Name: עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: למדו ליצור מודל שבץ איסכמי אמבולי בעכברושים באמצעות עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה עם קרישי דם הומולוגיים. שיטה זו מחקה מצב שבץ אנושי ומתאימה למחקר טיפולים תרומבוליטיים קליניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי HL087990 מענקי המכונים הלאומיים לבריאות (G.L.).

הצהרת אתיקה: חולדות ספראג-Dawley מבוגרת זכר (במשקל 330-380 ז) היו בשימוש בפרוטוקול זה. פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) במדעי בריאות LSU המרכז-Shreveport ועומד ב&#39;המדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה &quot;(מהדורה השמינית, האקדמיה לאומית למדעים, 2011 ). .1 הכנת Tube PE-50 השתנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק צינור PE-50 ארוכי 30 סנטימטר מעל אש גז על ידי ידיים, לרכך את הצינור בהדרגה. בעדינות למתוח את הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר נקודה על הצינור נמתח באמצעות קליפר דיגיטלי (איור 1), לסמן אותו, ולחתוך את PE-50 הצינור הותאם למגזר ארוך 25 סנטימטר עם קצה 1 סנטימטר ארוך (מחוץ קוטר: .30-0.34 מ&quot;מ). </li></ol> 2 הכנת קרישי דם ההומולוגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברוש עם isoflurane (5% לזירוז, 2-3% לתחזוקה) בN 70% 2 O ו30% O &lt;תת&gt; 2 על ידי מסיכת פנים לפני איסוף דם. לאשר הרדמה על ידי קמצוץ הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע cannulation עורקי הירך של עכברוש תורם עם שיטה שפורסמה 4 ולהעביר דם עורק הירך ישירות לתוך PE-50 צינור ארוך 20 סנטימטר. מניחים את הצינור לשעה 2 בטמפרטורת חדר לדם להיקרש, ולאחר מכן לשמור על הצינור ל22 שעות ב 4 ° C.. הערה: Cannulation מבוצע באמצעות טכניקת ספטית, כמתואר בשלב 3.1. עכברוש התורם הוא התאושש לדגימה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את צינור PE-50 ל50 מגזרי מ&quot;מ ולשטוף את הקריש מהצינור לתוך צלחת פטרי המכילה סטרילי מלח רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את 50 מ&quot;מ הקריש ארוך לתוך ארוך 60 מ&quot;מ PE-10 צינור ולחבר את כל קצה של PE-10 צינור לצינור ארוך 20 סנטימטר PE-50 מחובר למזרק 1 מ&quot;ל המכיל מלח רגיל עם 23 מחט G (איור 2) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Shift הקריש על ידי תנועה לסירוגין רציפה ממזרק אחד למשנהו במשך 5 דקות, אשר יכולה להסיר את תאי דם שלהקריש ולמזער השביר של קריש קרוש extravascular, מבלי לשבש את ליבת הפיברין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הקריש למגזר ארוך 40 מ&quot;מ ולהעביר את קטע הקריש לPE-50 קטטר שונה כמתואר בשלב 1.2 בתנאי ספטית. הערה: כל צינורות PE מעוקרים עם אתילן אוקסיד. </li></ol> .3 חסימת עורק תסחיפים התיכון מוחין (איור 3 א &#39;, ב&#39;) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את כל הכלים כירורגיים ידי מעוקר (מינימום 121 מעלות צלזיוס, 15 PSI, ל15 דקות). לטהר את שולחן הניתוחים וציוד כירורגי הקשורים באמצעות אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברוש עם isoflurane כמתואר בשלב 2.1. בדוק את עומק ההרדמה על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן על שני רגליים האחוריות, וכל תנועה שנצפתה (משיכת הכפה) מצביעה על כך שבעלי החיים הוא לא מספיק בהרדמה לעשות ניתוח. למרוח כמות קטנה של משחה וטרינר בשני העיניים כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. לגלח את הפרווה על הגחון הצוואר והראש מחדשgions עם קוצץ חשמלי לחשוף את אזורי העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה במצב שכיבה על כרית חימום. הכנס בדיקה, שליטה בפי הטבעת ולשמור על טמפרטורת גוף בין 36.5-37.5 מעלות צלזיוס באמצעות יחידת שמיכת שליטת homeothermic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את העור המגולח ופרווה המקיפה עם 10% povidone- יוד ואחריו 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו האמצע של 2 סנטימטר ארוך על הצוואר תחת מיקרוסקופ לנתח. השתמש בכלי כתיבה כדי לחשוף את שדה הניתוח ולנתח את העורק הימני הנפוץ תרדמה (CCA), עורק תרדמה חיצוני (ECA), עורק תרדמה פנימי (ICA), ועורק pterygopalatine (PPA) חופשי מעצבים שמסביב וfascia (איור 3 א). הערה: לפני הניתוח, לשנות כפפות סטריליות אם לא עוזר עוזר להכין את בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את המרכז לאמנות עכשווית חופשית מהעצבים שמסביב (מבלי לפגוע בעצב המחנק) ומקום תפר 5-0 משי סטרילי תחת העורק. לקשור קשר תלוש (מס &#39;1) ולתפוס את התפר באמצעות hemos קטןמידה ולמשוך לימדה כלפי הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את ECA ושני הסניפים שלה, את העורק העורפי (OA) ועורק מעולה בלוטת התריס (STA). להקריש שני סניפים באמצעות יחידת electrosurgical וטרינרים. הנח שתי חתיכות של תפרי משי סטרילי 6-0 תחת ECA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפריד בין שני המשי ממוקם מתחת לעורק, חתיכה אחת לכיוון הראש (קצה הדיסטלי) והשני לכיוון הגוף. לקשור קשירה הדוקה (מס &#39;2) בצד הקרוב ביותר לראש, לתפוס את המשי עם hemostats הקטן ולמשוך לימד לכיוון הראש. הכן קשר רופף (# 3) עם המשי האחר לשימוש מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את ICA וPPA מהעצבים שמסביב (מבלי לפגוע בעצב המחנק). לקשור את PPA עם תפר 6-0 (מס &#39;4). הפוך קשר להחליק עם 6-0 תפר סביב ICA (המס &#39;5). לחלופין, קליפ ICA באמצעות קליפ כלי דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך חור קטן (1/2 thru) לתוך ECA בין ההדוק (המס &#39;2) ו( # 3) חיבורי אותיות רופפות עם מספריים באביב בסגנון Vannas. הכנס את PE-50 אמבטיה שונהדואר המכיל קריש דם לתוך החתך ומראש להסתעפות של המרכז לאמנות העכשווית. הדק את המייתר הרופף (# 3) סביב לומן מספיק כדי לאבטח לשמר את הניידות של צינור שוכני ב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את ECA באתר של חור קטן כדי לשחרר את הגדם ומקם את הגדם מתחת להסתעפות של ECA ויק&quot;א; זה יאפשר הצינור הותאם להחליק בקלות לתוך ICA. פתח את ICA ובעדינות לקדם את הצינור מלומן של ECA לתוך ICA עד קצה הצנתר מגיע למקורו של MCA (~ 17 מ&quot;מ מההסתעפות). הערה: לפני הכנס את קצה הצינור לתוך ECA, על פני השטח החיצוניים של צינור סטרילי עם 70% אתנול, ולאחר מכן לשטוף עם מלח רגיל סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק את הקריש באמצעות PE-50 קטטר שונה יחד עם 10 μl של תמיסת מלח מעל 10 שניות באמצעות מזרק המילטון 100 μl (איור 3 ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשוך את הצנתר מECA 5 דקות מאוחר יותר. לקשור את ECA ולפתוח מחדש מרכז לאמנות עכשווית. לתפור את החתך בצוואר. </li></ol> .4 ניטור דם אזורי במוח זרימה (rCBF) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני חסימת MCA, לעשות חתך קו האמצע ארוך 1.2 סנטימטר בקרקפת כדי לחשוף את עצם הגולגולת. הסר את הרקמות על עצם הגולגולת עם מגרד שיניים ועסקות חלף גפן סטרילי. הערה: לפני הניתוח, אזור הקרקפת החשופה ופרווה מסביב לחטא עם 10% povidone- יוד ואחריו 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדוח חור בר קוטר 1.5 מ&quot;מ הממוקם ב2 מ&quot;מ אחורי ו 5 מ&quot;מ לרוחב גבחת באמצעות בר 0.7 מ&quot;מ כדורי נירוסטה (איור 4). הערה: שמור את הדורה ללא פגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החללית 0.5 מ&quot;מ מעל פני השטח הדורה. צג rCBF ב 0 (בסיס), 5, 15, 30, 60, 90, ו120 דקות לאחר אמבוליזציה ולהמשיך ב5, 15, 30, 45, ו60 דקות לאחר עירוי לוריד של tPA. לאחר המדידה האחרונה של rCBF, החתך בקרקפת סגור על ידי תפר. הערה: לפני חתך צוואר אנו מודדים rCBF כבסיס לפני occlus MCAיון. חסימת ההודעה MCA אנו מודדים rCBF לאחר סגירת איחוי החתך בצוואר. כך, חתך הצוואר נשמר סטרילי. </li></ol> טיפול .5 לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 2.5 מ&quot;ל של תמיסת מלח תת עורי על מנת למנוע התייבשות ולהזריק Buprenex (0.05 מ&quot;ג / קילוגרם, SC) מייד לאחר הניתוח וכל שעה 6-12 בהתאם לצורך להקלה על כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפסיק הרדמה isoflurane. מניחים את החולדה בחדר התאוששות וטרינרי 37 ° C (לשמור על חום בעלי חיים) ולשמור על תצפית. זה בדרך כלל לוקח 10 דקות לחולדה להתאושש מהרדמה. לאחר מכן, הכניס את בעלי החיים לכלוב מעוקר, למקם את מזון רטוב כמה בצלחת פטרי בכלוב, ולהחזיר את הכלוב לחדר עיקור בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 שעות לאחר שבץ, להרדים את העכברוש עם מנת יתר של נתרן pentobarbital (100 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף, IP). </li></ol> .6 ציון גירעון נוירולוגיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את ציון Bederson לפני ובשעה 2 לאחר אמבוליזציה. השתמש של דירוגקייל של 0-3 כפי שתואר בעבר 5: 0, העלאת העכברוש בזנב, בעלי החיים המשתרעים שני forelimbs לרצפה ושאינם מראים שום גירעונות אחרים (תנועה רגילה); 1, העלאת העכברוש בזנב, כופף את forelimb הנגדי; 2, ירד התנגדות לדחיפה לרוחב (וכיפוף forelimb) בלי שחג; 3, אותה ההתנהגות כמו בדרגה 2 עם חג. הערה: חולדות מראים ציון = 0 (אין גירעון) Bederson בשעה 2 לאחר אמבוליזציה אינן נכללות במחקר נוסף. </li></ol>

