Name: הערכת קונפורמציה של HIV-1 trimeric מעטפת גליקופרוטאינים שימוש ELISA Assay מבוסס Cell (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: חקור את קונפורמציית גליקופרוטאיני המעטפת של HIV-1 באמצעות שיטת ELISA מבוססת תאים. שיטה זו מאפשרת ניתוח יעיל של אינטראקציות נוגדנים עם חלבוני Env לפיתוח חיסונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לד&quot;ר ג&#39;יימס רובינסון למתנתו הנדיבה של A32, 17b, 48d, וC11 מהבז. PGT 121 הושג באמצעות התכנית מגיב NIH האיידס, החטיבה של איידס, NIAID, NIH (חתול # 12343). עבודה זו נתמכה על ידי קרן קנדה לחדשנות תכנית המנהיג # 29,866, על ידי ההפעלה CIHR # 257,792, על ידי הקמת FRQS של מדען צעיר להעניק # 24,639 לAF ועל ידי מענק רצף CRCHUM כמו גם על ידי מענק # זרז CIHR 126,630 לAF וMR. AF הוא הנמען של # 24,639 אחוות 1 FRSQ Chercheur Boursier Junior. MV נתמכה על ידי # CIHR דוקטורט פרס מחקר 291,485.

1 יום 1 - תרבית תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצלחת 2 x 10 4 אוסטאוסרקומה אנושית (HOS) תאים לכל גם בצלחת אטומה, 96 גם תרבית התאים מתאימה לקריאת הארה. השתמש בנשר בינוני השתנה Dulbecco (DMEM) בתוספת סרום 10% שור עוברי (FBS) ו100 U / פניצילין, סטרפטומיצין מ&quot;ל. דגירה עד למחרת ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. </li></ol> Transfection Polyethylenimine (PEI) - 2 יום 2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תערובת transfection פי השלבים הבאים. התאם ריאגנטים וכמויות DNA על פי מספר הבארות שיש transfected עם אותו מעטפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Tube: הוסף 10 פלסמיד ng תאת הקידוד (כגון pTat-III 27) ו150 ng פלסמיד מעטפה הקידוד לDMEM 5 μl בתוספת 25 HEPES מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלסמיד תאת הקידוד נדרש רק בעת השימוש בפלסמידים מעטפה קידוד תאת תלויה כגון pSVIII. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינור B: הוסף 450 ng PEI (מ1מיקרוגרם פתרון / μl) עד 5 μl DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף תוכן של צינור ב &#39;לצינור א מערבבים היטב על ידי vortexing עבור 10 שניות ודגירת תערובת transfection 10 דקות בטמפרטורת חדר (22 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 μl של תמהיל transfection לכל טוב של 96 גם הצלחת. דגירה של 48 שעות על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. </li></ol> 3 יום 4 - ELISA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את כל הניסויים בטמפרטורת חדר כדי למזער אנדוציטוזה האפשרית של מתחמים / נוגדני מעטפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 250 מ&quot;ל של הצפת כביסה לכל צלחת בשימוש באותו הזמן. חיץ כביסה הוא שנאגר מלוח טריס 1x pH (TBS) 7.5 (50 מ&quot;מ טריס-Cl, pH 7.5; 150 mM NaCl), בתוספת 1 ​​מ&quot;מ MgCl 2 ו1.8 מ&quot;מ CaCl 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 125 מ&quot;ל חיץ חסימה לכל צלחת על ידי הוספת חלב יבש ללא שומן 1% ו5 מ&quot;מ טריס pH 8.0 לכביסת הצפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר תקשורת תרבית תאים ובתמהיל transfection (supernatant) מצלחת 96 היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 100 μ; L של חיץ חסימה לכל טוב ודגירת 20 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר supernatant ולהוסיף 50 μl של נוגדן (או סרום) לכל טוב, בדילול מלא לריכוז מתאים בחסימת המאגר. בדרך כלל, להשתמש בריכוז של 1 מיקרוגרם / מ&quot;ל. דגירה שעה 1 בRT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3x לשטוף עם 100 μl חיץ חסימה ולאחר מכן לחזור 3x תהליך כביסה עם כביסה 100 μl הצפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר supernatant, להוסיף 100 μl חיץ חסימה, ודגירה 5 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר supernatant ולהוסיף 50 μl של נוגדנים משני, בדילול 1 / 3,000 בחסימת המאגר. להשתנות דילול נוגדן אופטימלי בהתאם להבדלי יצרן. דגירה 40 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3x לשטוף עם 100 μl חיץ חסימה ולאחר מכן לחזור 3x תהליך כביסה עם כביסה 100 μl הצפת. </li></ol> .4 Data Acquisition <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר supernatant מהצלחת ולהוסיף 30 μl 1x chemiluminescence המשופרות מצע (ECL) לכל טוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש כימיהאות iluminescence לשניית 1 / גם בצלחת קורא מתאים בהתאם להוראות יצרן. זמן קריאה עשויה להיות שונה בהתאם להבדלי חומרה. </li></ol>

