Name: Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: למדו לכמת התנהגות הימנעות חברתית ב-Drosophila melanogaster באמצעות מבוך T פשוט. פרוטוקול זה מאפשר לחקור השפעות גנטיות וסביבתיות על אינטראקציות חברתיות בזבובי פירות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו מודים לרייצ'ל קניפאיור על עזרתה בזיהוי זן הבר החדש כזן מלנוגסטר. R.W.F, O.F. ו-A.F.S היו אחראים על תכנון המחקר; R.W.F, M.N. ו-O.F. ביצעו את הניסויים. R.W.F, M.N., O.F. ו-A.F.S. ניתחו את הנתונים; R.W.F., I.S.M. ו-A.F.S. כתבו את כתב היד. 
עבודה זו נתמכה על ידי פרסי המחקר של PSC-CUNY, במימון משותף של קונגרס הסגל המקצועי ואוניברסיטת העיר ניו יורק ל-A.F.S.; על ידי מימון פנימי מאוניברסיטת ווסטרן ל-A.F.S. ו-I.S.M.; על ידי תמיכה בהכשרה מהברית הלאומית לבריאות היספנית/תוכנית המלומדים ההיספניים של Merck Ciencia (Science) ומלגת אוניברסיטה מבית הספר לאמנויות ומדעים של ייל ל-R.W.F.

