Name: המהיר Genotyping של בעלי חיים ואחרי הקמת תרבויות עיקריות של נוירונים במוח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: למד שיטה מהירה לגנוטיפינג עכברים ניידים ולהקמת תרביות נוירונים ראשוניות על שכבת תומכת של תאי גליה. פרוטוקול זה מאפשר מחקר יעיל של מודלים גנטיים הנגררים למוות מיד לאחר הלידה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לחוקרים מאוניברסיטת איווה, לד"ר לואיס טסדור, אינס מרטינס ובוורלי דייווידסון על ההנחיות וההערות המועילות בנוגע לתרביות סטריאטליות, ולד"ר קארה גורדון, ניקול בודה ופדרו גונזלס-אלגרה על הסיוע והדיונים בגנוטיפ. אנו מודים גם לד"ר אריק ויאנד (מערכות זיהוי וסימון של בעלי חיים) על הערות מועילות בנוגע לקעקועים, ולד"ר שוטארו קטסוראביאשי (אוניברסיטת פוקואוקה) על הערות מועילות בנוגע לתרבות העכברים. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מאיגוד הלב האמריקאי, משרד ההגנה (פרס תוכנית המחקר הרפואי W81XWH-14-1-0301), קרן המחקר הרפואי של דיסטוניה, קרן אדוארד מלינקרודט ג'וניור, הקרן הלאומית למדע וקרן וייטהול (NCH).

המחבר (Zhengmin Huang) הוא נשיא EZ BioResearch LLC המייצרת ריאגנטים המתוארים במאמר זה.

הפרוטוקול המובא כאן כולל נהלים לקעקוע לתייג / לזהות עכברים, לgenotyping עכברים מטיפי זנב, ולתאי עצב במוח עכבר culturing בצפיפות נמוכה. בסיבוב ניסויים באמצעות 6-8 גורים אחד, נהלים אלה בדרך כלל דורשים ~ 0.5 שעות, ~ 4 שעות ו~ 2 שעות, בהתאמה, על סך של 6-7 שעות. זה עושה את זה מעשי לניסוי אחד כדי להשלים את כל ההליכים הנדרשים מעת הלידה &quot;הגורים לציפוי של תרבויות עצביות - בתוך פחות מיום עבודה אחד (למעט הכנה המוקדמת של שכבות מזין גליה). <p class="jove_content" style=";text-align:ri...

