Name: מערכת Swimmeret של סרטן הנהרות: מדריך מעשי לDissection של חוט העצב ותאי הקלטות של התבנית מוטורית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 45 s
Description: למדו את שיטת הפריסה של חוט העצב הבטני בסרטן הנהרות לצורך הקלטות אלקטרופיזיולוגיות של תאי עצב מוטוריים במערכת Swimmeret. טכניקה זו מאפשרת חקר תבניות תנועה ותיאום גנרטורים מרכזיים במערכת העצבים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים Jos Burgert על עזרה עם כמה מהדמויות. אנו מודים לאינגו Selbach (והקבוצה &quot;Edelkrebsprojekt NRW&quot;) על מאמציו לספק את המעבדה עם חיות ניסוי. אנו מודים לאנה ג שניידר להגהת גרסאות הראשונות של כתב היד. מחקר זה נתמך על ידי SM אמי Noether DFG מענק 206 / 3-1 ומענק הפעלה של אוניברסיטת קלן לסגל נשי.

<ol><li>Hughes, G. M., Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Co-Ordination+of+Swimmeret+Movements+in+the+Crayfish%2C+Procambarus-Clarkii+%28Girard%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">The Co-Ordination of Swimmeret Movements in the Crayfish, Procambarus-Clarkii (Girard).</a> J Exp Biol. 37 (4), 657-670 (1960).</li>
<li>Mulloney, B., Smarandache, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fifty+Years+of+CPGs%3A+Two+Neuroethological+Papers+that+Shaped+the+Course+of+Neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fifty Years of CPGs: Two Neuroethological Papers that Shaped the Course of Neuroscience.</a> Front Behav Neurosci. 4, 45(2010).</li>
<li>Murchison, D., Chrachri, A., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Separate+Local+Pattern-Generating+Circuit+Controls+the+Movements+of+Each+Swimmeret+in+Crayfish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">A Separate Local Pattern-Generating Circuit Controls the Movements of Each Swimmeret in Crayfish.</a> J Neurophys. 70 (6), 2620-2631 (1993).</li>
<li>Mulloney, B., Hall, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+organization+of+crayfish+abdominal+ganglia.+III.+Swimmeret+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Functional organization of crayfish abdominal ganglia. III. Swimmeret motor neurons.</a> J Comp Neurol. 419 (2), 233-243 (2000).</li>
<li>Davis, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lobster+Righting+Responses+and+Their+Neural+Control%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+Ser+B-Bio%22%5BJournal%5D)">Lobster Righting Responses and Their Neural Control.</a> Proc R Soc Ser B-Bio. 170 (1021), 435-456 (1968).</li>
<li>Mulloney, B., Smarandache-Wellmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobiology+of+the+crustacean+swimmeret+system%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neurobiology of the crustacean swimmeret system.</a> Prog Neurobiol. 96 (2), 242-267 (2012).</li>
<li>Huxley, T. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHuxley%2C+TH+%22The+crayfish%3A+An+introduction+to+the+study+of+zoology%22">The crayfish: An introduction to the study of zoology</a>. , MIT Press. Cambridge, MA. (1980).</li>
<li>Smarandache-Wellmann, C., Weller, C., Wright, T. M., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five+types+of+nonspiking+interneurons+in+local+pattern-generating+circuits+of+the+crayfish+swimmeret+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Five types of nonspiking interneurons in local pattern-generating circuits of the crayfish swimmeret system.</a> J Neurophys. 110 (2), 344-357 (2013).</li>
<li>Skinner, F. K., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intersegmental+coordination+of+limb+movements+during+locomotion%3A+mathematical+models+predict+circuits+that+drive+swimmeret+beating%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Intersegmental coordination of limb movements during locomotion: mathematical models predict circuits that drive swimmeret beating.</a> J Neurosci. 18 (10), 3831-3842 (1998).</li>
<li>Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((During+fictive+locomotion%2C+graded+synaptic+currents+drive+bursts+of+impulses+in+swimmeret+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">During fictive locomotion, graded synaptic currents drive bursts of impulses in swimmeret motor neurons.</a> J Neurosci. 23 (13), 5953-5962 (2003).</li>
<li>Smarandache-Wellmann, C., Grätsch, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+coordination+in+distributed+neural+circuits%3A+Encoding+coordinating+information%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of coordination in distributed neural circuits: Encoding coordinating information.</a> J Neurosci. 34 (16), 5627-5639 (2014).</li>
