Name: מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: למדו למדוד אנפילקסיס מקומי בעכברים באמצעות צבע Evans Blue וספקטרופוטומטריה. שיטה זו מאפשרת כימות אובייקטיבי של שינויים בחדירות כלי הדם בתגובות אלרגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לד"ר אלן מ. פוקס על עבודתה בנוגע למודל זה של אנפילקסיס מקומי. עבודה זו נתמכה על ידי מענק האוניברסיטה למדעי הבריאות R073UE.

.1 עכברים לרגש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון מניות OVA על ידי דילול OVA ב1x PBS לריכוז סופי של 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל. להקפיא את aliquots בcryovials ולאחסן ב -80 ° C לשימוש עתידי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא aliquots אחד או יותר מ20 מ&quot;ג / מניית OVA מ&quot;ל לטמפרטורת חדר. לדלל OVA ב1x PBS לריכוז סופי של 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​בצינור 5 מ&quot;ל קלקר עגול תחתון עם כובע. בקצרה מערבולת לערבב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד מחזיק את צינור הקלקר המכיל 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​OVA במערבולת להגדיר במהירות בינונית, מוסיף נפח שווה של אלום הומוגני ביסודיות Imject (40 מ&quot;ג / מ&quot;ל) dropwise תוך המשך מערבולת הצינור כדי לייצר יחס של 1: 1 של אלום לimmunogen. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח כובע על צינור צינור וקלטת למערבולת. הפעל מערבולת בהגדרה הנמוכה ביותר ולאפשר OVA לספוג לאלום ל30 דקות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תאפשר לכמות גדולה של זמן כדי לעבור בין הכנת OVA / אלום ורגישות עכברים. אם רגישות לא ניתן להשלים באופן ישיר לאחר preparat OVA / אלוםיון, חנות OVA / אלום בטמפרטורת חדר. מערבולת 1 דקות לפני השימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטעון מזרק אינסולין 1 מ&quot;ל עם תערובת OVA / אלום. מכסה את המזרק עם מחט המד 27.. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק של OVA / אלום 100 μl לתוך הצפק של עכברים / ג BALB למנה לכל עכבר של 50 מיקרוגרם של OVA ו2 מ&quot;ג של אלום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לביקורת שלילית, רגישות קבוצה אחרת של עכברים לPBS. הכן 1: תערובת 1 של אלום וPBS באותו אופן כפי שפורט לעיל, תוך השמטת OVA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רגישות כל העכברים (שליטת OVA וPBS) פעם בשבוע למשך 3 שבועות עבור הסכום כולל של 3 זריקות. לאחר ההזרקה אחרונה, לחכות לפחות 2 שבועות לפני ביצוע assay אנפילקסיס המקומי. </li></ol> .2 המקומי אנפילקסיס Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא פתרון מניות OVA לטמפרטורת חדר. בצינור 1.5 מ&quot;ל microcentrifuge, לדלל 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​מניית OVA לריכוז סופי של 5 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​עם PBS (1: 4 דילול של OVA ב1X PBS). בקצרה מערבולת לערבב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים באמצעות RC 2 &lt;/ Sup&gt; מערכת מכרסמים הרדמה (או מערכת אספקה ​​מתאדה מקבילה). מלא מאגר עם isoflurane, ולהדליק O 2 זרימת אוויר. מקום עכברים בחדר אינדוקציה ולהתאים חיוג שליטת isoflurane עד 5% ליזום הרדמה. ברגע שעכברים מורדמים באופן מלא, שצוין על ידי חוסר הניידות, להתאים חיוג שליטת isoflurane עד 3% כדי לשמור על הרדמה עמוקה. המטרה של הרדמה בהליך זה היא לשתק את בעלי החיים. זריקות וריד אוזן וזנב לא לגרום לכאב או מצוקה משמעותיים לבעלי