Name: רכישת באיכות גבוהה וידאו דיגיטלי של דרוזופילה Behaviors הזחל ומבוגרים מנקודת מבט רוחבי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: למד שיטת מיקרוסקופיה פשוטה לצילום וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של פנוטיפים מוטנטיים בדרוזופילה מנקודת מבט רוחבית. הפרוטוקול מותאם למערכות מיקרוסקופיה סטריאו עם מצלמות דיגיטליות ומסייע בתקשורת ממצאים מדעיים חזותיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מבקשים להודות אלכסנדרה Opie לקבלת סיוע טכני ולתמיכה, ג&#39;יימס ברטון למתן קריינות וידאו, ורמונה Flatz וJoellen סוויני הלמופיע בוידאו המצורף. עבודה זו נתמכה על ידי קרן הצדקה MJ מרדוק (מענק מס &#39;2,012,205 לJED).

.1 מערכת מיקרוסקופ סטריאו הערה: למרות שפרוטוקול זה הוא בקלות להתאמה לכמעט כל מערכת מיקרוסקופ סטריאו מצמידים את מצלמה דיגיטלית עם היכולת של רכישת וידאו, פרטים מסופקים על המערכת המשמשת במעבדה שלנו (טבלה של חומרים / ציוד). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש וידאו דיגיטלי באמצעות מיקרוסקופ סטריאו trinocular מצמידים את מצלמה דיגיטלית מסחרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת זוג המצלמה הדיגיטלית המסחרית לנמל trinocular של מיקרוסקופ סטריאו, להסיר את ½x C-mount של נמל phototube של מיקרוסקופ סטריאו ולהחליף אותו עם 1X C-mount. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר מצמד מצלמה דיגיטלי (43 חוט מ&quot;מ) ל1X C-mount. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שתי טבעות הר צעד למטה, 58 מ&quot;מ ל48 מ&quot;מ, ו48 מ&quot;מ ל43 מ&quot;מ, למצמד המצלמה כדי לגשר על החיבור ממצמד המצלמה הדיגיטלי לערכת מתאם עדשה למצלמה הדיגיטלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעלות את המצלמה הדיגיטלית לערכת מתאם עדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש וידאו עם הגדלת מיקרוסקופ וזום אופטי של המצלמה הדיגיטלית מוגדרת להגדלת שילוב של כ 12X (30 מסגרות לשנייה, 640 480 פיקסלים). הערה: ההגדלה של מיקרוסקופ סטריאו חייבת להיות מתוגמלת בהתאם ל1X C-mount מחדש החדש של נמל trinocular. </li></ol> .2 הדמיה דרוזופילה שלישית instar זחלים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרט בטוש בלתי מחיק לצלחת השלב השחורה של מיקרוסקופ סטריאו מצמידים את מצלמה דיגיטלית כך שהצד של כובע הסמן תופס כ ⅓ ל¼ של השדה האנכי של התצוגה נצפתה בצג LCD המצלמה. השתמש בצמרות סמן כשלב לבצע הדמיה זחל, כי הם באים במגוון רחב של צבעים שיכולים לשמש לקוד צבע ולהבדיל גנוטיפים של זחלים שצלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסמן את שדה הראייה שנצפתה בצג LCD המצלמה הדיגיטלי על פני השטח של למעלה הסמן עם נקודת קנססמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר זחל instar שלישי לתמונה. הקריטריונים