<ol><li>Bures, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+recombinant+canarypox+vectors+expressing+membrane-anchored+glycoprotein+120+followed+by+glycoprotein+160+boosting+fails+to+generate+antibodies+that+neutralize+R5+primary+isolates+of+human+immunodeficiency+virus+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Res.+Human+Retroviruses%22%5BJournal%5D)">Immunization with recombinant canarypox vectors expressing membrane-anchored glycoprotein 120 followed by glycoprotein 160 boosting fails to generate antibodies that neutralize R5 primary isolates of human immunodeficiency virus type 1.</a> AIDS Res. Human Retroviruses. 16, 2019-2035 (2000).</li>
<li>Koff, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+vaccine+development%3A+challenges+and+opportunities+towards+solving+the+HIV+vaccine-neutralizing+antibody+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">HIV vaccine development: challenges and opportunities towards solving the HIV vaccine-neutralizing antibody problem.</a> Vaccine. 30, 4310-4315 (2012).</li>
<li>Mascola, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+envelope+subunit+vaccine+products+elicits+neutralizing+antibodies+against+laboratory-adapted+but+not+primary+isolates+of+human+immunodeficiency+virus+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22The+National+Institute+of+Allergy+and+Infectious+Diseases+AIDS+Vaccine+Evaluation%22%5BJournal%5D)">Immunization with envelope subunit vaccine products elicits neutralizing antibodies against laboratory-adapted but not primary isolates of human immunodeficiency virus type 1.</a> The National Institute of Allergy and Infectious Diseases AIDS Vaccine Evaluation. 173, 340-348 (1996).</li>
<li>Rerks-Ngarm, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+with+ALVAC+and+AIDSVAX+to+prevent+HIV-1+infection+in+Thailand%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Vaccination with ALVAC and AIDSVAX to prevent HIV-1 infection in Thailand.</a> N. Engl. J. Med. 361, 2209-2220 (2009).</li>
<li>Roederer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+and+virological+mechanisms+of+vaccine-mediated+protection+against+SIV+and+HIV%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Immunological and virological mechanisms of vaccine-mediated protection against SIV and HIV.</a> Nature. 505, 502-508 (2014).</li>
<li>Fennie, C., Lasky, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+for+intracellular+folding+of+the+human+immunodeficiency+virus+type+1+gp120%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Model for intracellular folding of the human immunodeficiency virus type 1 gp120.</a> J. Virol. 63, 639-646 (1989).</li>
<li>Willey, R. L., Bonifacino, J. S., Potts, B. J., Martin, M. A., Klausner, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+cleavage%2C+and+degradation+of+the+human+immunodeficiency+virus+1+envelope+glycoprotein+gp160%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis cleavage, and degradation of the human immunodeficiency virus 1 envelope glycoprotein gp160.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85, 9580-9584 (1988).</li>
<li>Bosch, V., Pawlita, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutational+analysis+of+the+human+immunodeficiency+virus+type+1+env+gene+product+proteolytic+cleavage+site%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Mutational analysis of the human immunodeficiency virus type 1 env gene product proteolytic cleavage site.</a> J. Virol. 64, 2337-2344 (1990).</li>
<li>Hallenberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+furin-mediated+cleavage+activation+of+HIV-1+glycoprotein+gp160%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inhibition of furin-mediated cleavage activation of HIV-1 glycoprotein gp160.</a> Nature. 360, 358-361 (1038).</li>
<li>Li, Y., Luo, L., Thomas, D. Y., Kang, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HIV-1+Env+protein+signal+sequence+retards+its+cleavage+and+down-regulates+the+glycoprotein+folding%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">The HIV-1 Env protein signal sequence retards its cleavage and down-regulates the glycoprotein folding.</a> Virology. 272, 417-428 (2000).</li>
<li>Leonard, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assignment+of+intrachain+disulfide+bonds+and+characterization+of+potential+glycosylation+sites+of+the+type+1+recombinant+human+immunodeficiency+virus+envelope+glycoprotein+%28gp120%29+expressed+in+Chinese+hamster+ovary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Assignment of intrachain disulfide bonds and characterization of potential glycosylation sites of the type 1 recombinant human immunodeficiency virus envelope glycoprotein (gp120) expressed in Chinese hamster ovary cells.</a> J. Biol. Chem. 265, 10373-10382 (1990).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+study+of+the+N-glycosylation+sites+of+HIV-1+envelope+protein+on+infectivity+and+antibody-mediated+neutralization%5BTitle%5D)+AND+%22Retrovirology%22%5BJournal%5D)">A systematic study of the N-glycosylation sites of HIV-1 envelope protein on infectivity and antibody-mediated neutralization.</a> Retrovirology. 10 (14), (2013).</li>
<li>Helseth, E., Olshevsky, U., Furman, C., Sodroski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+immunodeficiency+virus+type+1+gp120+envelope+glycoprotein+regions+important+for+association+with+the+gp41+transmembrane+glycoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Human immunodeficiency virus type 1 gp120 envelope glycoprotein regions important for association with the gp41 transmembrane glycoprotein.</a> J. Virol. 65, 2119-2123 (1991).</li>
<li>Haim, H., Salas, I., Sodroski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteolytic+processing+of+the+human+immunodeficiency+virus+envelope+glycoprotein+precursor+decreases+conformational+flexibility%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Proteolytic processing of the human immunodeficiency virus envelope glycoprotein precursor decreases conformational flexibility.</a> J. Virol. 87, 1884-1889 (2013).</li>
<li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+immune+evasion+at+the+site+of+CD4+attachment+on+HIV-1+gp120%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Structural basis of immune evasion at the site of CD4 attachment on HIV-1 gp120.</a> Science. 326, 1123-1127 (2009).</li>
<li>Kwong, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+evades+antibody-mediated+neutralization+through+conformational+masking+of+receptor-binding+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">HIV-1 evades antibody-mediated neutralization through conformational masking of receptor-binding sites.</a> Nature. 420, 678-682 (2002).</li>
<li>Sakai, K., Takiguchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+an+effective+AIDS+vaccine+development%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Toward an effective AIDS vaccine development.</a> Eur. J. Immunol. 43, 3087-3089 (2013).</li>
<li>Veillette, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+with+Cellular+CD4+Exposes+HIV-1+Envelope+Epitopes+Targeted+by+Antibody-Dependent+Cell-Mediated+Cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Interaction with Cellular CD4 Exposes HIV-1 Envelope Epitopes Targeted by Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity.</a> J. Virol. 88, 2633-2644 (2014).</li>
<li>Wibmer, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+escape+from+HIV-1+neutralizing+antibodies+drives+increased+plasma+neutralization+breadth+through+sequential+recognition+of+multiple+epitopes+and+immunotypes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Viral escape from HIV-1 neutralizing antibodies drives increased plasma neutralization breadth through sequential recognition of multiple epitopes and immunotypes.</a> PLoS Pathogens. 9 (e1003738), (2013).</li>
<li>Kovacs, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+envelope+trimer+elicits+more+potent+neutralizing+antibody+responses+than+monomeric+gp120%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">HIV-1 envelope trimer elicits more potent neutralizing antibody responses than monomeric gp120.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 12111-12116 (2012).</li>