החיים. הערה: Isoflurane יכולה להיות השפעות שליליות על מערכת הרבייה האנושית. הקפד להשתמש בחדר מאוורר היטב ולצרף מיכל הדחה לתא האינדוקציה לנטרל גז פסולת. אם הינך בהריון בעת ​​שימוש isoflurane, ללבוש מסכת מסנן פחמן כדי למזער את החשיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען 10 μl של 5 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​OVA לתוך מזרק אינסולין 3/10 סמ&quot;ק כתרים עם מחט ביום 31 בG. לטעון אחר מזרק אינסולין 3/10 סמ&quot;ק עם 10 μlPBS של 1x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרוסקופ לנתח, להזריק 10 μl של OVA לאוזן ימין של עכבר הרדים למנת אתגר של 50 מיקרוגרם של OVA. מינונים אחרים, כגון 20 מיקרוגרם, גם מקובל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לייצב את האוזן להזרקה, לעטוף נייר דבק (צד עד דביק) סביב צינור חרוטי 15 מ&quot;ל. אבטח את צד הגב של אוזן ימין לקלטת. הכנס את צד פוע המחט בין שני העלים של האוזן. לאט לאט להזריק OVA למרכז רקמת האוזן, נזהר שלא לפגוע בכל כלי דם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש באותה השיטה שתוארה לעיל, להזריק 10 μl של PBS לתוך אוזן השמאל כביקורת שלילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 3 דקות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תקופה זו, להציב את העכבר בעוצר ולהחזיק את הזנב תחת מנורת חום או באמבט מים חם ל1 דקות כדי להרחיב את כלי הדם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מזרק אינסולין 1 מ&quot;ל כתרים עם מחט 27 G, להזריק לאט 200 μl של .0.5% צבע אוונס הכחול לv הזנבעין של העכבר. הזרקה מהירה עלולים להרוס את מבנה הספינה לפני 200 μl כולו מנוהלת. במקרה זה, תנסה להזריק את הנפח הנותר של צבע לתוך הווריד בצד השני של הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר ולהסיר את שני האוזניים באמצעות מלקחיים ומספריים כירורגיות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את הקצוות של האוזן עם מלקחיים, ולוודא כי אין לחץ מוחל על אתר ההזרקה במרכז של האוזן. להסיר כמה שיותר רקמת אוזן ככל האפשר על ידי חיתוך קרוב ל, אך לא דרך, הרכס של הווה סחוס בבסיס של האוזן. כמויות קטנות של פרווה יכולות להיות נוכחת באוזן נכרתה; זה לא ישפיע על assay. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aliquot 700 μl של פוראמיד לתוך צינורות 1.5 מ&quot;ל microcentrifuge. הכן צינור אחד לכל אוזן (שני צינורות לכל עכבר). הערה: פוראמיד הוא טרטוגניות, mutagenic, וגירוי. ללבוש כפפות, משקפי מגן, ופנים הגנה. נשים בהריון צריכות לנקוט באמצעי זהירות בעת טיפולפוראמיד של עשוי להיות fetotoxic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת אוזניים לפוראמיד, מכסה את הצינורות, ודגירת הלילה באמבט חום יבש מוגדר 63 ° C. אוזניים עדיין עשויות להופיע כחולות מעט לאחר דגירה; עם זאת רוב הצבע יהיה חילוץ לפוראמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 300 μl של כל דגימה, בשני עותקים, לצלחת גם 96. הימנע מהעברת פרווה אם הוא נמצא במדגם. ודא שאין בועות בהווה בבארות, כפי שהם ישפיעו על הקריאה ספיגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 300 μl של פוראמיד, בשני עותקים, לצלחת גם 96. בארות אלה ישמשו כחסר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ספקטרופוטומטר למדוד הספיגה ב 620 ננומטר. בארות פוראמיד לגרוע מכל קריאת מדגם. הערה: כל הניסויים בוצעו תחת פרוטוקולים שאושרו על ידי הוועדה מוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטת שירותים במדים. </li></ol>

