoclasts, rheumatoid arthritis, and osteoimmunology.</a> Curr Opin Rheumatol. 18, 419-426 (2006).</li>
<li>Das, S., Crockett, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoporosis+-+a+current+view+of+pharmacological+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+design%2C+development+and+therapy%22%5BJournal%5D)">Osteoporosis - a current view of pharmacological prevention and treatment.</a> Drug design, development and therapy. 7, 435-448 (2013).</li>
<li>Chen, Z. Y., He, C. Y., Ehrhardt, A., Kay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minicircle+DNA+vectors+devoid+of+bacterial+DNA+result+in+persistent+and+high-level+transgene+expression+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+therapy+%3A+the+journal+of+the+American+Society+of+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Minicircle DNA vectors devoid of bacterial DNA result in persistent and high-level transgene expression in vivo.</a> Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy. 8, 495-500 (2003).</li>
<li>Kay, M. A., He, C. Y., Chen, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+system+for+production+of+minicircle+DNA+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">A robust system for production of minicircle DNA vectors.</a> Nature biotechnology. 28, 1287-1289 (2010).</li>
<li>Chen, Z. Y., He, C. Y., Kay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+production+and+purification+of+minicircle+DNA+vector+free+of+plasmid+bacterial+sequences+and+capable+of+persistent+transgene+expression+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Human+gene+therapy%22%5BJournal%5D)">Improved production and purification of minicircle DNA vector free of plasmid bacterial sequences and capable of persistent transgene expression in vivo.</a> Human gene therapy. 16, 126-131 (2005).</li>
<li>Halleen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tartrate-resistant+acid+phosphatase+5b%3A+a+novel+serum+marker+of+bone+resorption%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bone+and+mineral+research+%3A+the+official+journal+of+the+American+Society+for+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Tartrate-resistant acid phosphatase 5b: a novel serum marker of bone resorption.</a> Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research. 15, 1337-1345 (2000).</li>
<li>Adamopoulos, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-23+is+critical+for+induction+of+arthritis%2C+osteoclast+formation%2C+and+maintenance+of+bone+mass%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-23 is critical for induction of arthritis, osteoclast formation, and maintenance of bone mass.</a> J Immunol. 187, 951-959 (2011).</li>
<li>Suda, T., Takahashi, N., Martin, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+osteoclast+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+reviews%22%5BJournal%5D)">Modulation of osteoclast differentiation.</a> Endocrine reviews. 13, 66-80 (1992).</li>
<li>Takahashi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic+cells+are+involved+in+osteoclast+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic cells are involved in osteoclast formation.</a> Endocrinology. 123, 2600-2602 (1988).</li>
<li>Bradley, E. W., Oursler, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast+culture+and+resorption+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Osteoclast culture and resorption assays.</a> Methods Mol Biol. 455, 19-35 (2008).</li>
<li>Arai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commitment+and+differentiation+of+osteoclast+precursor+cells+by+the+sequential+expression+of+c-Fms+and+receptor+activator+of+nuclear+factor+kappaB+%28RANK%29+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">Commitment and differentiation of osteoclast precursor cells by the sequential expression of c-Fms and receptor activator of nuclear factor kappaB (RANK) receptors.</a> The Journal of experimental medicine. 190, 1741-1754 (1999).</li>
<li>Fuller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+colony-stimulating+factor+stimulates+survival+and+chemotactic+behavior+in+isolated+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicin%22%5BJournal%5D)">Macrophage colony-stimulating factor stimulates survival and chemotactic behavior in isolated osteoclasts.</a> The Journal of experimental medicin. 178, 1733-1744 (1993).</li>
<li>Edwards, J. R., Mundy, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+osteoclast+biology%3A+old+findings+and+new+insights+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Advances in osteoclast biology: old findings and new insights from mouse models.</a> Nature reviews. Rheumatology. 7, 235-243 (2011).</li>
<li>Weinstein, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promotion+of+osteoclast+survival+and+antagonism+of+bisphosphonate-induced+osteoclast+apoptosis+by+glucocorticoids%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Promotion of osteoclast survival and antagonism of bisphosphonate-induced osteoclast apoptosis by glucocorticoids.</a> The Journal of clinical investigation. 109, 1041-1048 (2002).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