מודלים של מכרסמים של מחלות גנטיות הוכיחו שימושיים בהקמת הפונקציות הפיזיולוגיות של חלבונים וחומצות גרעין נורמלים, כמו גם את השלכות pathophysiological של פגמים באלה. דוגמאות כוללות עכברים חסרים לחלבונים מעורבים בתפקודים תאיים מפתח, כמו גם מודלים של עכברים של הפרעות כגון מחלת אלצהיימר. עם זאת, מניפולציות גנטיות מסוימות יכולות להוביל לקטלני בילוד זמן קצר או כמה ימים לאחר לידה. במקרים אלה, תרביות תאים עיקריות הן כלי חשוב, כי ניתן להשיג תאי חיים מהגורים העובריים או ילוד לפני המוות, הם יכולים להישמר במשך לפחות כמה שבועות במבחנה, ובמשך הזמן הזה התפתחות עצבית מוקדם יכולה להיות מלווה ב ניסויים ביוכימיים, פונקציונליים וצורניים. לתרבויות העיקריות, זה יכול להיות מועיל לצלחת הנוירונים בצפיפות נמוכה; זה עושה את זה אפשר לדמיין את somata הבודד, דנדריטים, פירי axonal וtermi עצבאלכסונים ברזולוציה מרחבית גבוהה. עם זאת, ההישרדות וההתמיינות של תאי עצב בצפיפות נמוכה בדרך כלל דורש כי הם מצופים בשכבת מזין גליה, שיתוף תרבותי עם תאי גלייה בהעדר המגע פיזי עימם, או בתרבית בינונית המותנה בגליה 1. הקמת תרבויות עצביות בצפיפות נמוכה בשכבות מזין גליה יכולה להיות תלויה במהיר ואמין genotyping מראש - תוך כמה שעות בניגוד לכמה ימים. מהירות היא חשובה במיוחד כאשר גנוטיפ העצבי צריכה להיות מתאים לזה של שכבת מזין גליה מוכנה מראש. כדוגמא מעשית יותר, ייתכן שיהיה צורך להחליט איזה גורים שגנוטיפ להשתמש בתרבויות יצירה, כדי לייעל את היעילות של ניסוי. כאן אנו מדגימים את הפרוטוקול עובד שהיה בשימוש כבר genotyping עכבר מהיר, פשוט ואמין בפרסומים קודמים 2-6. זנבות עכבר ומשמשות ערכה זמינה מסחרי. פרוטוקול זה כולל מיצוי בשלב יחיד של חומצות גרעין מהרקמות, ולא דורש צעד טיהור גרעין חומצה ולא שימוש במאגר סיום (&quot;להפסיק פתרון &#39;). האמינות של שיטת genotyping זה בא לידי ביטוי בהצגת התוצאות של סדרה של בדיקות, כאשר הבדלים הם הציגו ביחס לסכום התחלתי של הדגימות, גילם של בעלי החיים ואת אורכו של amplicons PCR. ערכה זו מציעה את היתרונות של מיצוי ואמינות אוטומטיים. למען להיות מקיף, השימוש בקעקוע לזיהוי לטווח ארוך של עכברי genotyped הוא הוכיח גם. קעקוע מושגת על ידי החלת דיו קעקוע לדרמיס של העור (מתחת לאפידרמיס) 7. הליך מתואר לקעקוע כפות הרגלי של עכברים ילודים או יום 1 ישן, אם כי ניתן ליישם קעקועים לחלקים אחרים של הגוף, כגון זנבות ורגליים, ועניםals בכל הגילים. בנוסף, הליכים יהיו הפגינו לציפוי ונוירונים culturing עכבר בצפיפות נמוכה, המבוססים על הכנה מותאמת סוגים שונים של שכבות מזין גליה 2,8 של. אנו משתמשים במודל גנטי עכבר של דיסטוניה DYT1 הפרעת נוירולוגית בירושה - הפרעת תנועה אוטוזומלית דומיננטית הנגרמת על ידי מוטציה בגן TOR1A (c.904_906delGAG / c.907_909delGAG; p.Glu302del / p.Glu303del) 9. החלבון המקודד, torsinA, שייך ל&quot; ATPases הקשורים לפעילויות מגוונות סלולריות &quot;משפחה של חלבונים (+ AAA), שחבריה בדרך כלל לבצע פעולות כמו מלווה-, סיוע ב: חלבון התגלגלות, פירוק חלבון מורכב, סחר בקרום, ואיחוי שלפוחית 10-13. תוצאות המוטציה במחיקה במסגרת של קודון לחומצה גלוטמית, ויכולות להוביל לתופעה של &#39;התחלה המוקדמת של כללי דיסטוניה המבודדת&#39; 14,15. עם זאת, בדרךמנגנוני ophysiological אחראים להפרעה זו יישארו הבין היטב. במודל של עכברי נוק-ב, אלל מוטנטי הוא Tor1a tm2Wtd, ציינו להלן כTor1a ΔE. עכברי מטופלים אנושיים ברי-קיימא וגנטי לחקות עם דיסטוניה DYT1 הטרוזיגוטיים ΔE-torsinA בנוק-, ואילו הומוזיגוטים לדפוק בעכברים למות לאחר הלידה 16,17, עם זמן האחזור למוות לאחר לידה מושפעת מרקע גנטי 18. המוות המוקדם של עכברים לדפוק בהומוזיגוטים מחייב ששני genotyping של בעלי חיים ואת הקמתה של תרבויות עצביות הושלמו במהירות. כדוגמא נוספת של גנוטיפ, Tfap2a (גורם שעתוק AP-2α, הפעלה משפר מחייב 2α חלבון) ישמשו. החלבון מקודד על ידי הגן הזה הוא חשוב בויסות תהליכים תאיים רבים, כגון ריבוי, בידול, הישרדות ואפופטוזיס 19.

המהיר genotyping של בעלי חיים ואחרי הקמת תרבויות עיקריות של נוירונים במוח

Rapid Genotyping of Animals Followed by Establishing Primary Cultures of Brain Neurons

