Name: בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: למד בידוד סעיפי עורקי ווריד mesenteric משור לבדיקת פעילות וסקולרית של תרכובות ניסיוניות. שיטה זו מאפשרת הערכת זרימת דם וספיגת חומרים במעי הדק.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מודים ריאן צ&#39;פלין וד&quot;ר גרג Rentfrow של אוניברסיטת קנטאקי המעבדה בשרים והמחלקה לבעלי החיים ומדעי מזון למתן הזדמנויות לאיסוף רקמות ניסיוניות מנוצלות במסמך זה.

נהלים המשמשים במחקר זה לא דורשים אישור מאוניברסיטת קנטאקי טיפול בבעלי חיים ועדת שימוש משום שאין בעלי חיים היו בשימוש. לפני האוסף של כל מדגם המשמש במסמך זה, כל בעלי החיים היו המומים עם בורג בשבי וexsanguinated. זה נערך במתקן בית מטבחיים בדק פדרלי באוניברסיטת קנטאקי. נציג רשמי של משרד החקלאות האמריקאי בטיחות מזון ופיקוח השירות נצפה כל הפעילויות שעסקו בבעלי החיים וטיפול בשידור חי של הפגר. .1 הכנת מכשור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למזער את כמות הזמן בין האוספים של דגימות רקמה לתחילת ניסוי, להגדיר את הציוד ולהכין מאגרים לפני איסוף רקמות ניסיוניות (או אם אנשים נוספים זמינים, משימות אלה יכולים להתרחש בו זמנית). הערה: זה לא רק מספק את הכמות הגדולה ביותר של זמן שהרקמה נשארת קיימא לבצע ניסויים, אבל חלקניסויים יכולים לרוץ במשך תקופות זמן ארוכות (או יש רצון להשלים ניסויים מרובים ביום), ולכן זה בדרך כלל רצוי להתחיל מוקדם ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יחידת כוח את המחשב קשור, ציוד רכישות נתונים, אמבט מים (לחיץ (ים)) וmyograph (ים). הנח את ציוד הכיול ביחידת myograph (ים) ולהדליק חום myograph (מוגדר מראש כדי 37.5 ° C) ולאפשר יחידות וציוד כיול לחמם למראש טמפרטורות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח קובץ הגדרות תוכנת תרשים שנוצר בעבר על המחשב ולהתחיל לרוץ (אך לא רכישת נתונים). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את הציוד עבור 10 דקות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתחיל לרכוש נתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפס כל הערוצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו, ולנהל כיול (במידת צורך) על כל ערוץ (4 ערוצים לכל multimyograph) לתקנן את האות החשמלית המסופקת ממתמר הכוח המתאים הקשורים לערוץ זה על כוח 2-g מסופק על ידי משקל מוסמך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הכיול והמרת יחידות הושלמו, לאחסן את כל הנתונים שלאחר מכן כגרם. תשתנה בהתאם מבוסס על רצונות של כל מעבדה נפרדת; הציוד והתוכנה מתירים את השימוש ביחידות אחרות, כגון milliNewtons ווולט. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שקווי הגז ברורים של חסימות ולהדליק אספקת גז (95% O 2/5% CO 2) לmyograph יחידות (ים). ברציפות בגז את כל המאגרים (בתאי myograph) במהלך ההליך כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למלא את כל תאי myograph עם 70% אתנול ולספוג עבור 10 דקות, להסיר את אתנול, ולחזור לרגע 10 דקות לספוג. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת אתנול, לשטוף שלוש פעמים עם מים ללא יונים, ואחריו שלוש שטיפות עם חיץ מוכן (ראה סעיף 2 להכנת חיץ), שעזב את התוספת השלישית של חיץ בתאי. הערה: בשלב זה את הציוד יכולה להישאר ללא פעילות במדינה זו עד חיץ ורקמה מוכנה וצוות מוכן להמשיך בexperiment. </li></ol></li></ol> 2 הכנת חוצצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון חיץ L קרבס-Henseleit 1 לשימוש בתחבורה ועיבוד של דגימות רקמה מנת להגיע לריכוזים סופיים של 11.1 מ&quot;מ D-גלוקוז; 1.2 מ&quot;מ MgSO 4; 1.2 מ&quot;מ KH 2 PO 4; 4.7 מ&quot;מ KCl; 118.1 mM NaCl; 3.4 מ&quot;מ CaCl 2; 24.9 מ&quot;מ NaHCO 3. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 9.6 גרם של מלחי קרבס לתוך כ 900 מ&quot;ל של מים ללא יונים על צלחת ומערבבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים במייבש סידן כלוריד 0.373 גרם ואחריו סודיום ביקרבונט 2.1 גרם לכל ליטר של החיץ הרצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון חיץ גז ל20 דקות עם 95% O CO 2/5% 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר המתה בגז, כדי להתאים את pH 7.05 (סינון של חיץ מגביר pH; pH היעד סופי צריך להיות 7.4) ולהתאים את עוצמת קול עד 1 ל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן לעקר חיץ לחיץ נקי autoclaved 1 ליטר תקשורת בקבוק ולאחסן ב 4 ° C עד מוכן לשימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן קרבס-H הנפרדפתרון enseleit חיץ לשימוש בניסויי myograph כמתואר בשלב 2.1 לתחבורה קרבס-Henseleit חיץ עם תרכובות נוספות הנוגעות לניסויי ההתכווצות. הערה: בדרך כלל 2 L יספיק לניסויים מתוארים במאמר זה, אבל זה נפח ייתכן שיהיה צורך מוגבר או מופחת המבוסס על האורך של הניסוי, מספר תאי myograph, והחלפות חיץ מספר (יחסית לתוספות טיפול). