Name: דגם לא פולשנית של Neuropathogenic Coli Escherichia זיהום בעכברוש הילודים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: חקור מודל זיהום מערכתי של Escherichia coli K1 בעכברושים ניאונטליים. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני פתוגנזה של זיהום במערכת העצבים המרכזית ופיתוח טיפולים חדשים לספסיס ניאונטלי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי G0400268 מענקי מחקר וMR / K018396 / 1 מהמועצה למחקר הרפואי, ועל ידי מחקר רפואי פעולה. תמיכה נוספת סופקה על ידי המכון הלאומי לחקר בריאות באוניברסיטת קולג &#39;בלונדון בתי חולים ביו-רפואי מרכז מחקר.

כל הניסויים בבעלי החיים שבוצעו במחקר זה תאמו את חקיקה לאומית ואירופית ואושרו על ידי הוועדה האתית של בית הספר לרוקחות UCL והמשרד בבריטניה הבית (HO). כל העבודה בבעלי החיים שנערכה במסגרת פרויקט HO רישיונות PPL 80/2243 וPPL 70/7773. 1. עכברוש הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את כל in vivo הניסויים באמצעות חולדות ילודות Wistar הפתוגן ללא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את כל המלטות העכברוש (12 ילודים למושבה) בכלובים בודדים עם אמהותיהם נשים (9 - 11 בשבוע שנקבות זקנות), בתנאים אופטימליים (19-21 מעלות צלזיוס, 45-55% לחות, 15-20 שינויי אוויר / שעה ו 12 שעות אור / חושך מחזור). </li></ol> 2. תא חיידק הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות E. מניות coli K1 ב -20% (V / V) גליצרול ב -80 מעלות צלזיוס. עבור כל ניסוי, צלחת את חיידקי המניה על מילר-הינטון (MH) צלחות אגר, ולדגור על 37 מעלות CO / N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היום לפני ההאכלה, inocuמאוחר 10 מיליליטר של מרק MH עם ה יחידה מושבה והתרבות O coli K1 / N על 37 מעלות צלזיוס, 200 סל&quot;ד. כביקורת על זיהום בינוני, להכין 10 מיליליטר של מרק MH uninoculated ולדגור על 37 מעלות צלזיוס ב 200 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת O / השעיה חיידקי N 100 μl ל9.9 מיליליטר של מרק MH (1: 100 V / V), ולדגור על 37 מעלות צלזיוס, 200 סל&quot;ד, עד שיגיע לאמצע מעריכי-שלב, מתאים לצפיפות אופטית של 0.6 הנמדד באורך גל של 600 ננומטר (OD 600). </li></ol> 3. האכלת חולדות ילודים עם א &#39; K1 coli <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד בעדינות את בעלי החיים בצורה אנכית ביד אחת מהעורף, המאפשר לפתוח את הפה. לאט לאט להכניס את קצה פיפטה סטרילית לתוך פיו של בעל החיים, ופיפטה 20 μl של הבידוד (~ 37 ° C) לתוך הפה של בעלי החיים על פני פרק זמן של 30 שניות. להחזיר את בעל החיים לאמו מייד לאחר הנקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא ש4 - 8 x 10 6 חיידקים לא האביסו to כל גור על ידי דילול סדרתי של הבידוד בPBS ואיתור על גבי צלחות אגר MH. </li></ol> 4. הערכה של התיישבות על ידי א K1 coli <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד בעדינות את החיה ביד אחת מהעורף. להרטיב מקל אוזני סטרילי בסטרילי PBS, ולאחר מכן בעדינות לשטוף את האזור פי הטבעת. להחזיר את בעל החיים לאמו מייד לאחר קירצוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את קצה הצמר-הגפן לצינור המכיל 300 μl של PBS סטרילית ולאחסן על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את המספרים של חיידקי קיימא על ידי דילול סדרתי בPBS וציפוי על צלחות אגר MacConkey. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע א קיימא coli K1 על ידי בדיקת רגישות bacteriophage. פיק מושבה בודדת באמצעות לולאת מיקרוביולוגית סטרילי, טבל 200 μl סטרילי PBS, אז בכפוף לערבוב מערבולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות לולאת מיקרוביולוגית סטרילי, תת-תרבות על אגר MH בקו ישר. לאפשר את הצלחת לייבוש למשך 30 שניות, ולאחר מכן פיפטה 10 μl של BACK1E teriophage (10 9 פלאק ויוצרים מיליליטר / יחידות (PFU / ml)) על גבי במרכז הקו. דגירה O הצלחת / N על 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, לבחון את הצלחת לתמוגה בתיווך bacteriophage. </li></ol> 5. הערכה של מחלת חומרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את חומרת המחלה של כל חיה 4 - 5 פעמים ביום באמצעות מערכת ניקוד שבע נקודות המפורטים בטבלה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם ציונים של בעלי חיים ≥3 מתוך 7, לברור באופן מיידי לבעלי החיים כדי למזער את הסבל. רשום את בעלי החיים למתים. </li></ol> 6. Euthanization של חולדות ילודים ודם אוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד בעדינות את החיה ביד אחת, וחושף את הראש וצוואר. לחטא את צווארו של בעל החיים על ידי מנגב עם ספוגית אלכוהול. לחטא זוג מספריים גדול באמצעות אתנול 70%, לפני השטיפה בPBS סטרילי כדי להסיר אתנול עקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד בעדינות את בעלי החיים ישירות מעל צלחת פטרי. לערוף את הילוד באמצעות surgi החדמספריים קאל, על מנת להבטיח כי הדם מטפטף לתוך צלחת פטרי. יש להימנע ממגע עם הראש על מנת למנוע זיהום של דם עם צמחיית עור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאסוף את הדם באמצעות פיפטה סטרילית ומערבבים עם מלח נתרן הפרין בריכוז של 20-50 מיליליטר / יחידות בצינור 0.5 מיליליטר microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את המספרים של חיידקי קיימא על ידי דילול סדרתי בPBS וציפוי על צלחות אגר MacConkey. לקבוע את מספריו של ע &#39;בר-הקיימא coli K1 על ידי בדיקת הרגישות של חיידקי קיימא לK1E bacteriophage. </li></ol> 7. Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות עריפת ראשו של העכברוש בילוד, להשתמש תנאי ספטית לחתוך ולאסוף רקמות של עניין. לשטוף את כל המכשירים (מוצגים באיור 1) ב- 70% אתנול וסטרילי PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את הלוח לנתיחה ולהרטיב את הבטן לגמרי עם 70% אתנול. מקם את הגופה על הגב שלה ולתקן ללוח לנתיחה על ידי (i) מצמיד את רגלו האחורית השמאלית לשולחן העבודה עם מחט סטרילית, (ii) מתיחת הגופה ומצמיד את הרגל הקדמית הימנית לשולחן הפעולה, (iii) מצמיד את רגל ימין אחורית ורגל קדמית השמאלית לשולחן הפעולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את העור לאורך הצד השמאלי של הבטן התחתונה באמצעות מלקחיים, ואז לחתוך לאורך צדו השמאלי של הגופה מהבטן התחתונה לעצם החזה באמצעות מספריים לנתיחה קטנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאריך את הכריתה פני עצם החזה, ואז למטה בצד ימין של הגופה מעצם החזה ועד הבטן התחתונה באמצעות מלקחיים ומספריים לנתיחה קטנה, להבטיח שאף אחד ממבני היסוד פגום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, משוך בעדינות את דש העור מעצם החזה ועד הבטן התחתונה באמצעות קשתית מלקחיים לנתיחה מעוקלות כדי לחשוף את הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להעלות את הצפק עם מלקחיים ולחתוך בצורה אנכית על מנת לחשוף את האיברים הפנימיים, כדי להבטיח שאף אחד מהאיברים שבבסיסם ניזוקו. </li></ol> 8. איסוףמערכת העיכול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את הקיבה, מערכת הלימפה mesenteric מעי דק, cecum, מעי גס ו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הבטן בעדינות על ידי transecting בכל צד, ואז למקם לתוך קומפקטי המכיל 1.6 מיליליטר של PBS סטרילי באמצעות מלקחיים סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect המעי הגס בפי הטבעת. משוך בזהירות את המסה במעי כולו מהגופה באמצעות מלקחיים לנתיחה ומניחים בצלחת פטרי סטרילית. ודא שזה נעשה בעדינות כך שמבנה המעיים ומבני הלימפה mesenteric אינם מפריד. </li></ol> 9. הפרדה של מערכת העיכול ומערכת הלימפה mesenteric (איור 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 30 מיליליטר של PBS סטרילי לתוך צלחת פטרי, להבטיח את מערכת העיכול היא שקועה לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את המסה של מערכת הלימפה mesenteric המרכזית, ולצבוט באמצעות מלקחיים לנתיחה קנס. זהה את החלק הפרוקסימלי ביותר של המעי הדק, ולצבוט באמצעות מלקחיים לנתיחה קנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט למשוך CENTRAמסת l של מערכת הלימפה mesenteric והמעי הדק דיסטלי בכיוונים מנוגדים, עד שתי הרקמות מופרדות לחלוטין זו מזו. לבצע תהליך זה בזהירות כדי להבטיח שהמעי הדק לא נמתח, כמו זה מונע גבייה לשחזור של הפרוקסימלי, אמצע ואזורי דיסטלי. הנח את מערכת הלימפה mesenteric ב300-500 μl סטרילי PBS ומניח על קרח. </li></ol> 10. חתך של מערכת העיכול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect מערכת העיכול בcecum להפריד המעי דק מהמעי הגס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המעי הגס ב300-500 μl סטרילי PBS ומניח על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות של רקמות נציג מאזורים הפרוקסימלי, אמצע ואחורי של המעי הקטן. יישר את המעי דק מנקודת האמצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז, (i) לאסוף את 2 סנטימטר האחרון של רקמה לפני המעי האטום כמו המעי הדק דיסטלי, (ii) לאסוף את רקמת 5-7 סנטימטר מעל לנקודת האמצע כמו המעי הדק הפרוקסימלי, ו(Iii) לאסוף את רקמת 3-5 סנטימטר מתחת לנקודת האמצע כמו המעי הדק האמצע. </li></ol> 11. איסוף הכבד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות שלוש אונות של כבד החולדה לאחר ההסרה של הקיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך אונות מחלל הבטן באמצעות מלקחיים לנתיחה קנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכבד על ידי חיתוך כל רצועות חיבור באמצעות מספריים עדינים. הנח כבד ב300-500 μl סטרילי PBS ומניחים על קרח. </li></ol> 12. איסוף הטחול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את הטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך טחול מהבטן ולהשתמש במספריים עדינים לחתוך את רצועות gastrosplenic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח טחול ב300-500 μl סטרילי PBS ומניחים על קרח. </li></ol> 13. איסוף הכליות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את הכליות שתהיינה גלויים בחלק האחורי של חלל הבטן עם ההסרה של המערכה העיכול ואיברים אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השופכנים Cut וכל רצועות הצמדת uלשיר מספריים לנתיחה קנס ולהסיר כליות באמצעות מלקחיים בסדר. הסר בלוטת יותרת הכליה וכל חומר שומני (אם עדיין מחובר) באמצעות מלקחיים בסדר ומספריים לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שני הכליות ב300-500 סטרילי PBS μl ומניח על קרח. </li></ol> 14. איסוף המוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר עריפת הראש, להחזיק את הראש בתנוחה זקופה באמצעות מלקחיים מעוקלים. צובט את העור על ראש של אורכית באמצעות קבוצה נוספת של מלקחיים מעוקלים, ולהפוך את חתך באמצעות מספריים לנתיחה קנס. לחתוך את עור שנותר ליד צוואר, שוב אורכית עם מספריים לנתיחה קנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך עור בכיוון החוצה באמצעות מלקחיים בסדר בשני הצדדים כדי לחשוף את הגולגולת ולהסיר דשי עור באמצעות מספריים לנתיחה קנס. הנח מספריים לנתיחה קנס בפתיחת השדרה ולעשות חתך לאורך הגולגולת לכיוון הדוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את שני החלקים של גולגולת בכיוון החוצה באמצעות מלקחיים בסדר. חותך להסרת מקטעי גולגולת. </li><li&gt; הסרת מוח באמצעות מלקחיים רחבים, תוך שימוש בתנועה כלפי מעלה גורפת מפתיחת השדרה לכיוון הדוכן. שטוף את המוח בPBS פעמיים כדי להסיר כל דם מהליך עריפת הראש. </li></ol> 15. עיבוד רקמות ולתפעול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים הדורשים ספירת כדאיות או מיצוי DNA, רקמות מקום לצינורות המכילים סטרילי PBS. מייד לקבוע את המספרים של חיידקי קיימא על ידי דילול סדרתי בPBS וציפוי על צלחות אגר MacConkey, או בחנות ב -20 ° C עם גליצרול 20% לטווח קצר. להפקת DNA, רקמות חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים הדורשים מיצוי RNA, רקמות מקום באמצעי האחסון מתאים של פתרון RNAlater (10 μl לכל רקמת 1 מ&quot;ג), ולאחר מכן לאחסן באופן מיידי ב -20 ° C לטווח קצר או באחסון לטווח ארוך -80 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים הדורשים הדמיה, רקמות מקום 10 מיליליטר פתרון Methacarn (מתנול 60%, כלורופורם 30% ו -10% חומצה אצטית), לאחר מכן לאחסןלא RT (20-25 מעלות צלזיוס) לתקופה של עד 3 שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את משקל רקמה על ידי השוואת משקל של צינורות של לפני ואחרי תוספת של רקמות. Homogenize רקמות באמצעות homogenizer. שטוף את homogenizer פעם אחת בשנת 70% אתנול ו פעמים PBS סטרילי בין הומוגניזציה של כל דגימה. הערה: קיבעון Methacarn רצוי לקיבעון של דגימות מעיים במטרה לשמר את מבני הגנה ריריים הקשורות mucin; קיבעון פורמלין עשוי לשמש לרקמות מערכתיות. </li></ol>