<ol><li>Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., Høyer, S., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+reproducible+cerebral+infarction+using+thrombotic+blood+clot+emboli%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).</li>
<li>Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+focal+embolic+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A rat model of focal embolic cerebral ischemia.</a> Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).</li>
<li>Dinapoli, V. A., Rosen, C. L., Nagamine, T., Crocco, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+MCA+occlusion%3A+a+precise+embolic+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Selective MCA occlusion: a precise embolic stroke model.</a> J. Neurosci. Methods. 154 (1-2), 233-238 (2006).</li>
<li>Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+arterial+and+venous+catheterization+for+blood+sampling%2C+drug+administration+and+conscious+blood+pressure+and+heart+rate+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements.</a> J Vis Exp. 59 (3496), (2012).</li>
<li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Tsuji, M., Nishimura, M. C., Davis, R. L., Bartkowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+middle+cerebral+artery+occlusion%3A+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).</li>
<li>Henninger, N., Bouley, J., Bråtane, B. T., Bastan, B., Shea, M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Doppler+flowmetry+predicts+occlusion+but+not+tPA-mediated+reperfusion+success+after+rat+embolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Laser Doppler flowmetry predicts occlusion but not tPA-mediated reperfusion success after rat embolic stroke.</a> Exp Neurol. 215 (2), 290-297 (2009).</li>
<li>Zhu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Annexin+A2+combined+with+low-dose+tPA+improves+thrombolytic+therapy+in+a+rat+model+of+focal+embolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Annexin A2 combined with low-dose tPA improves thrombolytic therapy in a rat model of focal embolic stroke.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 30 (6), 1137-1146 (2010).</li>
<li>Cheng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+inhibits+tissue+plasminogen+activator-induced+brain+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Activated protein C inhibits tissue plasminogen activator-induced brain hemorrhage.</a> Nat Med. 2 (11), 1278-1285 (2006).</li>
<li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. 21 (955), (2008).</li>
<li>Sicard, K. M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+focal+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Transl+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Animal models of focal brain ischemia.</a> Exp Transl Stroke Med. 1 (7), (2009).</li>
<li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Westendorp, W. F., Nederkoorn, P. J., Vermeij, J. D., Dijkgraaf, M. G., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-stroke+infection%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurol%22%5BJournal%5D)">Post-stroke infection: a systematic review and meta-analysis.</a> BMC Neurol. 11 (110), (2011).</li>
</ol>

אין לנו שום אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים לחשוף.

במחקר זה, שהדגמנו שיטה סטנדרטית לביצוע מודל שבץ MCAO תסחיפים בחולדה, שבמקורו של MCA הוא occluded על ידי קריש הפיברין העשיר. היתרון העיקרי של מודל זה הוא: החסימה של הגזע של MCA עם קריש דם הפיברין העשיר דומה לשבץ תרומבו בבני אדם, מודל שבץ תסחיפים הוא מתאים לביצוע חקירה פרה קלינית של טיפול Fibrinolytic, וכי מודל זה יכול לפתח לשחזור וצפוי אוטם נפח בתוך השטח המסופק על ידי MCA. לביצוע מודל תסחיפי MCAO, מבוא קריש, היציב...

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.
The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.

Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

שבץ הוא הגורם המוביל השלישי למוות בארצות הברית, אבל אפשרויות טיפול בשבץ חריף יישארו מוגבלות. נכון לעכשיו, עירוי תוך ורידי של activator plasminogen רקמות רקומביננטי (tPA) לפזר את קרישי הדם הוא הטיפול יעיל ביותר לשבץ איסכמי חריף. עם זאת, השימוש בtPA מוגבל על ידי החלון הטיפולי הצר שלה ועל ידי עלייה בסיכון לדימום תוך מוחי. לכן, יש צורך במודל של שבץ מתאים למחקר הטרומבוליטיות בדחיפות. עורק אמצע המוח (MCA) הוא העורק לרוב האפיל בשבץ בבני אדם. התמקד בעורק זה, מודלים של בעלי חיים רבים של שבץ איסכמי הוקמו. נכון לעכשיו, שני סוגים עיקריים של מודלים איסכמיה מכרסמים מוקד על ידי הגורם לחסימת MCA פותחו: מודל תפר מודל MCAO ותסחיפי MCAO. למרות שדגמי MCAO באמצעות טכניקת תפר intraluminal היו בשימוש נרחב במחקר שבץ מונע מנגנון, מודלים תפר אלה לאשבץ אדם לחקות, כעד 80% ממקרי שבץ אדם נגרמים על ידי פקקת או תסחיף. עם זאת, מודל שבץ תסחיפים באמצעות קרישי דם מחקה באופן הדוק שבץ אדם ונחשב מתאים למחקר הטרומבוליטיות. מודל תסחיפים זו פותח לראשונה בחולדות על ידי et Overgaard אל. 1 ב1992 ועוד מאופיין בet ג&#39;אנג אל. בשנת 1997 2 ועל ידי Dinapoli et al. ב2006 3. למרות MCAO תסחיפים זכה לתשומת לב גוברת, יש בעיות טכניות מתמודדות על ידי מעבדות רבות. במאמר זה, אנו מדגימים שיטה סטנדרטית לייצור MCAO תסחיפים עם קרישי דם הומולוגיים בחולדה הבוגרת, אשר יכול לפתח אוטם צפוי בתוך שטח MCA. הטכניקות שהוצגו במאמר זה אמורות לעזור לחוקרים להתגבר על בעיות טכניות להקמת מודל זה למחקר שבץ.

<table><tbody><tr><td>rh-tPA</td><td>כימי</td><td>Genentech</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td><td>כימי</td><td>Sigma</td><td>T8877</td></tr><tr>ציוד<td>אידוי הרדמה</td><td></td><td>Soma Technology</td><td>Drager Vapor 19.1&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>ציוד</td> <td>מקדחה מיקרו נטענת במהירות גבוהה</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>18000-17</td></tr><tr><td>מספריים מעוקלים</td><td>ציוד</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>14117-14</td></tr><tr><td>מלקחיים של דומונט (רפואי #7)</td><td>ציוד</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11270-20</td></tr><tr><td>מלקחיים של דומונט (רפואי #5)</td><td>ציוד</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11251-35</td></tr><tr><td>מספריים קפיציים בסגנון Vannas</td><td>ציוד</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td></tr><tr><td>תא התאוששות וטרינרי&nbsp;</td><td>ציוד&nbsp;</td><td>פקו שירותים&nbsp;</td><td>V1200&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>ציוד משאבת מזרק Genie plus</td><td>Kent</td><td>Scientific Corporation</td><td></td></tr><tr><td>ציוד מטריצת מוח עכברוש</td><td>Kent</td><td>Scientific Corporation</td><td>RBMA-310C</td></tr><tr><td>קליפר דיגיטלי&nbsp;</td><td>ציוד</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>501601</td></tr><tr><td>ניתוח מיקרוסקופ</td><td>ציוד</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>PZMTIII-BS-LWD</td></tr><tr><td>ציוד מזרק המילטון</td><td></td><td></td><td>דגם 710</td></tr><tr>יחידת<td>בקרת שמיכה הומותרמית</td><td>ציוד</td> מכשיר <td>הרווארד</td><td></td></tr><tr>ציוד<td>קוצץ חשמלי</td><td>Braintree</td><td>Scientific</td><td>CLP-9931</td></tr><tr><td>יחידה אלקטרוכירורגית וטרינרית</td><td>ציוד</td><td>MACAN Manufacturing Company</td><td>MV-9</td></tr><tr><td>ציוד מד זרימת דם</td><td></td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 4/30</td><td>ציוד</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7.2</td><td>תוכנה</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>מתכלה</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309659</td></tr><tr><td>מחט 23 גרם</td><td>מתכלה</td><td>בקטון, דיקינסון וחברה</td><td>305143</td></tr><tr><td>30 גרם מחט</td><td>מתכלה</td><td>בקטון, דיקינסון וחברה</td><td>305106</td></tr><tr><td>צינורות PE-50</td><td>מתכלים</td><td>בקטון, דיקינסון וחברה</td><td>427517</td></tr><tr><td>PE-10</td><td>צינורות מתכלים</td><td>בקטון, דיקינסון ושות</td>' <td>427400</td></tr><tr><td>6-0 תפר משי</td><td>מתכלה</td><td>מכשירי הרווארד</td><td>723287</td></tr><tr><td>5-0 תפר משי</td><td>מתכלה</td><td>מכשירי הרווארד</td><td>517607</td></tr></tbody></table>