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני צעד ההמתה בגז (שלב 2.1.3), להוסיף 9.1 מ&quot;ג (מחיר לליטר של חיץ שמכין) של desipramine-HCl למאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 1.0 מיקרומטר של propranolol-HCl ולהוסיף 1 מ&quot;ל (מחיר לליטר של חיץ שמכין) של פתרון זה לפתרון חיץ קרבס-Henseleit. הפוך חיץ זה ביום של שימוש ולשמור בטמפרטורות myograph הפעלה (טמפרטורה שמניבה טמפרטורת C ° 37.5 בmyograph). הערה: desipramine מתווספת למעכבת את הספיגה החוזרת של המנגנונים האמינים יוגנייםותאפשר סליקה של תוספות ניסיוניות ממאגר הרחצה כלי הדם להתרחש במהירות רבה יותר. התוספת של propranolol מונעת הלא ספציפי מחייב של תרכובות טיפול לβ-adrenergic receptors. </li></ol></li></ol> .3 איסוף והכנה של כלי דם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהקדם האפשרי, להסיר את מערכת העיכול מהפגר. ברגע שבעלי החיים כבר לא מציג שום רפלקס לא רצוני, להסיר את הראש ולהסתיר ולאחר מכן להעלות את הפגר בצורה אנכית. הסרת הקרביים של מערכת העיכול (ושט אל פי הטבעת) מהפגר צריכה להתבצע על ידי אנשי בית מטבחיים מאושרים (&lt;20 דקות מהזמן של מדהים). הערה: תוך כמה זמן, מוגבל בדרך כלל על ידי המיקום / המתקן שבו מערכת העיכול שנאספה ומנהלי הפעלה סטנדרטיים או נהלי מנדט פדרלי ואחריו את הסגל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברוב המתקנים, לנהל מניפולציות של מערכת העיכולבמיקום נפרד מעיבוד של הפגר שנועד להזין את אספקת מזון. השתמש במיקום סמוך נוח שבו מערכת העיכול ניתן לקחת ופרושה לבדיקה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמערכת העיכול פרושה, לזהות את המעי הדק, פי ileocecal חיבור המעי הדק לcecum, ומקורבות ileal הארכה הפרוקסימלי לחיק ileocecal (איור 1 א). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל או סכין, מאוד קל לעשות חתך בקרום mesenteric במרכז אוגן ileal. באמצעות שתי אצבעות מורות, בבוטות לנתח את רקמת השומן וחיבור החושפת את כלי דם mesenteric (איור 1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאוגן או בליטה זו בלפדר המעיים, לנתח את ענפים מרובים (~ 2 סנטימטר אורך) של חבילות עורק ווריד mesenteric החשופות התומכות בחלק זה של המעי (איור 1 ג). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם uלשיר במלקחיים כדי לתפוס רקמות, לדאוג שלא לתפוס באופן ישיר או למשוך את כלי דם בכל עת הסרתם ככל סוג של מתיחה יכול לגרום נזק ובאופן שלילי משפיע ביצועי רקמה 14. הסרת כלי דם נעשית הטובה ביותר, על ידי חיתוך על פני כל קצה של הקטע שיש להסיר ולאחר מכן חיתוך לצד או במקביל לסעיף עכשיו מבודד. על מנת להקל, להסיר חלק מהרקמה הסובבת יחד עם כלי לספק כמה רקמה לתפוס עם זוג המלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם זוג המלקחיים, לצלול דגימת רקמה בצינור המכיל חיץ קרבס-Henseleit קרח קר ולאחסן על קרח עד עיבוד יכול להתרחש במעבדה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח דגימת רקמה על משטח חיתוך או בצלחת פטרי ובחלקו לצלול בקרח קר קרבס-Henseleit. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת 5 מלקחיים תכשיטנים #, איריס מספריים נויס, ומגדלת מנורה או לנתח היקף (2.5 להגדלת 5.0x היא מספיק), לנתח בזהירות את connecti השומן והסביבהve רקמות ולהפריד בין העורק לוריד. זיהוי פתיחת הכלי בקצה אחד של הקטע ולתפוס את fascia המקיף את הכלי עם המלקחיים בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך עם המספריים במקביל לספינה על ידי הזזה קצה המספריים מתחת fascia העלה. לאחר החתך הראשוני, השומן ורקמות חיבור יכולים להיות מנותקות עוד יותר מהספינה על ידי גדיעה כל צד עם המספריים. ודא שהכולים הם נקיים ככל האפשר, תוך מזעור כמות זמן כלי מבלים על הספסל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור כלי דם לצינורות של חיץ קרבס-Henseleit הטרי ולאחסן ב 4 ° C (דגימות יכולות להישאר לאחסן עד 24 שעות לאחר איסוף ועדיין לייצר נתונים