לבחירת זחלי instar שלישיים היה אורך גוף, יציאה ממקור המזון בשלב הזחל של מחזור החיים, את נוכחותו של spiracles הקדמי והאחורי, ואת המבנה של הקרסים בלסת התחתונים, של הפה המנגנון 11. להבטיח את הזחל הוא נקי על ידי שטיפתו ביסודיות במים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאיר את השלב העליון סמן הקבוע מלמעלה עם אור ממערכת תאורת סיבים אופטי. התאם את הזווית של אור האירוע לספק תאורה אופטימלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוקוס מיקרוסקופ על קצה עליון בטוש בלתי מחיקה. בגין רכישת וידאו דיגיטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הזחל בצד של כובע הסמן כ 75 ° הרחק מהציר האנכי, ממש מחוץ לשדה הראייה, עם הקדמי של הזחל פונה לכיוון שדה הראייה (איור 1). הערה: מיקום של הזחל בצד של כובע הסמן מאפשר למצלמה שיא תנועה של הזחל דואר מנקודת מבט לרוחב. זה עוזר לשמור את הזחל לח עם מים כך שהם לא נופלים מהצד של כובע הסמן. טיפול חייב להיות מופעל, עם זאת, שלא להשתמש יותר מדי מים ככמויות עודפות תדבק הזחל כפי שהוא זוחל על פני השדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לבדוק ולדקור את הזחל עם מכחול קטן לכפות אותו לזחול על פני שדה הראייה. היה סבלני כמו הזחלים לעתים רחוקות לשתף פעולה, ולעתים קרובות יש להחזיר לנקודת ההתחלה הרבה פעמים לפני שהם זוחלים ישר על פני השדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשומה כ 10-15 דקות של מד רציף וידאו דיגיטלי ויבול ולהסיר את כל פוסט רכישת המד מיותר עם תוכנת עריכת וידאו דיגיטלית. </li></ol> .3 ההדמיה דרוזופילה מבוגרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מבוגר יחיד דרוזופילה בקובט קלקר ספקטרוסקופיות 1.5 מ&quot;ל חד פעמי. הערה: CO 2 הרדמה של המבוגרים תסיסנית מייד לפני behavפרוטוקול ניתוח ioral יכול להתפשר תוצאות 12. מומלץ שהמבוגרים תסיסנית תינתן תקופת 24 שעות להתאושש מCO 2 הרדמה לפני הביצוע במבחן התנהגות 13. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הקצה של קובט עם כדור צמר גפן קטן. ודא כדור צמר גפן הוא ארוז חזק מספיק כדי לכבוש את חלל כובע הגדול ומגביל את הזבוב לתא הנפח המופחת של קובט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את קובט על צלחת השלב הלבנה של מיקרוסקופ סטריאו וליישר את תא הנפח המופחת של קובט עם שדה הראייה שנצפתה בצג LCD המצלמה הדיגיטלי כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאיר את קובט מלמעלה עם אור ממערכת תאורת סיבים אופטי. התאם את הזווית של אור האירוע לספק תאורה אופטימלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוקוס מיקרוסקופ ולהתחיל לרכוש וידאו דיגיטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשומות כ 30-45 דקות של מד רציף וידאו דיגיטלי ויבול ולהסיר את כל מיותרלאחר רכישת מדה עם תוכנת עריכת וידאו דיגיטלית. </li></ol>