<li>Mulloney, B., Hall, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+commissural+interneurons+integrate+information+from+intersegmental+coordinating+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Local commissural interneurons integrate information from intersegmental coordinating interneurons.</a> J Comp Neurol. 466 (3), 366-376 (2003).</li>
<li>Mulloney, B., Harness, P. I., Hall, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursts+of+information%3A+Coordinating+interneurons+encode+multiple+parameters+of+a+periodic+motor+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Bursts of information: Coordinating interneurons encode multiple parameters of a periodic motor pattern.</a> J Neurophys. 95 (2), 850-861 (2006).</li>
<li>Smarandache, C., Hall, W. M., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+Rhythmic+Motor+Activity+by+Gradients+of+Synaptic+Strength+in+a+Neural+Circuit+That+Couples+Modular+Neural+Oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Coordination of Rhythmic Motor Activity by Gradients of Synaptic Strength in a Neural Circuit That Couples Modular Neural Oscillators.</a> J Neurosci. 29 (29), 9351-9360 (2009).</li>
<li>Smarandache-Wellmann, C., Weller, C., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Coordination+in+Distributed+Neural+Circuits%3A+Decoding+and+Integration+of+Coordinating+Information%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Coordination in Distributed Neural Circuits: Decoding and Integration of Coordinating Information.</a> J Neurosci. 34 (3), 793-803 (2014).</li>
<li>Chrachri, A., Neil, D., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-Dependent+Responses+of+2+Motor+Systems+in+the+Crayfish%2C+Pacifastacus+leniusculus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">State-Dependent Responses of 2 Motor Systems in the Crayfish, Pacifastacus leniusculus.</a> J Comp Physiol A. 175 (3), 371-380 (1994).</li>
<li>Chrachri, A., Neil, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+and+Synchronization+between+2+Abdominal+Motor+Systems+in+Crayfish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Interaction and Synchronization between 2 Abdominal Motor Systems in Crayfish.</a> J Neurophys. 69 (5), 1373-1383 (1993).</li>
<li>Skinner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Structure+of+the+4th+Abdominal-Ganglion+of+the+Crayfish%2C+Procambarus-Clarki+%28Girard%29+II.+Synaptic+Neuropils%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The Structure of the 4th Abdominal-Ganglion of the Crayfish, Procambarus-Clarki (Girard) II. Synaptic Neuropils.</a> J Comp Neurol. 234 (2), 182-191 (1985).</li>
<li>Skinner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Structure+of+the+4th+Abdominal-Ganglion+of+the+Crayfish%2C+Procambarus-Clarki+%28Girard%29+I.+Tracts+in+the+Ganglionic+Core%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The Structure of the 4th Abdominal-Ganglion of the Crayfish, Procambarus-Clarki (Girard) I. Tracts in the Ganglionic Core.</a> J Comp Neurol. 234 (2), 168-181 (1985).</li>
<li>Mulloney, B., Tschuluun, N., Hall, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architectonics+of+crayfish+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Techniq%22%5BJournal%5D)">Architectonics of crayfish ganglia.</a> Microsc Res Techniq. 60 (3), 253-265 (2003).</li>
<li>Braun, G., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+modulation+of+the+swimmeret+motor+system+in+crayfish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Cholinergic modulation of the swimmeret motor system in crayfish.</a> J Neurophys. 70 (6), 2391-2398 (1993).</li>
<li>Davis, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motoneuron+Morphology+and+Synaptic+Contacts+-+Determination+by+Intracellular+Dye+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motoneuron Morphology and Synaptic Contacts - Determination by Intracellular Dye Injection.</a> Science. 168 (3937), 1358-1360 (1970).</li>
<li>Altman, J. S., Tyrer, N. M. Filling Selected Neurons with Cobalt through Cut Axons. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAltman%2C+JS+%22Neuroanatomical+Techniques%22">Neuroanatomical Techniques</a>. Strausfeld, N. J., Miller, T. A. , Springer. New York, NY. 373-402 (1980).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

<html> האנטומיה של סרטנים וגרעיני הבטן שלהם כבר תיארו בעבר 5, 18, ​​19, 20, ומומלץ להכיר אותם לפני הנתיחה על מנת להימנע מחיתוך של עצבים חשובים. זה קריטי כדי לשמור על ההכנה בטמפרטורות מתחת 23 ° C כדי למנוע השפלה של חוט העצב הבודד. זו יכולה להיות מושגת בקלות על ידי החלפה של פתרון הים כל דקות 20-30 עם מי מלח סרטנים קר. בנסיבות אלה השרשרת של הגרעינים יכולה לשמש לניסויי אלקטרו במשך שעה עד 12. <p class="j...