ניתוח ברזולוציה גבוהה של המורפולוגיה והתפקוד של תאי עצב ביונקים לעתים קרובות דורש genotyping של בעלי חיים בודדים ואחרי הניתוח של תרבויות העיקריות של תאי עצב. אנו מתארים מערכת של נהלים ל: תיוג עכברי יילוד להיות genotyped, genotyping המהיר, והקמת תרבויות בצפיפות נמוכה של תאי עצב במוח מעכברים אלו. עכברים בודדים מסומנים על ידי קעקוע, שמאפשר זיהוי לטווח ארוך שנמשך לבגרות. Genotyping על ידי הפרוטוקול המתואר הוא מהיר ויעיל, ומאפשר להפקה אוטומטית של חומצות גרעין עם אמינות טובה. זה שימושי בנסיבות שבו זמן מספיק לgenotyping הקונבנציונלי אינו זמין, למשל, בעכברים הסובלים מהקטלניות בילוד. תרבויות עצביות עיקריות נוצרות בצפיפות נמוכה, המאפשרת ניסויי הדמיה ברזולוציה מרחבית גבוהה. שיטת תרבות זו דורשת ההכנה של שכבות מזין גליה לפני ציפוי עצבי. Protocol מיושם במלואו למודל עכבר של דיסטוניה DYT1 הפרעת תנועה (העכברים לדפוק בΔE-torsinA), ותרבויות עצביות מוכנות מן ההיפוקמפוס, קליפת המוח וסטריאטום של עכברים אלו. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם על עכברים עם מוטציה גנטית אחרת, כמו גם לבעלי חיים ממינים אחרים. יתר על כן, רכיבים בודדים של הפרוטוקול יכולים לשמש למשנה פרויקטים בודדים. כך פרוטוקול זה יהיה יישומים רחבים, לא רק במדעי המוח, אלא גם בתחומים אחרים של מדעים ביולוגיים ורפואיים.

כדוגמא ליישום של פרוטוקול זה, תוצאות נציג מוצגות לתיוג עכברים על ידי קעקוע, genotyping אמין תחת תנאי ניסוי שונים, והקמת תרבויות עצביות עיקריות בשכבות מזין גליה. קִעקוּעַ יילוד גורים תויגו על כריות כף הרגל באמצעות מערכת קעקוע ("יילוד" באיור 1). התוויות נשארו גלויות לעין בשעה 3 שבועות ("3 שבועות בן") וגיל 32 שבועו...

אנו מתארים נהלים לתיוג וgenotyping עכברי יילוד ויצירת תרבויות עצביות עיקריות מהם. Genotyping הוא מהיר, יעיל ואמין, ומאפשר למיצוי גרעין חומצה אוטומטי. זה שימושי במיוחד עבור עכברי neonatally קטלניים והתרבויות שלהם שדורשות השלמה מוקדמת של genotyping.