<ol><li>Harvey, D., Holt, D. E., Bedford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+meningitis+in+the+newborn%3A+a+prospective+study+of+mortality+and+morbidity%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Bacterial meningitis in the newborn: a prospective study of mortality and morbidity.</a> 23 (5), 218-225 (1999).</li>
<li>Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+diagnosis%2C+and+antimicrobial+treatment+of+acute+bacterial+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Epidemiology diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 23 (3), (2010).</li>
<li>Silva, L. P. A., Cavalheiro, L. G., Queirós, F., Nova, C. V., Lucena, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+newborn+bacterial+meningitis+and+sepsis+during+the+pregnancy+period+for+public+health+care+system+participants+in+Salvador%2C+Bahia%2C+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Prevalence of newborn bacterial meningitis and sepsis during the pregnancy period for public health care system participants in Salvador, Bahia, Brazil.</a> J. Infect. Dis. 11 (2), 272-276 (2007).</li>
<li>Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+of+the+newborn%3A+basic+mechanisms+and+clinical+correlates%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Innate immunity of the newborn: basic mechanisms and clinical correlates.</a> Nat. Rev. Immunol. 7 (5), 379-390 (2007).</li>
<li>Robbins, J. B., et al. Escherichia coli K1 capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobbins%2C+JB+%22N.+Eng.+J%22">N. Eng. J</a>. Med,, et al. 290 (22), 1216-1220 (1974).</li>
<li>Korhonen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((hemolysin+production%2C+and+receptor+recognition+of+Escherichia+coli+strains+associated+with+neonatal+sepsis+and+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">hemolysin production, and receptor recognition of Escherichia coli strains associated with neonatal sepsis and meningitis.</a> Infect. Immun. 48 (2), 486-491 (1985).</li>
<li>Rutishauser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polysialic+acid+in+the+plasticity+of+the+developing+and+adult+vertebrate+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Polysialic acid in the plasticity of the developing and adult vertebrate nervous system.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9 (1), 26-35 (2008).</li>
<li>Koedel, U., Pfister, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+experimental+bacterial+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Dis.+Clin.+North+Am%22%5BJournal%5D)">Models of experimental bacterial meningitis.</a> Infect. Dis. Clin. North Am. 13 (3), 549-577 (1999).</li>
<li>Tunkel, A. R., Scheld, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+pathophysiology+of+bacterial+meningiits%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and pathophysiology of bacterial meningiits.</a> Clin. Microbiol. Rev. 6 (2), 118-136 (1993).</li>
<li>Kim, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+K1+capsule+is+the+critical+determinant+in+the+development+of+Escherichia+coli+meningitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">The K1 capsule is the critical determinant in the development of Escherichia coli meningitis in the rat.</a> J. Clin. Invest. 90 (3), 897-905 (1992).</li>
<li>Obata-Yasuoka, M., Ba-Thein, W., Tsukamoto, T., Yoshikawa, H., Hayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaginal+Escherichia+coli+share+common+virulence+factor+profiles%2C+serotypes+and+phylogeny+with+other+extraintestinal+E.+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Vaginal Escherichia coli share common virulence factor profiles, serotypes and phylogeny with other extraintestinal E. coli.</a> Microbiology. 148 (9), 2745-2752 (2002).</li>
<li>Sarff, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Escherichia+coli+K1+in+healthy+and+diseased+newborns%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Escherichia coli K1 in healthy and diseased newborns.</a> Lancet. 305 (7916), 1099-1104 (1975).</li>
<li>Schiffer, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review%3A+relation+between+invasiveness+and+the+K1+capsular+polysaccharide+of+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Res%22%5BJournal%5D)">A review: relation between invasiveness and the K1 capsular polysaccharide of Escherichia coli.</a> Pediatr. Res. 10 (2), 82-87 (1976).</li>
<li>Palmer, C., Bik, E. M., DiGuilio, D. B., Relman, D. A., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+human+infant+intestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of the human infant intestinal microbiota.</a> PLoS Biol. 5 (7), 1556-1573 (2007).</li>
<li>Nassif, X., Bourdoulous, S., Eugène, E., Couraud, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+do+extracellular+pathogens+cross+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">How do extracellular pathogens cross the blood-brain barrier.</a> Trends Microbiol. 10 (5), 227-232 (2002).</li>
<li>Moxon, E. R., Glode, M. P., Sutton, A., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+infant+rat+as+a+model+of+bacterial+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">The infant rat as a model of bacterial meningitis.</a> J. Infect. Dis. 136, 186-190 (1977).</li>
<li>Birchenough, G. M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+innate+defenses+in+the+neonatal+gastrointestinal+tract+in+response+to+colonization+by+neuropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Altered innate defenses in the neonatal gastrointestinal tract in response to colonization by neuropathogenic Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 81 (9), 3264-3275 (2013).</li>
<li>Ganz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defensins%3A+antimicrobial+peptides+of+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Defensins: antimicrobial peptides of innate immunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 3 (9), 710-720 (2003).</li>
<li>Bevins, C. L., Salzman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paneth+cells%2C+antimicrobial+peptides+and+maintenance+of+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Paneth cells, antimicrobial peptides and maintenance of intestinal homeostasis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 9 (5), 356-368 (2011).</li>
<li>Moxon, E. R., Smith, A. L., Averill, D. R., Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haemophilus+influenzae+meningitis+in+infant+rats+after+intranasal+inoculation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Haemophilus influenzae meningitis in infant rats after intranasal inoculation.</a> J. Infect. Dis. 129 (2), 154-162 (1974).</li>
<li>Bortolussi, R., Ferrieri, P., Björkstén, B., Quie, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsular+K1+polysaccharide+of+Escherichia+coli%3A+relationship+to+virulence+in+newborn+rats+and+resistance+to+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Capsular K1 polysaccharide of Escherichia coli: relationship to virulence in newborn rats and resistance to phagocytosis.</a> Infect. Immun. 25 (1), 293-298 (1979).</li>
<li>Glode, M. P., Sutton, A., Moxon, E. R., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+neonatal+Escherichia+coli+meningitis%3A+induction+of+bacteremia+and+meningitis+in+infant+rats+fed+E.+coli+K1%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of neonatal Escherichia coli meningitis: induction of bacteremia and meningitis in infant rats fed E. coli K1.</a> Infect. Immun. 16 (1), 75-80 (1977).</li>
<li>Pluschke, G., Mercer, A., Kusećek, B., Pohl, A., Achtman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+bacteremia+in+newborn+rats+by+Escherichia+coli+K1+is+correlated+with+only+certain+O+%28lipopolysaccharide%29+antigen+types%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Induction of bacteremia in newborn rats by Escherichia coli K1 is correlated with only certain O (lipopolysaccharide) antigen types.</a> Infect. Immun. 39 (2), 599-608 (1983).</li>
<li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+capsule-selective+endosialidase+E+minimizes+changes+in+organ+gene+expression+induced+by+experimental+systemic+infection+with+Escherichia+coli+K1%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Administration of capsule-selective endosialidase E minimizes changes in organ gene expression induced by experimental systemic infection with Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 156 (7), 2205-2215 (2010).</li>
<li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+the+polysialyl+capsule+during+blood-to-brain+transit+of+neuropathogenic+Escherichia+coli+K1%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Differential expression of the polysialyl capsule during blood-to-brain transit of neuropathogenic Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 154 (8), 2522-2532 (2008).</li>
<li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+cure+of+systemic+Escherichia+coli+K1+infection+by+modification+of+the+bacterial+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Prevention and cure of systemic Escherichia coli K1 infection by modification of the bacterial phenotype.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 48 (1), 1503-1508 (2004).</li>
<li>Achtman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six+widespread+bacterial+clones+among+Escherichia+coli+K1+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Six widespread bacterial clones among Escherichia coli K1 isolates.</a> Infect. Immun. 39 (1), 315-335 (1983).</li>
<li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+experimental+Escherichia+coli.+infection+with+recombinant+bacteriophage-derived+capsule+depolymerase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Antimicrob.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Treatment of experimental Escherichia coli. infection with recombinant bacteriophage-derived capsule depolymerase.</a> J. Antimicrob. Chemother. 56 (5), 160-165 (2005).</li>
<li>Gross, R. J., Cheasty, T., Rowe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+bacteriophages+specific+for+the+K1+polysaccharide+antigen+of+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Isolation of bacteriophages specific for the K1 polysaccharide antigen of Escherichia coli.</a> J. Clin. Microbiol. 6 (6), 548-550 (1977).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