Swimmerets של הסרטנים לשרת פונקציה בשליטה על יציבה והכה בקצב שבו החיות לשחות קדימה, לאוורר המחילות או הנקבות שלהם לאוורר את ביציהן 5, 6. Swimmerets של סרטני האות, leniusculus Pacifastacus, מתרחש בזוגות משניים לחמישית קטע בטן, עם איבר אחד בכל צד של 7 הבטן. מערכת העצבים המרכזית מייצרת בלהג שלו הקצבי המנוע אשר מניע את תנועת swimmeret בחיה שלמה, כמו גם בהכנת חוט עצב בודדת. כאשר אין משוב תחושתי או יורדים קלט נוכחי דפוס מנוע הקצבי מיוצר נקרא תנועה פיקטיבית 1, 2. במערכת swimmeret דפוס מנוע זה אינו שונה בכל פרמטר מהפעילות של swimmerets נמדד בבעלי החיים ללא פגע. התנועה של כל swimmeret היא מונעת על ידי microcircuit שנמצא ובמוגבל לג אחדorresponding hemiganglion 1 -. 3 בכל microcircuit יש גרעין דפוס יצירה שמורכב מחמש interneurons spiking שאינו מזוהה. הם יכולים להיות מאופיינים מבחינה תפקודית כמונעים או של שבץ כוח (IPS) או מונעי של שבץ שבות (IRS) 8. שב"ס אלה וinterneurons IRS אינם מתנדים אנדוגני, ולא הפעילות לסירוגין היא מונע על ידי עיכוב הדדי 9. בגלל interneurons אלה מעכבת את הנוירונים המוטוריים swimmeret ישירות, תנועת PS-RS לסירוגין נוצרה 10. תנועה עם זאת, לא רק דורשת הדור של פעילות, אלא גם תיאום של השבבים העצמאיים השונים. במערכת swimmeret תיאום כזה היא הוקם על ידי microcircuit התיאום אשר מבטיח כי איברים פעילים בזמנים נכונים. microcircuit זה נבנה על ידי שלושה נוירונים שזוהו בכל מגזר 11-15. פרוטוקול זה מספק עבור ההדואר הפעם הראשונה מדריך לנתיחה צעד-אחר-צעד לבודד את השרשרת של הגרעינים (T4 לA6, איור 1). אנו מראים כיצד להצמיד חוט עצב הבטן המבודד וdesheathe כל גנגליון. בהכנת מערכת עצבים מבודדת זה, תאי העצב אחראים לתנועת swimmeret מוכנים לשימוש בניסויי אלקטרו ומורפולוגי. בחלקו השני של פרוטוקול זה מדגים את התכונות העיקריות של הדפוס המוטורי swimmeret. זה כולל מדריך צעד-אחר-צעד לשיא extracellularly הפעילות של הנוירונים מוטוריים swimmeret. האקסונים של תאי עצב מוטורי RS להקרין באמצעות הסניף הקדמי של N1 עצב, בעוד האקסונים של תאי עצב מוטוריים PS להקרין באמצעות הסניף האחורי של אותו העצב (איור 1) 4. לכן הפעילות שלהם ניתן להקליט מענפים אלה עם אלקטרודות סיכת ההפרש. <img alt="דיאגרמת מבנה עצבי ואיור מתויג למחקר אנטומיה, המדגיש ענפי עצב." fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/52109/52109fig1highres.jpg" width="200" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="איור 1"> איור 1: מערכת עצבים מבודדת מגנגליון חזה 4 (T4) לגנגליון בטן 6 (A6) ותרשים סכמטי שלו T4:. גנגליון חזה 4; T5: גנגליון חזה 5; A1, A2 ... A6 הגנגליון בטן 1, הגנגליון בטן 2 ... הגנגליון בטן 6; N1: עצב N1; N2: עצב N2; N3: עצב N3; PS: שבץ-כוח; RS: שבץ-שיבה. קיצורים כיוונית: = קדמי; P = אחורי. הליך זה לנתיחה וטכניקת אלקטרו הפגינה נוחים לסטודנטים לתואר ראשון ועשוי להשלים קורסים מעשיים סטודנט בפיזיולוגיה. השרשרת בודדת של הגרעינים נעשתה שימוש במספר הניסויים כדי ללמוד לתפקד במערכת עצבים, תיאום, או אפנון של שבבי swimmeret 6, כמו גם שליטה עצבית של התנהגות מסתגלת בתנועה 16, 17. מערכת swimmeret הסרטנים וכך מספקת כמות עצומה הוראה או לא מענייניםגשם הזדמנויות שכל להתחיל עם דיסקציה של חוט עצב הגחון של סרטנים והקלטה תאית של הדפוס המוטורי הפיקטיבי.