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (mcao) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

טיפול קליני, הטרומבוליטיות עם שימוש בactivator plasminogen רקמות רקומביננטי (tPA) נשאר הטיפול היעיל ביותר עבור שבץ איסכמי חריף. עם זאת, השימוש בtPA מוגבל על ידי החלון הטיפולי הצר שלה ועל ידי עלייה בסיכון לשינוי המורגי. יש צורך דחוף לפתח מודלים שבץ מתאימים ללמוד סוכנים הטרומבוליטיות חדשים ואסטרטגיות לטיפול בשבץ איסכמי. נכון לעכשיו, שני סוגים עיקריים של מודלים שבץ איסכמי פותחו בחולדות ועכברים: MCAO התפר intraluminal ותסחיפים MCAO. למרות שדגמי MCAO באמצעות טכניקת תפר intraluminal היו בשימוש נרחב במחקר שבץ מונע מנגנון, מודלים תפר אלה אינם מחקים את המצב הקליני ואינם מתאימים ללימודים הטרומבוליטיות. בין הדגמים הללו, מודל MCAO תסחיפים מחקה באופן הדוק שבץ איסכמי אנושי ומתאים לחקירה פרה קלינית של טיפול טרומבוליטי. מודל תסחיפים זו פותח לראשונה בחולדות על ידי אובergaard et al. 1 ב1992 ומאופיין יותר על ידי Zhang et al. בשנת 1997 2. למרות MCAO תסחיפים צבר הגדלת תשומת לב, יש בעיות טכניות שעומדות בפני מעבדות רבות. כדי לענות על הצרכים גוברים למחקר הטרומבוליטיות, אנו מציגים מודל לשחזור ביותר של MCAO תסחיפים בחולדה, אשר יכול לפתח צפוי אוטם נפח בתוך שטח MCA. בקיצור, PE-50 צינור שונה הוא מתקדם בעדינות מעורק התרדמה החיצונית (ECA) לתוך לומן של עורק התרדמה הפנימי (ICA) עד קצה הצנתר מגיע למקורו של MCA. דרך הצנתר, קריש דם הומולוגי יחיד ממוקם במוצאו של MCA. כדי לזהות את ההצלחה של חסימת MCA, זרימת דם במוח האזורית הייתה פיקוח, גירעונות נוירולוגיות וכרכי אוטם נמדדו. הטכניקות שהוצגו במאמר זה אמורות לעזור לחוקרים להתגבר על בעיות טכניות להקמת מודל זה למחקר שבץ. &lt;/ P&gt;

Flowmetry הלייזר דופלר (LDF) שימש כדי לפקח rCBF במהלך האינדוקציה של איסכמיה המוחית 6,7. מעבדות רבות, כולל המעבדה שלנו כבר משתמשים rCBF לזהות בעלי חיים עם חסימת MCA מוצלחת, אבל הספים של תחילת המחקר נעו בין מעבדות הקשורים לאתר של מדידה. הבדיקה של LDF ממוקמת באחורי 2 מ"מ ו 5 מ"מ לרוחב לגבחת כפי שתואר לעיל 6. rCBF היה פיקוח על 0, 5, 15, 30, 60, 90, ו120 דקות לאחר ההזרקה של הקריש. על בסיס הנתונים אלה, רק בעלי חיים שמפגינים ירידה בrCBF&gt; 70% מנקודת ההתחלה נחשבים ...

במאמר זה, אנו מדגימים שיטה סטנדרטית ליצירת חסימת עורק מוח אמצעי תסחיף עם קרישי דם הומולוגיים (עשירים בפיברין) בחולדה בוגרת. מודל זה מחקה מקרוב שבץ איסכמי אנושי ומתאים למחקר פרה-קליני של טיפול טרומבוליטי בשבץ איסכמי.