1. ציוד וריאגנטים שנוצרו בבית (ראה רשימה של חומר לאחרים) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מנגנון הרדמה קרה תסיסנית לבצע עבודת זבוב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך גיליון פוליאתילן נקבובי כדי לכסות קופסא קטנה מפלסטיק (12.7 סנטימטרים, רוחב 10.2 סנטימטרים), בדרך כלל את המכסה העליון של תיבת טיפים פיפטה (12.7 סנטימטר, רוחב 10.2 סנטימטר, 3.8 סנטימטרים עומק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למלא את התיבה עם קרח כתוש, מכסה בגיליון פוליאתילן הנקבובי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מנגנון T-מבוך; להתאים את המנגנון שתואר קודם לכן בפרטי 28-31. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן aspirator לטוס כמתואר 32. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מנגנון תגובת Phototaxis לעקור זבובים ובמתוך בקבוקוני מבחן בלי לחץ: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במנגנון נגדי, כפי שתואר על ידי 29,33. </li></ol></li></ol> הערה: גם T-המבוך יכול לשמש למטרות אחרות, כפי שתואר על ידי 28. <ol start="5" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא Homתנאי תאורת ogeneous: לבצע את הניסוי על ספסל מכוסה בכיסוי ספסל לבן, ומול לוח לבן. הערה: בניסויים אלה, זנים לטוס השתמשו היו דרוזופילה melanogaster wild-סוגים: קנטון-S, אורגון וסמרקנד עף ממניות המעבדה שלנו 34; זבובי אלווד נאספו בסתיו 2011 בשכונת אלווד של הנטינגטון, בלונג איילנד, ניו יורק, ארה&quot;ב. </li></ol> 2. הכנת הזבובים לפני הניסוי 1-2 ימים לפני ביצוע הניסוי: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על זבובים בקמח תירס-אגר-מולסה-שמרים בינוניים סטנדרטי של 25 מעלות צלזיוס בשעתי אור 12 / מחזור כהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הזבובים מגיבים בהרדמה קרה 1-2 ימים לפני ביצוע הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים מהבקבוקים שבו הם הועלו לצינורות 50 מיליליטר פלקון, תוך שימוש במשפך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצינור הבז עם הזבובים מתחת לרמת קרח, לדלי קרח מבודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מנגנון ההרדמה הקר עם קרח כתוש ב-4 ° C לצנן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 5 דקות לזבובים להיכנס לתרדמת צינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים על גיליון פוליאתילן הנקבובי של מנגנון ההרדמה הקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הזבובים מגיבים על מנגנון ההרדמה הקר. ב RT, תחת סטראו, להפריד גבר בן 3-7 ימים מזבובים נשיים ולשמור על זבובים אלה בקבוצות של 40. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את זבובי פולט 1-2 ימים לפני ביצוע הניסוי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לאסוף מעורב-מין קנטון-S עף מהבקבוקים שלהם, באמצעות aspirator פה, שליטה על מספרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על זבובים אלה בקבוצה של 60-100, כפי שיהיה קרינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן דגימות רבות של קרינה כנקודות הנתונים דרושות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר לפחות לילה של התאוששות לאחר איסוף המגיבים והקרינה, כדי למזער את ההשפעה של בלבול ההרדמה הקרהואוסף הפה aspirator על התנהגות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את התיק של בקבוקוני בדיקה, כדי לאפשר לאוויר ריח פלסטיק המעופש בתיק להיות מוחלף על ידי אוויר צח, לפחות יום 1 לפני הניסוי. </li></ol> 2 שעות לפני ביצוע הניסוי: <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהטמפרטורה בחדר שבו הניסוי מתבצע היא סביב 23-25 ​​מעלות צלזיוס, עם אפילו אור, ולחות מעל 30%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את המגיבים וזבובי פירות קרינה לתוך צלוחיות מזון טריות על מנת להבטיח כי זבובים אלו אינם מורעבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו זבובי הפירות להסתגל לסביבה לשעה 2, על הספסל שבניסוי יבוצע. </li></ol> 3. ביצוע הניסוי החברתי ההימנעות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע כל ניסוי באותו הזמן של היום, בטווח של 3-4 שעות בשעתי אחר הצהריים בין הפעם צייטגבר ZT5 וZT9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את T-המבוך על משטח הכתישה, ולהדק את הבורג קליפ כל כך tהוא המעלית הוא יציב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים מגיבים לתוך בקבוקון בדיקה טרי. הצמד בקבוקון זה מכיל את הזבובים מגיבים על החלק העליון של T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיפוע מנגנון T-המבוך והקש עליו על המזרן ההולם כל כך זבובי הפירות נופלים במעלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את החלק העליון של המעלית כלפי מטה, כך הזבובים הם בין החלק העליון ותחתון של T-המבוך, אבל לשים לב כדי לשמור על המעלית מעל נקודת הבחירה - כדי למנוע הזבובים לברוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג בקבוקונים עם DSO (ראה סעיף 5 ליצירת בקבוקוני DSO-החופשי שנכבשו בעבר על ידי זבובים). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד הזבובים מגיבים להסתגל לסביבה חדשה זו, למקם את זבובי הפולט בבקבוקון מבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים פיסת צמר גפן כדי לסגור את הבקבוקון כך זבובי פירות שלא יברחו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכאני להתסיס בקבוקון זה על מיני-מערבולת כדלקמן: מערבולת במשך 15 שניות, הסר את הבקבוקון מהמערבולת במשך 5 שניות. חזור 3 פעמים עבור הסכום כולל של 55 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראםאובת זבובי הפולט מתוך הבקבוקון הטרי - על ידי העברה בבקבוקון מזון - ועד מהרה את מקום הבקבוקון זה מילא DSO לאחת משני צידי מכשיר T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את הצד של מיקום לבקבוקון מולא DSO בכל סיבוב חדש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בקבוקון מבחן טרי בצד השני של T-המבוך האחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא את המעלית לגמרי, כך זבובי הפירות יכולים לבחור בין בקבוקון בדיקה הטרי ובקבוקון הבדיקה עם DSO, ולהתחיל את הטיימר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הזבובים לבחור בין הבקבוקון הטרי ובקבוקון DSO, 1 דקות, אלא אם צוינו אחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 1 דקות, להעביר את המעלית עד להפריד את הזבובים בבקבוקון הטרי, בקבוקון DSO, ואלה תקועים במעלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר הזבובים בכל בקבוקון, ובמעלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על פעולה זו עבור כל גנוטיפ / מצב. </li></ol> 4. ניתוח נתונים החברתי ההימנעות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר זבובי פירות בכל בקבוקון לכל חנוטype, ולהעביר את הנתונים לגיליון אלקטרוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתוכנת גיליונות אלקטרוניים, לחשב את מדד ביצועים (PI) עבור כל גנוטיפ על ידי הפחתת מספר הזבובים בבקבוקון DSO ממספר הזבובים בבקבוקון DSO-חופשי, ולאחר מכן על ידי חלוקת המספר הכולל של זבובים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקלו את האמצעים &quot;החוקרים הפרטיים באמצעות תוכנת ניתוח סטטיסטית לניתוח התוצאות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן אידיאלי, להכין 2-3 חזרות פנימיות עבור כל ניסוי, ו -3 חזרות עצמאיות, ביצע בימים שונים, עם בקבוקים שונים או חוצה 30. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במבחנים סטטיסטיים הפצת גאוס, כנתונים מתפלגים נורמלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר בודק השפעה אחד (כלומר, צפיפות - איור 2), להשתמש בכיוון אחד ANOVA, עם פוסט-מבחן להשוואה מרובה (עמודה על ידי טור), או מבחן t פשוט להשוות כל תוצאה לשליטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר ניסויי קבוצה מבוצעים, לבדוק שני תנאים ומינים (בקבוקונים ריקים, הדגישזבובים-הדגיש un ד; והשפעת מגדר - איור 1), באמצעות דו-כיוונית ANOVA. </li></ol></li></ol> 5. צור בקבוקים כבושים בעבר על ידי זבובים unstressed - בצע במקום 3.5-3.6 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש Phototaxis להכין בקבוקונים שנכבשו על ידי זבובים שלא היה לחוץ, כביקורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים בבקבוקון בדיקה, והצמדת אותו למנגנון נגדי, עם בקבוקונים ריקים טריים במיקום ההפוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המכשיר בצורה אופקית עם בקבוקון דיסטלי ישירות מול אור מגניב-לבן 15 ניאון W, ולכסות בבד שחור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הזבובים בעדינות להזיז בבקבוקון הטרי. זה עלול לקחת כמה דקות. ברגע שרוב הזבובים הולכים לכיוון האור בבקבוקון דיסטלי, להפעיל את הטיימר דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא בעדינות את הבד השחור, לעבור את מיקומו של האור, להתאושש עם הבד השחור, ולאפשר לזבובים לעזוב את בקבוקון המבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באותו זמן, אניnitiate ניסוי הבחירה כמו ב3.2-3.5. דלג על 3.6 ו -3.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את המחוון של המנגנון, כדי להפריד את הזבובים שפינו את בקבוקון המבחן מהצד השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בבקבוקון המבחן שהתפנה בT-המבוך מייד לניסוי הבחירה, כמו ב3.7. </li></ol>