<ol><li>Kojima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+and+Bbasophils+are+selectively+activated+in+vitro+and+in+vivo+through+CD200R3+in+an+IgE-independent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mast cells and Bbasophils are selectively activated in vitro and in vivo through CD200R3 in an IgE-independent manner.</a> The Journal of Immunology. 179 (10), 7093-7100 (2007).</li>
<li>Parikh, S. A., Cho, S. H., Oh, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preformed+enzymes+in+mast+cell+granules+and+their+potential+role+in+allergic+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Allergy+and+Asthma+Reports%22%5BJournal%5D)">Preformed enzymes in mast cell granules and their potential role in allergic rhinitis.</a> Current Allergy and Asthma Reports. 3 (3), 266-272 (2003).</li>
<li>Amin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mast+cells+in+allergic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of mast cells in allergic inflammation.</a> Respiratory Medicine. 106 (1), 9-14 (2012).</li>
<li>Nakaya, M., Takeuchi, N., Kondo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+localization+of+histamine+receptor+subtypes+in+human+inferior+turbinates%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical localization of histamine receptor subtypes in human inferior turbinates.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 113 (7), 552-557 (2004).</li>
<li>Ramsdell, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+Trypan+Blue+to+demonstrate+the+immediate+skin+reaction+in+rabbits+and+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">The use of Trypan Blue to demonstrate the immediate skin reaction in rabbits and guinea pigs.</a> The Journal of Immunology. 15 (4), 305-311 (1928).</li>
<li>Chase, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+sensitization+of+animals+with+simple+chemical+compounds%3A+X.+Antibodies+inducing+immediate-type+skin+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on the sensitization of animals with simple chemical compounds: X. Antibodies inducing immediate-type skin reactions.</a> The Journal of Experimental Medicine. 86 (6), 489-514 (1947).</li>
<li>Goose, J., Blair, A. M. J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+cutaneous+anaphylaxis+in+the+rat%2C+induced+with+two+homologous+reagin-like+antibodies+and+its+specific+inhibition+with+disodium+cromoglycate%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Passive cutaneous anaphylaxis in the rat, induced with two homologous reagin-like antibodies and its specific inhibition with disodium cromoglycate.</a> Immunology. 16, 749-760 (1969).</li>
<li>Ovary, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+cutaneous+anaphylaxis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Passive cutaneous anaphylaxis in the mouse.</a> The Journal of Immunology. 81 (4), 355-357 (1958).</li>
<li>Ovary, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+reactions+in+the+skin+of+experimental+animals+provoked+by+antibody-antigen+interactoin%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Allergy%22%5BJournal%5D)">Immediate reactions in the skin of experimental animals provoked by antibody-antigen interactoin.</a> Progress in Allergy. 5, 459-508 (1958).</li>
<li>Akiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitiative+evaluation+of+passive+cutaneous+anaphylaxis+%28PCA%29+using+a+hand-held+spectrophotometer%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+%26+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Quantitiative evaluation of passive cutaneous anaphylaxis (PCA) using a hand-held spectrophotometer.</a> Biological & Pharmaceutical Bulletin. 19 (8), 1112-1114 (1996).</li>
<li>Teshima, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+spectrophotometric+analysis+of+passive+and+active+ear+cutaneous+anaphylaxis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Simple spectrophotometric analysis of passive and active ear cutaneous anaphylaxis in the mouse.</a> Toxicology Letters. 95 (2), 109-115 (1998).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

סמנים רבים של מחלות אלרגיות נמצאים בשימוש כדי להעריך את הכוח של תגובות אלרגיות הבאות אתגר אלרגן, לרבות שינויים ברמות של היסטמין במחזור, ייצור ציטוקינים Th2, וגיוס של תאים לנוזל רונכואלוואולרית בהגדרה של אתגר דרכי הנשימה. בעוד מעקב אחר שינויים בפרמטרים אלה הוא חשוב ללימוד לתגובות אלרגיות, סמנים ביולוגיים לא תמיד לתאם עם מחלה אלרגית קלינית. Assay אנפילקסיס המקומי תאר בפרוטוקול זה מספק מדידה לשחזור של חדירות כלי דם מקומיים כלתאם למחלה אלרגית מקומית. באמצעות extravasation צבע הכחול, פ...