<li>Yuan, W., Bazick, J., Sodroski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+multiple+conformational+States+of+free+monomeric+and+trimeric+human+immunodeficiency+virus+envelope+glycoproteins+after+fixation+by+cross-linker%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the multiple conformational States of free monomeric and trimeric human immunodeficiency virus envelope glycoproteins after fixation by cross-linker.</a> J. Virol. 80, 6725-6737 (2006).</li>
<li>Guttman, M., Lee, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+interaction+between+gp41+and+gp120+is+observed+for+monomeric+but+not+oligomeric%2C+uncleaved+HIV-1+Env+gp140%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">A functional interaction between gp41 and gp120 is observed for monomeric but not oligomeric, uncleaved HIV-1 Env gp140.</a> J. Virol. 87, 11462-11475 (2013).</li>
<li>Ringe, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage+strongly+influences+whether+soluble+HIV-1+envelope+glycoprotein+trimers+adopt+a+native-like+conformation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Cleavage strongly influences whether soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers adopt a native-like conformation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 18256-18261 (2013).</li>
<li>Desormeaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+highly+conserved+layer-3+component+of+the+HIV-1+gp120+inner+domain+is+critical+for+CD4-required+conformational+transitions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">The highly conserved layer-3 component of the HIV-1 gp120 inner domain is critical for CD4-required conformational transitions.</a> J. Virol. 87, 2549-2562 (2013).</li>
<li>Haim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+CD4+and+CD4-mimetic+compounds+inhibit+HIV-1+infection+by+induction+of+a+short-lived+activated+state%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Soluble CD4 and CD4-mimetic compounds inhibit HIV-1 infection by induction of a short-lived activated state.</a> PLoS Pathogens. 5 (e1000360), (2009).</li>
<li>Haim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+intrinsic+reactivity+of+the+HIV-1+envelope+glycoproteins+to+CD4-independent+infection+and+global+inhibitor+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Contribution of intrinsic reactivity of the HIV-1 envelope glycoproteins to CD4-independent infection and global inhibitor sensitivity.</a> PLoS Pathogens. 7 (e1002101), (2011).</li>
<li>Thali, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+changes+in+gp120-CD4+binding+affinity+on+human+immunodeficiency+virus+type+1+envelope+glycoprotein+function+and+soluble+CD4+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Effects of changes in gp120-CD4 binding affinity on human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein function and soluble CD4 sensitivity.</a> J. Virol. 65, 5007-5012 (1991).</li>
<li>Medjahed, H., Pacheco, B., Desormeaux, A., Sodroski, J., Finzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HIV-1+gp120+major+variable+regions+modulate+cold+inactivation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">The HIV-1 gp120 major variable regions modulate cold inactivation.</a> J. Virol. 87, 4103-4111 (2013).</li>
<li>Thali, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+conserved+human+immunodeficiency+virus+type+1+gp120+neutralization+epitopes+exposed+upon+gp120-CD4+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of conserved human immunodeficiency virus type 1 gp120 neutralization epitopes exposed upon gp120-CD4 binding.</a> J. Virol. 67, 3978-3988 (1993).</li>
<li>Finzi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topological+layers+in+the+HIV-1+gp120+inner+domain+regulate+gp41+interaction+and+CD4-triggered+conformational+transitions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Topological layers in the HIV-1 gp120 inner domain regulate gp41 interaction and CD4-triggered conformational transitions.</a> Mol. Cell. 37, 656-667 (2010).</li>
<li>Kassa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transitions+to+and+from+the+CD4-bound+conformation+are+modulated+by+a+single-residue+change+in+the+human+immunodeficiency+virus+type+1+gp120+inner+domain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Transitions to and from the CD4-bound conformation are modulated by a single-residue change in the human immunodeficiency virus type 1 gp120 inner domain.</a> J. Virol. 83, 8364-8378 (2009).</li>
<li>Xiang, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutagenic+stabilization+and%2For+disruption+of+a+CD4-bound+state+reveals+distinct+conformations+of+the+human+immunodeficiency+virus+type+1+gp120+envelope+glycoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Mutagenic stabilization and/or disruption of a CD4-bound state reveals distinct conformations of the human immunodeficiency virus type 1 gp120 envelope glycoprotein.</a> J. Virol. 76, 9888-9899 (2002).</li>
<li>Mouquet, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex-type+N-glycan+recognition+by+potent+broadly+neutralizing+HIV+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Complex-type N-glycan recognition by potent broadly neutralizing HIV antibodies.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 3268-3277 (2012).</li>
<li>Julien, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broadly+neutralizing+antibody+PGT121+allosterically+modulates+CD4+binding+via+recognition+of+the+HIV-1+gp120+V3+base+and+multiple+surrounding+glycans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Broadly neutralizing antibody PGT121 allosterically modulates CD4 binding via recognition of the HIV-1 gp120 V3 base and multiple surrounding glycans.</a> PLoS Pathogens. 9 (e1003342), (2013).</li>
<li>Walker, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broad+neutralization+coverage+of+HIV+by+multiple+highly+potent+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Broad neutralization coverage of HIV by multiple highly potent antibodies.</a> Nature. 477, 466-470 (2011).</li>
<li>Moore, J. P., Willey, R. L., Lewis, G. K., Robinson, J., Sodroski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+evidence+for+interactions+between+the+first%2C+second%2C+and+fifth+conserved+domains+of+the+gp120+surface+glycoprotein+of+human+immunodeficiency+virus+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Immunological evidence for interactions between the first, second, and fifth conserved domains of the gp120 surface glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1.</a> J. Virol. 68, 6836-6847 (1994).</li>
<li>Robinson, J. E., Yoshiyama, H., Holton, D., Elliott, S., Ho, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+antigenic+sites+on+HIV+gp120+identified+by+a+panel+of+human+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biochem.+Suppl%22%5BJournal%5D)">Distinct antigenic sites on HIV gp120 identified by a panel of human monoclonal antibodies.</a> J. Cell. Biochem. Suppl. 16E (Q449), (1992).</li>
<li>Bonsignori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-Dependent+Cellular+Cytotoxicity-Mediating+Antibodies+from+an+HIV-1+Vaccine+Efficacy+Trial+Target+Multiple+Epitopes+and+Preferentially+Use+the+VH1+Gene+Family%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity-Mediating Antibodies from an HIV-1 Vaccine Efficacy Trial Target Multiple Epitopes and Preferentially Use the VH1 Gene Family.</a> J. Virol. 86, 11521-11532 (2012).</li>
<li>Brand, D., Srinivasan, K., Sodroski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+entry+in+the+CDR2+loop+of+the+CD4+glycoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Determinants of human immunodeficiency virus type 1 entry in the CDR2 loop of the CD4 glycoprotein.</a> J. Virol. 69, 166-171 (1995).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שום ניגוד עניינים.