<ol><li>Fry, S. N., Rohrseitz, N., Straw, A. D., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrackFly%3A+virtual+reality+for+a+behavioral+system+analysis+in+free-flying+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">TrackFly: virtual reality for a behavioral system analysis in free-flying fruit flies.</a> J Neurosci Methods. 171, 110-117 (2008).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J Vis Exp. 24, 1096(2009).</li>
<li>Dankert, H., Wang, L., Hoopfer, E. D., Anderson, D. J., Perona, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+monitoring+and+analysis+of+social+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated monitoring and analysis of social behavior in Drosophila.</a> Nat Methods. 6, 297-303 (2009).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat Methods. 6, 451-457 (2009).</li>
<li>Simon, J. C., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+chamber+for+studying+the+behavior+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A new chamber for studying the behavior of Drosophila.</a> PLoS One. 5, 8793(2010).</li>
<li>Wang, L., Dankert, H., Perona, P., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inaugural+Article%3A+A+common+genetic+target+for+environmental+and+heritable+influences+on+aggressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22in+Drosophila.+Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Inaugural Article: A common genetic target for environmental and heritable influences on aggressiveness.</a> in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5657-5663 (2008).</li>
<li>Schneider, J., Dickinson, M. H., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+structures+depend+on+innate+determinants+and+chemosensory+processing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Social structures depend on innate determinants and chemosensory processing in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 2, 17174-17179 (2012).</li>
<li>Miyamoto, T., Amrein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+male+courtship+by+a+Drosophila+pheromone+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Suppression of male courtship by a Drosophila pheromone receptor.</a> Nat Neurosci. 11, 874-876 (2008).</li>
<li>Villella, A., Hall, J. C., Jeffrey, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+3+Neurogenetics+of+Courtship+and+Mating+in+Drosophila.+%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Chapter 3 Neurogenetics of Courtship and Mating in Drosophila. </a> Advances in Genetics. 62, 67-184 (2008).</li>
<li>Ejima, A., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Courtship+Initiation+Is+Stimulated+by+Acoustic+Signals+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Courtship Initiation Is Stimulated by Acoustic Signals in Drosophila melanogaster.</a> PLoS ONE. 3, 3246(2008).</li>
<li>Mery, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Public+Versus+Personal+Information+for+Mate+Copying+in+an+Invertebrate%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Public Versus Personal Information for Mate Copying in an Invertebrate.</a> Current Biology. 19, 730-734 (2009).</li>
<li>Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+taste+of+the+Drosophila+gustatory+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">A taste of the Drosophila gustatory receptors.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 19, 345-353 (2009).</li>
<li>Billeter, J. -C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+cells+tag+sexual+and+species+identity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 461, 987-991 (2009).</li>
<li>Krupp, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+experience+modifies+pheromone+expression+and+mating+behavior+in+male+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster.</a> Curr Biol. 18, 1373-1383 (2008).</li>
<li>Kent, C., Azanchi, R., Smith, B., Formosa, A., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+context+influences+chemical+communication+in+D.+melanogaster+males%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Social context influences chemical communication in D. melanogaster males.</a> Curr Biol. 18, 1384-1389 (2008).</li>
<li>Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resetting+the+Circadian+Clock+by+Social+Experience+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resetting the Circadian Clock by Social Experience in Drosophila melanogaster.</a> Science. 298, 2010-2012 (2002).</li>
<li>Ganguly-Fitzgerald, I., Donlea, J., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waking+Experience+Affects+Sleep+Need+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Waking Experience Affects Sleep Need in Drosophila.</a> Science. 313, 1775-1781 (2006).</li>
<li>Billeter, J. -C., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Who+is+he+and+what+is+he+to+you%3F+Recognition+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Who is he and what is he to you? Recognition in Drosophila melanogaster.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 23, 17-23 (2013).</li>