תנאי השלד והשרירים מובילים גורמים לתחלואה ונכות ומורכבים של מעל 150 מחלות ותסמונות; המשפיע על כ -90 מיליון אמריקאים היום. דלקת מפרקים והרס עצם הם תכונות העיקריות של תנאים שרירי שלד, הכוללים דלקת מפרקים ואוסטאופורוזיס. אוסטאופורוזיס היא מחלה שמחלישה את שלמות עצם, לעתים קרובות מוביל לשברים בעצמות. דלקת פרקים הוא מחלה כרונית, מתישה מחלה המאופיינת בדלקת המפרקים שהפכו נפוח, רך ותנועה נורמלית הגבלה-נוקשה ויכולים לגרום לנכות. למרות פתוגנזה של מחלות שרירים ושלד שונה מאוד אחד מהשני, הרס עצ...

מחלות השלד והשרירים משפיעות על מיליוני אנשים בארצות הברית וההשלכות חמורות בהווה למערכות בריאות מקומיות וארציות 1. הפרעות אלו מתאפיינות באובדן העצם ותפקוד מפרקים הדורשים טיפול מקיף ותקופות של התאוששות ארוכות. בדרך כלל, גידול יחסי במספר ו / או הפעילות של osteoclasts, תאים מתמחים לנספגים שוב עצם, באוסטיאופורוזיס ובדלקת מפרקים שהוא ציין 2. בתנאים פיסיולוגיים במספר ובפעילות של osteoclasts מוסדר על ידי מפעיל הקולטן של הגורם הגרעיני κ-B ליגנד (RANKL), אשר מופק על ידי אוסטאובלסטים. Osteoprotegerin (OPG), קולטן דמה לRANKL מיוצר גם על ידי osteoblasts 3 בvivo מודלים של בעלי חיים הכרוכים בביטוי יתר מערכתי של sRANKL, או מחיקה של OPG יקרים מאוד במחקר באוסטאופורוזיס.; עם זאת, שיטות אלו דורשות הדור של עכברים הטרנסגניים 4,5. כאן, אלטרנטיבה רומןשיטה של ​​overexpressing sRANKL לחקר הפרעות הקשורות לשרירים ושלד מתואר. באופן ספציפי, minicircle (MC) טכנולוגיית ה-DNA ושיטות משלוח הידרודינמית שימשו כדי להשיג העברת גנים של sRANKL in vivo ו overexpress עכבר sRANKL מערכתי 6. שיטה זו היא גם משלימה in vivo מודלים אחרים לאוסטאופורוזיס, כגון אפנון הורמונלי של osteoclasts הבא ovariectomy 7 והתערבות תזונתית על ידי דיאטה דל בסידן 8. מודלים אלה הם מאוד שימושיים כדי ללמוד היבטים שונים של הפרעות הקשורות לשלד ושרירים עם זאת הם דורשים ניתוחים ועשויים להימשך עד מספר חודשים, במחיר משמעותי 9. מודל מכרסם ovariectomized (OVX) הוא מודל חיה ניסיוני שבו הסרת השחלות גורמת למחסור באסטרוגן ובכך מחקה אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר אדם 10. אוסטיאופורוזיס בגיל הבלות אדם, מצב שבו defici אסטרוגןency מוביל לסיכון מוגבר לשברים בעצמות ובריחת סידן משפיעה על כשמונה מיליון נשים בארצות הברית לבדה. למרות שמודל OVX שימושי לאוסטיאופורוזיס בגיל הבלות הוא מציע יתרונות מוגבלים בלימוד אוסטאופורוזיס באופן כללי. אסטרוגן מדכא את איבוד מסת עצם, על ידי גרימת osteoclast ועיכוב אפופטוזיס osteoblast, ולכן בהעדרה פעילות osteoclast המוגבר הוא ציין 10-12. חוסר איזון יחס RANKL-OPG שמעדיף ספיגת עצם הוא ציין גם 13. עם זאת, מחסור באסטרוגן in vivo מלווה גם בירידה ברמות של הפיכת β גורם גדילה (β TGF), גדל אינטרלויקין 7 (IL-7) וTNF, IL-1 ו-IL-6 14,15. כציטוקינים אלה ידועים פונקציות ויסות שיפוץ עצם בלתי תלויות במסלול RANKL, אי אפשר לייחס כל הפעלת osteoclast אך ורק על ציר RANKL-RANK. המודל המתואר במאמר זה מאפשר לחוקרים ללמוד ביוo ציר RANKL-RANK בosteoclastogenesis ואובדן עצם ללא הפרו ציטוקינים דלקתיים בהשוואה למודלים של מכרסמים OVX. בנוסף, טכניקות osteoclastogenesis במבחנה הן כלים חיוניים ללמוד הפעלת osteoclast לטיפולי פוטנציאל טיפוליים של מחלות השלד והשרירים. גם מחקרים קודמים הראו כי culturing מקרופאגים מח עצם עכבר נגזרים (BMMs) עם גורם מקרופאג העכבר מגרה מושבה (M-CSF) והעכבר sRANKL יכול להוביל לבידול osteoclast 3,16,17. הנה, את הפרוטוקולים כדי לייצר תאים כמו osteoclast-multinucleated ממח העצם של עכבר, כמו גם מהתאים אנושיים היקפיים mononuclear הדם (PBMCs) במבחנה 18 מתוארים. מבחני מבוססי התאים נדרשים להגדיר osteoclast הבדיל סופני ומתפקד באופן מלא בשלה גם מתוארים בקצרה. במבחנה טכניקות אלה משלימים את הרומן בגישת vivo ויחד לשמש pכלי החקירה owerful ללמוד בידול osteoclast והפעלה. שימוש במערכות אלה, מדענים מסוגלים לייצר osteoclasts in vivo ו במבחנה ולהגדיר את הגירויים ואותות הנדרשים להפצה וההפעלה שלהם, כמו גם לבחון את היעילות של מעכבים תרופתיים וביולוגיים.