assay זה הוא מותאם כדי לזהות את האינטראקציה של בז ספציפי עם HIV-1 מעטפה trimeric הביעה על פני התא. ברגע שהפרוטוקול כבר נקבע, ניתן להשתמש בו במדיום לתפוקה גבוהה עם עלויות נמוכות הכוללות חומר וכמויות קטנות של נוגדנים. מאז assay זה הוא מבוסס transfection, זה יכול בקלות להיות מותאם לcoexpression של חלבונים תאיים כגון CD4 כדי ללמוד את ההשפעות שלהם במבנה גוף מעטפה. עם זאת, בסיס transfection של פרוטוקול זה גם מרמז שזה א...

סוג נגיף כשל חיסוני אנושי 1 כניסה (-1 HIV), בתיווכו של גליקופרוטאינים trimeric הנגיפיים המעטפה (מעטפה) הוא הצעד הראשון של המחזור המדבק. להיות אנטיגן רק נחשף הנגיפי מוצג על פני השטח של virions, trimer מעטפה מעורר נטרול ונוגדנים nonneutralizing. ככזה, הוא מייצג מועמד מעניין לעיצוב immunogen החיסון. עם זאת, ניסויי חיסון עם מעטפה בצורות מסיסה או רקומביננטי עוררו תגובות עם יעילות מינימאלית בלבד מול רוב HIV-1 העיקרי מבודד 1-3. עם זאת, יעילות חלקית נצפתה בעניין ניסוי בחיסון RV144 4 המחודש בנגיף HIV-1 מעטפה כמועמד immunogen. זה אושר על ידי מחקר שנערך לאחרונה מתאר כי נוגדנים נגד מעטפה-הושר חיסון היו מספיק כדי ליצור מידה מסוימת של הגנה מפני SIV ו HIV מאתגר 5. לאחר שמסונתז בreticulum endoplasmic, glycoprote מעטפהבמבשר, gp160, עובר לאחר translational שינויים שונים שהם קריטיים ליכולתה כדי לתדלק את תהליך היתוך ויראלי. מבשר מעטפה חייב לקפל כראוי ושותף בtrimers לפני שהבקיע ליחידות משנת gp120 וgp41 הטרנסממברני במיוחד cytoplasmic 6-10, עם אינטראקציות noncovalent שמירה על קשר gp120-gp41. מכונות התא נגועות היא גם אחראיות לglycosylating כבדות מעטפה, הכולל כ -50% מהמסה הכוללת שלה 11,12. המבנה המורכב וכתוצאה מכך מאפשר מעטפה להיות conformationally גמישה 13,14, תוך מתן-חלקית, כי הוא חשב על מנת לאפשר מעטפה להסתגל ולהסתיר אפיטופים חיסוניים מאוד מסוימים שאחרת היה חשוף 15-19, המדגיש את החשיבות כדי להבין טוב יותר את התצורות השונות נדגמו על ידי trimer מעטפה הילידים. נכון להיום, כמה טכניקות פותחו ומשמשות בהצלחה ללמוד ch קונפורמציה מעטפהAnges. עם זאת, הם משתנים במגבלות שלהם, שלעתים קרובות מוגבלים להקשרי מעטפה ספציפיים. לדוגמא, תהודת plasmon פני השטח או מבחני immunoprecipitation באמצעות נוגדנים חד שבטיים ספציפיים קונפורמציה (בז), להסתמך גם על מולקולות מסיסה או solubilized monomeric מעטפה אשר ידוע להיות שונה immunogenetically מצורות trimeric 20,21. מחקרים שנעשה לאחרונה מראים גם כי מחשוף משפיע תצורות מעטפה וכתוצאה מכך החשיפה של אפיטופים מוכרים בעיקר על ידי nonneutralizing נוגדנים 14,22,23. כאן אנו מתארים בפירוט שיטה המאפשרת לקביעה מהירה וקלה של קונפורמציה של trimers מעטפה הביעה cellularly 18,24-26. בעקבות transfection החולף של מעטפה בשורת תאים חסיד אנושית המחייב של נוגדני מעטפה ספציפיים מזוהה באמצעות תגובת chemiluminescence פשוטה. גם טכניקה זו יכולה לשמש כדי לאפיין את העדפת קונפורמציה של קונפורמציה-depenנוגדני שקע. לפיכך, assay זה מספק שיטה לגילוי חזקה וגמישה מאוד.