התכווצות בתוקף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות סכין גילוח, כלי פרוס לשימוש בmyograph למספר רצוי של סעיפי 2 מ&quot;מ (כדאי להשתמש מבצעה רקמה להשיג חתכים עולים בקנה אחד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבחון כל סעיף תחת SCO לנתחPE (הגדלה 12.5X) כדי להבטיח כי לכל סעיף לא חריג, סניפים, שסתומים, או נזק שטחי בטעות שנעשה במהלך נתיחה וניקוי. החלף את סעיף הכלי אם יש חריגות, סניף, שסתום, או נזק שטחי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סעיפי חנות מקובלים פרוסים כלי (שקועים בחיץ קרבס-Henseleit) על קרח או על 4 מעלות צלזיוס עד מוכן להרכבה בתאי myograph (בדרך כלל &lt;30 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לעלות על כלי השיט בmyograph ידי ההכנסה תומכת בלום ולהגדיל את המתח (באמצעות micropositioner על myograph) להיות זהיר, כדי לא למתוח את כלי מעל קריאת 2 עד 3 גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שכל התאים מכוסים, לשאוב חיץ מכל התאים ולמלא עם 5.0 מ&quot;ל של חיץ ולהתחיל טיימר 15 דקות כדי להתחיל את תקופת האיזון והניסוי. </li></ol> ניסוי .4 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן את כל חלקי הספינה ל1.5 שעות כדי להשיג מיל יציבמתח טינג של 1.0 גרם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את חיץ הדגירה קרבס-Henseleit כל 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך האיזון, כל הזמן להתאים את המתח בחלקי כלי דם עד 2 גרם ולאחר מכן לאפשר להירגע עד כ 0.80 גרם. נסה שלא לאפשר כלי להירגע יותר מדי (הם עשויים לשמוט את mounts). נסה להשיג מתח בסיס יציב, שבו הכלי מחזיק מתח 1 גרם ללא צורך בהתאמה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך האיזון, להכין 1.32 M תמיסה מימית של KCl כדי לשמש כנקודת התייחסות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות השלמת איזון משביע רצון, להוסיף 500 μl של פתרון M KCl 1.32 להביא לפתרון 0.12 M בפתרון 5.5 מ&quot;ל רחצה הכלי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות התוספת של 1.32 M KCl, לא להתאים את המתח באופן ידני כתגובה המקסימלי מתוספת זו משמשת להערכת כדאיות רקמות והוא יכול לשמש כדי לנרמל נתונים טיפול (לדוגמא תגובות ריכוז לgonist). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את החיץ במרווחי 15 דקות, עד המתח חזר לערך הבסיסי של 1.0 גרם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמגיעה נקודת ההתחלה, לשנות את החיץ ובו זמנית להתחיל טיימר 1 דקות. האם זה עבור כל התאים בו זמנית, כדי למנוע מדהים של זמני הפעלה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבולת הסטנדרטי שיש להוסיף ולהכין תגובה לקאמרית 1 במהלך הספירה לאחור 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף את הסטנדרטים ב25 aliquots μl לכל תא כתכתיבי ניסוי (זה שומר על הטיפול בהמשך 0.5% מהנפח הכולל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר התקן האחרון נוסף, להתחיל טיימר 9 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של הדגירה סטנדרטית 9 דקות, להסיר את החיץ המכיל טיפול מהתאים ולהוסיף 5.0 מ&quot;ל של חיץ טרי, ולהתחיל את הטיימר 2.5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 4.4.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של שטיפת 2.5 דקות השניה, לשאוב התאים ולהוסיף למאגר טרי, ולהתחיל טיימר 1 דקות לספירה לאחור לתחילת seconבנוסף סטנדרטי ד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמשיך את המעגל הזה לכל תוספות סטנדרטי של היום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך התוספת סטנדרטית הסופית ודגירת 9 דקות לאחר מכן להכין את תרכובת התייחסות M KCl 1.32 לסוף בנוסף מינון התייחסות ריצה של 500 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות מרווח 1 דקות לאחר תוספת הטיפול הסופית, להוסיף KCl ולהתחיל טיימר 9 דקות. הערה: בנוסף KCl הוא לאשר כדאיות רקמות בסיומו של הניסוי ושימושי אם מתן טיפול שגורם לתגובה זניחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסיומו של הדגירה מתחם התייחסות 9 דקות הסופיות, ואקום או להסיר חיץ מכל התאים. אל תוסיף חיץ טרי. מסקנת הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את קובץ תרשים, להסיר חלקים של כלי דם ולהיפטר כראוי, ולעקוב אחר הפרוטוקול הנקי עד (המסופק על ידי יצרן ויכול להיות ספציפי במעבדה) לציוד myograph. </li></ol>