<table><tbody><tr><td>אלפא-MEM</td><td>טכנולוגיות חיים&nbsp;</td><td>12561-056</td><td></td></tr><tr><td>M-CSF אנושי</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-492</td><td></td></tr><tr><td>עכבר M-CSF</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-643</td><td></td></tr><tr><td>RANK-Ligand אנושי - מסיס</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-631</td><td></td></tr><tr><td>עכבר RANK-Ligand - מסיס</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-076</td><td></td></tr><tr><td>Tailveiner Restrainer לעכברים</td><td>Braintree</td><td>TV-150 STD</td><td></td></tr><tr><td>עכבר טראנס/דרגה L/TNFSF11 ערכת קוונטיקין אליסה&nbsp;</td><td>מו"פ D systems</td><td>MTR00</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פוספטאז, לויקוציטים (TRAP) ערכת</td><td>Sigma</td><td>387A</td><td></td></tr><tr><td>MouseTRAP assay&nbsp;</td><td>מערכות אימונודיאגנוסטיקה</td><td>SB-TR103</td><td></td></tr></tbody></table>

רומן in vivo טכניקה וין העברה במבחנה לחקר אובדן עצם בפרעות השלד והשרירים

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

התמיינות והפעלה של אוסטאוקלסטים ממלאים תפקיד מפתח בהתפתחות מחלות שרירים ושלד מכיוון שתאים אלה מעורבים בעיקר בספיגת עצם. ניתן ליצור אוסטאוקלסטים במבחנה מתאי מונוציטים/מקרופאגים בנוכחות ציטוקינים מסוימים, המקדמים הישרדות והתמיינות. כאן מודגמות טכניקות in vivo ו-in vitro, המאפשרות למדענים לחקור תרומות ציטוקינים שונות לקראת התמיינות, איתות והפעלה של אוסטאוקלסטים. מערכת העברת הגנים של מעגל ה-DNA מספקת שיטה חלופית להקמת מודל הקשור לאוסטאופורוזיס שימושית במיוחד לחקר היעילות של מעכבים פרמקולוגיים שונים in vivo. באופן דומה, פרוטוקולי תרבית במבחנה לייצור אוסטאוקלסטים מתאי קודמן אנושיים בנוכחות ציטוקינים ספציפיים מאפשרים למדענים לחקור אוסטאוקלסטוגנזה בתאים אנושיים ליישומים תרגומיים. בשילוב, לטכניקות אלה יש פוטנציאל להאיץ את מאמצי גילוי התרופות לטיפולים ממוקדים ספציפיים לאוסטאוקלסטים, שעשויים להועיל למיליוני חולי אוסטאופורוזיס ודלקת פרקים ברחבי העולם.