<ol><li>Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+B+%22Drosophila+neurobiology%3A+a+laboratory+manual%22">Drosophila neurobiology: a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2010).</li>
<li>Frank, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+approaches+for+studying+synaptic+development%2C+function%2C+and+plasticity+using+Drosophila+as+a+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">New approaches for studying synaptic development, function, and plasticity using Drosophila as a model system.</a> J Neurosci. 33, 17560-17568 (2013).</li>
<li>Mudher, A., Newman, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMudher%2C+A+%22Drosophila+%3A+a+toolbox+for+the+study+of+neurodegenerative+disease%22">Drosophila : a toolbox for the study of neurodegenerative disease</a>. , Taylor & Francis Group. (2008).</li>
<li>Bilen, J., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+human+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for human neurodegenerative disease.</a> Annu Rev Genet. 39, 153-171 (2005).</li>
<li>Jakubowski, B. R., Longoria, R. A., Shubeita, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+throughput+and+sensitive+method+correlates+neuronal+disorder+genotypes+to+Drosophila+larvae+crawling+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Fly+%28Austin%29%22%5BJournal%5D)">A high throughput and sensitive method correlates neuronal disorder genotypes to Drosophila larvae crawling phenotypes.</a> Fly (Austin). 6, 303-308 (2012).</li>
<li>Caldwell, J. C., Miller, M. M., Wing, S., Soll, D. R., Eberl, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+analysis+of+larval+locomotion+in+Drosophila+chordotonal+organ+mutants%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Dynamic analysis of larval locomotion in Drosophila chordotonal organ mutants).</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 16053-16058 (2003).</li>
<li>Jahn, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+early+locomotor+abnormalities+in+a+Drosophila+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection of early locomotor abnormalities in a Drosophila model of Alzheimer's disease.</a> J Neurosci Methods. 197, 186-189 (2011).</li>
<li>Donelson, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%26%2334%3Btracker%26%2334%3B+program%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">High-resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the &#34;tracker&#34; program.</a> PLoS ONE. 7, e37250(2012).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J Vis Exp. (24), (2009).</li>
<li>Colomb, J., Reiter, L., Blaszkiewicz, J., Wessnitzer, J., Brembs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+source+tracking+and+analysis+of+adult+Drosophila+locomotion+in+Buridan%27s+paradigm+with+and+without+visual+targets%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Open source tracking and analysis of adult Drosophila locomotion in Buridan's paradigm with and without visual targets.</a> PLoS ONE. 7, e42247(2012).</li>
<li>Demerec, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDemerec%2C+M+%22Biology+of+Drosophila%22">Biology of Drosophila</a>. , Hafner Pub. Co. (1965).</li>
<li>Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthetising+Drosophila+for+behavioural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Anaesthetising Drosophila for behavioural studies.</a> J Insect Physiol. 46, 439-442 (2000).</li>
<li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGreenspan%2C+RJ+%22Fly+pushing+%3A+the+theory+and+practice+of+Drosophila+genetics.%22">Fly pushing : the theory and practice of Drosophila genetics.</a>. , 2nd edn, Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2004).</li>
<li>Duncan, J. E., Lytle, N. K., Zuniga, A., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Microtubule+Regulatory+Protein+Stathmin+Is+Required+to+Maintain+the+Integrity+of+Axonal+Microtubules+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The Microtubule Regulatory Protein Stathmin Is Required to Maintain the Integrity of Axonal Microtubules in Drosophila.</a> 8, e683244(2013).</li>
<li>Belmont, L. D., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+protein+that+interacts+with+tubulin+dimers+and+increases+the+catastrophe+rate+of+microtubules%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of a protein that interacts with tubulin dimers and increases the catastrophe rate of microtubules.</a> Cell. 84, 623-631 (1996).</li>
<li>Cassimeris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oncoprotein+18%2Fstathmin+family+of+microtubule+destabilizers%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The oncoprotein 18/stathmin family of microtubule destabilizers.</a> Curr Opin Cell Biol. 14, 18-24 (2002).</li>
</ol>