מודל החיה המתואר כאן מתבסס על עבודה קודמת שנועדה לשחזר את המאפיינים הבולטים של מתרחש באופן טבעי בזיהומים בבני אדם. חולדות בילוד בתחילה הועסקו ללמוד דלקת קרום מוח תינוקות עקב H. סוג אינפלואנזה b כמינים עומדים בקריטריונים המרכזיים למודל חזק של זיהום. כך, פורטל כניסה של הפתוגן הרלוונטי צריך לשקף את זה של הדבקת בני אדם הטבעית וreproducibly להצמיח פתולוגיה דומה של משך מספיק כדי לאפשר התערבות טיפולית. הטכניקות המשמשות לא צריך להגביל את תחולתו של ההליך ולא צריך לתרום לתוצאה מחלה 20. המודל של ה &#39; דלקת קרום מוח המופילוס בחולדות תינוק שפותחו על ידי Moxon ועמיתים עונה על קריטריונים אלה 20; ההדבקה הטבעית מתרחשת לאחר קולוניזציה של הקרומים הריריים של דרך הנשימה העליונה, תכונה חשובה זו שוכפלה בגורי החולדה על ידי אי-טראומההחדרת טיקים של החיידקים על גבי הקרומים של מעברי האף. חשוב לציין, הטבע תלוי הגיל של הזיהום היה משוכפל במודל. אותה הקבוצה גם היתה הראשונה לפתח מודל לא פולשנית של א &#39; coli K1 NBM בחולדה בילוד 22. גורי ספראג-Dawley הפתוגן ללא שיישבו על ידי האכלת 8 אוקטובר - 10 אוקטובר חיידקים דרך צינור קיבה דרך הפה; הבידוד לכן היה גבוה במידה ניכרת מזה מועסק על ידינו. קולוניזציה עם שלושה זני K1 בדקו, C94 (O7: K1: H-), EC3 (O1: K1: H-) ו- LH (O75: K1: H3), התרחשה בשיעור גבוה יחסית (48-74%) של K1-האכיל בעלי חיים, אבל מקרים של בקטרמיה, דלקת קרום המוח ולתמותה היו משתנים ונמוכים משמעותי משיעורים של קולוניזציה. הטבע המשובט של א &#39; זיהום ניסיון coli K1 הוקם מאוחר יותר 23 ונראה עכשיו כי רק O18: K1 ו, ובמידה פחותה, O7: קפסיד K1 יכוליםלגרום באופן עקבי זיהום מערכתי. מסיבה זו, החקירות של פתוגנזה של א &#39;neuropathogenic אלה coli K1 היו מבוסס על השימוש בO18 משופר הארסיות: A192PP מתח K1. השוואה של א &#39; האכלת coli K1 של חולדות בילוד דרך צינור קיבה, כפי שGlode ועמיתי 22, ושיטת האכלת טיפה כפי שהיא מתבצעת על ידי הקבוצה של Achtman 23 חשפו מספרים מוגזמים של מוות תוך שימוש בשיטה הקודמת, כמעט בודאות כתוצאה מניזק לרירית משטחים על ידי צינור קיבה. כמו שיעורים של קולוניזציה דומים עם שתי שיטות אלה, מומלץ להשתמש בשיטה פחות פולשנית של האכלת החיידקים באמצעות פיפטה עם טיפ סטרילי, כפי שתואר בתקשורת זו. A192PP זן החיידק המשמש במחקרים שלנו הוא O18: K1. זה הוא נגזר אלים יותר של הזן הקליני E. A192 coli שהתאושש במקור ממטופל עם הרעלת דם 27 </sup&gt;. האלימות המוגברת של הזן הייתה מתקבלת על ידי מעבר סדרתי דרך חולדות ילודות 26. המתח מעורר את חומרת מחלה תלוית גיל, עם בקטרמיה 100% ותמותה כאשר ניתן לבעלי החיים ישנים 2 יום 28. בניגוד לכך, ישנות חיות 9 יום הן לגמרי עמידות למחלות. K1 הספציפי bacteriophage ממס ניתן להשתמש כדי לבדל את ה coli K1 מא האחר coli זני 29. במחקר זה, רגישות של חיידקי קיימא לK1E bacteriophage יש להשתמש כדי (i) לבדוק את הטוהר של E. השעיות coli K1 מוכנות להיות מוזנות לבעלי החיים, וכן (ii) כדי לבדל את E. K1 coli מהקוליפורמים אחרים על מנת לחשב את הכדאיות במטליות פי טבעת, דם ודגימות רקמה. אם המושבה היא E. coli K1, זה יהיה רגיש לתְמוּגָה K1E bacteriophage, והתפתחות חיידקים יהיו מעוכב באתר של חיסון bacteriophage. אם המושבה לא E. coli K1, זה יהיה בדואר עמיד לתְמוּגָה bacteriophage kie, ולא צריך להיות על שטח של התפתחות חיידקים באתר של חיסון bacteriophage. יש לזכור שמודלים של בעלי החיים אינם יכולים לשקף את כל התכונות של המחלה מתרחשת באופן טבעי. המודל הנוכחי יכול להיות שונה כדי לבחון את מאפייני האלימות של חיידקי neuropathogenic אחרים מאשר E. ניתן לאכלס coli A192PP ושינויים בגודל של הבידוד והמיישבים. יישומים עתידיים של הטכניקה יכולים לכלול ההערכה של תרופות נחוצות לטיפול במצב ולחשוף פרטים על תשובות המארח לפלישת קולוניזציה ורקמה. השיטה המתוארת כאן היא פשוטה אך יעילה. המלטות יחידה של 10-12 גורים הועסקו כקבוצות מבחן או שליטה וגישה בתוך-אפריון זה מבטיחה רמה גבוהה של שחזור ותוקף סטטיסטי. זה הכרחי כי הגורים יוחזרו לאמהות טבעיות שלהם בהקדם האפשרי לאחר כל procedurדואר והמלטות לא צריכים לכן מהווים חיות עוברות התערבויות שונות. חשוב שהבידוד נמאס לחמם אחרת הגורים ידחו את התרבות המוצעת. הגורים לפתח במהירות חיידקים מורכבים ובתוך יומיים של לידה במערכת העיכול היא יישבה עם מגוון רחב של חיידקים מהמערכת הנוספת שהוקמה כחיידקים הנפוצים ביותר במעיים של התינוקות ומבוגרים. גורים שלא היה מאכילים א coli A192PP אינו נושא את ה coli K1 נחישות במערכת העיכול 17 וכן שיעורים של קולוניזציה היא פשוטה יחסית. עם זאת, Neus המבוסס על מתקפות שיטת qPCR לגילוי של מיישבי E. coli K1 הוא הרבה יותר רגיש כי שיטות תרבות מסורתיות, והוא מומלץ בחום 17.