כאן, בטכניקת העברת גנים חדשים לבידול של osteoclasts in vivo ופרוטוקולי תרבית תאים להפרדת תאים מבשר לosteoclasts במבחנה, כמו שיטה כדי לחקור את ההשפעות של ציטוקינים על osteoclastogenesis מתוארות. באיור 1, תוצאות הנציג של העברת גנים המוצלחת של ה-GFP ועכבר sRANKL MC בעכברים מוצגות. באיור 2, התמונות מייצגות של מח עצם עכבר או תרבויות אנושיות PBMC התמיינות תאים כמובן זמן של תאים מבשר לosteoclasts על ידי מיקרוסקופ שדה הבהיר מוצגות. <stro...

התמיינות של תאים קודמים לאוסטאוקלסטים מווסתת על ידי ציטוקינים וגורמי גדילה. כאן, מתוארת טכניקה חדשה להעברת גנים להתמיינות של אוסטאוקלסטים in vivo ופרוטוקולי תרבית תאים להתמיינות תאים קודמים לאוסטאוקלסטים במבחנה כשיטה לחקר ההשפעות של ציטוקינים על אוסטאוקלסטוגנזה.

רומן In vivo טכניקה וין העברה במבחנה לחקר אובדן עצם בפרעות השלד והשרירים

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone ...