<li>Suh, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+population+of+olfactory+sensory+neurons+mediates+an+innate+avoidance+behaviour+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila.</a> Nature. 431, 854-859 (2004).</li>
<li>Bonini, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tribute+to+Seymour+Benzer+1921-2007%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A Tribute to Seymour Benzer 1921-2007.</a> 180, 1265-1273 (2008).</li>
<li>Castermans, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobeachin+gene+is+disrupted+by+a+translocation+in+a+patient+with+idiopathic+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Genetics%22%5BJournal%5D)">The neurobeachin gene is disrupted by a translocation in a patient with idiopathic autism.</a> Journal of Medical Genetics. 40, 352-356 (2003).</li>
<li>Medrihan, L., et al. Neurobeachin, a protein implicated in membrane protein traffic and autism, is required for the formation and functioning of central synapses. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMedrihan%2C+L+%22J+Physiol%22">J Physiol</a>. 587, 5095-5106 (2009).</li>
<li>Simon, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+assay+to+study+social+behavior+in+Drosophila%3A+measurement+of+social+space+within+a+group%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">A simple assay to study social behavior in Drosophila: measurement of social space within a group.</a> Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).</li>
<li>Venkatesh, T., et al. Cold Spring Harbor Meeting: From Molecules to Circuit Behavior. , Cold Spring Harbor Laboratories. Cold Spring Harbor, NY. (2013).</li>
<li>Hamilton, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+mutation+in+the+dopamine+transporter+gene+associates+dopamine+dysfunction+with+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">De novo mutation in the dopamine transporter gene associates dopamine dysfunction with autism spectrum disorder.</a> Mol Psychiatry. 18, 1315-1323 (2013).</li>
<li>Gadow, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+dopamine+gene+variants%2C+emotion+dysregulation+and+ADHD+in+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Developmental+Disabilities%22%5BJournal%5D)">Association of dopamine gene variants, emotion dysregulation and ADHD in autism spectrum disorder.</a> Research in Developmental Disabilities. 35, 1658-1665 (2014).</li>
<li>Fernandez, R. W., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Simon, A. F. 54th Annual Drosophila Research Conference, , (2014).</li>
<li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+Locomotor%2C+Learning%2C+and+Memory+Deficits+in+Drosophila+Models+of+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration.</a> J Vis Exp. , 2504(2011).</li>
<li>Connolly, J. B., Tully, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aConnolly%2C+JB+%22Drosophila%3A+A+Practical+Approach%22">Drosophila: A Practical Approach</a>. Roberts, D. B. 1, IRL. New York, NY. 265-317 (1998).</li>
<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical-conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+%5BA%5D%22%5BJournal%5D)">Classical-conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> J Comp Physiol [A]. 157, 263-277 (1985).</li>
<li>Krashes, M. J., Waddell, S. Drosophila Aversive Olfactory Conditioning. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKrashes%2C+MJ+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22">Cold Spring Harbor Protocols</a>. 2011, (2011).</li>
<li>Ejima, A., Griffith, L. C. Ch. 30. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEjima%2C+A+%22Drosophila+Neurobiology%2C+A+Laboratory+Manual%22">Drosophila Neurobiology, A Laboratory Manual</a>. Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring, NY. 475-481 (2010).</li>
<li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+mutants+of+Drosophila+melanogaster+isolated+by+countercurrent+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Behavioral mutants of Drosophila melanogaster isolated by countercurrent distribution.</a> PNAS. 58, 1112-1119 (1967).</li>
<li>Simon, A. F., Shih, C., Mack, A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+control+of+longevity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Steroid control of longevity in Drosophila melanogaster.</a> Science. 299, 1407-1410 (2003).</li>
<li>Vaux, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+methods%3A+Know+when+your+numbers+are+significant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Research methods: Know when your numbers are significant.</a> Nature. 492, 180-181 (2012).</li>
<li>Stowers, L., Logan, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+in+olfactory+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism in olfactory signaling.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 770-775 (2010).</li>
<li>Simon, A. F., Liang, D. T., Krantz, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+decline+in+behavioral+performance+of+Drosophila+melanogaster+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">Differential decline in behavioral performance of Drosophila melanogaster with age.</a> Mechanisms of Ageing and Development. , 127-647 (2006).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