<table><tbody><tr><td>מגבר חוץ-תאי 4 ערוצים: MA 102&nbsp;</td><td>מגבר</td><td>אלקטרוני, זואולוגיה, אוניברסיטה&auml; t zu K&ouml; ln, גרמניה</td><td></td></tr><tr><td>air-table</td><td></td><td>Technical Manufacturing Corporation (TMC) יחידה של AMETEK Ultra Precision Technologies, פיבודי, MA, ארה"ב</td><td>63-534</td></tr><tr><td>Axon Digidata 1440A</td><td>Digitizer</td><td>Axon Instruments, עיצוב התקנים מולקולריים, יוניון סיטי, קליפורניה</td><td>DD1440A</td></tr><tr><td>דלי גדול&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קלמפקס & Clampfit</td><td>pClamp 10, תוכנת הקלטה וניתוח</td><td>עיצוב מכשירים מולקולריים, יוניון סיטי, קליפורניה</td><td>pClamps 10</td></tr><tr><td>מקור מנורה קרה</td> סטנדרטי <td>עם מדריך אור גמיש (צרור סיבים אופטיים)&nbsp;</td><td>מיקרוסקופים של Euromex הולנד, ארנהם, BD</td><td>LE.5211 & מחשב וצג LE.5235</td></tr> מצויד במיכל <tr><td></td><td>תוכנת</td><td></td><td></td>הקלטה</tr><tr><td>ופיפטה לפסולת נוזלית&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרטני מלח&nbsp;</td><td>מכיל (במ"מ): 5.4 KCl, 2.6 MgCl2, 13.5 CaCl2 ו-195 NaCl, חוצץ עם בסיס Tris 10 מ"מ וחומצה מאלית 4.7 מ"מ; מאוורר למשך 3 שעות. התאם ב-pH של 7.4.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דקסטרן, טקסס אדום (3000 מגה-וואט, ליזין ניתן לתיקון</td>)<td>צבע פלורסנט, ליזין ניתן לתיקון</td><td>Life Technologies GmbH, דרמשטדט, גרמניה</td><td>D3328</td></tr><tr><td>צלחת דיסקציה&nbsp;</td><td>(אורך x רוחב x גובה) 15x7x5 ס"מ; מצופה</td><td></td><td></td></tr> במלקחיים שחורים <tr><td>לקיבוע סיכות</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>פאראדיי</td></tr><tr><td>(ביולוגיה, Dumont #5)</td><td>מלקחיים: ביולוגיה, קצה 0.05 x 0.02 מ"מ, אורך 11 ס"מ, INOX</td><td>Fine Science Tools (FST), גרמניה</td><td>11252-20</td></tr><tr><td>מלקחיים (ביולוגיה, Dumont #55)</td><td>מלקחיים: ביולוגיה, קצה 0.05 x 0.02 מ"מ, אורך 11 ס"מ, INOX</td><td>Fine Science Tools (FST), גרמניה</td><td>11255-20</td></tr><tr><td>מלקחיים (אלקטרוניים, Dumont #5)</td><td>מלקחיים: סטנדרטיים, קצה 0.1 x 0.06 מ"מ, אורך 11 ס"מ, INOX</td><td>Fine Science Tools (FST), גרמניה</td><td>11251-20</td></tr><tr><td>אלקטרודה תוך-תאית</td><td>נימי זכוכית בורוסיליקט (קוטר חיצוני/פנימי: 1 מ"מ/0.5 מ"מ), עם נימה</td><td>Sutter Instruments, Novato, CA</td><td>BF100-50-10</td></tr><tr><td>Leica S8 Apo StereoZoom</td><td>מיקרוסקופ דיסקציה&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; זום 1x - 8x</td><td>לייקה, גרמניה</td><td>10446298</td></tr> מראה <tr><td>שולחן</td><td></td><td></td><td></td>מיקרוסקופ</tr><tr><td></td><td>להארת הכנה מלמטה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חימר</td><td></td><td></td><td></td>דוגמנות</tr><tr><td>אולימפוס SZ61</td><td>מיקרוסקופ דיסקציה&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; זום 0.67x - 4.5x</td><td>אולימפוס, גרמניה</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי&nbsp;</td><td>94 x 16 מ"מ; מרופד בסיליקון שקוף</td><td>Greiner bio-one, גרמניה</td><td>633180</td></tr><tr><td>מספריים טבעת</td><td>WhileCut, קצה חיתוך: חד / קהה, ישר: 13 ס"מ</td><td>Fine Science Tools (FST), גרמניה</td><td>14054-13</td></tr><tr><td>מספריים קפיציים או חלופה: Vannas מספריים קפיציים</td><td>קצה חיתוך: 8 מ"מ, קוטר קצה: 0.2 מ"מ, ישר: 10 ס"מ או קצה חיתוך 2.5 מ"מ, קוטר קצה 0.075 מ"מ, ישר: 8 ס"מ</td><td>כלי מדע עדינים (FST), גרמניה</td><td>15024-10 או&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 15000-08</td></tr><tr><td>סטודנט Vannas&nbsp; מספריים קפיציים או אלטרנטיב:&nbsp; Moria Spring מספריים</td><td>קצה חיתוך: 5 מ"מ, קוטר קצה: 0.35 מ"מ, ישר: 9 ס"מ או קצה חיתוך: 5 מ"מ, קוטר קצה 0,1 מ"מ, ישר: 8 ס"מ</td><td>כלי מדע עדינים (FST), גרמניה</td><td>91500-09 או&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 15396-00</td></tr><tr><td>sylgard</td><td>184 בסיס אלסטומר סיליקון וסוכן ריפוי; עבור סילגרד שחור הוסף פחמן פעיל</td><td>דאו קורנינג, מידלנד, מישיגן, ארה"ב</td><td></td></tr><tr><td>מזרק מלא בג'לי נפט ומצויד במחט 20 גוש עם קצה</td><td></td><td></td><td></td> מעוגל</tr></tbody></table>