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לפתח מודל של שבץ תסחיף בחולדה. זה מושג על ידי קשירה ראשונה, עורק הצוואר המשותף באופן זמני עם קשר החלקה ועורק הצוואר החיצוני הדוק ככל האפשר. לאחר מכן הניחו תפר רופף סביב ה-ECA מעל ההסתעפות.השלב השני הוא לבודד את עורק הטגו פלאטין ואת עורק הצוואר הפנימי ולקשור אותם באופן זמני בקשרי החלקה. לאחר מכן חותכים חור קטן לתוך ה- ECA בין הקשירה ההדוקה והרופפת. לאחר מכן, צינור P 50 השונה המכיל קריש דם מוחדר ל-ECA.לאחר מכן הופכים את הקטטר לתוך ה-ICA והצינור מתקדם בעדינות עד שקצה הצנתר מגיע למקור ה-MCA. השלב האחרון הוא להזריק את קריש הדם דרך הקטטר יחד עם מי מלח, ואז להוציא את הקטטר מה-ECA חמש דקות לאחר מכן. בסופו של דבר, 24 שעות לאחר השבץ, צביעת TTC משמשת להצגת אזורי האוטם בפרוסות המוח.היתרון העיקרי של טכניקה זו, מודל השבץ הקיים שלנו, כמו מודל MC, הוא שמודל שבץ תסחיף זה מחקה באופן הדוק את האדם הוא שבץ מוחי ושימוש, מתאים למחקר מקדים של טיפול SLI לשבץ איסכמי, מה שמדגים את ההליך יהיה כשל יציאת ד"ר A מהמעבדה שלי. לד"ר ג'ין ניסיון של יותר מ-10 שנים בביצוע מודלים של מעגלים אדומים. הדגמה חזותית של שיטה זו היא צעדים קריטיים הוא קושי בשמות.להכנת צינור PE 50 יש לרכך ולמתוח בהדרגה צינור PE 50 באורך 30 ס"מ מעל אש גז. בחר נקודה בצינור המתיחה באמצעות קליפר דיגיטלי. לאחר מכן חותכים אותו לקטע באורך 25 סנטימטר עם קצה באורך סנטימטר אחד וקוטר חיצוני בין 0.30 ל -0.34 מילימטרים.לאחר מכן, אספו את דם עורק הירך מחולדה מורדמת עם צינור PE 50 באורך 20 סנטימטר. הנח את הצינור בטמפרטורת החדר למשך שעתיים כדי שהדם ייקרש. לאחר מכן שמור את הצינור למשך 22 שעות בארבע מעלות צלזיוס.חותכים את צינור PE 50 למקטעים של 50 מילימטר ושוטפים את הקריש מהצינור לצלחת פטרי סטרילית המכילה מי מלח רגילים. העבירו את הקריש באורך 50 מילימטר לתוך צינור PE 10 באורך 60 מילימטר. לאחר מכן חבר כל קצה של צינור PE 10 לצינור PE 50 באורך 20 ס"מ, המחובר למזרק מיליליטר אחד המכיל מי מלח רגילים עם מחט בגודל 23 כדי להסיר את תאי הדם מבלי לשבש את ליבת הפיברין, להעביר את הקריש ממזרק אחד למשנהו ולהיפך ברציפות במשך חמש דקות לאחר מכן, חותכים את הקריש למקטע באורך 40 מילימטר ומעבירים את קטע הקריש לצנתר PE 50 שונה.בהליך זה, יש לעקר את כל כלי הניתוח על ידי חיטוי וחיטוי שולחן הניתוחים והציוד הכירורגי הנלווה עם 70% אתנול. לאחר מכן, יש להרדים את החולדה עם איזו פלואור ולהבטיח את עומק ההרדמה על ידי ביצוע צביטה בבוהן על כפות הרגליים האחוריות. יש למרוח כמות קטנה של משחה על העיניים כדי למנוע יובש.לאחר מכן הניחו את החולדה במצב שכיבה על כרית חימום. לאחר מכן, יש לגלח את הפרווה באזור צוואר הגחון בעזרת הקוצץ החשמלי לחטא את העור ואת הפרווה שמסביב עם 70% אתנול. הכנס בדיקה רקטלית ושמור על טמפרטורת הגוף בסביבות 37 מעלות צלזיוס באמצעות יחידת בקרת שמיכה הומאו.ואז תחת מיקרוסקופ מנתח, בצע חתך בקו האמצע באורך שני סנטימטרים בצוואר. השתמש במחזירים כדי לחשוף את שדה הניתוח. נתח את ה-CCA ללא העצבים שמסביב מבלי לפגוע בעצב הנרתיק, והנח תפר משי סטרילי חמש אפס מתחת לעורק.