המחברים הצהירו שאין אינטרסים מתחרים קיימים.

כוח דרוזופילה של melanogaster כמערכת מודל לחקר תפקוד מערכת עצבים נובע במידה רבה מהשילוב של כלים גנטיים רבי עוצמה זמינה והמגוון הרחב של מבחני התנהגות חזקים פיתח. כאן אנו מציגים טכניקה מיקרוסקופית פשוטה ונגישה לציבור רחב לרכישת וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של מבוגרים תסיסנית ופנוטיפים קטר זחל מנקודת מבט לרוחב. אנחנו השתמשנו בהצלחה בגישה זו כדי לאפיין ולכמת את החומרה של שיתוק אחורי &#39;זנב להעיף &quot;פנוטיפים שנצפו במוטציות זחל instar השלישי נוירולוגית ישיר...

הפירות הנפוצים לטוס melanogaster דרוזופילה הוא מערכת מודל ניסיוני רבת עוצמה ללימוד הפונקציה של מערכת העצבים 1-3. שימור האבולוציוני של מבנה ותפקוד של מערכת עצבים עם בני אדם, כמו גם קלות מניפולציה גנטית ומגוון רחב של כלים גנטיים גורמים דרוזופילה האורגניזם בכורה לדגמן מחלות ניווניות אנושיות 4. מוטציות גנטיות הגורמות לתפקוד לקוי של מערכת העצבים לעתים קרובות לגרום לזחלי מוטציה קיימא ומבוגרי תסיסנית עם תנועה לקויה. פנוטיפים שנצפו במוטציות פגומות מערכת עצבים כוללים ירידה בשיעור של תנועה, תיאום חריג, ותנועות עוויתיות במבוגרים, וכן את גירעונות בהתכווצות נפיחה של קיר שרירי הגוף, ושיתוק חלקי של זחלים. פנוטיפים אלה נוצלו בפיתוח של מסכי גנטיים תפוקה גבוהה ומבחני תנועה של זחלי מוטציה 5, 6 והמבוגר 7-10 דרוזופילה שנועד לכמת את ירידת ערך התנועה וזיהוי גנים חיוניות לתפקוד של מערכת העצבים. בעוד גישות אלה הן מאוד שימושיות לכימות התנהגויות קטר זחל ומבוגרים, הם לא מצליחים להעביר מידע איכותי על כל התנהגות חריגה ספציפית. לדוגמא, בזמן שזחלי instar שלישי מוטציה, עשויים להציג פרמטרים תנועה שינו בassay התנהגות, זה עלול להיות לא ברור אם זו היא התוצאה של שינויים בהתכווצויות peristaltic קצביות במהלך מחזור הזחילה, מחסור כללי בתיאום, או שיתוק חלקי של הגוף האחורי קיר שרירים. כאן אנו מתארים טכניקה מיקרוסקופית פשוטה ונגישה לציבור רחב לרכישת וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של מבוגרים תסיסנית ופנוטיפים קטר זחל מנקודת מבט לרוחב. וידאו דיגיטלי שנרכש מנקודת מבט רוחבית מאפשר תצפית הישירה וניתוח של הבחנות דקות בlocomotivהתנהגויות דואר מנטייה צד להציג יותר אינפורמטיבי.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ סטריאוזום משולש</td><td>תאגיד אולימפוס</td><td>SZ6145TR</td> <td>ו-frac12; תושבת C הוסרה והוחלפה ב-1X C-mount</td></tr><tr><td>1X C-mount</td><td>Leeds Precision Instruments</td><td>LSZ-1XCMT2</td><td></td></tr><tr><td>מצמד מצלמה דיגיטלית (חוט 43 מ"מ)</td><td>Qioptiq Imaging Solutions</td><td>25-70-10-02</td><td></td></tr><tr><td>58 מ"מ עד 48 מ"מ טבעת מורידה</td><td>B& H Video</td><td>GBSDR5848</td><td></td></tr><tr><td>48 מ"מ עד 43 מ"מ צלצול ירידה</td><td>B& </td> ערכת מתאם H <td>Video GBSDR4843</td><td></td></tr><tr><td>Lensmate עבור Canon G10</td><td>LensMateOnline.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מצלמה דיגיטלית Canon PowerShot G10</td><td>Canon ארה"ב, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 מ"ל ספקטרוסקופי פוליסטרן Cuvette</td><td>דנוויל סיינטיפיק</td><td>U8650-4</td><td></td></tr></tbody></table>

רכישת באיכות גבוהה וידאו דיגיטלי של דרוזופילה behaviors הזחל ומבוגרים מנקודת מבט רוחבי

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

תסיסנית היא מערכת מודל ניסיוני רבת עוצמה ללימוד הפונקציה של מערכת העצבים. מוטציות גנטיות הגורמות לתפקוד לקוי של מערכת העצבים לעתים קרובות לייצר זחלים ומבוגרים שיש להם פנוטיפים פגומים תנועה שקשה לתאר במידה מספקת עם טקסט או מייצג לחלוטין עם דימוי הצילומי יחיד קיימא. מצבים הנוכחיים של הוצאה לאור מדעי, לעומת זאת, תומכים בהגשה של מדיה וידאו דיגיטלית כחומר משלים ללוות כתב יד. כאן אנו מתארים טכניקה מיקרוסקופית פשוטה ונגישה לציבור רחב לרכישת וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של שני פנוטיפים זחל והמבוגרים דרוזופילה מנקודת מבט לרוחב. וידאו של תנועת זחל ומבוגר מצדו להציג הוא יתרון משום שהוא מאפשר התבוננות וניתוח של הבחנות ושינויים קלים בהתנהגות קטר חריגה. אנחנו השתמשנו בהצלחה בטכניקה זו כדי לחזות ולכמת aberrant זחילה התנהגויות בזחלי instar שלישיים, בנוסף לפנוטיפים מבוגרים מוטציה והתנהגויות הכוללים טיפוח.