זיהומים חיידקיים מערכתיים הם איום עיקרי לרווחת ולהישרדותו של הוולד; פגים פגיעים במיוחד. דלקת קרום המוח בילוד בקטריאלי (NBM), קשור לעתים קרובות עם אלח דם חיידקים, ממשיך להיות מקור משמעותי לתמותה ותחלואה בשבועות הראשונים לחייהם והבעיה מחריפה בפיתוח המתמשך של התנגדות לתרופות אנטי-בקטריאלי חזית 1,2. מקרה של NBM הוא מצב חירום רפואי שנושא בנטל רפואי, חברתי וכלכלי גבוה 3; כתוצאה מכך, יש צורך דחוף בתרופות חדשות ו, במיוחד, אסטרטגיות מניעתי רומן להפחית את הנטל של זיהום. חלק מהתכונות של NBM הן יוצאי דופן: בעולם המפותח, Escherichia coli וקבוצת B סטרפטוקוקוס אחראים לרוב הגדול של המקרים ואת היכולת של זנים אלה כדי לעורר NBM כמעט תמיד קשור בנוכחות של CA פוליסכריד מגןpsule המאפשר פתוגן להתחמק הכרה חיסונית מעבד 4. אחוז גבוה מאוד (80-85%) של neuroinvasive E. coli להביע כמוסת K1 5,6, פולימר חומצת polysialic α-2,8 צמוד שהוא מבני זהה לארח מאפננים של פלסטיות עצבית 7. ההערכה של תרופה חדשה ואמצעי מניעה לNBM ובקטרמיה קשורה ואלח דם הייתה ברורה תועלת ממודל של בעלי חיים חזק של זיהום המחקה את התכונות העיקריות של המחלה בילוד האנושי, בפרט בגיל-התלות החזקה והמסלול הטבעי של זיהום . מגוון רחב של מודלים לדלקת קרום המוח חיידקית שלילי גרם גראם-חיובי והם זמינים 8,9 ואלה שיש לי משמעותי הרחיבו את הידע של אפשרויות פתוגנזה, פתופיזיולוגיה וטיפול בזיהומים אלה שלנו. כך, זיהומים ניסיוניים בחולדות, עכברים, ארנבים וקופים היו בשימוש ללמוד דלקת קרום מוח בשני neonate והמבוגר. עם זאת, רבים מהמודלים האלה להעסיק הזרקה תת עורית או intracisternal ישירה של חיידקים לייזום של זיהום, יצירת פתוגנזה מלאכותית על-ידי עקיפת תהליכים טבעיים של הפצה מהאתר של קולוניזציה. בחלק מהמקרים בשיטות של חיסון אלה הביאו לשינויים משמעותיים בפתולוגיה; לדוגמא, מנהל תת-עורי של א &#39; coli זני K1 ביטלו את גיל תלות הקשורים לזיהום הטבעי, ייצור בקטרמיה ופלישה של מערכת העצבים המרכזית (CNS) בשני ילודים ומבוגרים 10. נטייה לE. coli NBM תלוי באופן קריטי על העברת אנכית של הסוכן סיבתי מאם לתינוק באו מייד לאחר לידת 11. אימהי המופק E. חיידק E. K1 ליישב את מערכת עיכול של ילוד (GI) 11-13, שהוא סטרילי בלידה, אבל במהירות רוכשת חיידקים מורכבים 14. בילודים יישבו, E. coliיש חיידקי K1 יכולת translocate מחלל המעי למחזור הדם המערכתי לפני הכניסה למערכת העצבים המרכזית על פני מחסום הדם-המוח או מחסומי נוזל דם-המוח והשדרה 9,15. העיצוב של דגמים חזקים של זיהום ניסיון צריך לקחת פרטים אלה בחשבון. למרות שעכברים היו בשימוש נרחב למחקר של צורות מסוימות של דלקת קרום מוח חיידקית 8, הם אינם מתאימים ללימודים של זיהום בילוד: הם מוצפים על ידי זיהום מערכתי ולא מראים אופייני תלות גיל החזקה של תינוקות אנושיים 16. יתר על כן, α-defensins, פפטידים מפתח של מערכת עיכול מתן הגנה מפני פלישה מערכתית על ידי א coli K1 17, באים לידי ביטוי מאוד בתאי פנט ונויטרופילים בבני אדם ובחולדות, אך לא בעכברים 18. יש מידה ראויה לציון של כפילות, יתירות וההטרוגניות בdefensin עכבר והגנים cryptidin קשורים לא נמצאה באחרimals 19. העכברוש בילוד שימש בתחילה על ידי Moxon ועמיתים לעבודה 20 לחקור את פתוגנזה של דלקת קרום מוח המופילוס אינפלואנזה הבאה חיסון intranasal, משכפלים את האתר הטבעי של קולוניזציה של הפתוגן בילוד באדם, ולאחר מכן הותאם לתלוי גיל E. בקטרמיה coli K1 ודלקת קרום מוח. Bortolussi et al. 21 זריקת intraperitoneal מועסק של הבידוד החיידקים ליזום זיהום, אך המחקר המרכזי של Glode ועמיתים לעבודת 22 האכלת קיבה דרך הפה בשימוש במקביל לתוואי הטבעי של זיהום לאחר קולוניזציה GI. כצינור הקיבה עלול לגרום נזק משטחים ריריים, ההליך היה מעודן לכלול האכלה של הבידוד לילודים 23. כאן, השיטה להתיישבות מערכת עיכול ונהלים למעקב אחר הזיהומים בגורי חולדה רגישים מתוארים; בנוסף, יישומים טיפוליים ומניעתי של המודל נדונים.