מערכת swimmeret של סרטן הנהרות: מדריך מעשי לdissection של חוט העצב ותאי הקלטות של התבנית מוטורית

The Swimmeret System of Crayfish: A Practical Guide for the Dissection of the Nerve Cord and Extracellular Recordings of the Motor Pattern

כאן אנו מדגימים את הנתיחה של חוט עצב בטן הסרטנים. ההכנה כוללת את הגרעינים שעבר שני חזה (T4, T5) ושרשרת של גרעיני בטן (A1 לA6). שרשרת זו של הגרעינים כוללת את החלק של מערכת העצבים המרכזית (CNS) שמניעה את התנועה מתואמת של pleopods (swimmerets): מערכת swimmeret. זה ידוע במשך למעלה מחמישה עשורים שבסרטנים כל swimmeret הוא מונע על ידי הליבה שלה עצמאי דפוס יצירה שיוצרת פעילות לסירוגין קצבי 1-3. הנוירונים המוטוריים innervating השרירים של כל swimmeret מהווים שני אנטומית ותפקודי אוכלוסיות נפרדות 4. אחת מהן הוא אחראי לביטול (שבץ הכח, PS) של swimmeret. האחרים מניע את ההימשכות (מכה החוזרת, RS) של swimmeret. הנוירונים מוטוריים של מערכת swimmeret מסוגלים לייצר באופן ספונטני דפוס מוטורי פיקטיווי, שהוא זהה לדפוס שנרשם בvivo </em&gt; 1. מטרת דו&quot;ח זה היא להציג את מערכת מודל מעניינת ונוחה ללימוד רשתות מניבת קצב ותיאום של שבבים עצמאיים לקורסי המעבדה המעשיים של התלמידים. הפרוטוקול סיפק כולל הוראות שלב-אחר-צעד לנתיחה של חוט עצב הבטן של הסרטנים, מצמיד של השרשרת בודדת של הגרעינים, גרעיני desheathing והקלטת הדפוס המוטורי הפיקטיבי swimmerets extracellularly ממערכת העצבים המבודדים. בנוסף, אנו יכולים לפקח על הפעילות של תאי עצב swimmeret נרשמו intracellularly מהדנדריטים. כאן אנו גם מתארים בקצרה את הטכניקות הללו ולספק כמה דוגמאות. יתר על כן, המורפולוגיה של תאי עצב swimmeret ניתן להעריך באמצעות טכניקות צביעה שונות. כאן אנו מספקים דוגמאות של תאית (על ידי iontophoresis) נוירונים צבע מלא וbackfills של בריכות של הנוירונים מוטוריים swimmeret. במעבדה שלנואנו משתמשים בתכשיר זה ללמוד פונקציות בסיסיות של תנועה פיקטיבית, את ההשפעה של משוב תחושתי בפעילות של מערכת העצבים המרכזית, ותיאום בין שבבים ברמה תאית.

עם ההקלטות תאי בו-זמנית מRS וPS, הנוירונים מוטוריים של גנגליון אחד, הפעילות לסירוגין של בריכות הנוירון מוטורי אלה, יכול להיות במעקב (איור 18), המייצגת את דפוס התנועה הפיקטיבי. <img alt="ניתוח דחפים עצביים, תרשים עם אותות מסומנים RS, PS; מערך ניסיוני וצורות גל." src="/files/ftp_upload/52109/52109fig18highres.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="איור 18"> איור 18: סכמטי של גנ...