<ol><li>Matheson, P. J., Wilson, M. A., Garrison, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+intestinal+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+surgical+research%22%5BJournal%5D)">Regulation of intestinal blood flow.</a> The Journal of surgical research. 93, 182-196 (2000).</li>
<li>Dobson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+flow+and+absorption+from+the+rumen%5BTitle%5D)+AND+%22Quarterly+journal+of+experimental+physiology%22%5BJournal%5D)">Blood flow and absorption from the rumen.</a> Quarterly journal of experimental physiology. 69, 599-606 (1984).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li>
<li>Nielsen-Kudsk, F., Poulsen, B., Ryom, C., Nielsen-Kudsk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+strain-gauge+myograph+for+isometric+measurements+of+tension+in+isolated+small+blood+vessels+and+other+muscle+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pharmacological%22%5BJournal%5D)">A strain-gauge myograph for isometric measurements of tension in isolated small blood vessels and other muscle preparations.</a> Journal of pharmacological. 16, 215-225 (1986).</li>
<li>Mulvany, M. J., Aalkjaer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+small+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">Structure and function of small arteries.</a> Physiological reviews. 70, 921-961 (1990).</li>
<li>Klotz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+vasoconstrictive+potential+of+D-lysergic+acid+using+an+isolated+bovine+lateral+saphenous+vein+bioassay%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+animal+science%22%5BJournal%5D)">Assessment of vasoconstrictive potential of D-lysergic acid using an isolated bovine lateral saphenous vein bioassay.</a> Journal of animal science. 84, 3167-3175 (2006).</li>
<li>Klotz, J. L., Bush, L. P., Strickland, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vascular+contractility+bioassay+using+bovine+right+ruminal+artery+and+vein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+animal+science%22%5BJournal%5D)">A vascular contractility bioassay using bovine right ruminal artery and vein.</a> Journal of animal science. 89, 1944-1951 (2011).</li>
<li>Westendorf, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+ruminal+and+physiological+responses+to+endophyte-infected+tall+fescue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dairy+science%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo ruminal and physiological responses to endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of dairy science. 76, 555-563 (1993).</li>
<li>Strickland, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Board-invited+review%3A+St.+Anthony%26%2334%3Bs+Fire+in+livestock%3A+causes%2C+mechanisms%2C+and+potential+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+animal+science%22%5BJournal%5D)">Board-invited review: St. Anthony&#34;s Fire in livestock: causes, mechanisms, and potential solutions.</a> Journal of animal science. 89, 1603-1626 (2011).</li>
<li>Eckert, H., Kiechel, J. R., Rosenthaler, J., Schmidt, R., Schreier, E. Ch. 11. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEckert%2C+H+%22Ergot+Alkaloids+and+Related+Compounds%22">Ergot Alkaloids and Related Compounds</a>. B, B. erde, HO, S. child , Springer-Verlag. (1978).</li>
<li>Rhodes, M. T., Paterson, J. A., Kerley, M. S., Garner, H. E., Laughlin, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+blood+flow+to+peripheral+and+core+body+tissues+in+sheep+and+cattle+induced+by+endophyte-infected+tall+fescue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+animal+science%22%5BJournal%5D)">Reduced blood flow to peripheral and core body tissues in sheep and cattle induced by endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of animal science. 69, 2033-2043 (1991).</li>
<li>Foote, A. P., Harmon, D. L., Strickland, J. R., Bush, L. P., Klotz, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ergot+alkaloids+on+contractility+of+bovine+right+ruminal+artery+and+vein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+animal+science%22%5BJournal%5D)">Effect of ergot alkaloids on contractility of bovine right ruminal artery and vein.</a> Journal of animal science. 89, 2944-2949 (2011).</li>
<li>Foote, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ergot+alkaloids+from+endophyte-infected+tall+fescue+decrease+reticuloruminal+epithelial+blood+flow+and+volatile+fatty+acid+absorption+from+the+washed+reticulorumen%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+animal+science%22%5BJournal%5D)">Ergot alkaloids from endophyte-infected tall fescue decrease reticuloruminal epithelial blood flow and volatile fatty acid absorption from the washed reticulorumen.</a> Journal of animal science. 91, 5366-5378 (2013).</li>
<li>Hocking, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrimental+effects+of+mechanical+stretch+on+smooth+muscle+function+in+saphenous+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+vascular+surgery%22%5BJournal%5D)">Detrimental effects of mechanical stretch on smooth muscle function in saphenous veins.</a> Journal of vascular surgery. 53, 454-460 (2011).</li>
<li>Smith, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+intestinal+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+veterinary+practice%22%5BJournal%5D)">Bovine intestinal surgery.</a> Modern veterinary practice. 65, 705-710 (1984).</li>
<li>Budras, K. D., Habel, R. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudras%2C+KD+%22Bovine+Anatomy+An+Illustrated+Text%22">Bovine Anatomy An Illustrated Text</a>. , first, Schlütersche GmbH and Co. KG, Verlag and Druckerei. (2003).</li>
<li>Klotz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonism+of+lateral+saphenous+vein+serotonin+receptors+from+steers+grazing+endophyte-free%2C+wild-type%2C+or+novel+endophyte-infected+tall+fescue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+animal+science%22%5BJournal%5D)">Antagonism of lateral saphenous vein serotonin receptors from steers grazing endophyte-free, wild-type, or novel endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of animal science. 91, 4492-4500 (2013).</li>
<li>Egert, A. M., Kim, D. H., Schrick, F. N., Harmon, D. L., Klotz, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+exposure+to+ergot+alkaloids+decreases+contractility+of+bovine+mesenteric+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+animal+science%22%5BJournal%5D)">Dietary exposure to ergot alkaloids decreases contractility of bovine mesenteric vasculature.</a> Journal of animal science. 92, 1768-1779 (2014).</li>
</ol>