אנחנו השתמשנו בהצלחה בטכניקה זו כדי לרכוש ולכמת את הפנוטיפ ההתנהגותי הזחל הקשורים לאובדן התפקוד של גן stathmin (איור 2) 14. גן stathmin מקודד חלבון רגולטורי microtubule שמחיצות הדימרים טובולין מבריכות של טובולין המסיס, ונקשר microtubules ומקדם פירוקם 15,16. פונקצית Stathmin נדרש כדי לשמור על השלמות של microtubules בהאקסונים של עצבים היקפיים 14. שיבוש של פעילות stathmin בתוצאות זחלי instar השלישי דרוזופילה...

כאן אנו מתארים טכניקה מיקרוסקופית פשוטה ונגישה לציבור רחב לרכוש וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של מבוגרים תסיסנית ופנוטיפים מוטציה זחל מנקודת מבט לרוחב.

רכישת באיכות גבוהה וידאו דיגיטלי של דרוזופילה Behaviors הזחל ומבוגרים מנקודת מבט רוחבי

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

השיטות הנוכחיות של פרסום מדעי תומכות בהגשת קבצי מדיה דיגיטלית כחומר משלים לכתב היד. קבצי מדיה וידאו אלה משמשים לעתים קרובות כדי להעביר לקורא מידע איכותי שקל יותר לצפות בו מאשר מתואר בטקסט או על ידי תמונה בודדת. כאן אנו מתארים מתודולוגיה פשוטה לרכישת וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של פנוטיפים מוטנטיים של דרוזופילה מנקודת מבט רוחבית, למרות שפרוטוקול זה ניתן להתאמה בקלות כמעט לכל מערכת מיקרוסקופ סטריאו בשילוב עם מצלמה דיגיטלית, עם היכולת לרכוש וידאו, פרטים מסופקים על המערכת בה אנו משתמשים במעבדה שלנו.אנו רוכשים את הסרטון שלנו באמצעות מיקרוסקופ סטריאו עיני Olympus SZ 61, בשילוב עם מצלמה דיגיטלית מסחרית Canon G 10. תושבת ה-XC של יציאת צינור הצילום של מיקרוסקופ הסטריאו הוגדרה מחדש עם תושבת XC אחת. מצמד מצלמה דיגיטלית הותקן על תושבת XC אחת.שתי טבעות מורידות, 58 מילימטר עד 48 מילימטר ו-48 מילימטר עד 43 מילימטר, הותקנו על מצמד המצלמה. הותקנה ערכת מתאם למצלמת Canon G 10. גישור על החיבור למצלמת Canon G 10 לתמונה.שלישי בזחלי כוכבים מנקודת המבט הרוחבית, הדביקו טוש קבוע לשלב המיקרוסקופ הסטריאו. מכסה הסמן צריך לתפוס כרבע מהשדה האנכי שנצפה בצג ה-LCD של המצלמה. אנו משתמשים בטושים כשלב חלופי מכיוון שהם מגיעים במגוון צבעים המאפשרים לנו לצבוע קוד ולהבדיל בין הגנוטיפים של הזחל המצולם על כובע הסמן.סמן את הג

acquisition-high-quality-digital-video-drosophila-larval-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

המחקר של התנהגות של תנועה...

וידאו ברזולוציה גבוהה של מעקב אחר תנועה של מבוגרים תסיסנית melanogaster

מסמך זה מדגים את השימוש במיקרוסקופ confocal סריקה מהירה לתמונת התנהגות תא ישירות דרך הגולם. מאת עוזב את המקרה גלמי שלם, שיטה זו מאפשרת תצפית ומדידה של תהליכים בתא דינמיים בשלב של פיתוח דרוזופילה שקשה ללמוד באופן ישיר.