סוג אני רגישות יתר מתווך על ידי-Induced אנטיגן cross-linking של IgE על פני השטח של תא פיטום ובזופילים. התוצאה היא degranulation הסלולרי והשחרור של מתווכי vasoactive ומעודדים דלקת כגון היסטמין, tryptase, וגורם 2 שמפעיל את טסיות דם. בעקבות השחרור של מתווכים, מעוצב מראש, במהלך degranulation, תאי פיטום לסנתז ולשחרר פרוסטגלנדינים ולאוקוטריאנים, המגדיל את חדירות כלי דם 3 נוסף. התגובה הקלינית הראשונית מתרחשת במהירות, והוא מכונה &quot;תגובה מיידית&quot;. בעור, תגובת wheal ו- התלקחות גלויה בקלות בתוך דקות של אתגר אנטיגן. בהתאם למינון של האתגר, אפשר לצפות &quot;תגובת שלב מאוחר&quot; כמה שעות מאוחר יותר. נפיחות שלב המאוחרות בשל בצקת מקומית וגיוס ליקוציט לתוך הרקמות 2. היסטמין, בדרך כלל נחשב למתווך העיקרי לוקח חלק בתגובות אלרגיות מיידיות, פועלת על קולטן היסטמין 1 (HR1) הביעה בכלי וקולט היסטמין 2 (HR2) הביע על שריר חלק. ההשפעה המשולבת מגבירה את זרימת דם וחדירות כלי דם באתר של דלקת 4. מגוון רחב של מודלים של בעלי החיים של אלרגיה פותחו כדי לחקור את המנגנונים מעורבים בדלקת אלרגית, כולל מודלים של אסתמה אלרגית, אנפילקסיס המערכתי, ואנפילקסיס המקומי. ממשל צבע תוך ורידים נעשה שימוש כדי למדוד את התגובות אלרגיות מקומיות במודלים של בעלי חיים לכמעט מאה שנה, עם פרסומים המתארים היכרויות טכניקה זו חזרה ל1920s 5. ארנבות ושרקנים היו המודלים של בעלי החיים הראשונים משמשים לבדיקת תגובות של רגישות יתר מיידיות, והתגובות רגישות ביותר נמצאו בדרך כלל באוזן 5,6. Assay מאוחר יותר תוקף לשימוש בחולדות ועכברים 7 8. מבחינה הסטורית,מגוון של שיטות ניסיוניות היה בשימוש, כולל הזרקה של אנטיגן לפני הזריקה של צבע, הזרקה של צבע לפני הזריקה של אנטיגן, והזרקה בו זמנית של צבע ואנטיגן. ממשל צבע תוך ורידים כאמצעי למדידת תגובות אלרגיות הוא assay צדדי כפי שהוא יכול לשמש למדידה פעילה, פסיבי, ולהפוך את תגובות פסיביות 5,9. צבעים רבים כבר נוצלו כדי להעריך את תגובות אלרגיות, כולל Trypan הכחול, Pontamine שמיים כחולים, אוונס הכחול, Geigy הכחול 536, והודו דיו 5,6,9. פתרון של .0.5% כחול אוואנס הוא כיום הצבע הסטנדרטי המשמש למדידת תגובות אלרגיות בעור. התגובה אנפילקטית לאתגר היא חולפת; הוא הגיע בעוצמה מקסימלית בתוך 10 - 15 דקות של הזרקת צבע, ואין תגובה היא גלויה אם צבע מנוהל יותר מ 30 דקות אחרי האתגר, ללא קשר למינים של בעלי החיים המשמשים 9. כימות של extravasation הצבע הייתה מקוריתly מתקבל על ידי מדידת גודל wheal כפי שצוין על ידי הצבע הכחול 7-9. בנוסף, סעיפים של תאי פיטום degranulated ניתן לכמת על ידי כריתת רקמת עור מהאתר של התגובה וצביעה עם toluidine הכחול 7. degranulation תא פיטום משמש לעתים קרובות כסמן לעורית, תגובות אלרגיות בתיווך IgE, כתאי פיטום הם אוכלוסיית התא המקומית העיקרית המבטאת את הזיקה הגבוהה IgE קולט FcεRI. טכניקות spectrophotometric למדידת extravasation צבע לתוך הרקמות פותחו לאנפילקסיס הפסיבי עורית (PCA) בחולדה 10 ו11 העכבר של 1990. פרוטוקול assay אנפילקסיס המקומי הבא הותאם מאל Kojima et. 1, ומנצל ovalbumin ביצת עוף (OVA) כאנטיגן ללעורר תגובות אלרגיות. עם זאת, ניתן להשתמש באנטיגנים אחרים מאשר OVA אם תרצה בכך. Assay אז משתמש לצבוע אוונס הכחול לעקוב אחר שינויים בpermeabilit כלי הדםy המתרחשים עקב תורן תא קישור צולב IgE ושחרור היסטמין.