<table><tbody><tr><td>חולדות Wistar נקיות מפתוגנים (12 x רך, 1 x אם מניקה)</td><td><a href="http://www.harlan.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Harlan, UK</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>E. coli K1 A192PP</td><td><a href="http://www.ucl.ac.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Taylor lab</a></td><td></td><td>Mushtaq &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt; 2004</td></tr><tr><td>בקטריופאג K1E</td><td><a href="http://www.ucl.ac.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Taylor lab</a></td><td></td><td>Mushtaq &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt; 2004</td></tr><tr><td>גליצרול</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>אגר Mueller-Hinton</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Oxoid, UK</a></td><td>CM0037</td><td></td></tr><tr><td>ציר Mueller-Hinton</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Oxoid, UK</a></td><td>CM0405</td><td></td></tr><tr><td>אגר MacConkey</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Oxoid, UK</a></td><td>CM0007</td><td></td></tr><tr><td>מלח תמיסת פוספט (PBS)</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 100%</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>מלח Heparin Sodium</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>84020</td><td>להכין 20 - 50 units/ml</td></tr><tr><td>תמיסת RNAlater</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>R0901</td><td>10 &amp;mu;l/mg רקמה</td></tr><tr><td>חומצה אצטית</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>320099</td><td></td></tr><tr><td>כלורופורם</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>322415</td><td></td></tr><tr><td>מטבונים עם קצה כותנה</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>11542483</td><td></td></tr><tr><td>מטבוני Alcotip</td><td><a href="http://www.scientificlabs.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Scientific Laboratory Supplies, UK</a></td><td>SWA1000</td><td></td></tr><tr><td>צלחות פטרי</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>P5856</td><td></td></tr><tr><td>מבחנה אוניברסלית 30 ml</td><td><a href="http://www.alphalabs.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> AlphaLaboratories, UK</a></td><td>CW3890</td><td></td></tr><tr><td>מבחנות מיקרוצנטריפוגה 0.5 ml</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> StarLab, UK</a></td><td>I1405-1500</td><td></td></tr><tr><td>מבחנות מיקרוצנטריפוגה 1.5 ml</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> StarLab, UK</a></td><td>I1415-1000</td><td></td></tr><tr><td>לופים מכויילים 0.1 &amp;mu;l</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> StarLab, UK</a></td><td>E1412-0112</td><td></td></tr><tr><td>פורסי פריסה בצורת L</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> StarLab, UK</a></td><td>E1412-1005</td><td></td></tr><tr><td>קוובטות</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>10594175</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה ישרה עם קצוות דקים</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12780036</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה ישרה עם קצוות קהים</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12391369</td><td></td></tr><tr><td>פינצטת שעון מעוקלת עם קצוות דקים מאוד</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12740926</td><td></td></tr><tr><td>מספריים ישרים עם קצוות דקים מאוד</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12972055</td><td></td></tr><tr><td>מספרי מעבדה</td><td><a href="http://www.vwr.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> VWR, UK</a></td><td>USBE4251</td><td></td></tr><tr><td>מחטי מזרק 25 G</td><td><a href="http://www.greinerbioone.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Greiner Bio-One Ltd</a></td><td>N2525</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטרי UV/Vis מדגם LAMBDA 25</td><td><a href="http://www.perkinelmer.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> PerkinElmer, UK</a></td><td>L60000BB</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור Unitemp</td><td>B&amp;amp;T, UK</td><td>OP958</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור עם ניעור מדגם Multitron</td><td><a href="http://www.infors-ht.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> INFORS HT, UK</a></td><td>AJ118</td><td></td></tr><tr><td>הומוגניזטור Ultra-Turrax T-10</td><td><a href="http://www.ika.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> IKA Werke</a></td><td>0003737000</td><td></td></tr></tbody></table>

דגם לא פולשנית של neuropathogenic coli escherichia זיהום בעכברוש הילודים

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

חקירה של יחסי הגומלין בין בעלי החיים ומארח הפתוגן חיידקים היא משמעותית רק אם מודל הזיהום המועסק משכפל את המאפיינים העיקריים של ההדבקה הטבעית. פרוטוקול זה מתאר הליכים להקמה וההערכה של זיהום מערכתי עקב K1 coli Escherichia neuropathogenic בחולדה בילוד. קולוניזציה של מערכת העיכול גורמת להפצה של הפתוגן לאורך מסלול מעי-לימפה-דם-המוח של זיהום והמודל מציג תלות גיל חזקה. זן של א &#39; coli O18: K1 בארסיות משופרת עבור העכברוש בילוד מייצר שיעורים גבוהים במיוחד של קולוניזציה, טרנסלוקציה לתא הדם והפלישה של קרומי המוח הבאים מעבר דרך המקלעת דמית העין. כמו במארח האנושי, חדירה של מערכת העצבים המרכזית מלווה בדלקת מקומית ותוצאה תמיד קטלנית. המודל הוא של שירות מוכח ללימודים של המנגנוןשל פתוגנזה, להערכת התערבויות טיפוליות, ולהערכה של אלימות חיידקים.