אזכור של שם המסחרי, מוצר קנייני, או ציוד שצוין אינו מהווה ערובה או אחריות על ידי משרד החקלאות ואינו מעיד על אישור להרחקה של מוצרים אחרים שעשויה להיות זמין.

האתגר הראשוני בפיתוח של המבדק זה היה הקמתו של אתר אוסף הדיר לכלי דם mesenteric. עקביות אתר מדגם היא קריטית, כחלק מהפונקציות של שינוי המעי הדק במהלך ההתקדמות מהמעי הריק דרך המעי וכתוצאה מכך לפדר להשתנות בדפוס דומה. סניפי ileal של עורק ווריד mesenteric היו הכי מזוהה באמצעות ציוני דרך אנטומיים בקלות. על ידי איתור cecum והבא של פי ileocecal לתחנה הסופי שלה בצד השמאל של לפדר, זה ליד הסיום של עורק mesenteric גולגולת 15. האזור של לפדר ארוך יותר (המכונה מקורבות) ואת הסיומת של ק...

שינויים בזרימת דם למיטת רקמה יכולים להיות השפעה גדולה על תפקוד איבר. תפקידו עיקרי של המעי הדק הוא מזין קליטה. זרימת דם העורקי למשטח הקליטה של המעי נדרש לעליית קליטה וזרימת דם מזינה כדי לסייע בקליטת חומרים מזינים כמו digesta נע לאורך המשטח 1. ירידה בזרימת דם יכולה לגרום לירידה בספיגת חומרי מזון בשל ירידה בשיפוע transepithelial 2. בנוסף לחומרים מזינים, המעי הדק יכול גם להיות חשוף למטבוליטים משניים, תרופות, או רעלים שיפעילו השפעה על זרימת דם מקומי בלפדר. במקרה של החיים מעלה הגירה, יכולות להיות משוחררות תרכובות מfeedstuff (למשל, חומרים מזינים כגון חומצות אמינו, או רעלים כגון אלקלואידים ergot) באמצעות תהליכי תסיסה של המעי הקדמי. אם תרכובות אלו לשרוד את חילוף החומרים של חיידקים תסיסה בכרס, הם זמינים כעת לקליטהאו אינטראקציה כשהם נוסעים דרך מערכת העיכול של בעלי החיים. ישנן מספר השיטות שונות זמין כדי למדוד את זרימת דם בגוף חי (למשל, אולטראסאונד דופלר, שכינת מדידת תצרוכת דם, microspheres radiolabeled, וטכניקות מחוון דילול) שתאפשר הערכה של תרחישים ניסיוניים שונים או טיפולים. עם זאת, כדי להשיג מידע לגבי התכונות מכאניות או תרופתית של שריר חלק בכלי הדם, שיטות נותרת מוגבלות לכלי גדול עד Mulvany והלפרן 3 פרסמו מאמר המתאר את הטכניקה באמצעות חוט רכוב הכנות טבעת כלי דם בmyograph. מאז הפיתוח של טכניקה זו, שינויים ימשיכו להתבצע למערכות myograph הקשורות המאפשרות מגוון רחב של יישומים שונים להערכת מבנים צינוריים. המערכת גם הותאמה לנצל מוטות קבועות להרכבת כלי גדול יותר 4 שבו זלוףטכניקות לא רצויים. בגלל השוני בכלי ממקורות שונים אנטומיים והבחנות באותו כלי ממינים שונים של בעלי חיים, נתונים מכלי שיט והסוג של בעלי חיים לא יכול בקלות להיות אקסטרפולציה על פני כלי שונים או אותו כלי השיט בסוגים שונים של בעלי חיים 5. כתוצאה מכך, bioassays הנפרד חייב להיות מפותח ומאומתים בכל עת היבטים אלה השתנו. לאחרונה כמה bioassays פותחו עם טכנולוגיות אלה לשימוש בבקר לרוחב וריד saphenous ועורק כרס תקין ווריד 6,7. המבדק זה פותח כדי לחקור באופן ספציפי את ההשפעות שיש לי אלקלואידים ergot על כלי דם התומכים במעי הדק. נמסר כי 50-60% מאלקלואידים האכילו מופיעים בתוכן abomasal, אבל רק 5% הם התאוששו בצואת 8. סטריקלנד et al. 9 האמור בסקירה של אלקלואידים ergot, שsugg נתונים זמיןבהערכה שהמעי דקה עשויה להיות האתר החשוב ביותר לקליטת ergopeptine. אקרט et al. 10 היבטים ביולוגיים בביקורת של אלקלואידים ergot וקבע כי ברגע שהם חוצים את מחסום האפיתל, אלקלואידים ergot מועברים גם על ידי מערכת הלימפה לוריד subclavian או באמצעות וריד mesenteric ולדם פורטל. רודוס et al. 11 דיווח על ירידה בזרימת דם לתריסריון ומעי גס בפרים רב דיאטה עתירת נגוע endophyte (אלקלואיד ergot הגבוה). באמצעות המבדק עורק ווריד הכרס תקין, פוט et al. 12 הוכיחו כי אלקלואידים ergot הם vasoactive בכלי דם בכרס. פוט et al. 13 הפגינו לאחר מכן in vivo כי חשיפת כרס לתוצאות אלקלואידים ergot בזרימה דם אפיתל כרס פנימית ירד. ירידה בזרימת דם אל פני השטח הקליטה של ​​הכרס הפנימי זו בו זמנית, גרמה לירידה במזין שטף (חומצת שומן נדיפות). בהתחשב quantity של אלקלואידים ergot מעבירים למעי הדק מהמעי הקדמי; זה היה שיערו כי השפעה דומה על מערכת כלי דם של מעי דק ומזין קליטה תתרחש. הדבר זה הצריך את הפיתוח של המבדק ileal הפרוקסימלי שור עורק mesenteric ווריד.