המהיר Genotyping של בעלי חיים ואחרי הקמת תרבויות עיקריות של נוירונים במוח

High-resolution analysis of the morphology and function of mammalian neurons often requires the genotyping of individual animals followed by the analysis ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא ליצור גנוטיפ של עכברים שזה עתה נולדו וליצור תרביות עצביות בצפיפות נמוכה על שכבת הזנה גליאלית. זה מושג על ידי גנוטיפ מהיר של עכברים שזה עתה נולדו באמצעות קצות הזנב שלהם בשלב השני. באותו יום, המוחות מנותחים ומתורבתים כשכבות הזנה גליאליות.לאחר מספר שבועות, קבוצה נוספת של עכברים שזה עתה נולדו עוברת גנוטיפ מהיר ותאי עצב נוצרים ממוחות החיה לתרבית על שכבות ההזנה הקודמות. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בשיטה זו לגנוטיפ מהיר ואמין כמו גם ליצירת נוירונים ותאי גליה בריאים. ישנם שני יתרונות עיקריים לפרוטוקול זה.האחת היא שאנו יכולים לתרבית נוירונים בריאים בצפיפות נמוכה מאוד לניסויי הדמיה על ידי ציפוי שלהם על שכבת עובר גליה. היתרון השני הוא שניתן לבצע גנוטיפ של עכברים שזה עתה נולדו תוך מספר שעות, מה שמאפשר התאמה של הגנוטיפים של הנוירונים ושכבת העובר של הגליה. אני עוזרת מחקר במעבדת הרטה.אדגים את הנהלים לגנוטיפ ותרביות. התחל בהוספת 200 מיקרוליטר של תמיסת מיצוי DNA לכל צינור PCR המכיל דגימה. הנח את רצועת הצינור לתוך מחזור תרמי PCR ולאחר מכן התחל את מיצוי ה-DNA בסיום המיצוי.הסר את רצועת הצינור מהמחזור התרמי והפוך את הצינורות חמש פעמים. לאחר מכן העבירו ארבעה מיקרוליטרים של תמצית DNA מכל דגימה לצינור שאינו בשימוש על רצועת שמונה צינורות וערבבו את הדגימה עם 10 מיקרוליטר של שני XPCR מוכנים. מערבבים שניים, שני מיקרוליטרים של פריימרים מעורבים קדימה ואחורה, וארבעה מיקרוליטרים של מים ללא נוקלאז.עבור כל דגימה, הנח את הדגימות במחזור תרמי והתחל את תוכנית הרכיבה התרמית. בסיום התוכנית, טען 20 מיקרוליטר מכל דגימה מוגברת או סמן משקל מולקולרי ישירות לבאר המתאימה של ג'ל ארוס. לאחר מכן הפעל את הג'ל ורכוש תמונות פלורסנט של הרצועות באור אולטרה סגול.כדי לזהות את תוצרי הדנ"א המוגברים, התחילו בהסרת האזורים המעניינים מכל המיספרה של המוח ולאחר מכן העבירו את רקמות המוח לתוך שפופרת של 15 מיליליטר. הניחו לרקמה להתיישב בתחתית הצינור ואז החליפו את התמיסה מהחלק העליון של הפרוסות בחמישה עד 10 מיליליטר קר כקרח. תמיסת האנק עם או בלי סרום בקר עוברי כפי שצוין קודם, שואב לחלוטין את כל התמיסה.לאחר הכביסה הרביעית, השתמש במזרק של שלושה מיליליטר כדי לסנן שני מיליליטר של ניסיון טרי המכיל תמיסת עיכול דרך מזרק של 0.2 מיקרומטר. סננו ישירות לתוך הצינור המכיל את רקמות המוח ותנו לטריפסין להתקדם בטמפרטורת החדר. לאחר 13 דקות, נטרל את התגובה על ידי שאיבת רוב תמיסת הטריפסין ולאחר מכן הוספת שבעה עד 10 מיליליטר תמיסת האנק קר כקרח עם סרום בקר עוברי.לאחר מכן שטפו את הטישו בתמיסת האנק עם או בלי סרום בקר עוברי כפי שהודגם זה עתה. לאחר מכן, סנן שני מיליליטר של תמיסת דיסוציאציה על רקמות המוח. לאחר מכן נתק מכנית את התאים עם טרייר עדין 10 עד 20 פעמים באמצעות PE מלוטש אש מכותנה סתום באש שלך.המשך בטרייר עד שחלקי הרקמה הגלויים נעלמים. המתן שלוש דקות עד שהחתיכות הקטנות יתייצבו ולאחר מכן השתמש בפיפטה PEs כדי להעביר כ-1.5 מיליליטר מהתמיסה לתוך צינור חרוטי של 15 מיליליטר המכיל שלושה מיליליטר תמיסת האנק קרה כקרח עם סרום בקר עוברי להסתובב במורד הצינורות למשך 13 דקות ב-185 גרם וארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן שאפו בזהירות את הסופרנטנט באמצעות אותה פיפטת פסטר.השעו בעדינות את הגלולה במיליליטר אחד של מדיום ציפוי טרום חם. לאחר מכן מוסיפים כארבעה מיליליטר של מדיום ציפוי חם מראש. העבירו את תרחיף התאים לבקבוק תרבית T 25 לא מצופה והניחו את הבקבוק באינקובטור תרבית תאים.ביום אחד במבחנה, שטפו את התאים פעמיים עם חמישה מיליליטר של מדיום ציפוי קר כקרח, אחד על ידי הטיה עדינה של הבקבוק מספר פעמים בתנועה מסתחררת במשך שישה עד תשעה ימים במבחנה, הניחו 100 מיקרוליטר של חומר ציפוי עם חלבוני מטריצה חוץ-תאיים על החלקות כיסוי זכוכית בצלחת תרבית תאים והניחו את המנה בחממת תרבית התאים. למחרת יש לשטוף את הבקבוק על ידי שאיבת כל התמיסה בתוך הבקבוק והוספת כ -13 מיליליטר תמיסת האנק קרה כקרח. ואז שאפו את התמיסה לחלוטין.לאחר מכן, סנן ארבעה מיליליטר של טריפסין EDTA בתוספת תמיסת DNA ישירות על התאים ואפשר לתאים להתנתק מבקבוק תרבית התאים באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס. לאחר 13 דקות, נטרלו את התגובה עם שני מיליליטר של סרום בקר קר כקרח, 100% עוברי, והשתמשו בפיפטה של 5 עד 10 מיליליטר כדי להעביר את תרחיף התא לצינור חרוטי של 15 מיליליטר. לאחר מכן שטפו את התאים על ידי הוספת כארבעה מיליליטר של תמיסת האנק קרה כקרח עם צנטריפוגה בסרום בקר עוברי, ולאחר מכן החזרת הגלולה למיליליטר אחד של מדיום ציפוי טרום חם. אחד.כעת שאפו את חומר הציפוי לחלוטין מהכיסוי, החליקו וצלחו כ-50 מיקרוליטר מתאי הגליה התלויים על החלקות הכיסוי. כדי לבסס את שכבת הזנת הגליה, דגרו על תאי הגליה למשך 20 עד 60 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן הוסיפו מיליליטר אחד של מדיום ציפוי טרום חם, אחד לכל החלקת כיסוי בזמן הוספת אמצעי הציפוי. כדאי להשתמש בפיפטה אחרת כדי ללחוץ כלפי מטה על היקף החלקת הכיסוי כך שהחלקת הכיסוי לא תצוף במדיום.לאחר תרבית בן לילה. החלף את המדיום במיליליטר אחד של מדיום ציפוי טרי חם, אחד ביומיים-שלושה. במבחנה, הוסף 10 מיקרוליטר של מעכב מיטוטי לכל תרבית שכבת הזנה כדי לעכב את שכפול ה-DNA והתפשטות תאי גליה לאחר שבעה עד תשעה ימים.במבחנה, החלף את מדיום התרבות במדיום ציפוי חם מראש שניים. לאחר מכן צלחת בעדינות כ-50 עד 100 מיקרוליטר של תאי עצב עכבר בציפוי בינוני חם מראש שניים על כל שכבת הזנה גליאלית. בתמונה זו, הגן הוגבר מ-DNA גנומי, שבודד מקליפס הזנב של יילוד, של גורים הטרוזיגוטיים והומוזיגוטים מסוג פרא של מודל הדיסטוניה של נוקין DYT.רצועות נפרדות לסוג הבר ולאללים שעברו מוטציה נראות בבירור. באיור הזה מוצגים שני שדות מייצגים מתרבית עצבית בהיפוקמפוס של עכבר. הם נוצרו מ-CA שלוש, CA אזור היפוקמפוס אחד של עכברים מסוג בר.14 יום לאחר הציפוי על CA 3, CA שכבת הזנה גליאלית אחת בהיפוקמפוס של עכברים מסוג בר בתמונות הניגודיות של הפרעות דיפרנציאליות, ניתן להבחין בסימנים של בריאות טובה, כגון שוליים ברורים של תהליכים עצביים מורחבים בגוף התא העצבי, ושכבה אחידה יחסית של תאי גליה. צביעה כימית נוספת של אימונו-ציטו למפת הסמנים העצביים. שנית, ניתן לצפות גם בזיהוי הנוירונים והתהליכים שלהם בכל שדה.באמצעות פרוטוקול זה, ניתן להשלים גנוטיפ בסבב תרבית אחד תוך 67 שעות. פרוטוקול זה שימושי במיוחד לתרבית נוירונים של עכברים מהונדסים גנטית שיכולים למות מספר ימים לאחר הלידה.