המטרה הכוללת היא לדווח על טכניקת העברת גנים חדשה להתמיינות של אוסטאוקלסט in vivo. אנו מתארים גם פרוטוקולים של תרבית תאים להבדיל בין מקרופאגים של מח העצם של עכבר של PBMC אנושי לאוסטאוקלסט. סרטון זה יחולק לשלושה חלקים.האחד, אספקה הידרודינמית של מיני מעגל חזזית דרגה, DNA, שניים דור אוסטאוקלסט במבחנה מעכבר, מקרופאגים של מח עצם, ושלושה דור אוסטאוקלסט במבחנה מ-pbmc אנושי. חלק ראשון, אספקה הידרודינמית של מעגל מיני חזזית דרגה, DNA. האנימציה הבאה מציגה סקירה קצרה של העברה הידרודינמית באמצעות הזרקת וריד זנב עכבר.יש להניח תחילה את העכבר מתחת למפת חום למשך 10 דקות לפני ההזרקה. זה מרחיב את כלי הדם והופך את הוורידים הצדדיים לגלויים יותר. לאחר מכן אתר את מקום ההזרקה והמשך בהזרקה, תוך הקפדה על השלמת ההזרקה תוך חמש עד שבע שניות.החלק הבא של סרטון זה יציג תיאור מפורט יותר של ההליכים הכרוכים בהעברה הידרודינמית דרך וריד זנב העכבר. אסוף את החומרים להזרקה. חממו את העכבר בכלוב למשך 10 דקות לפני ההזרקה.עקוב אחר העכבר בזהירות כדי למנוע התייבשות והיפותרמיה. חימום העכבר מרחיב את כלי הדם והופך את הוורידים הצדדיים לגלויים יותר. לאחר שהוורידים נראים לעין, העבירו את העכבר למסננת והכנסו בוכנה כדי לרסן את תנועת העכבר.יש לחטא את מקום ההזרקה בעזרת מגבון אלכוהול. שימוש במחט בגודל 27 עד 30 להזרקת זנב העכבר עם ליגנד דרגה מדולל או מעגל מיני GFP לתמיסת צלצול מחמם מראש. החזק את הזנב בחוזקה ביד אחת והכנס את המחט לווריד הזנב.הפעילו לחץ על המזרק והשלימו את ההזרקה תוך חמש עד שבע שניות. לאחר מכן, הסר את המחט מזנב הווריד והפעל לחץ עם צמר גפן על מקום ההזרקה כדי לעצור כל דימום. יש להקפיד על קצב נשימה מוגבר עקב דם מדולל וזריקות מוצלחות.עקוב אחר הפיות במשך 15 עד 30 דקות, ולאחר מכן העבר בחזרה לבריום. ברגע שהעכבר מפתח קצב נשימה תקין, אספקת גנים הידרודינמית משתמשת בלחץ הידרודינמי שנוצר על ידי הזרקה מהירה של נוזל בנפח גדול לכלי דם כדי להתגבר על המחסומים הפיזיים של קרום תאי האנדותל המונע מ-DNA להיכנס לתאי פרנכימה. תאי פרנכימה עוברים טרנספטציה מכיוון שהקרבה לאנדותל נימי מאפשרת גישה מיידית ל-DNA.ברגע שמחסום האנדותל מופרע. חלק שני, יצירת אוסטאוקלסט במבחנה ממקרופאגים של מח עצם עכבר, הצעד הראשון הוא להקריב את עצמות השוקה ועצם הירך המבודדות של העכבר. שטפו את מח העצם באמצעות מזרק עמוס ב-PBS, ואז ספרו תאים ולאחר מכן צלחו לזמן קצר.לאחר המתת חסד של העכבר התורם והסרת עצמות עצם הירך והשוקה, מח העצם נשטף לתוך צינור של 50 מיליליטר. שימוש במזרק מיליליטר אחד עם מחט בגודל 25 עמוסה בתערובת PBS ולאחר מכן העבירו את מתלה מח העצם לצינור חדש של 50 מיליליטר על ידי העברתו דרך מסננת תאי ניילון. לאחר העברת תרחיף מח העצם דרך צנטריפוגה מסננת תאי ניילון במורד התאים והשהיית החייאה במדיום תרבית אוסטאוקלסטים, הכינו צלחת 96 בארות באמצעות פרוסות דנטין של חמישה מילימטרים.באופן דומה, ניתן להכין צלחת 96 באר באמצעות פתקי כיסוי זכוכית של חמישה מילימטרים. שימו לב למקם את פרוסת הדנטין משמאל ולהחליק את מכסה הזכוכית מימין באמצעות המו, ציטומטר או מונה תאים אוטומטי לספור את התאים ואז להצמיד 300,000 תאים להחלקות כיסוי זכוכית או פרוסות שקעים המונחות בצלחת 96 הבאר ולדגור באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס. יש להסיר את כל המדיה המכילה את כל התאים שאינם נדבקים ולהוסיף מדיום חדש בתוספת MCSF למשך 48 שעות.לאחר 48 שעות, הסר את כל המדיה ולאחר מכן הוסף מדיה אוסטאוקלסט המכילה MCSF של עכבר ודירוג עכבר כדי להתחיל אוסטאוקלסטוגנזה, הסר וחידש את המדיה כל שלושה ימים לפי הצורך. מחלקת אוסטיאו בוגרת המוגדרת על ידי היווצרות תאים חיוביים למלכודת מרובת גרעינים. F היווצרות וספיגה פעילה על הדנטין חלק שלישי.במבחנה גם דור כיתה מ pbmc אנושי. הוסף 10 מיליליטר של חבילת היסטו חמה מראש לתוך שפופרת של 50 מיליליטר במסנן הלויקוציטים המתקבל מבנק דם שטוף עם PBS לתוך צינור של 50 מיליליטר. לאחר מכן הניחו את הדם על תמיסת חבילת ההיסטו לאט מאוד, וודאו שהדם לא מתערבב עם תמיסת חבילת ההיסטו.שימו לב כיצד הדם מונח על גבי דגימות הצנטריפוגות של תמיסת ההיסטו ב-2, 250 סל"ד למשך 20 דקות ב-18 מעלות צלזיוס. שימו לב לשכבת הפרווה של באפי במרכז שלוש השכבות. לאחר הצנטריפוגה, בודדו את שכבת הפרווה הלבנה המכילה את תאי הדם הלבנים והעבירו לצינור חדש של 50 מיליליטר.לאחר מכן, לאחר השלמת השלב, יש לדלל את התאים עם PBS וצנטריפוגה שוב ב -1800 סל"ד למשך חמש דקות כדי לאסוף את התאים. לאחר צנטריפוגה, הסר את שם העל. השעו מחדש את התאים בתרבית אוסטאוקלסטים, ערבבו וערבבו את התאים והמדיה יחד.ספור תאים עם המו, ציטומטר או מונה תאים הכן צלחת 96 באר עם פרוסות שקעים או החלקות כיסוי זכוכית כפי שהודגם בעבר בסרטון זה. לאחר מכן צלחו מיליון תאים לבאר על החלקות כיסוי זכוכית או פרוסות שקעים 24 שעות לאחר הציפוי. הוסף MCSF אנושי למדיה התרבותית.החלף את אמצעי התרבית, חידוש התאים ב-MCSF אנושי כל יומיים-שלושה לפי הצורך. לאחר מכן המשך לשלב ההתמיינות על ידי הוספת ליגנד דרגה אנושית בתוספת MCSF אנושי ומדיה אוסטאוקלסט כדי ליזום אוסטאוקלסטוגנזה, אוסטאוקלסט בוגר המוגדר על ידי היווצרות תאים חיוביים למלכודת רב-גרעינית, היווצרות טבעת אקטין F וספיגה על תוצאות הדנטין. כאן אנו מתארים את מודל העכבר שלנו in vivo osteoclastogenesis באמצעות אספקה הידרודינמית של מעגל מיני ליגנד מסיס, DNA, כמו גם תרבות חוץ גופית והתמיינות של תאי מבשר.לאוסטאוקלסט. איור 1 מציג את העברת הגנים המוצלחת של GFP ומעגל מיני ליגנד דרגה בעכברים, איור 2 מציג תמונות מייצגות של מח עצם עכבר או תרביות מהלך זמן התמיינות תאי PBMC של תאים קודמים לאוסטאוקלסט על ידי מיקרוסקופיה בהירשדה איור 3 מציג תמונות מייצגות משלוש שיטות עצמאיות לאפיון אוסטאוקלסט שמקורו במח עצם עכבר. אנו מדגימים כי נוכחותו של ליגנד דרגה מסיס מפעילה את הביטוי והשחרור של מלכודת שלוש A ו-B, היווצרות טבעות אקטין F.איור 3 C ו-D.אנו מראים גם על ידי סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים כי חזזית דרגה מסיסה גורמת להיווצרות בורות ספיגה על דנטין איור 3 E ו-F. איור 4 מציג את אותן שיטות אפיון על אוסטאוקלסט שמקורו ב-PBMC. שוב, נוכחותו של ליגנד דרגה מסיס מפעילה את הביטוי והשחרור של מלכודת דמות 4 A ו-B. היווצרות טבעות אקטין F איור 4 C ו-D וליגנד דרגה מסיס גורמת להיווצרות בורות ספיגה על דנטין, איור 4 E ו-F. יחד טכניקות אלו יוצרות כלי חקירה רבי עוצמה לבידול והפעלה של מחלקות אוסטאו. באמצעות מערכות אלו אנו מסוגלים לייצר מחלקה של אוסטאו in vivo ו-in vitro ולהגדיר את הגירויים והאותות הנדרשים להתרבות והפעלה, כמו גם לבדוק את יעילותם של מעכבים פרמקולוגיים וביולוגיים.