<table><tbody><tr><td>תאי HOS</td><td>ATCC</td><td>CRL-1543</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית רקמות אטומה לבנה, 96 בארות, תחתית</td><td>שטוחה BD</td><td>353296</td><td></td></tr><tr><td>פוליאתילנימין, ליניארית, 25,000 מגה-וואט</td><td>Polysciences</td><td>23966</td><td>מוכן בתמיסה של 1 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>מדיום הנשר השונה של Dulbecco (DMEM)</td> <td>Invitrogen</td><td>11995</td><td></td></tr><tr><td>IgG אנטי אנושי עיזים, מצומד פרוקסידאז</td><td>פירס</td><td>31413</td><td></td></tr><tr><td>מצע כימילומינסנציה משופר</td><td>PerkinElmer</td><td>NEL105001EA</td><td></td></tr><tr><td>TriStar LB 941, קורא צלחות</td><td>Berthold Technologies</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הערכת קונפורמציה של hiv-1 trimeric מעטפת גליקופרוטאינים שימוש elisa assay מבוסס cell

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

גליקופרוטאינים מעטפת HIV-1 (Env) מתווכים כניסה ויראלית לתאי מטרה והם חיוניים למחזור הזיהום. הבנת האופן שבו גליקופרוטאינים אלה מסוגלים לתדלק את תהליך ההיתוך באמצעות השינויים הקונפורמטיביים שלהם יכולה להוביל לתכנון אימונוגנים טובים ויעילים יותר לאסטרטגיות חיסון. כאן אנו מתארים בדיקת ELISA מבוססת תאים המאפשרת לחקור את הזיהוי של HIV-1 Env טרימרי על ידי נוגדנים חד שבטיים. בעקבות ביטוי של HIV-1 trimeric Env על פני התאים שעברו טרנספטציה, נוגדנים ספציפיים נגד Env מודגרים עם התאים. לאחר מכן משתמשים בנוגדנים משניים מצומדים לחזרת פרוקסידאז ותגובת כימילומינסנציה פשוטה לאיתור נוגדנים קשורים. מערכת זו גמישה מאוד ויכולה לזהות שינויים קונפורמטיביים של Env הנגרמים על ידי CD4 מסיס או חלבונים תאיים. זה דורש כמות מינימלית של חומר וללא ציוד או ידע מיוחד במיוחד. לפיכך, ניתן לבסס טכניקה זו לבדיקת תפוקה בינונית עד גבוהה של אנטיגנים ונוגדנים, כגון נוגדנים שבודדו לאחרונה.