rapid-genotyping-animals-followed-establishing-primary-cultures-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

ב electroporation ברחם היא שיטה ערך עבור transfecting ובתאים עצביים in vivo. בהתאם למיקום של אלקטרודות ואת timepoint ההתפתחותי של electroporation, תת מסוימים של תאים בקליפת המוח יכול להיות ממוקד. התאים הממוקדים אז יכול להיות מנותח in vivo או במבחנה על ההשפעות של שינוי גנטי.

ברחם electroporation ואחריו תרבות עצבית ראשונית ללימוד פונקציה ג&#39;ין בתת קבוצה של נוירונים קליפתיים

הפרוטוקול מתאר את מערכת מודל יעיל לשחזור ללמוד הרפס סימפלקס סוג הנגיף 1 (HSV-1) ההשהיה מחדש. Assay מעסיקה הומוגניות תרבויות נוירונים אוהדים ומאפשר לנתיחה מולקולרית של וירוסים נוירונים אינטראקציות באמצעות מגוון של כלים, כולל התערבות RNA וביטוי של חלבונים רקומביננטיים.

תא עצב ראשי מערכת התרבות לחקר וירוס הרפס סימפלקס המתנה ו הפעלה מחדש

שיטה של ​​התחקות נוירונים הקשורים synaptically מתוארת. אנו משתמשים סגוליים TVA של תא במעלה זרם כדי לבחון אם אוכלוסיית תא של עניין מקבלת קלט סינפטי מסוגי תאים מוגדרים מבחינה גנטית.