<table><tbody><tr><td>Multi Myograph</td><td>Danish Myo Technologies</td><td>610M</td><td>A מיוגרף הוא קריטי לבדיקה ביולוגית זו, אך ישנן פלטפורמות אחרות זמינות לשימוש שיספיקו.</td></tr><tr><td>Powerlab 8/sp</td><td>ADIntruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7</td><td>ערכת</td> כיול כוח <td>גרסה 7</td><td></td></tr> טכנולוגיות <tr><td></td><td>Myo הדנית</td><td>100055</td><td>ספציפיות למיוגרפיות DMT</td></tr><tr><td>מסנן בקבוק</td><td>Nalgene</td><td>595-4520</td><td>0.22 & #956; גודל נקבוביות m; צוואר 45 מ"מ מידה</td></tr><tr><td>#5 Jewler' s מלקחיים</td><td>Miltex</td><td>555008FT</td><td>ניתן להשתמש בכל מותג של מלקחיים</td></tr><tr><td>Noyes Iris מספריים</td><td>Miltex</td><td>18-1510</td><td>ניתן להשתמש בכל מותג מספריים</td></tr><tr><td>Dissecting Scope</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000-C</td><td>כל מותג של מיקרוסקופ אור ניתוח יספיק</td></tr><tr><td>מטריצת רקמות מתכווננת</td><td>Braintree Scientific</td><td>TM C12</td><td>זה לא קריטי לבדיקה, אבל מפחית מאוד את השונות באורך מקטע לקטע ומזרז מאוד את תהליך החיתוך</td></tr><tr><td>Krebs-Hensleit Buffer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K3753-10x1L</td><td>אין צורך לקנות קרבס, זה יכול להיעשות בבית</td></tr><tr><td>סידן כלוריד מיובש</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C7902-500G</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Desipramine-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D3900-5G</td><td></td></tr><tr><td>Propranolol-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0884-1G</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>95% O2/5% CO2</td><td>Scott Gross</td><td>UN3156</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת vasoactivity במעי הדק