שימוש בנוהל הכללי שתואר לעיל, אנו מותאמים הפרוטוקול לassay ההשפעה של CD4 המסיס (sCD4) וCD4 הסלולרי coexpressed על החשיפה של אפיטופים CD4i משני wild-type (WT) או מעטפה שעברו מוטציה, כפי שתואר לעיל 18,24, 25,28. איור 1 סכמטי מייצג את ההליך באופן כללי וחשיפה של אפיטופים CD4i בעקבות הטיפול בsCD4 או על ידי coexpression של CD4 הסלולרי 18. באיור 2, שנהגנו sCD4 לגרום שינויי קונפורמציה מעטפה החושפים 17b CD4i מהבז ו48d אפיטופים שחופפים...

הבנת קונפורמציות של אנטיגנים על פני השטח של הנגיף נדרשת כדי להעריך את נטרול הנוגדנים ולהדריך את התכנון של אימונוגנים יעילים לחיסון. כאן אנו מתארים בדיקת ELISA מבוססת תאים המאפשרת לחקור את הזיהוי של HIV-1 Env טרימרי המתבטא על פני תאים שעברו טרנספטציה על ידי נוגדנים ספציפיים נגד Env.

הערכת קונפורמציה של HIV-1 trimeric מעטפת גליקופרוטאינים שימוש ELISA Assay מבוסס Cell

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לחקור גליקופרוטאינים במעטפת אחת של RIC HIV או אישור ENV עם נוגדנים חד שבטיים. זה מושג על ידי תאי היצמדות ראשונים כדי לבטא חלבוני HIV כימריים אחד E NV על פני התא. כשלב שני, התאים מודגרים בנוגדנים חד שבטיים נגד ENV, אשר יקשרו את ENV בהתאם לחשיפה לאפיטופ.לאחר מכן, מתווסף נוגדן משני מצומד HRP על מנת לכמת אינטראקציה של נוגדנים על ידי בדיקת כימילומינסנציה. מתקבלות תוצאות המראות רמות יחסיות של נוגדנים קשורים ל-VNV בהתבסס על יחידות האור היחסיות שנרכשו עבור כל אחד מהם. ובכן, היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון קשירה מבוססת עובדות, הוא שניתן לבצע טכניקה זו עם כמות נמוכה של נוגדנים ובתפוקה גבוהה, פוסט-דוקטורנט במעבדה יבצע טכניקה זו.תאי אוסטאוסרקומה אנושיים משמשים בניסוי זה יום אחד לפני צלחת הטרנספקציה, פעמיים כפול 10 לתאים הרביעיים לבאר. בצלחת תרבית תאים אטומה 96 באר המתאימה לקריאת זוהר. מדיום נשר משומש בתוספת סרום בקר עוברי וסטרפטומיצין פניצילין דוגרים על התאים בן לילה ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למחרת.הכן את תערובת הטרנספקציה. ראשית, הציבו שני צינורות, שני מפרצים ושניים B עד שני מפרצים. הוסף חמישה מיקרוליטרים של DMEM בתוספת 25 מילי-מולארי היפי, ואחריהם 10 ננוגרם של טאט וציפוי פלסמיד, ו-150 ננוגרם של HIV כימרי גליקופרוטאין מעטפת אחת המקודד פלסמיד.שים לב שהפלסמיד המקודד TAT נדרש רק בעת שימוש בגליקופרוטאין מעטפת אחת תלויה ב-TAT ב-HIV המקודד פלסמיד לשני B בחמישה מיקרוליטרים של DMM ו-450 ננוגרם של פוליאתלין או PEI. יש להתאים את כמויות הריאגנטים וה- DNA בהתאם למספר הבארות שיש להעביר עם אותו גליקופרוטאין מעטפת אחת של HIV. לאחר מכן, מוסיפים את התוכן של שני B לשני מפרצים ומערבבים היטב על ידי מערבולת למשך 10 שניות.דגרו את תערובת הטרנספקציה למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר 10 דקות, הוסיפו 10 מיקרוליטר מתערובת הטרנספקציה לכל באר של צלחת 96 הבארות הדגירה למשך 48 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% תחמוצת פחמן. ה- Ali SA לחקר הזיהוי של גליקופרוטאין מעטפת אחת של HIV כימרי על ידי נוגדנים חד שבטיים מבוצע יומיים לאחר הטרנספקציה של תאי האוסטאוסרקומה האנושיים.הכן 250 מיליליטר של מאגר כביסה לכל צלחת המשמשת בו זמנית. הכן 125 מיליליטר של מאגר חוסם לצלחת על ידי הוספת 1% חלב יבש ללא שומן וחמישה מילימולר של טריס pH 8.0 למאגר הכביסה. הסר את אמצעי תרבית התאים ותערובת הטרנספקציה מצלחת 96 הבארות.הוסף 100 מיקרוליטר של מאגר חוסם לבאר ודגר למשך 20 דקות. בטמפרטורת החדר, הסר את הסופרנטנט והוסף 50 מיקרוליטר נוגדן לכל באר מדוללת לריכוז המתאים במאגר חוסם. דגירה למשך שעה בטמפרטורת החדר.יש לשטוף שלוש פעמים עם 100 מיקרוליטר של מאגר חוסם ואז לחזור על תהליך הכביסה שלוש פעמים. יש לשטוף שלוש פעמים עם 100 מיקרוליטר של מאגר חוסם ולאחר מכן לשטוף שלוש פעמים עם 100 מיקרוליטר של מאגר כביסה לאחר הכביסה האחרונה. הסר את הסאטה.מוסיפים 100 מיקרוליטר של חיץ חוסם ודוגרים למשך חמש דקות. בטמפרטורת החדר, הסר את הסופרנטנט והוסף 50 מיקרוליטר של נוגדן משני מדולל אחד ל-3000 במאגר חוסם. דגירה למשך 40 דקות בטמפרטורת החדר לאחר 40 דקות.יש לשטוף שלוש פעמים עם 100 מיקרוליטר של מאגר חסימה, ולאחר מכן שלוש כביסות עם 100 מיקרוליטר של מאגר כביסה. כדי להכין את הדגימות לרכישת נתונים, הסר את הסופרנטנט מלוח 96 הבארות והוסף 30 מיקרוליטר של מצע כימילומינסנציה משופר אחד לכל באר. רכוש אות כימילומינסנציה למשך שנייה אחת לכל באר בקורא צלחות מתאים.על פי הוראות היצרן, ההשפעה של CD 4 או S CD 4 מסיס על החשיפה של CD 4 I אפיטופים על גליקופרוטאינים של מעטפת או ENV הייתה אינטראקציה של CD 4 עם ENV גורמת לשינויים מאשרים ENV החושפים אפיטופים של 17 B ו-48 D החופפים את אתר הקישור של הקולטן, אך אינם משפיעים על התחום החיצוני המזהה נוגדן 2 G 12. כדי להעריך את ההשפעה של מוטציות נקודתיות באישור ה-NV, נעשה שימוש בשני מוטציות ENV H 66 A, שיש לו נטייה מופחתת לדגום באופן ספונטני את אישור CD ארבע קשור ו-S3 75 W, מה שגורם ל-NV למצב CD 4 קשור. נרמול הנתונים הגולמיים בהתאם לרמות הביטוי, מגלה כי H 66 A מפחית את זיהוי CD 4 I 17 B, בעוד ש-S3 75 W משפר את האות 17 B ומספיק כדי לשחזר את הפנוטיפ של H 66.מוטציה של תאים בודקים עריסה שהועברה עם כמויות הולכות וגדלות של CD ארבע מבטא. יחד עם הפסים הכחולים של NV חשפו אותות הולכים וגדלים לנוגדנים חד-שבטיים CD four I, A שלוש, שניים ו-C 11, שזיהו אפיטופים לא רציפים בתחום הפנימי של גליקופרוטאין ENV. זיהוי GP אחד 20 ENV על ידי שני נוגדני G 12 לא הושפע.לבסוף, הנתונים הגולמיים נורמלו לשני G 12, היעדר אפנון 32 ו-C 11 כאשר ENV הועבר עם מוטציה CD ארבע עם ירידה ביכולת לקיים אינטראקציה עם ENV מצביע על כך שהאותות המוגברים היו תלויים באינטראקציה של E NV CD ארבע לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך ארבע שעות.