איתור נגיפי של מעגלים עצביים מוגדרים גנטי

הסרטון מדגים טכניקה לתרבית אסטרוציטים ראשוניים מקליפת המוח של החולדה. קליפת המוח מנותקת מכנית כדי לקבל תרחיף תאי גליה הומוגני, אשר לאחר מכן מצופה על לוחות מצופים פוליפפטיד כדי לקדם התרבות סלקטיבית של אסטרוציטים. לאחר מכן, האסטרוציטים מנותקים אנזימטית מהלוחות ומועברים למדיה חדשה, המאפשרת תרבית של אסטרוציטים טהורים.

יצירת תרבית ראשונית של אסטרוציטים ממוחו של גור חולדה

מתואר פרוטוקול ליצירת מערכת תרבית משותפת המורכבת מתאי עצב שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs), נוירונים ראשוניים בקליפת המוח ואסטרוציטים. מערכת קו-תרבית זו מאפשרת לזהות היווצרות של מגעים ומעגלים סינפטיים בין נוירונים חדשים שמקורם ב-iPSC לבין נוירונים קיימים בקליפת המוח המבטאים channelrhodopsin-2.

גישת optogenetic להערכת יצירת קשרים עצביים במערכת Co-תרבות

הגורמים לניוון של נוירונים דופמינרגיים במוח התיכון במהלך מחלת פרקינסון אינם מובנים במלואם. מערכות תרבית תאיות מספקות כלי חיוני לחקר התכונות הנוירופיזיולוגיות של נוירונים אלה. כאן אנו מציגים פרוטוקול אופטימלי, שניתן להשתמש בו למודלים במבחנה של ניוון עצבי.

בידוד, תרבות והטווח ארוך תחזוקה של יסודיים mesencephalic דופאמין נוירונים ממוח עוברי מכרסם

אנו לשנות וליישם פרוטוקול שפורסם בעבר המתאר את הבידול מהירה, לשחזור, ויעיל של תאי גזע מושרים אנושיים (hiPSCs) לתוך נוירונים בקליפת המוח מעוררים 12. באופן ספציפי, השינוי שלנו מאפשר שליטה של ​​צפיפות תאים עצבית ושימוש על מערכים מיקרו-אלקטרודות למדוד תכונות אלקטרו ברמת הרשת.

בידול העצבי המהיר של גזע תאים המושרה pluripotent למדידת פעילות רשת על מערכי מייקרו-אלקטרודה

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור הדור הספונטני של נוירוספירות מועשר בתאי מחולל קדמון בצפיפות גבוהה מצופה נוירונים. במהלך אותו ניסוי, כאשר הנוירונים מצופים בצפיפות נמוכה יותר, הפרוטוקול גם גורם לתרבויות ממושכות של עצב החולדות הראשי.

הדור של נוירוספירות מ מעורב היפוקמאל ראשוני ונוירונים בקליפת המוח מבודדים מ E14-E16 ספראג העובר עכברוש

פרוטוקול זה מציג דרך ייחודית ליצירת תרביות תאים של מערכת העצבים המרכזית ממוחות עכברים עובריים ביום ה-17 לצורך מחקר נוירו(אימונו)לוגי. ניתן לנתח מודל זה באמצעות טכניקות ניסיוניות שונות, כולל RT-qPCR, מיקרוסקופיה, ELISA וציטומטריית זרימה.

ביסוס תרביות תאי עצב וגליה מעורבים ממוחות עכברים עובריים לחקר זיהומים וחסינות מולדת

פרוטוקול זה מתאר תרבית מיקרוגליה-נוירונים שנוצרה מתאים עצביים ראשוניים שבודדו מעוברי עכברים בימים עובריים 15-16 ומתאי מיקרוגליה ראשוניים שנוצרו ממוחם של עכברים ילודים בימים 1-2 שלאחר הלידה.

יצירה וטיפוח משותף של תאי מיקרוגליה ראשוניים של מורין ונוירונים קורטיקליים

למד שיטה מהירה לגנוטיפינג עכברים ניידים ולהקמת תרביות נוירונים ראשוניות על שכבת תומכת של תאי גליה. פרוטוקול זה מאפשר מחקר יעיל של מודלים גנטיים הנגררים למוות מיד לאחר הלידה.

המהיר Genotyping של בעלי חיים ואחרי הקמת תרבויות עיקריות של נוירונים במוח

גלה סרטונים נוספים