<table><tbody><tr><td>עכברי BALB/c</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>651</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4</td><td>איכות ביולוגית</td><td>114-058-101</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin</td><td>Sigma</td><td>A5503-10G</td><td></td></tr><tr><td>הזרקת Alum</td><td>Thermo Scientific</td><td>77161</td><td>יש לערבב היטב לפני השימוש</td></tr><tr><td>Evans Blue Dye</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Formamide</td><td>Sigma</td><td>295876</td><td>99%+ איזופלורן בדרגה ספקטרופוטומטרית</td></tr><tr><td>, USP</td><td>Phoenix</td><td>NDC 57319-474-06</td><td></td></tr><tr><td>1 סמ"ק מזרקי אינסולין</td><td>BD</td><td>329654</td><td></td></tr><tr><td>3/10 סמ"ק מזרק אינסולין עם מחט 31 גרם</td><td>Terumo</td><td>NDC 100861</td><td></td></tr><tr><td>27 גרם מחטים</td><td>BD</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>FST</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td></td> <td>FST14070-12</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל פוליסטירן צינורות תחתונים עגולים</td><td>BD Falcon</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>שותפי אספקה רפואית</td><td>15-1151</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות חרוטיים</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>תחתית שטוחה 96 בארות</td><td>צלחת Costar</td><td>3590</td><td></td></tr><tr><td>סקוטש טייפ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RC2 מערכת הרדמת מכרסמים</td><td>VetEquip</td><td>922100</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Genie 2</td><td>Scientific Industries</td><td>SI-0236</td><td>דגם G560 עם פלטפורמה בגודל 3 אינץ'</td></tr></tbody></table>

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

תגובות אלרגיות הן התוצאה של הפעלת תאי מאסט ובזופילים, ואת שחרורו הבא של vasoactive ומתווכים מעודדי דלקת. חשיפה לאלרגן באדם רגיש יכולה לגרום לתסמינים קליניים המשתנים מאריתמה הקטין לאנפילקסיס סכנת חיים. במעבדה, מודלים של בעלי חיים שונים פותחו כדי להבין את מנגנוני נהיגה תגובות אלרגיות. בזאת, אנו מתארים שיטה מפורטת למדידת שינויים בחדירות כלי דם לכמת תגובות אלרגיות מקומיות. Assay אנפילקסיס המקומי דווח לראשונה ב1920s, והותאם מהטכניקה שפורסמה על ידי אל Kojima et. ב2007 1. ב assay זה, עכברים רגישים לOVA מאותגרים באוזן השמאל עם רכב ובאוזן ימין עם OVA. זה ואחריו הזרקה תוך ורידית של צבע אוונס הכחול. עשר דקות לאחר הזרקת אוונס הכחול, בעלי החיים הוא מורדמים והצבע שextravasated בלאוזניים מופק לילה בפוראמיד. הספיגה של הצבע שחולץ לאחר מכן לכמת עם ספקטרופוטומטר. שיטה זו באופן מהימן תוצאות בביטוי חזותי וכימות של תגובה אלרגית מקומית.