conformational-evaluation-hiv-1-trimeric-envelope-glycoproteins-using

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

האזור כתר לולאה רצפים שונים V3 של גליקופרוטאין את פני השטח המעטפה (gp120) של HIV-1 יכול להיות מאופיין מבנית במקרים רבים על ידי קיפול ב סיליקו תפקידים 10-22 של הלולאה באמצעות...

הערכת Dynamic תכונות רלוונטיים Immunologically מבנית השלישון של HIV-1 רצף V3 קראון Loop R2 על ידי מבראשית מתקפל

פיתחנו וקטור lentiviral שיש לה, בנוסף LTR תאת מגיב, את אלמנט Rev-תגובה (RRE) כי ניתן לווסת את ביטוי הגן הכתב בצורה HIV-1 ו-תאת Rev-מותנה. וקטור מאפשר את זיהוי ספציפי של שכפול HIV בתאים חיים באמצעות ביטוי ה-GFP.

סימון ספציפיות של HIV-1 תאים חיוביים באמצעות וקטור Rev-מותנה lentiviral מבטא את חלבון פלואורסצנטי ירוק

הפרוטוקול מתאר גישה תפוקה גבוהה לקביעת מבנים של חלבונים בממברנה באמצעות אלקטרונים cryo-3D טומוגרפיה ועיבוד תמונה. זה מכסה את הפרטים של הכנת הדגימה, איסוף נתונים, עיבוד נתונים לפרשנות, מסכם עם ייצור של היעד מייצג את הגישה, HIV-1 גליקופרוטאין מעטפה. נהלים אלה חישובית מעוצבים באופן המאפשר לחוקרים וסטודנטים כדי לעבוד מרחוק לתרום עיבוד וניתוח של נתונים מבניים.