פרוטוקול זה מתאר נוהל מפורט לassay ההימנעות החברתי. קנטון-S רק להימנע מבקבוקון שבטס כבר בעבר באופן מכאני הדגיש, וכי יחסי מין ומספר המגיבים אינם משפיעים על ביצועי שהימנעות חברתיים. עם זאת, רקע גנטי של המגיבים יש השפעה גדולה. להלן כמה צעדים קריטיים לביצוע ניסוי זה בהצלחה: 1) תמיד להעביר את זבובי שעה 2 לפני הניסוי ולוודא שלא להפריע לסביבתם; 2) לבצע את הניסוי תמיד באותו הזמן של היום, באופן אידיאלי בין זמן צייטגבר ZT5...

מטרתה של שיטה זו היא לכמת היבט חדש של התנהגות פשוטה חברתית בmelanogaster דרוזופילה, עצמאית מחיזור ותוקפנות בקלות. אינטראקציות חברתיות הן קריטיות להתפתחות התקינה ובריאותו של אדם בחברה, כמו גם את הפונקציונליות של קבוצה חברתית בכללותו. המורכבות גבוהות של אינטראקציות אלה מחייבים גדלי מדגם גדולים ומערכת המאפשרת לפישוט של ההתנהגות כבסיס הגנטי ועצבי של התנהגות חברתית עדיין לא נחקרו מספיק. Melanogaster תסיסנית הוא מודל גנטי רב עוצמה שיכול לשמש לזיהוי הגנטי ו בסיסים עצביים של אינטראקציות חברתיות. ואכן, ד &#39; יש melanogaster רפרטואר של התנהגויות חברתיות מורכבות וכמה מדידות ישירות של סוציאליזציה כבר נעשו 1-7. עם זאת, רוב המאמצים האלה כבר התמקדו התנהגויות חברתיות מורכבות יחסית, כגון aggresאינטראקציות sive 3,6, היבטים שונים של חיזור 3,8-12, וכיצד משפיעים על התנהגויות חברתיות ניסיון אחרים כגון למידה, או קצב היממה 13-17. בנוסף, רב של מבחני אלה מסתמכים על ניתוח דפוסי אינטראקציה מורכבים של קבוצות של זבובים, באמצעות מעקב וידאו ותוכנת מחשב כדי לנתח את השפע של נתונים וכתוצאה מכך. ניתוח כזה הוא לא יסולא בפז, ולהוביל לתובנות חדשות וחשובות כמו הדינמיקה של אינטראקציות לטוס לטוס בקבוצות 7. מגבלה אחת, לעומת זאת, היא הנגישות של מבחני אלה לקהילה בכללותה, והידע המוגבל של המנגנונים העומדים בבסיס הכרה של אחרים. במילים אחרות, הבסיס של הפליטה של אות על ידי אדם אחד וההכרה שלה על ידי אחר עדיין הבין היטב 18. בניגוד לכך, זבובים גם תערוכת התנהגות פשוטה, הימנעות חברתית, שבו אנשים להתרחק מאות הנפלטת על ידי זבובים הדגישו: ד Melanogaster מתח odorant או DSO 19. בassay תפוקה גבוהה, התנהגות זו ניתן לכמת כהימנעות מאות מתח הנפלטת על ידי זבובים אחרים, או הימנעות חברתית 19. זבובים ממוקמים במנגנון T-מבוך וניתנו להם האפשרות להימנע מבקבוקון המכיל DSO. שימוש assay זה, CO 2 הוצג להיות מרכיב של DSO, וחלק מהמעגלים העצביים ההכרחיים להגיב ל- CO 2 היו גזורים 19. Assay ההימנעות החברתי שהוצג כאן הוא דומה מבחינה רעיונית למבחני התנהגות הפשוטים שפותחו במעבדתו של סימור Benzer שאפשרו דורות של חוקרים לנתח התנהגויות מורכבות 20. ניתוח של הימנעות חברתית יכול להתבצע בצורה חסכונית באמצעות assay T-המבוך, ומאפשר למחקר נרחב יותר של התנהגות חברתית. לדוגמא, באמצעות assay זה אנו הוכיחו לאחרונה כי יש לי סיכונים גנטיים שונים לאוטיזם השפעות מנוגדות בb החברתיתמבחני ehavior. מוטציות לגן מועמד לאוטיזם - neurobeachin 21,22 - ליקויים הנוכחיים הן במרחב חברתי (שתוארו במקום אחר 23) והימנעות חברתית 24. איתות דופאמין חריגה היא גם הציעה לשחק תפקיד באטיולוגיה של אוטיזם בבני האדם 25,26. בניגוד לתוצאות שהושגו עם neurobeachin, מצאנו כי ביצועי הימנעות חברתיים היו מושפעים מעלייה או הירידה ברמות של דרוזופילה לפוחי מונואמין Transporter (VMAT) בתאי דופאמין, למרות שהמרחב חברתי הראה המתאם גבוה לרמות של 27 VMAT אלה. התוצאות המנוגדות שהושגו עם neurobeachin וVMAT מדגישות את האפשרות של זיהוי צורות שונות של התנהגות א-סוציאלית, ובכך circuitries העצבי הבסיסי שונה ויסות התגובה לאחרים.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ זום סטריאו&nbsp;</td><td>ניקון&nbsp; &nbsp;</td><td>SMZ-645</td><td>כל היקף סטנדרטי אחר לטיפול בזבובים יעבוד</td></tr><tr><td>מברשות צבע קטנות&nbsp;</td><td></td><td></td><td>לדחיפת זבובים</td></tr><tr><td>פוליאתילן נקבובי, 12 אינץ' x 12 אינץ'</td><td>זבובים - Genesee</td><td>46-100</td><td>http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 גיליון פלסטיק נקבובי לקופסת הרדמה קרה</td></tr><tr><td>מיני אזעקה טיימר/שעון</td><td></td><td></td><td></td>עצר</tr><tr><td>עטים</td><td></td><td></td><td></td>שארפי</tr><tr><td>סרט</td><td></td><td></td><td></td>דבק</tr><tr><td>מיני מערבולת</td><td>פישר</td><td>14-955-151&nbsp;</td><td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail<> לתסיסה מכנית של הזבובים - כל מערבולת תעבוד.</td></tr><tr><td>Corning Life Sciences DL מס 352017, מבחנה פלקון; תחתית עגולה; חד פעמי; ללא סגירה, 14 מ"ל; 17 x 100 מ"מ</td><td>פישר</td><td>14-959-8 &nbsp; &nbsp;</td><td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalogId=29104&productId=2771811&distype=0&highlightProductsItemsFlag=Y&fromSearch=1&searchType=PROD&hasPromo=0 אלה נצמדים למקומם במבוך T ומנגנון זרם נגדי (ראה טקסט)</td></tr> <tr>כדורי <td></td><td></td><td>צמר גפן</td><td>כדי לסגור את הבקבוקונים לאחר הניסוי.</td></tr><tr><td>לוח משולש וכיסוי</td><td></td><td></td> ספסל לבן <td>כדי לספק רקע לבן ואור הומוגני.</td></tr><tr>כיסוי <td></td><td></td><td></td><td>ספסל לבן</td></tr><tr><td>משטח</td><td></td><td></td> דפיקות <td>כל משטח עכבר עובד.</td></tr><tr><td>בד</td><td></td><td></td> שחור גדול <td>לכיסוי מנגנון הזרם הנגדי בתגובת פוטוטקסיס.</td></tr><tr><td>אור לבן-קריר&nbsp;</td><td>הום דיפו</td><td>1000516563</td><td>http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 כל אור ליניארי דומה עם נורת פלורסנט לבנה קרירה ב-13-15 וואט יעבוד</td></tr></tbody></table>

assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב melanogaster דרוזופילה

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster הוא מודל מתפתח לחקר היבטים שונים של אינטראקציות חברתיות. לדוגמה, זבובים נמנעים מאזורים שנכבשו בעבר על ידי מינים לחוצים עקב ריח המשתחרר במהלך לחץ המכונה ריח מתח דרוזופילה (dSO). באמצעות שימוש במנגנון מבוך T, ניתן לכמת את ההימנעות מה-dSO על ידי זבובי מגיב בבדיקה זולה וחזקה מאוד. התנאים הדרושים להשגת ביצועים חזקים מוצגים כאן. חוויה מלחיצה נחוצה כדי שהזבובים יפלטו dSO, כמו גם מספיק זבובים פולטים כדי לגרום לתגובת הימנעות חזקה לנוכחות dSO. הרקע הגנטי, אך לא גודל הקבוצה שלהם, שינה מאוד את ההימנעות מ-dSO על ידי זבובי המגיבים. קנטון-S ואלווד מציגים ביצועים גבוהים יותר בהימנעות מ-dSO מאשר הזנים אורגון וסמרקנד. מבחן התנהגותי זה יאפשר לזהות את המנגנונים העומדים בבסיס התנהגות חברתית זו, ולהעריך את השפעת הגנים והתנאים הסביבתיים הן על פליטה והן על הימנעות מה-dSO. בדיקה כזו יכולה להיכלל בסוללות של בדיקות אבחון פשוטות המשמשות לזיהוי ליקויים חברתיים של מוטציות או תנאים סביבתיים מעניינים.

Assay ההימנעות החברתי הוא מבחן חזק כימות היכולת של דרוזופילה melanogaster להכיר אות מתח (DSO) הנפלטת על ידי זבובים אחרים, ובכך להעריך היבט אחד של אינטראקציות חברתיות. Assay מתבצע באמצעות מנגנון נפוץ במבחני התנהגות שונים המכונים T-מבוך, המציג את הזבובים עם בחירה בין שתי אפשרויות שונות - ימין או שמאל 19,28-31. במקרה זה, את היעילות שבה הזבובים להימנע DSO היא לכמת על ידי חישוב והשוואת ביצועי מדדם (PI). PI של אפס מציין הפצה 50-50 או לא הימנעות, ואילו לצרכן של 100 מצ...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות ההימנעות של אנשים לחוצים. פרדיגמה זו היא עוצמתית אך ידידותית למשתמש וניתן להשתמש בה כדי להעריך את ההשפעה של גנים וסביבה על סוג אחד של אינטראקציה חברתית ב-Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

מטרת הליך זה היא לכמת את תגובת הזבובים לאות החברתי הנפלט על ידי אנשים לחוצים. זה מושג על ידי איסוף ראשון, מגיב ופולט זבובים לא יותר מיומיים לפני הניסוי. השלב השני הוא להעביר גם את זבובי הפולט וגם את זבובי המגיב לבקבוקונים טריים שעתיים לפני הניסוי ולתת להם להתרגל לחדר המבוקר הסביבתי שבו תבוצע הבדיקה.לאחר מכן, זבובי המגיב ממוקמים ב-TMAs ובהינתן הבחירה בין בקבוקון שבו זבובים נלחצו בעבר, ובכך מכילים את ריח הלחץ של הדרוזופילה לבין בקבוקון טרי, השלב האחרון הוא לספור את מספר זבובי המגיבים בבקבוקון הטרי בבקבוקון ה-DSO ובמעלית כדי לכמת את תגובתם ל-DSO. בסופו של דבר, מבוך ה-T משמש למדידת ההימנעות של זבובים מאות מתח חברתי, במיוחד ריח המתח של גילו. הרעיון לשיטה זו עלה לי לראשונה כשהייתי פוסט-דוקטורנט ב-Caltech.באותה תקופה, גרג סו והמנחה שלו לפוסט-דוקטורט דיוויד אנדרסון, היו מעורבים בחקר פחד או הימנעות חברתית בפילה, אבל לא הייתה בדיקה קיימת לכך. הם פנו אלי מכיוון שביצעתי הרבה מבחני התנהגות במעבדה של מותגי S ובזמן שביצעתי ניסויי צילום מוניות ולמידת חוש הריח, שמתי לב שזבובים נמשכים לבקבוקונים שבהם זבובים אחרים בילו זמן מה ללא הפרעה תוך הימנעות מבקבוקונים שבהם זבובים היו לחוצים באותו זמן עם התחשמלות. רץ. הדגמה של שיטה זו היא קריטית מכיוון שתהליך הניסוי של בדיקת ההימנעות החברתית דורש תרגול מסוים כד

straightforward-assay-for-quantification-social-avoidance-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

במאמר זה וידאו, אנו מתארים שיטה חדשה המאפשרת בנייה של הדרגתיים odorant בגיאומטריות ויציב לשליטה. אנו בקצרה להמחיש כיצד הדרגתיים אלה יכולים לשמש מסך פגמים חוש הריח (תתרנות מלאה או חלקית) ו ללמוד תכונות מהותיות יותר של התנהגות chemotaxis.