E. מודל זיהום מערכתי coli K1 המתואר כאן משכפל רב מהתכונות של ההדבקה הטבעית בבני אדם. החיידקים הם מעובדים, ליישב את מערכת העיכול, translocate לתוך תא הדם דרך בלוטות לימפה mesenteric לפני הקמת מחלה ספציפית לאיבר עם הדלקת הקשורים במוח 24. חשוב לציין, המודל מציג תלות גיל חזקה; כפי שמוצגים באיור 3, גורי חולדה שתי בנות יום (P2) רגישים מאוד למחלה פולשנית אלא על פני תקופה של שבעה ימים והחיות נעשות יותר ויותר עמידות לזיהום, אך לא למערכת עיכול קולוניזציה בדרכי 17. לאחר מעבר מהאתר של קולוניזציה GI לתא הדם, יכולים להיות דמיינו את החיידקים בדגימות דם על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי (איור 4) לפני הכניסה למערכת העצבים המרכזית בעיקר במקלעת דמית העין 25. אצל בעלי חיים מסוימים, יש פלישה נרחבת של איברים מרכזיים אחרים כגוןריאות, טחול וכליות 25. מספרי חיידקים ברקמות יכולים להשתנות באופן משמעותי בין גורים הבודדים 25 אבל כאשר bioburden הוא הבקיע כמו גם בהווה או בנעדר יש רמה גבוהה של שחזור בכל קשור לפלישת איבר. בשגר של 12 גורים כעוקבת בדיקה אחת, חישובי כוח באמצעות ה- G * תוכנת כוח נקבעו כי גודל מדגם זה משווה להסתברות 98.6% להימצאות השפעה המבוססת על הישרדות באמצעות שישה בעלי חיים מהמחזור ו&gt; הסתברות של 99% אם כל שנים עשר נלקחות בחשבון. המודל לכן הוא מתאים להערכה של תרופות חדשות מותאמות במיוחד לטיפול בזיהומים חיידקיים בילוד ונעשה שימוש בהליך כדי להעריך את הפוטנציאל הטיפולי של הכמוסה depolymerase EndoE כי סלקטיבי מסירה את הקפסולה K1 ממשטח חיידקי 24-26. גם זה יכול לשמש כדי לחקור אינטראקציות מארח-חיידקים המשפיעים על הטפיחהhogenesis של א ' neuropathogens coli; בהקשר זה היא שמשה ללימודים של א ' קולוניזציה coli A192PP והפצה. הוכח כי א קולי תאי A192PP להתמיד במערכת העיכול של גורי P2, P5 וP9 במספרים גדולים; היבטים זמניים של קולוניזציה בשלוש קבוצות אלה היו דומים מאוד (איור 5) ומשקפים את היכולת של החיידקים כדי לשכפל ולשמור על צפיפות אוכלוסייה בתוך הבטן. הארסיות של A192 הבודד הקליני הייתה משופר על ידי מעבר סדרתי בחולדות ילודות כדי להבטיח יתירות מעט או ללא שימוש בבעלי חיים. E. coli A192 יישב חולדות ילודות P2 עם 100 יעילות%, שהושרו בקטרמיה ב -35% מבעלי החיים וניב תוצאה קטלנית ב -25% 27. A192PP הנגזר passaged colonizes מערכת העיכול, מייצר בקטרמיה וגורם קטלני בכל גורי P2. כך, המודל יכול להיות מועסק על מנת לחקור את האלימות של דיfferent K1 זנים ביחס ליכולתם לחדור לתוך מערכת העצבים המרכזית ומערכות גוף שונות מהאתר של קולוניזציה. בהקשר זה, Pluschke ועמיתים לעבודה 23 השתמשו במודל זיהום עכברוש בילוד כדי לקבוע את הקיבולת של 95 E. coli K1 זנים ממקור אנושי כדי לגרום לבקטרמיה לאחר קולוניזציה הבטן; הם נצפו וריאציות רחבות ביעילות של שני קולוניזציה ויכולת פולשנית, שבבסיס הטבע המשובט של א ' coli K1 neuropathogens. <img alt="איור 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" width="600"> איור 1. חומרים לאוסף רקמות: (א) בקנה מידה במשקל, (ב) צינורות-שקל מראש המכילים תקשורת הכרחית, (ג) פעולת שולחן, שליט ומחטים להצמיד בעלי החיים, 70% (ד) (V / V) אתנול וPBS לעקר ציוד אוסף רקמות, <s>(F) לשימור הרקמות (E), (G) 70% (V / V) אתנול לחיטוי שולחן הפעילות ומקיף. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> </s><img alt="איור 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" width="600"> איור 2. הפרדה של מערכת העיכול ומערכת הלימפה mesenteric. גריפ ההמוני של מערכת הלימפה mesenteric עם מלקחיים לנתיחה קנס המרכזי מערכת עיכול מערכת הלימפה mesenteric (). גריפ (ב ') החלק הפרוקסימלי של המעי הדק, ומושך בכיוונים מנוגדים. (ג) וseparat מלאדואר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig3highres.jpg" width="500"> איור 3. הישרדות של גורי חולדה יילודים בגילים מ יומיים (P2) לתשעה ימים (P9) לאחר נטילה דרך הפה של א ' coli A192PP, הממחיש את תלות גיל החזקה של זיהום מערכתי. כל קבוצה מייצגת 24 ילודים. <img alt="איור 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" width="600"> איור 4. תמונות הקרינה של ה קולי תאי A192PP בכתם דם מגור P2 נגועים לאחר הנטילה דרך הפה של חיידקים. אנטיגן O lipopolysaccharide על פני השטח של החיידקים היה stained עם נוגדן ארנב נגד O18 polyclonal ונוגדן שני עז-נגד ארנב Alexa546 מצומדות-. כמוסת K1 הייתה דמיינה עם מגיב EndoE-GFP. כמעט כל החיידקים שאותרו בדגימות דם מוצג כמוסת K1 מגן. תמונות שנתפסו על ידי ד"ר אנדריאה Zelmer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig5highres.jpg" width="500"> איור 5. E. הממשל הבא קולוניזציה במעי coli A192PP של הבידוד החיידקים. DNA הופק מכל מעי וא רקמת coli K1 המושבה להרכיב יחידות / g (CFU / g) שנקבעה על ידי תגובת השרשרת של פולימראז כמותית (QPCR) מיקוד גן polysialyltransferase (Neus) כפי שמתוארת במקום אחר 17 <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> תכונה </td><td> בריא </td><td> לא בריא </td></tr><tr><td> צבע של העור </td><td> ורוד </td><td> חיוור / צהוב </td></tr><tr><td> Agility (רפלקס ליישר) </td><td> גור הופך באופן מיידי על מיקום אחורה </td><td> קושי בהיפוך מיקום לאחור (&gt; 3 שניות) או לא יכול להשיג </td></tr><tr><td> לחץ עדין על הבטן </td><td> אין קול </td><td> קול של תסיסה </td></tr><tr><td> בטן קו חלב / </td><td> גלוי ולבן </td><td> לא נראה לעין </td></tr><tr><td> טמפרטורה </td><td> חם </td><td> * קר יחסית </td></tr><tr><td> משקל </td><td> רווח של 1.5-2 גרם ליום </td><td> ללא עלייה במשקל או ירידה במשקל </td></tr><tr><td> התנהגות כאשר הניחו בכלוב </td><td> נע לכיוון אמא ומתחיל Feeding </td><td> לא יכול לזוז לכיוון אמא ומראה האכלת קושי </td></tr></tbody></table> 1. מערכת שולחן שבע נקודות ניקוד: שלושה הציונים הראשונים ברשימה הן בדרך כלל הסימנים הראשונים שנצפו. * ילודים עם טמפרטורת זיהום מערכתי ניסיון מוגבה גוף (&gt; 2 מעלות צלזיוס). עם זאת, בשל חוסר הגמישות של בעלי החיים כדי להגיע לאמא שלהם כדי לשמור על טמפרטורת גוף, בעלי חיים לא בריאים עשויים להיות מופרדים מהפסולת ומרגישים קר ליד החשופה.