בעלי חיים שעברו assay בהצלחה יהיו עור ועיניים המופיעות כחול. בעלי חיים רגישים PBS לא צריכים להגיב לכל אחד PBS או אתגר OVA, לכן שני האוזניים צריכה להישאר (איור 1 א) הלבן. בבעלי החיים OVA רגישים, אוזן קבלת אתגר PBS (משמאל) צריכה להיות לבנה או בקלילות כחולה בדרך מקומית באתר ההזרקה לחלוטין. אוזן קבלת אתגר OVA (מימין) צריכה להיות בהדרגה כהה הכחול במהלך 10 דקות לאחר מתן צבע (איור 1). ב...

תגובות אלרגיות, המתאפיינות בהפעלת תאי מאסט ובזופילים, מונעות על ידי הקישור הצולב של IgE והשחרור של מתווכים מעודדי דלקת. הערכה כמותית של תגובות אלרגיות יכולה להיות מושגת על ידי שימוש בצבע כחול אוונס לעקוב אחר שינויים בחדירות כלי דם לאחר אתגר אלרגן.

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא למדוד שינויים בחדירות כלי הדם, לכמת תגובות אלרגיות מקומיות. זה מושג על ידי רגישות החיות תחילה לאלרגן, כגון O אלבומין. השלב השני הוא לאתגר את האוזניים בהזרקה תוך עורית של האלרגן.ואז הצבע הכחול של אוון מוזרק לווריד הזנב. השלב האחרון הוא לחלץ את הצבע מהאוזניים המאותגרות על ידי דגירה למשך הלילה. בצורה, אמיד פוטומטריית ספקטרו בסופו של דבר משמשת לכימות כמות הצבע שנכנסה לאוזן.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני השיטות הקיימות הוא שאקסטרוואזציה של צבע נמדדת על ידי ספקטרומטריה. המשמעות היא שהבדיקה אינה נתונה בקלות להטיית הצופה. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו מכיוון שהזרקות ורידים תוך עוריים וזנב מאתגרות מבחינה טכנית ודורשות תרגול רב כדי להשיג מיומנות.התחל בהבאת תמיסת מלאי ביציות לטמפרטורת החדר לשימוש. בטמפרטורת החדר, יש לדלל את מלאי הביציות לריכוז של מיליגרם אחד למיליליטר ב-XPBS אחד. השתמש בצינור תחתון עגול מפוליסטירן בנפח חמישה מיליליטר.מערבל את הצינור במהירות בינונית, והוסף בזהירות נפח שווה של הומוגני ביסודיות. הזריק אלום לתמיסת הביציות טיפה. במקביל, הכינו תמיסת בקרה שלילית של אלום מעורבב ל-PBS ביחס של אחד לאחד באותה טכניקה.לאחר מכן מכסים את הצינורות ומאבטחים אותם למערבולת. הפעל את המערבולת בהגדרה הנמוכה ביותר למשך חצי שעה כשהצינורות מחוברים. כאשר הפתרונות

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מדידות חוזרות של הפיזיולוגיה מכרסם הנשימה דגימה של תאים דלקתיים בדרכי האוויר רצויות, אבל בדרך כלל לא ריאלי. כאן אנו מתארים את שיטת הדיר עבור בעל פה intubating עכברים המאפשר מדידות חוזרות של דרכי הנשימה ואת hyperreactivity דגימה של תאים דלקתיים בדרכי האוויר.

הפיך, לא פולשני שיטת ההתנגדות מדידות דרכי הנשימה ואת נוזל שטיפה ברונכואלוואולרית דגימה של עכברים

מודלים העכבר ניסיוני של אסטמה אלרגית להציע אפשרויות חדשות ללימוד בהיווצרות המחלה ופיתוח ותרופות חדשות. דגמים אלה מתאימים גם לגורמים השולטים מדידה תגובה חיסונית אלרגית, דלקת בדרכי הנשימה, ו פתופיזיולוגיה ריאתי.