כאן אנו מתארים את דיסקציה של חוט העצב הבטני של הסרטנים. אנו גם מדגימים טכניקה אלקטרופיזיולוגית לתיעוד תנועה פיקטיבית מנוירונים מוטוריים של שחייה.

מערכת Swimmeret של סרטן הנהרות: מדריך מעשי לDissection של חוט העצב ותאי הקלטות של התבנית מוטורית

Here we demonstrate the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. The preparation comprises the last two thoracic ganglia (T4, T5) and the chain of ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לנתח את חוט העצב הבטני מהסרטנים על מנת להשתמש בו במחקרים אלקטרופיזיולוגיים. זה מושג על ידי הרדמה ראשונה של הסרטנים. לאחר מכן, מתבצעת דיסקציה גסה כדי לבודד את צלחת הגחון של הסרטנים.לאחר מכן מבוצעת דיסקציה עדינה כדי לבודד לחלוטין את מערכת העצבים המרכזית מגרעיני הראיה לגרעיני הבטן. שש. לבסוף, מעטפת הגנגליון מוסרת מכל הגרעינים כדי להקל על ניסויים אלקטרופיזיולוגיים.בסופו של דבר, שרשרת גרעיני הבטן משמשת להקלטות נוספות או תוך-תאיות. לחקור קואורדינציה של מחוללי דפוסים מרכזיים או לחקור את המורפולוגיה וההקשר הסינפטי של נוירונים מזוהים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום מדעי המוח, כגון מתן התנסות מעשית בתפקוד רשת העצבים כדי להיות מסוגל לתעד תנועת FLA במערכת העצבים המבודדת, או לאפיין את המורפולוגיה של גרעיני הבטן או של נוירונים ספציפיים.אם כי שיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי מערכת קצב השחייה של סרטנים. ניתן ליישם אותו גם על מערכות אחרות כגון רשת עצבית המניעה את התנהגות היפוך הזנב בסרטנים עבודה עם הסרטן פסיפי Stacia Linea Guus. לאחר הרדמת בעל חיים על פי פרוטוקול הטקסט, החזיקו את צד הגחון כלפי מעלה והשתמשו במספריים חזקים כדי לחתוך את שני הטפרים בבסיסם ליד בית החזה.לאחר מכן הסר את תרמילי האירו השמאלי והימני. הניחו את הצד הגחוני של החיה כלפי מעלה בכלי חיתוך מרופד בזרוע שחורה לפני השימוש במי מלח קרים כדי לחלחל דרך פתח הטופר. לאחר מכן, השתמש במספריים חזקים כדי לבצע חתך רוחבי יחיד ממש אחורי לעיני הסרטן כדי לערוף את ראשו.לאחר מכן הסר את כל רגלי ההליכה ליד מפרקי הבסיס כדי לבודד את הבטן יחד עם קטעי בית החזה האחרונים משאר בית החזה. הכנס את קצה המספריים לפתח רגל ההליכה השנייה וחתוך לצד הנגדי. לאחר הרחבת החתך לשני הצדדים דרך בית החזה וחשיפת חלק מהאיברים הפנימיים כמתואר בפרוטוקול הטקסט, הסר את החלק הקדמי של בית החזה.כעת הסר את האיברים הפנימיים ושטוף את החיה במי מלח קרים. המשך את הדיסקציה עם חתך במיקום רוחבי מקסימלי בין הלומון לחולדות השחיין לכל אורך צלחת החזה. בצע את אותו חתך בצד השני.הניחו את בטן הסרטן כלפי מעלה בצלחת הדיסקציה. השתמש בסיכות חרקים כדי לקבע את הדגימה מאחור בטלסון ומקדימה בשרידי הקרבאס. ממלאים את המנה במי מלח סרטנים כך שתכסה את הדגימה.השתמש במלקחיים גסים ביד שמאל כדי לתפוס דרך פתח רגל הליכה ולמשוך את הדגימה פתוחה. זהה את שני גדילי השריר המכופפים הגדולים של הגב. תקן אותם וחתוך את בסיסי הגחון שלהם כמו גם את עורק החזה.לחשוף את גרעיני הבטן הראשונים A אחד ואת העצבים הקשורים N אחד N שתיים. עכשיו עוברים לקטע הבטן השני. הסר את הבסיס של גדילי השרירים קרוב לבסיס הגחון.גנגליון הבטן A 2 נראה כעת עם העצבים הקשורים N one, N 2 ו-N 3. חצו את העצבים N שלוש במיקום המרוחק ביותר מחוט העצב. חזור על שלבים אלה עבור שלושת מקטעי הבטן הבאים עם גרעיני הבטן.שלוש עד חמש. כשמגיעים לגנגליון הבטן, שש. חותכים את לוחית החזה האחורית לעצבים של שש.שמור את החלק הגחוני והצמד אותו כלפי מטה. צד הגב כלפי מעלה בצלחת מלאה במי מלח מתחת למיקרוסקופ. השתמש במלקחיים כדי להסיר את החלקים הקדמיים ביותר של ירכתי בית החזה של הצפלון.ואז חותכים את השרירים בין מבני השלד החיצוניים הנותרים. לאחר הרמה בזהירות של הקצה הקדמי של חוט העצב הגחוני, חתוך את עצבי בית החזה לרוחב. התמקד באחד וחתוך את העצבים N אחד ו-N שניים של אחד באורך מקסימלי של סנטימטר אחד כדי להצמיד אותם החוצה.לאחר מכן, עברו ל-A 2 וזהו את העצבים N one, N 2 ו-N 3 של קטע זה. העצבים באחד מגרעיני הבטן, שניים עד חמש. שוכנים בין שני עור החזה בהתפתחויות בכל קטע ומכוסים בשרירים.