ברזולוציה גבוהה מדידה של התנהגות ריח מונחה על הזחלים תסיסנית

מבחני התנהגות למדידת פונקציות של תנועה, למידה, ויכולות...

Assaying של תנועה, למידה, וזיכרון גירעונות תסיסנית מודלים של ניוון מוחיים

תסיסנית melanogaster היא מערכת גנטית התנהגותית מודל צייתן, שבו נעשה שימוש כדי להבין את הבסיס המולקולרי התאי של תהליכים ביולוגיים רבים חשובים יותר ממאה שנים 1. תסיסנית נוצלה היטב כדי לקבל תובנות לתוך הבסיס הגנטי של ההתנהגות במהירות הבזק.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

סרטון זה מתאר שיטה פשוטה לכימות תנועת הזבובים ומציג את בדיקת הטיפוס שבוצעה. מבחן טיפוס הזבובים הוא מבחן כללי של תפקוד מוטורי המסתמך על תגובת גיאוטקסיס שלילית.

בדיקת טיפוס זבובים: שיטה לבדיקת תנועה כללית בדרוזופילה מלנוגסטר

במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

ניתן לכמת את השפעת הגנים והסביבה על המרחב החברתי של Drosophila melanogaster באמצעות פרדיגמה אנליטית רבת עוצמה אך ישירה. אנו מראים כאן גורמים שונים שיכולים להשפיע על המרחב החברתי הזה, ולכן יש לקחת אותם בחשבון בעת תכנון ניסויים בפרדיגמה זו.

תנאים המשפיעים על המרחב חברתי ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

פרוטוקול זה מתאר בדיקת תפוקה גבוהה לבדיקת העדפות הטלת ביצים של Drosophila melanogaster ברזולוציה של בעל חיים יחיד.  בדיקה זו מספקת פלטפורמה פשוטה, יעילה וניתנת להרחבה לזיהוי גנים ורכיבי מעגלים השולטים בתהליך קבלת החלטות פשוט.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

פרוטוקול זה מציג שיטה בעלת מקום קל לחקור התנהגות של דרוזוהילה זחל פוטוטקטיקה. בשיטה זו, נקודת אור נוצרת כגירוי קל, והתהליך של התחמקות מאור הזחל נרשם על-ידי מערכת הדמיה מבוססת אור אינפרא-אדום.

שיטת האור המבוססת על ספוט לניתוח דרוזופילה זחל פוטומוניות

עבודה זו מתארת פרדיגמה התנהגותית פשוטה המאפשרת ניתוח של למידה אסוציאטיבית מרתיעה בזבובי פירות בוגרים. השיטה מבוססת על דיכוי ההתנהגות הגיאוטקסית השלילית המולדת בשל הקשר שנוצר בין הקשר סביבתי מסוים להלם חשמלי.

דרוסופילה התנהגות הימנעות פסיבית כפרדיגמה חדשה לחקר למידה אסוציאטיבית מרתיעה

הפרוטוקול הנוכחי מעריך את הפעילות המוטורית של דרוזופילה על ידי מעקב וניתוח תנועת הזבובים בזירה בעבודת יד באמצעות תוכנת קוד פתוח פיג'י, התואמת לתוספים לפלח פיקסלים של כל פריים בהתבסס על הקלטת וידאו בחדות גבוהה כדי לחשב פרמטרים של מהירות, מרחק וכו '.

טכניקה פשוטה להערכת פעילות לוקומוטורית בדרוזופילה

הפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD) קשורה להתנהגות חברתית ותקשורתית לקויה ולהופעתה של התנהגות חזרתית. לצורך חקר הקשר בין גנים אוטסיים וליקויים התנהגותיים במודל דרוזופילה , מתוארות במאמר זה חמש פרדיגמות התנהגותיות להערכת ריווח חברתי, תוקפנות, חיזור, טיפוח והתנהגות הרגלה.

פרדיגמות להערכה התנהגותית במודל דרוזופילה של הפרעת הספקטרום האוטיסטי

למדו לכמת התנהגות הימנעות חברתית ב-Drosophila melanogaster באמצעות מבוך T פשוט. פרוטוקול זה מאפשר לחקור השפעות גנטיות וסביבתיות על אינטראקציות חברתיות בזבובי פירות.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה

גלה סרטונים נוספים