קביעת מבנים מולקולריים של גליקופרוטאינים HIV מעטפה באמצעות אלקטרונים cryo-טומוגרפיה ו ממוצעים אוטומטי תת tomogram

מספר 2'-Fluoro aptamers נגד HIV-RNA 1Ba-L gp120 עם זיקה nanomole מבודדים מספריית RNA על...

פיתוח נייד מסוג ספציפי נגד HIV gp120 aptamers למסירה siRNA

מאמר זה מתאר שיטה לחזות היווצרות הסינפסה virological HIV-1 המעטפה הנגרמת על bilayers זכוכית הנתמכים מישוריים על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי סך פנימית (TIRF) השתקפות. השיטה ניתן גם לשלב עם כתמים immunofluorescence לזהות הפעלה חלוקה מחדש של מולקולות איתות המתרחשים במהלך היווצרות ה-HIV-1 המעטפה הנגרמת סינפסה virological.

הדמיה של HIV-1 מעטפה הנגרמת סינפסה Virological והאיתות על bilayers שומנים סינתטי

אנו מדגימים כאן מבחן קשירת ממברנה במבחנה שבו אינטראקציות בין HIV-1 Gag וממברנות שומנים מנותחות ויזואלית באמצעות Gag מתויג YFP המסונתז במערכת תרגום במבחנה מבוססת נבט חיטה ו-GUVs שהוכנו בטכניקת אלקטרופורמציה.

ויזואליזציה של HIV-1 Gag מחייב את הענק Unilamellar שלפוחיות (בוס) ממברנות

תיאר מתודולוגיה quantitate את הביטוי של גנים 96, 18 פני שטח חלבונים על ידי תאים בודדים לשעבר vivo, המאפשרות הזיהוי באופן שונה באה לידי ביטוי גנים, חלבונים בתאים הנגועים בנגיף ביחס תאים נגוע. אנו מיישמים את הגישה ללימוד CD4 הנגועים סיב+ T תאים מבודד קופי מקוק רזוס.

תא בודד כימות של mRNA וביטוי חלבונים השטח ב- CD4 הנגועים בנגיף+ T תאים מבודדים מן קופי מקוק רזוס

אנו מתארים וזמינותו מבוססת תא לדווח על HIV-1 היתוך באמצעות הביטוי של חלבון פלואורסצנטי ירוק לזיהוי על ידי מיקרוסקופ לזרום cytometry או קרינה פלואורסצנטית. זה יכול לשמש כדי לבדוק את מעכבי נגיפי כניסה (במיוחד בשלב fusion) במערכות זיהום תא ולתא.

Cre-עצלן תפוקה גבוהה מופעל ממברנה ויראלי Assay פיוז'ן לזהות מעכבי של היתוך ממברנה נגיפי HIV-1

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לזיהוי אפיטופים נטרול על חלקיקים דמויי וירוס אנטיגן מציגים (VLPs). אימונופרציפיטציה של נגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) נגזר VLPs מתבצע באמצעות נוגדנים חד שבטיים ספציפיים glycoproteins מעטפה בשילוב חלבון חרוזים מגנטיים מצומדים G. VLPs שנתפסו כפופים לאחר מכן SDS-PAGE וניתוח כתם מערבי באמצעות חלבון הליבה הנגיפי נוגדנים ספציפיים ל-Gag.

זיהוי אפיטופים רגישים לנטרול באנטיגנים המוצגים על חיסונים מבוססי חלקיקים דמויי וירוס (VLP) באמצעות בדיקת לכידה

כאן, אנו מתארים בדיקה חיסונית פלואורסצנטית מרובת מרבבים שפותחה לאחרונה המשתמשת במערכת ציטומטרית זרימה דו-מדווחת כדי לזהות בו זמנית שני אפיטופים ייחודיים של חלבון ספייק על חלקיקים נגיפיים שלמים של תסמונת נשימה חריפה חמורה קורונה 2 (SARS-CoV-2) שנלכדו על ידי מיקרוספרות מגנטיות מצומדות אנזים 2-2 הממירות אנגיוטנסין.

יצירת פרופיל של אפיטופים של חלבון פני השטח על חלקיקים נגיפיים על ידי אסטרטגיית Multiplex Dual-Reporter

כאן, אנו מתארים כמה שיטות מבוססות לקביעת מתח רשתית אנדופלסמית (ER) והפעלת תגובת חלבון פרושה (UPR), עם דגש מיוחד על זיהום HIV-1. מאמר זה מתאר גם סדרה של פרוטוקולים כדי לחקור את ההשפעה של מתח ER / UPR על שכפול HIV-1 והדבקה virion.

מדידת לחץ רשתית אנדופלסמית ותגובת חלבון פתוחה בתאי T נגועים ב- HIV-1 וניתוח תפקידה בשכפול HIV-1

חקור את קונפורמציית גליקופרוטאיני המעטפת של HIV-1 באמצעות שיטת ELISA מבוססת תאים. שיטה זו מאפשרת ניתוח יעיל של אינטראקציות נוגדנים עם חלבוני Env לפיתוח חיסונים.

הערכת קונפורמציה של HIV-1 trimeric מעטפת גליקופרוטאינים שימוש ELISA Assay מבוסס Cell

גלה סרטונים נוספים