a-novel-vivo-gene-transfer-technique-vitro-cell-based-assays-for

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בדיקת האורך של איבוד מסת העצם של עצמות הירך לבין tibiae של עכברים בוגרים בוצעה בעקבות פגיעה בחוט השדרה באמצעות רציפים במינון נמוך רנטגן סורק. אובדן העצם Tibia זוהה לאורך כל תקופת המחקר, תוך איבוד מסת העצם בעצם הירך לא זוהה עד 40 ימים שלאחר הפציעה.

הערכת אורך של עכבר הינד איבוד מסת העצם לימב לאחר פגיעה בחוט השדרה באמצעות רומן, In vivo מתודולוגיה

מודלים של בעלי חיים לעתים קרובות מנוצלים כדי ללמוד גרורות סרטן העצם. בפרוטוקול זה יתאר שתי שיטות נפוצות של חיסון ללימודי גידול גרור בעצמות ומתארים בקצרה כמה מהניתוחים מנוצלים כדי לעקוב ולכמת דגמים אלה.

מודלים של גרורות עצם

מדידת כמותית של פונקצית אב עצם בריפוי שבר דורשת טכנולוגיית הדמיה סידורי ברזולוציה גבוהה. הנה, פרוטוקולים ניתנים לשימוש במיקרוסקופיה intravital ומעקב osteo שושלת ברצף תמונה ולכמת את ההגירה, השגשוג והתמיינות של תאי גזע / אב osteogenic אנדוגני בתהליך של תיקון שברים בעצמות.

עוקב<em&gt; בvivo</em&gt; הדמיה של תאי גזע / אב osteogenic במהלך תיקון שבר

בשילוב הדמיה אופטית וμCT במודל של עכברים של זיהום שתל אורתופדים, ניצול זן מהונדס bioluminescent של Staphylococcus aureus, סיפק את היכולת noninvasively ואורכים כדי לפקח על הדינמיקה של זיהום החיידקים, כמו גם את התגובה הדלקתית המקבילה ושינויים אנטומיים ב עצם.