הדמיה באמצעות המקרה גלמי של<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מציג שיטה יעילה להדמיה של נוירואפיתל עין גולם חי של דרוזופילה. שיטה זו מפצה על תנועת רקמות וטופולוגיה לא אחידה, משפרת את ההדמיה של גבולות התא באמצעות שימוש בחלבוני צומת מרובים המתויגים ב-GFP, ומשתמשת במתקן הדמיה המורכב בקלות.

Live-הדמיה של דרוזופילה גלמי עין

כאן, אנו מציגים שיטה להקליט התכווצויות שרירים עובריים בעוברי דרוזוהילה בצורה לא פולשנית ומונחה פרטים.

הדמיה חיה וניתוח של התכווצויות שרירים בתוך העובר דרוזופילה

פרוטוקול זה מיועד הדמיה וניתוח של הדינמיקה של כיוון התאים ואת צמיחת רקמות בתוך הבטן הדרוזולה epithelia כמו זבוב הפרי עובר מטמורפוזה. המתודולוגיה המתוארת כאן ניתנת להחלה על חקר שלבים, רקמות ומבנים תת-סלולאריים שונים בדרוזופילה או באורגניזמים אחרים במודל.

הדמיה וניתוח של כיוון רקמות ודינמיקה בפיתוח הדרוזולה אפיתליה במהלך שלבי pupal

פרוטוקול זה מתאר שיטה להרכבת הזחלים של דרוזוהילה כדי להשיג יותר מ-10 שעות של הדמיה של הפרעות זמן בבעלי חיים חיים שלמים. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לדמות תהליכים ביולוגיים רבים קרוב לקיר הגוף הזחל.

LarvaSPA, שיטה להרכבה ממושכת על זחל לטווח ארוך הדמיה לזמן קצר

מוצג כאן פרוטוקול microinject ובו זמנית תמונה עוברי Drosophila מרובים במהלך התפתחות עוברית באמצעות צלחת מבוססת, דימוי תוכן גבוה.

הכנת עובר Drosophila ומיקרו-היתוך למיקרוסקופיה של תאים חיים שבוצעו באמצעות מנתח תוכן גבוה אוטומטי

פרוטוקול זה מתאר כיצד להפוך תא תצפית התנהגות Drosophila מבוגר פשוט, וכיצד לצלם בהבחנה גבוהה / קטעי וידאו של המורפולוגיה או התנהגות של סוגים שונים של זבובי פירות בתא התצפית באמצעות שיטות פשוטות יחסית ובמחיר סביר.

מערכת הדמיה מתכווננת בחדות גבוהה למחקרים התנהגותיים של מבוגרים Drosophila

כאן, מוצג פרוטוקול להדמיה חיה ארוכת טווח של רגל הדרוזופילה בשלב הגולם, הכולל הסרה מלאה של הגולם. ניתן ליישם פרוטוקול זה גם על רקמות אחרות.

הדמיה חיה לטווח ארוך של התפתחות רגל גולם דרוזופילה לאחר הסרת פופריום

הזחלים תסיסנית melanogaster לספק מערכת מודל אידיאלי לחקור את המנגנונים של תחבורה axonal בתוך העצבים סגמנטלי הזחל. באמצעות הליך זה, 3 rd הזחלים instar נושאת מוטציות שונות ניתן להשוות את הזחלים סוג בר.

ויזואליזציה של עצבים המגזרי הזחל ב 3 Rd Instar תסיסנית הכנות הזחל

למד שיטת מיקרוסקופיה פשוטה לצילום וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של פנוטיפים מוטנטיים בדרוזופילה מנקודת מבט רוחבית. הפרוטוקול מותאם למערכות מיקרוסקופיה סטריאו עם מצלמות דיגיטליות ומסייע בתקשורת ממצאים מדעיים חזותיים.

רכישת באיכות גבוהה וידאו דיגיטלי של דרוזופילה Behaviors הזחל ומבוגרים מנקודת מבט רוחבי

גלה סרטונים נוספים