לאחר מכן החל מהשפה הצדדית של הבטן, בצע חתך אחד לאורך קיפול הציפורן החזה האחורי, והמשך לכיוון קו האמצע לאחר חשיפת N אחד על פי פרוטוקול הטקסט. במידת הצורך, חתוך את העצב בצורה דיסטלית ככל האפשר. המשך לצד הנגדי והתחל לבודד את העצב N אחד מקו האמצע ליד הגנגליון והתקדם לכיוון השפה הצדדית על ידי חיתוך לאורך עטיפת הציפורן האחורית של החזה.עכשיו חתכו את העצבים N שניים של הגנגליון הזה לאורך מתאים להצמדה. לאחר מכן חזור על השלבים המוצגים עבור גרעיני הבטן. שתיים לשלוש עד חמש רחוק ככל האפשר.לחתוך את העצבים של גנגליון שש. השתמש במלקחיים כדי לתפוס עצבים מרובים של שש כדי להרים את הגנגליון ולהתחיל לבודד את שרשרת הגרעינים מצלחת החזה. לאחר בידוד מוחלט של חוט העצב, העבירו את שרשרת הגרעינים לצלחת פטרי מרופדת במגן אדן שקוף וממולאת במי מלח באמצעות סיכות קטנות שנחתכו מחוט נירוסטה תוך הפעלת מגע מתיחה עדין.הצמד את שרשרת הגרעינים בקו ישר כשחוט העצב מסודר בצד הגב כלפי מעלה. שמור רק את שני גרעיני בית החזה האחרונים והצמד את עצבי בית החזה לצד. הצמד את העצבים של אחד בזווית של 90 מעלות ביחס לחוט העצב.לאחר מכן המשך ל-2 והצמד את העצבים N 2 בזווית של 35 עד 45 מעלות ביחס לחוט העצב. לאחר שהעצבים N one מופרדים ומוצמדים על פי פרוטוקול הטקסט, הצמד את הענף הקדמי של העצב N אחד בזווית של 90 מעלות לחוט העצב. לאחר מכן הצמד את הענף האחורי של עצב N אחד בין הענף הקדמי N אחד לעצב N שתיים.מכיוון שכל גרעיני הבטן צריכים להיות עטופים, השתמש במספריים קפיציים עדינים כדי לבצע חתך רוחבי קטן דרך נדן הגנגליון האחורי לגנגליון ובין העצבים N שתיים ו-N שלוש. חותכים לרוחב הנדן מעל החיבור. לאחר מכן המשיכו לחתוך אותו לאורך הגבולות הצדדיים של הגנגליון לפני הסרת הנדן.במידת הצורך, השתמש במלקחיים עדינים כדי להרים את הנדן כדי לבצע הקלטות חוץ-תאיות. לאחר הגדרת הכלים והריאגנטים המפורטים בפרוטוקול הטקסט, הנח את שרשרת הגרעינים על שולחן המיקרוסקופ והאיר מלמטה. הכנס את אלקטרודת ההקלטה למגן הסיל קרוב לעצב המטרה ואלקטרודת הייחוס במיקום קרוב אך לרוחב הגרעין.לאחר מכן כופפו את עצב המטרה סביב ההקלטה. לאחר מתיחה ואבטחת העצב, השתמש במזרק מלא בג'לי נפט ובמחט קצה מעוגל בגודל 20 כדי לבודד את עצב המטרה מתמיסת הרחצה. חזור על כך עבור כל העצבים שצריך לתעד את פעילותם.לבסוף, התחל להקליט כפי שמוצג כאן, פעילות ה-PS החוץ-תאית של נוירונים מוטוריים PS 2 עד PS 5 מתחילה בפרץ PS בחמש וגל העירור מתפשט בכיוון הקדמי. בנוסף, הזמן הנמדד מתחילת פרץ אחד ועד לתחילת ההתפרצות הבאה בכל קטע נשאר קבוע ומוגדר כתקופה של תקופות הקצב וההתפרצות. משכי הזמן יכולים להשתנות בין תכשירים שונים, אך השהיית הפאזה בין הקטעים נשארת קבועה כרבע מהמחזור ללא תלות בתדירות הקצב.ניתן לראות את דפוסי הקואורדינציה הללו בצורה הטובה ביותר בהיסטוגרמות הפאזה הנראות כאן. כאן באמצעות מיקרו אלקטרודות חדות, הקלטות תוך-תאיות מהדנדריטים של Ps.נוירונים מוטוריים מראים תנודות אנפאזה של נוירונים בודדים עם הפעילות המתועדת החוץ-תאית של כל הנוירונים המוטוריים של PS מאותו גנגליון הימי. כדי לזהות נוירונים שהוקלטו תוך תאיים, ניתן למלא תאים באמצעות מיקרו אלקטרודות חדות ויונטופורזה.באיור זה, הסודה הגחונית של שני נוירונים מוטוריים של PS ממולאים ממוקמת אחורית לבסיס העצב N one. הנויריט הראשוני מקרין מלפנים ומסתעף בתוך הגלולה הנוירולוגית הרוחבית. האקסון מקרין דרך הענף האחורי של העצב N אחד אל השרירים.לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 45 דקות עד שעה אם היא מבוצעת כראוי. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להחליף את מי המלח במרווחי זמן קבועים כדי לשמור על בריאות רקמת העצבים. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו הקלטה תוך-תאית של נוירונים מוטוריים או בין נוירונים על מנת לענות על שאלות נוספות כמו ניתוח מנגנון הקואורדינציה התאי, מדידת זרמים יוניים או חקר ההשפעה של נוירומודולטורים על פעילות קצבית של תאים ספציפיים.