כאן, הליך מתואר להקמת זיהום מערכתי בחולדה היילודים עם תרבויות של Escherichia coli K1. הליך בלתי פולשני זה מאפשר קולוניזציה של מערכת העיכול, טרנסלוקציה של הפתוגן למחזור המערכתי, ופלישה של מערכת העצבים המרכזית במקלעת דמית העין.

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic Coli Escherichia זיהום בעכברוש הילודים

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

מטרת הליך זה היא לספק מודל in vivo חזק לחקירת הפתוגנזה המולקולרית של E coli, K one אלח דם בילודים ודלקת קרום המוח. זה מושג על ידי מתן אוראלי ראשון של E coli K לחולדה שזה עתה נולדה. בשלב השני, הקולוניזציה מאושרת על ידי ספוגית פריאנאלית.לאחר מכן, הרקמות והאיברים המעניינים נאספים בנקודות הזמן הרצויות, ולאחר מכן בשלב הסופי, הדגימות מעובדות ונשמרות בתנאים המתאימים. בסופו של דבר, ניתן לדמיין ולכמת את היקף הקולוניזציה באמצעות טכניקות שונות כגון ספירת כדאיות ו-QPCR. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון הזרקה תוך חזה ותת עורית, הוא שהיא משכפלת את מסלול ההתקדמות הטבעית של המחלה בבני אדם נגועים.הדגמה של ההליך תהיה מריצה שמנה לבסוף, דוקטורנט מהמעבדה שלי לשמור את כל המלטות החולדות של 12 יילודים בכל מושבה בכלובים בודדים עם אמהותיהם המניקות בתנאים אופטימליים עד לנקודת הסיום של הניסוי כדי לתת את החיידקים לכל בעל חיים, להרים בעדינות את היילוד אנכית ביד אחת על ידי קשקוש הצוואר, לאפשר לפה להיפתח. לאחר מכן הכניסו לאט קצה פיפטה סטרילי לפה והוציאו 20 מיקרוליטר מהחיסון. במשך 30 שניות, החזירו את בעלי החיים לאמם מיד לאחר ההאכלה והעריכו את חומרת המחלה של כל בעל חיים ארבע עד חמש פעמים ביום באמצעות מערכת הניקוד של שבע הנקודות המתוארת בטבלה.אם בעל חיים מקבל ציון נמוך או שווה לשלושה מתוך שבעה, התקשר מיד לבעל החיים כדי למזער את הסבל. רשום שהחיה מתה כדי לאשר את ההתיישבות של בעלי החיים כל 24 שעות, החל מ-24 השעות הראשונות לאחר האכלה. הרימו כל חיה על ידי הקשקוש בתורו כפי שהודגם זה עתה, ולאחר מכן החליפו בעדינות את האזור הפריאנאלי של היילוד עם ספוגית כותנה סטרילית לחה PBS.החזירו את החיה לאמה והניחו את הספוגית ב -300 מיקרוליטר PBS סטרילי על קרח. לאחר מכן השתמש ב-PBS כדי לאשר קולוניזציה על ידי אקולוגי כמו K אחד על ידי דילול סדרתי, ואחריו ציפוי על אגר מקונקי. לאחר מכן, כדי לקבוע את מספר האקולוגיות הקיימות, כמו Kone, השתמשו בלולאה מיקרוביולוגית סטרילית כדי לאסוף מושבה בודדת מאחת מלוחות מקונקי, ואז העבירו את המושבה ל-200 מיקרוליטר של PBS סטרילי.צור תרחיף תא בודד על ידי מערבולת, ולאחר מכן השתמש בלולאה מיקרוביולוגית סטרילית חדשה כדי לתרבית את התאים על צלחת אגר מולה הינטון בקו ישר. לאחר שאפשרו לצלחת להתייבש במשך 30 שניות, פיפטה 10 מיקרוליטר של חיידקים פאג' K אחד E על מרכז הקו, ודגרו על הצלחת למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס. למחרת, בדוק את הצלחת לאיתור חיידקים בתיווך פאג'ים ליזיס כדי לאסוף את מערכת העיכול.נקו את הבטן של בעל חיים מחוסן לאחר המתת החזה, ולאחר מכן חתכו לאורך הבטן התחתונה עד עצם החזה, והאריכו את החתך על פני עצם החזה ובמורד הצד הימני מעצם החזה לבטן התחתונה. לאחר מכן, השתמשו במלקחיים מעוקלים של קשתית כדי למשוך בעדינות את דש העור כלפי מטה כדי לחשוף, ולאחר מכן הרם בעדינות את חיתוך הצפק אנכית כדי לחשוף את האיברים הפנימיים תוך הקפדה לא לפגוע באף אחד מהאיברים הבסיסיים. כעת, העבירו בעדינות את הקיבה משני הצדדים והניחו אותה בביג'ו לפני הווייד, חתכו את המעי הגס בפי הטבעת, ולאחר מכן השתמשו במלקחיים כדי לשלוף בזהירות את כל מסת המעי, והניחו את הרקמה בצלחת פטרי סטרילית.מכסים את הרקמה ב -30 מיליליטר PBS, ואז מזהים את המסה המרכזית של מערכת הלימפה המזנטרית. צבטו את המסה בעזרת מלקחיים דקים, ולאחר מכן זהו את החלק הפרוקסימלי ביותר של המעי הדק וצבטו אותו גם עם מלקחיים דקים. משוך לאט את המסה המרכזית של מערכת הלימפה המזנטרית ואת המעי הדק הדיסטלי בכיוונים מנוגדים עד ששתי הרקמות מופרדות לחלוטין.מקפידים לא למתוח את המעי הדק. העבירו את מערכת הלימפה המזנטרית ל-300 עד 500 מיקרוליטר של PBS סטרילי בצינור שנשקל מראש על קרח. לאחר מכן חצו את מערכת העיכול בצקום כדי להפריד את המעי הדק מהמעי הגס.לאחר מכן העבירו את המעי הגס ל-300 עד 500 מיקרוליטר של PBS סטרילי בצינור כביש מהיר אחר על קרח, ואז יישרו את המעי הדק מנקודת האמצע. לבסוף, אסוף את שני הסנטימטרים האחרונים של הרקמה לפני הצקום עבור רקמת דגימת המעי הדק הדיסטלית המייצגת מחמישה עד שבעה סנטימטרים מעל נקודת האמצע של המעי הדק הפרוקסימלי. דגימה ורקמה משלושה עד חמישה סנטימטרים מתחת לנקודת האמצע למעי הדק האמצעי.דגימה לכל אחד מהצינורות. לאחר איסוף הרקמות, שקלו את כל הצינורות שנצברו כדי לחשב את משקל הרקמה על ידי השוואת משקל הצינורות לפני ואחרי הוספת הדגימות. לאחר מכן, הומוגניזציה של הרקמות, שטיפת ההומוגנייזר בין כל דגימה, ולאחר מכן אחסן מיד את הדגימות על קרח כדי לחשב את לוחית העומס החיידקים.דילול סדרתי של הדגימות ההומוגניות על צלחות מקון הוא דגירה של לילה ב-37 מעלות צלזיוס למחרת קובע את העומס האחד של Eli K על ידי בדיקת הרגישות של מושבות בודדות לפאג' החיידק הספציפי K אחד כפי שהודגם קודם לכן, מודל הזיהום המערכתי של Coli K המתואר כאן משכפל רבים מהתכונות של זיהום טבעי בבני אדם. חשוב לציין, המודל מציג תלות גיל חזקה כפי שמוצג בגרף. גורי חולדות בני יומיים רגישים מאוד למחלות פולשניות, אך במהלך תקופה של שבעה ימים, בעלי החיים הופכים בהדרגה עמידים יותר לזיהום, אך לא קולוניזציה של מערכת העיכול כפי שנצפתה בבני אדם.ניתן גם לדמיין חיידקים בדגימות דם על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי לפני הכניסה למערכת העצבים המרכזית ולאחר המעבר מאתר ההתיישבות במערכת העיכול לתא הדם כפי שמודגם בתמונות אלה של אי קולי, תאי PP 1 92 במריחת דם מגור יום שני לאחר הלידה לאחר מתן אוראלי של החיידק אי קולי, 1,92 תאי PP ממשיכים להתקיים במערכת העיכול של היום השני, החמישי והתשיעי לאחר הלידה במספרים גדולים ככאלה, היבטים זמניים של ההתיישבות בשלוש קבוצות אלה דומים מאוד ומשקפים את יכולתם של החיידקים לשכפל ולשמור על צפיפות אוכלוסייה בתוך המעיים. לפיכך, ניתן להשתמש במודל זה כדי לחקור את האלימות של זני K one שונים ביחס ליכולתם לפלוש למערכת העצבים המרכזית ולמערכות איברים אחרות מאתר הקולוניזציה. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כולל הדמיה של חיידקים ביו-לומינסנטים, באמצעות מיקרו CT IVs כדי לענות על שאלות נוספות כגון, כיצד המחלה מתקדמת בזמן אמת?