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

מערכות עיכול של יונקים כל הזמן נחשפות לתרכובות (רצויות ולא רצויים), כי יכולה להיות השפעה על זרימת דם ומהמערכת ש. שינויים בזרימת דם למעי דק עלולים לגרום להשפעות על פונקציות הקליטה של ​​האיבר. עניין מיוחד ברעלים שוחררו ממספוא באמצעות תהליכי תסיסה ועיכול פיתח במעלי גירה כאזור שבו אפשר לשפר את היעילות יצרנית. הווידאו הקשורים במאמר זה מתאר המבדק במבחנה פותח לתרכובות מסך לvasoactivity בחתכים מבודדים של עורק mesenteric שור והווריד באמצעות multimyograph. ברגע שכלי הדם הם רכובים וequilibrated בmyograph, המבדק עצמו יכול להיות בשימוש: ככלי מיון כדי להעריך את תגובת ההתכווצות או vasoactivity של תרכובות של עניין; לקבוע את הנוכחות של סוגי קולט ידי פרמקולוגית מיקוד קולטנים עם אגוניסט הספציפיים; לקבוע את תפקידו של קולטן עם הנוכחות של יריבים אחד או יותר; או לקבוע אינטראקציות פוטנציאליות של תרכובות של עניין עם יריבים. דרך כל זה, הנתונים נאספים בזמן אמת, רקמה שנאספו מבעלי חיים יחידים יכולה להיות חשופה למספר רב של טיפולים ניסיוניים שונים (יתרון במבחנה), ומייצגת את כלי דם בכל צד של מיטת הנימים לספק מדויק תמונה של מה שיכול להיות שזה קורה באספקת הדם מביא וefferent תמיכה המעי הדק.

כלי הדם המשמשים לייצור התוצאות כללו נאספו מ6 שוורי הולשטיין (425 קילוגרם ± 8) בתוך מרווח 3 שבוע. דוגמא לתגובה התכווצות וריד mesenteric האופייני לKCl ותוספות טיפול ההולך וגוברות בריכוז מוצגת באיור 2. סדר הגודל של תגובה ישתנה חלקם עם הגודל של כלי השיט (מתואם עם הגודל של החיה התורם), אבל גם יכולה להיות מושפע (לרעה) מטיפול לא נכון (מתיחה) של כלי במהלך איסוף וניקוי. לכן, חשוב לבחון את תגובת התכווצות משמעותית בחשיפת כלי לKCl. אם תגובה זניחה הוא ציין בשלב זה, זה לא מומלץ...

המעי הדק הוא לעתים קרובות נחשף לרעלים שיכולים להשפיע על זרימת דם ולהשפיע לרעה על מזין קליטה. שימוש בעורק multimyograph וmesenteric ווריד מבודד, תרכובות או רעלים של עניין יכול להיות מוקרן לvasoactivity.

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבודד חתכים של עורקים וורידים מזנטריים של בקר בגרף מולטימ כדי לאפשר סינון של תרכובות ניסיוניות לפעילות כלי הדם שלהן. זה מושג על ידי איסוף תחילה דגימת רקמה מזנטרית מהחיה. בשלב השני מנקים את הדגימה וחותכים את הכלים.לאחר מכן, החלקים מותקנים ומאוזנים על שתל המיו. בשלב האחרון, הכלים המבודדים נחשפים לתרכובות המעניינות. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בבדיקה ביולוגית זו של העורקים והוורידים כדי להעריך את פעילות כלי הדם של התרכובות ואת ההשפעות שיש להן על זרימת הדם בתוך כלי הדם המזנטרי של בקר.היתרון העיקרי של טכניקה זו בהשוואה לשיטות קיימות כמו מדידת זרימת דם in vivo, הוא שבעזרת טכניקה זו, רקמה מבעל חיים בודד יכולה להיחשף למספר תרכובות בו זמנית. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה בתסמונות בעלי חיים ספציפיות מאוד שעלולות לגרום להתכווצות כלי דם כגון פסקו, רעילות או ארגוטיזם, ניתן ליישם אותה גם על תרחישים אחרים שעשויים לעניין את החוקרים, כגון תרופות המפותחות או מוצרים טבעיים. בנוסף, ניתן ליישם אותו לא רק על כלי דם של בקר, אלא גם על כלי דם מכל מין אחר של יונקים.לאחר הוצאת כלי הדם מהרקמה המזנטרית, השתמש בזוג מלקחיים כדי להניח את דגימת הרקמה על משטח חיתוך ולהטביע אותה חלקית בתרנגולות קרות כקרח. לאחר מכן באמצעות תכשיטן מספר חמש, מלקחיים ורעש, מספריים של איריס מנתחים בזהירות את ה

isolating-using-sections-bovine-mesenteric-artery-vein-as-bioassay-to

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הרקמות מבוגר vascularized יונקים כי חסרה אנגיוגנזה פיזיולוגי שלא נחשף התערבות כירורגית משמש המחקר: (i) ייזום ופיתוח של אנגיוגנזה הבאים הממשל intraperitoneal של סוכני הבדיקה; (ii) שינוי של אנגיוגנזה הבאים מערכתית של הממשל נבחרת סוכני הבדיקה.