קשרו קשר החלקה ומשכו את התפר לכיוון הגוף. לאחר מכן, נתחו את ה-ECA ושני הענפים שלו, ה-OA וה-STA קרשו את שני הענפים באמצעות יחידה אלקטרוכירורגית וטרינרית, ואז הניחו שתי חתיכות של תפר משי סטרילי שש אפס מתחת ל-ECA, הפרידו את שני תפרי המשי המונחים מתחת לעורק, חלק אחד לכיוון הראש והשני לכיוון הגוף. קשרו קשירה הדוקה בצד הקרוב ביותר לראש.אחוז בתפר המשי עם המוסטטים קטנים ומשוך לכיוון הראש. הכן קשר רופף עם תפר המשי השני לשימוש מאוחר יותר. כעת נתח את ה-ICA וה-PPA מהעצבים הסובבים מבלי לפגוע בעצב הנרתיק.קושרים את ה- PPA עם תפר שש אפס. לאחר מכן צור קשר סביב ה-ICA או הצמד את ה-ICA באמצעות קליפס מיקרו-וסקולרי. לאחר מכן, חותכים חור קטן לתוך ה- ECA בין הקשירה ההדוקה והרופפת בעזרת מספריים קפיציים בסגנון ונציה.הכנס את צינור ה-PE 50 המותאם המכיל את קריש הדם לתוך החתך והתקדם לפיצול ה-CCA. הדק את הקשירה הרופפת סביב הלומן מספיק כדי לשמור בבטחה על הניידות של הצינור השוכן. לאחר מכן חתכו את ה-ECA באתר החור הקטן כדי לשחרר את הגדם.מקם את הגדם מתחת להתפצלות של ה-ECA וה-ICA. זה יאפשר לצינור השונה להחליק בקלות לתוך ה-ICA. פתח את ה-ICA וקדם בעדינות את הצינור מלומן ה-ECA לתוך ה-ICA עד שקצה הקטטר מגיע למקור ה-MCA.כעת הזרקו את הקריש דרך קטטר ה-P 50 המותאם יחד עם 10 מיקרוליטר מי מלח במשך 10 שניות באמצעות מזרק המילטון בנפח 100 מיקרוליטר. חמש דקות לאחר מכן, הוציאו את הקטטר מה-ECA, קשרו את ה-ECA ופתחו מחדש את ה-ECA לאחר מכן, ותפרו את החתך בצוואר. בהליך זה, בצע חתך קו אמצע באורך 1.2 ס"מ בקרקפת של חולדה מורדמת כדי לחשוף את עצם הגולגולת.המקדחה הבאה, חור בקוטר 1.5 מילימטר הממוקם בשני מילימטרים אחוריים וחמישה מילימטרים לרוחב ה-bgma באמצעות בור נירוסטה כדורי של 0.7 מילימטר. הנח את הגשושית 0.5 מילימטרים מעל פני הדורה. מדוד את ה-RCBF באמצעות מד זרימת דם ב-0, 5, 15, 30, 60, 90 ו-120 דקות לאחר האמבוליזציה בשעתיים של אמבוליזציה.לטפל בחולדה ב-TPA ולעקוב באופן רציף אחר זרימת הדם ב-5, 15, 30, 45 ו-60 דקות לאחר הטיפול ב-TPA לאחר הניתוח, להזריק 2.5 מיליליטר תמיסת מלח לבעל החיים באופן תת עורי כדי למנוע התייבשות ולהזריק ברן ב-0.05 מיליגרם לק"ג תת עורי מיד לאחר הניתוח וכל שש עד 12 שעות לפי הצורך לשיכוך כאבים. הפסק את הרדמת הפלואוריד. הניחו את החולדה בתא התאוששות וטרינרי של 37 מעלות צלזיוס והמשיכו לעקוב אחריה.לאחר כ-10 דקות, הניחו את החיה בכלוב מעוקר עם מעט מזון רטוב בצלחת פטרי לפני החזרת הכלוב לחדר עיקור בעלי החיים. שעתיים לאחר האמבוליזציה, הציון הנוירולוגי מוערך באמצעות ציון BESON. חולדות שלא מראות ליקוי אינן נכללות במחקר נוסף.איור זה מציג את מדידת ה-RCBF באמצעות מד זרימת דופלר לייזר. הזרקת הקריש הובילה להפחתה של יותר מ-70% RCBF מערך הבסיס. טיפול TPA שעתיים לאחר הקריש למשך 30 דקות משוחזר.RCBF קרוב לקו הבסיס. כאן התמונות המייצגות את קרישי הדם במקור ה-MCA ו-CA 24 שעות לאחר השבץ. ואלה התמונות המייצגות של פרוסות המוח המוכתמות ב-TTC.24 שעות לאחר שבץ מוחי לאחר שליטה טכניקה זו צריכה להיעשות תוך 30 דקות.