non-invasive-model-neuropathogenic-escherichia-coli-infection

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

המודל עכברוש הלידה לפגיעה hypoxic-איסכמי המוח הוא מודל ומבוססת של אנצפלופתיה הילוד האנושי איסכמי היפוקסי (HIE). במאמר זה, אנו מתארים את המודל של HIE ב שלאחר הלידה גורי חולדה.

מודל hypoxic אנצפלופתיה איסכמי של איסכמיה הלידה

מקור: Seman, B. G. ואחרים. מודל הדמיה של יילודים של ספסיס חיידקי גראם שלילי. J. Vis. Exp. (2020)הסרטון מדגים מודל עכבר יילוד לחקר זיהום מערכתית באמצעות חיידקים ביולומינצנטיים מקופלים. גורים יילודים מוזרקים בתרופות חיידקיות במינון גבוה או נמוך ומוחזרים לאמם לטיפול לאחר הלידה. החיידקים המכוסים בכיסוי נמנעים מזיהוי חיסוני מוקדם, מתפשטים באופן מערכתית, ומוצגים לאורך זמן באמצעות הדמיית זוהר. מודל זה מאפשר מעקב לא פולשני אחר התקדמות הזיהום בעכברים יילודים.

מידול זיהום בעכברים יילודים באמצעות חיידקים ביולומינסנטיים עטופים

אנצפלופתיה של פגות מקיפה את ההפרעות במערכת העצבים המרכזית הקשורות לפגיעה מלידה מוקדמת. דוח זה מתאר מודל חולדה רלוונטי מבחינה קלינית של איסכמיה מערכתית חולפת ברחם ומתן ליפופוליסכריד תוך מי שפיר (LPS) המחקה כוריואמניוניטיס, ואת ההשפעה הקשורה של גירויים זיהומיים ותת-עירוי שליה על התפתחות מערכת העצבים המרכזית.

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

כתב יד זה מתאר מודל כירורגי של חולדות של פיילונפריטיס באמצעות זיהום תוך-כלייתי ישיר על ידי Escherichia coli לאגן הכליה. ניתן להשתמש בהליך הניסוי כדי לחקור את הפתוגנזה של פיילונפריטיס כמו גם את הדלקת והפיברוזיס הנלווים.

הזרקת Intranenal של Escherichia coli במודל עכברוש של Pyelonephritis

דו ח זה מתווה גישה פשוטה לזירוז בהצלחה ניסוי חיסון לדלקת בעצה (EAN) באמצעות חלבון המיאלין אפס פפטיד180-199 (P0) בשילוב עם אדג'וונט מלאה של פרוינד, הרעלן שעלת. אנו מציגים פרדיגמה מתוחכם המסוגל להעריך במדויק את היקף הגירעונות פונקציונלי, neuropathology המתרחשים EAN הזה.

גישה פשוטה כדי לגרום לדלקת בעצה חיסון ניסיוני בעכברים C57BL/6 עבור הערכות Neuropathological פונקציונלי

פיתחנו מודל של chorioamnionitis כדי לדמות חשיפה עוברית לדלקת אימהית (FEMI) ללא סיבוכים של אורגניזמים חיים כדי לבחון את ההשפעות של FEMI על התפתחות מערכת העיכול של הצאצאים. זה מאפשר מחקר של סיבות מכניות להתפתחות של פגיעה במעיים בעקבות chorioamnionitis.

מודל מורין של חשיפה עוברית לדלקת אימהית כדי ללמוד את ההשפעות של Chorioamnionitis חריפה על התפתחות מעיים שזה עתה נולד

זיהום של עכברים יילודים עם bioluminescent E. coli O1:K1:H7 תוצאות זיהום ספיגה עם דלקת ריאות משמעותית ופתולוגיה ריאות. כאן, אנו מתארים נהלים למודל וחקר נוסף אלח דם יילודים באמצעות הדמיה תוך ויציתית אורך במקביל ללקטואר של נטל חיידקי מערכתי, פרופיל דלקתי, היסטופתולוגיה ריאות.

מודל הדמיה יילודים של אלח דם חיידקי גרם שלילי

נמק enterocolitis (NEC) היא המחלה הקשה ביותר במערכת העיכול (GI) המתרחשת לעתים קרובות אצל פגים, במיוחד תינוקות במשקל לידה נמוך מאוד, עם תמותה גבוהה ופתוגנזה לא ברורה. הגורם ל- NEC עשוי להיות קשור לחריגות במערכת הרגולציה החיסונית הדלקתית. מודל בעלי חיים NEC הוא כלי הכרחי למחקר חיסוני מחלות NEC. מודלים בעלי חיים NEC בדרך כלל להשתמש C57BL / 6J עכברי יילודים; עכברי יילודים BALB / c משמשים לעתים רחוקות. מחקרים קשורים הראו כי כאשר עכברים נגועים, בידול התא Th2 הוא דומיננטי בעכברים BALB / c לעומת עכברי...

מודל עכבר BALB /c יילודים של דלקת אנטרוקוליטיס נמק

לידה מוקדמת (לידה &lt; שבוע 37) היא בעיה בריאותית עולמית דחופה עם אפשרויות מניעה וטיפול לא אופטימליות. אנו מציגים מודל עכברי של לידה מוקדמת הנגרמת על ידי זיהום חיידקי בנרתיק ומתארים כיצד לנתח את התחלואה והתמותה של היילודים כתוצאה מכך.

מידול זיהום נרתיקי עולה, לידה מוקדמת ותחלואה בילודים בעכברים

פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר יילודים של דלקת מעיים נמקית (NEC) ובידוד לאחר מכן של תאי חיסון למינה פרופריה מהמעי הדק של עכברי היילוד.

מודל עכבר יילודים של דלקת מעיים נמקית ובידוד למינה פרופריה לפרופיל תאי חיסון

חקור מודל זיהום מערכתי של Escherichia coli K1 בעכברושים ניאונטליים. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני פתוגנזה של זיהום במערכת העצבים המרכזית ופיתוח טיפולים חדשים לספסיס ניאונטלי.

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic Coli Escherichia זיהום בעכברוש הילודים

גלה סרטונים נוספים