עכברוש mesentery Assay אנגיוגנזה

שיטה myography אוטומטית עבור מדידות כוח בעורקים mesenteric מבודד מתואר. היא מעסיקה Mulvany-Wire הלפרן כפול אוטומטי Myograph 510A לקבוע התגובות phenylephrine וסידן תאיים. השיטה מאפשרת קביעת עקבית של תגובות איזומטרי כדי אגוניסטים בכלי קטן של קטרים ​​של 6-30 מיקרומטר, באופן עצמאי.

התכווצות העורקים mesenteric ללימודי הרפיה באמצעות Myography בנקאית אוטומטית

לשעבר vivo הכנה מבודדת Microvessel השלד לחקירות תגובתיות כלי דם

מדידות של Kv7 פעילות ערוץ (KCNQ) אשלגן בmyocytes העורק המבודד (באמצעות תיקון לצבוט טכניקות אלקטרו) במקביל למדידות של תגובות הכווץ / מרחיב (באמצעות myography לחץ) יכולות לחשוף פרטים חשובים על התפקידים של Kv7 ערוצים בפיזיולוגיה של שריר חלק של כלי דם ו פרמקולוגיה.

היכרות עם פונקצית עורקי שריר חלק Kv7 אשלגן ערוץ באמצעות אלקטרופיזיולוגיה קלאמפ תיקון וMyography לחץ

אנו מציגים הכנה להדמית מניפולציה סידן איתות בהאנדותל כלי הדם מקומי, ללא פגע. צינורות אנדותל מבודדים טריים מעורקי התנגדות עכבר אספקת שרירים שלד לשמור במורפולוגיה vivo ואיתות דינמית בתוך ובין תאי שכנים. ניתן להכין צינורות אנדותל מmicrovessels של רקמות ואיברים אחרים.

בידוד של כלי הדם האנדותל צינורות מעורקי עכבר התנגדות

myography לחץ משמש כדי להעריך vasoactivity של עורקים קטנים המתפתחים התכווצות מתמשכת כאשר לחץ. כתב יד זה מספק פרוטוקול מפורט להעריך במגזרים בודדים של עורקי mesenteric קטנים מחולדות, vasoactivity ואת ההשפעה של לחץ intraluminal על קוטר כלי דם.

הערכת myogenic תגובה וVasoactivity בעורקי ההתנגדות mesenteric שימוש Myography לחץ

טכניקת לנדיס המותאמת מאפשרת מדידה זוגית של המוליכות ההידראולית של מיקרו-כלים בודדים במזנטריה של חולדות רגילות וחולדות מהונדסות גנטית בתנאי בקרה ובדיקה באמצעות טכניקות מיקרו-פרפוזיה. הוא מספק שיטה נוחה להערכת מנגנונים המווסתים את חדירות המיקרו-כלי דם וחילופי כלי דם בתנאים פיזיולוגיים.

Microperfusion טכניקה לחקירת הסדרת כלי דם קטן חדירות בחולדה לפדר

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בתכשירי רקמת מעיים שנכרתו או "שקי מעיים" כמודל ex vivo של תפקוד מחסום המעי. מודל זה עשוי לשמש להערכת שלמות מחסום האפיתל ושכבת הג'ל הרירית באתרי מעיים ספציפיים במודלים של מחלות עיכול בבעלי חיים.

Sacs Ex Vivo המעיים להעריך חדירות ריריות מודלים של מחלות במערכת העיכול

כתב יד זה מתאר במבחנה מיקרוסקופ וידאו פרוטוקולים להערכת הפונקציה כלי הדם בעכברוש מוחי התנגדות העורקים. כתב היד מתאר גם טכניקות להערכת צפיפות microvessel עם fluorescently שכותרתו זלוף לקטין ורקמות באמצעות לייזר Flowmetry דופלר.

הערכה של מנגנוני הבקרה וסקולרית ניצול מיקרוסקופ וידאו מבודד התנגדות העורקים של חולדות

הפרוטוקול מתאר את השימוש במיגרפיה תיל כדי להעריך את המתח האיזוגרפי של העורקים המסריים מבודדים מעכברים, עם שיקול מיוחד של האפנון על ידי גורמים שפורסמו מתאי האנדותל ורקמות השומן הפריסקולרית.

הערכה של תגובתיות וסקולרית באמצעות העורקים המבודדים הבודדים באמצעות התמקדות באפנון על ידי פריסקולרית של הרקמות

אנו מציגים שיטה לבידוד צינורות מעיים של חולדות ולהערכת ההשפעה של תרופות על המתח, התדירות והמשרעת שלהן במבחנה. שיטה זו מציעה גישה רבת ערך לחוקרים החוקרים את צינורות המעי.

שימוש במערכת זילוח רקמות חוץ גופית כדי לזהות את הפעילות התפקודית של צינורות מעי מבודדים בזמן אמת

למד בידוד סעיפי עורקי ווריד mesenteric משור לבדיקת פעילות וסקולרית של תרכובות ניסיוניות. שיטה זו מאפשרת הערכת זרימת דם וספיגת חומרים במעי הדק.

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

גלה סרטונים נוספים