בשילוב<em&gt; בvivo</em&gt; אופטי וμCT הדמיה למעקב אחר זיהום, דלקת, ועצם אנטומיה בזיהום אורטופדיים שתל בעכברים

הפרוטוקול מתאר מודל חדש של תא חלון עצם הירך של עכברים שניתן להשתמש בו כדי לעקוב אחר תנועת תאים במח עצם הירך in vivo. מיקרוסקופיה פלואורסצנטית רב-פוטונית תוך-חיונית משמשת להדמיית שלושה מרכיבים של מח עצם הירך (כלי דם, מטריצת קולגן ונויטרופילים) לאורך זמן.

חלון ירך דגם קאמרי<em&gt; In vivo</em&gt; מעקב תא Murine מח עצם

אנו מתארים פרוטוקול in vivo למדידת כיפוף הגב של כף הרגל בעקבות גירוי של העצב הפרונאלי והתכווצות התא האחורי הקדמי של הגפה האחורית של החולדה. מדידות כאלה הן כלי תרגומי הכרחי להערכת פתולוגיה של שרירי השלד וגישות הנדסת רקמות לתיקון והתחדשות שרירים.

יישומים של<em&gt; In vivo</em&gt; בדיקות פונקציונליות של עכברוש השוקה הקדמי להערכת רקמות מהונדסות תיקון שרירי שלד

דגי מעבדה קטנים הפכו למודלים פופולריים לחקר עצמות על המנגנונים העומדים בבסיס הפרעות בעצמות אנושיות ולסינון תרופות מווסתות עצם. בדוח זה, אנו מתארים פרוטוקול להערכת ההשפעה של אלנדרונאט על תאי עצם בזחלי מדקה עם נגעים אוסטאופורוטיים.

ותרופות טיפול<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של אוסטאובלסטים-osteoclast אינטראקציות במודל אוסטאופורוזיס Medaka דגים

המטרה של פרוטוקול זה היא ליצור מודל שבר הקשורות אוסטאופורוזיס בחוליות עירום עכברוש יכול להיות הערכה longitudinally ויוו באמצעות semiautomated microcomputed מבוססי טומוגרפיה כמותיים וניתוח מבני.

Semiautomated האורך מבוסס-טומוגרפיה Microcomputed כמותיים ניתוח מבנה של מודל הקשורות אוסטיאופורוזיס שבר בחוליות עכברוש עירום

הפרוטוקול המוצע כולל גישה גלובלית להערכת היווצרות עצם בהקשר של התחדשות עצם באמצעות אנליזות מולטימודאליות. מטרתו לספק מידע איכותי וכמותי על היווצרות עצם חדשה, לשפר את הקפדנות והתוקף של מחקרים בסיסיים ופרה-קליניים.

אפיון מקיף של מינרליזציה של רקמות במודל Ex Vivo

מודל הפגיעה במח העצם של העכברים הוא כלי שימושי לחקר אוסטאוגנזה לאחר לידה באמצעות התעצמות פנימית. פרוטוקול כירורגי פשוט זה מתאר את הליך אבלציה של מח העצם להערכה במורד הזרם של היווצרות עצם חדשה ותגובות תאיות לאחר פציעה.

מתודולוגיה משופרת לחקר אוסטאוגנזה לאחר לידה באמצעות אוסיפיקציה אינטרמברנית במודל פגיעה במח עצם של עכברים

כאן, אנו מציגים גישת ריפוי גנטי המספקת צ'יטוזן מצופה ABE ישירות למח העצם על ידי הזרקה תוך גרמית.

העברת גנים וביטוי משופרים באמצעות הזרקה תוך גרמית של חלקיקי צ'יטוזן עטופים בעריכת אדנין בסיס פלסמידים

למד טכניקת העברת גנים חדשנית להבדלת אוסטאוקלסטים in vivo באמצעות הזרקת DNA מיני-סירקול דרך וריד הזנב בעכבר. השיטה מאפשרת חקר השפעת ציטוקינים על אוסטאוקלסטוגנזה ומספקת פרוטוקולים מפורטים לגידול תאים ממקרופאגים ממח עצם של עכברים ומ-PBMC אנושיים.

רומן In vivo טכניקה וין העברה במבחנה לחקר אובדן עצם בפרעות השלד והשרירים

גלה סרטונים נוספים