embolic-middle-cerebral-artery-occlusion-mcao-for-ischemic-stroke

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אינדוקציה כירורגי של נזק מוחי איסכמי בחולדה הוא מודל בשימוש נרחב עבור מחקר שבץ. כאן אנו מדגימים את האינדוקציה של איסכמיה מוחית המוקד על ידי חסימה של עורק המוח האמצעי. ויזואליזציה של האוטם שהתקבל על ידי צביעה היסטולוגית ו דימות בתהודה מגנטית מוצג גם.

דגם מרחק איסכמיה מוחית על ידי ספיגה תפר Endovascular של עורק המוח התיכון עכברוש

אנו מדגימים את הוידאו שיטה לייצור באמצע חסימה בעורק המוח בעכברים בוגרים באמצעות monofilament intraluminal. כמו כן, אנו מראים כיצד להעריך את מידת אוטם מוחי על ידי מכתים 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC).

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

עורק המוח האמצעי intraluminal חסימה (MCAO) מודל הוא מודל בשימוש השכיח ביותר בקרב מודלים ניסיוניים שבץ איסכמי. להלן נדגים את המודל כולו בפירוט עם מדריך של flowmetry לייזר דופלר, והתוצאות מי מטעמה.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

סרטון זה מדגים את ההליך של ביצוע חסימה קבועה של עורק המוח האמצעי הדיסטלי, או MCAO, עם עורק הצוואר המשותף, או קשירת CCA, בחולדות מבוגרות כדי להדגים שבץ איסכמי. זה חוסם את זרימת הדם למוח, מה שמוביל למוות עצבי ויוצר מודל לחקר מנגנוני שבץ וטיפולים פוטנציאליים.

גרימת איסכמיה באמצעות חסימת עורק המוח האמצעי והצוואר המשותף במודל חולדה

Intraluminal סגר נימה של עורק המוח התיכון הוא הדגם הנפוצות ביותר בשימוש ב- vivo של שבץ ניסויים בחולדות. גישה כירורגית חלופיים כדי לאפשר תיקון עורק הראש נפוצות מתבצע כאן, מה שמאפשר את פגיעה reperfusion של עורק תרדמני, של פגיעה reperfusion מלא אל השטח עורק המוח התיכון.

חסימה בעורק האמצעי המאפשר פגיעה Reperfusion באמצעות תיקון עורק הראש נפוצות בעכברים

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לגרום דיכאון לאחר שבץ בחולדות על ידי הסגר את עורק המוח האמצעי באמצעות עורק הראש הפנימי. אנו משתמשים במבחן Porsolt שחייה כפויה במבחן העדפה הסוכות כדי לאשר ולהעריך מצבי דיכאון המושרה.

עורק מוחין בינוני טכניקת הסגר לגרימת שלאחר שבץ דיכאון בחולדות

פרוטוקול זה מדגים מודל שבץ עכבר ייחודי עם אוטם בגודל בינוני ושיעור הישרדות מצוין. מודל זה מאפשר לחוקרי שבץ פרה-קליניים להאריך את משך האיסכמיה, להשתמש בעכברים מזדקנים ולהעריך תוצאות תפקודיות ארוכות טווח.

מודל שונה של חסימת עורק מוחי אמצעי טרנס-גולגולתי לחקר תוצאות שבץ מוחי בעכברים מזדקנים

פרוטוקול זה מתאר את המודל של איסכמיה מוחית מוקדית חולפת בעכברים באמצעות חסימה תוך לומינלית של עורק המוח האמצעי. בנוסף, דוגמאות להערכת תוצאות מוצגות באמצעות הדמיית תהודה מגנטית ומבחני התנהגות.

מודל חולף של חסימת עורק מוחי אמצעי חולף

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל חסימת עורק מוחי אמצעי דיסטלי (dMCAO) באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית בעכברי C57BL/6J ומעריכים את ההתנהגות הנוירולוגית והתכונות ההיסטופתולוגיות שלאחר מכן.

השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל חולדה של חסימה/רפרפוזיה של עורק המוח האמצעי המשמר את המבנה האנטומי של כלי המוח מבלי לגרום נזק.

מודל חולדה של חסימה/עירוי מחדש של עורק המוח האמצעי מבלי לפגוע במבנה האנטומי של כלי המוח

מטרת מחקר זה הייתה לקבוע שיטה שחוזרת לביצוע כריתת גולגולת ואחריה חסימה קבועה וסלקטיבית של עורק המוח האמצעי בחולדות, ליישום במחקרים ניסיוניים של ליקויים מוטוריים וזיכרון מרחבי.

סתימה סלקטיבית וקבועה של עורק המוח האמצעי בעכברים: גישה ניסויית לחקר ליקויים מוטוריים וזיכרון מרחבי

למדו ליצור מודל שבץ איסכמי אמבולי בעכברושים באמצעות עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה עם קרישי דם הומולוגיים. שיטה זו מחקה מצב שבץ אנושי ומתאימה למחקר טיפולים תרומבוליטיים קליניים.

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

גלה סרטונים נוספים