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

סרטון זה מדגים טכניקה in vivo להערכת אנטיגן בדיקה על ידי גרימת דלקת עור במודל מורין. האנטיגן הנבדק - הפטן בתמיסת שמן/אצטון - נמרח באופן מקומי על עור אוזן העכבר, ודלקת העור מוערכת לאחר תקופה מספקת.

טכניקה להערכת התגובה החיסונית נגד אנטיגן על ידי גרימת דלקת בעור

אובדן של רפלקס ליישר שימש עוד פונדקאית התנהגותיות סטנדרטית לחוסר הכרה, המכונה גם היפנוזה, בחיות מעבדה. שינויים ברגישות לחומר הרדמה נדיפים הנגרמים על ידי התערבויות תרופתיים יכולים להיות מזוהים עם מערכת מבוקרת בקפידה תפוקה גבוהה הערכה, אשר עשוי להיות מותאמת לאספקה ​​של כל טיפולי בשאיפה.

הערכת שינויים בנדיפות כללית הרדמה רגישות של עכברים לאחר התערבות תרופתי מקומית או מערכתית

מדידות פון פריי אלקטרוניות הן אלטרנטיבה יעילה ומשופרת לחוטי פון פריי הקלאסיים, מכיוון שהן מאפשרות מדידה מהירה ומדויקת של שינויים בספי הנסיגה המכאניים של מכרסמים לגירוי לחץ המופעל ברציפות לפני ואחרי אירוע דלקתי.

מדידת שינויים במגע רגישות בכף הרגל האחורית של עכברים באמצעות מנגנון אלקטרוני פון פריי

המתואר הוא הכנת חלקיקים liposomal antigenic והשימוש שלהם עירור תאי B הפעלה במבחנה וב -vivo. תגובות נוגדנים חזקים ועקביים הוביל את הפיתוח של מודל חדש של אלרגיה לבוטנים. הפרוטוקול עבור יצירת ליפוזומים antigenic ניתן להרחיב אנטיגנים שונים ומודלים חיסונים.

ליפוזומים antigenic לדור של נוגדנים מחלות ספציפיות

כאן אנו מציגים שיטה חדשה כדי למדוד במדויק את הבדלי טמפרטורה גוף פסיבי אנפילקסיס מערכתית (PSA), מזון אלרגיה העכבר מודלים באמצעות מד חום אינפרא אדום... הליך זה שוכפל במדויק בתוצאות ה-PSA הקודמת.

מדידה טמפרטורת גוף העכבר באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתית פסיבי והערכה אלרגיה למזון

כאן, אנו מציגים שלוש שיטות להערכת הגירה נויטרופילים והסתננות הן בvivo והן בתוך מבחנה. שיטות אלה ניתן להשתמש כדי לגלות מבטיח therapeutics פילוח הגירה נויטרופילים.

מזהה הגירה הסתננות של נויטרופילים בעכברים

רגישות יתר למגע (CHS) היא מודל ניסיוני של מורין של דרמטיטיס מגע אלרגי (ACD). CHS מבוסס על רגישות עם hapten תגובתי על ידי צביעת העור המגולח של החזה והבטן, עם אתגר עור אוזן לאחר מכן עם hapten מדולל, הגורם לתגובת נפיחות כי הוא מוערך בדרכים שונות.

צור רגישות יתר כמודל מורין של דרמטיטיס מגע אלרגי

כאן, אנו מתארים את השיטות לגרימת דרמטיטיס מגע אלרגי באוזני עכבר על ידי 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) וכיצד להעריך את חומרת דרמטיטיס מגע אלרגי.

מודל אוזן עכבר להערכת דרמטיטיס במגע אלרגי

למדו למדוד אנפילקסיס מקומי בעכברים באמצעות צבע Evans Blue וספקטרופוטומטריה. שיטה זו מאפשרת כימות אובייקטיבי של שינויים בחדירות כלי הדם בתגובות אלרגיות.

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

גלה סרטונים נוספים