the-swimmeret-system-crayfish-practical-guide-for-dissection-nerve

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

לא פולשני מדידות של דפוסי פעילות עצבית להתנהג בחופשיות בעלי חיים מתקבלים על ידי שילוב של הקלטות neurophysiological עם videography במהירות גבוהה.

הקלטות של הפעלת מעגלים עצביים מתנהגת בחופשיות בעלי חיים

חסרי חוליות להראות תגובה האוטונומית הסימפתטית דמוי דומה לזה שתואר על החוליות. התיאום של מערכות Cardio-כלי הדם נשימתית מאפשר מדידה של מדד ביולוגי בו כדי להעריך את מצב האורגניזם הפנימיים.

מדדי הלב ושיעורי נשימתית ב שנע בחופשיות סרטן הנהרות

השריר פותחן של הרגל סרטנים מוצג חשיבותו ההיסטורית צדדיות ניסיוני פנוטיפ שרירים, פיזיולוגיה ואת הפלסטיות הסינפטית.

צפה היסטורי הפגנה לפיזיולוגיה NMJ של השריר פותחן סרטן הנהרות

מאמר זה מדגים כיצד לנהל הקלטות אלקטרו התגובות הסינפטי על השרירים extensor ברגל הליכה של סרטן וכיצד מסופי העצב הם דמיינו כדי להראות את ההבדלים המורפולוגיים ברוטו גבוהה ונמוכה פלט מסופים עצב.

הקלטות פיזיולוגיים של NMJs פלט גבוה ונמוך על שרירים ברגליים סרטן הנהרות extensor

הניסויים להפגין גישה נוחה לסטודנטים לצבור ניסיון לבחינת מבנה השריר, תגובות הסינפטי, את ההשפעות של הדרגתיים יונים חדירות על פוטנציאל הממברנה. כמו כן, חושית-CNS-מנוע שריר מעגל מוצג להראות אמצעי לבחון השפעות של חומרים במעגל עצבי.

ממברנה פוטנציאלים, התגובות Synaptic, המעגלים הנוירונים, Neuromodulation ו היסטולוגיה שרירים שימוש סרטן הנהרות: מעבדה תרגילים סטודנטים

המטרה העיקרית של הניסוי היא להבין כיצד עצב סנסורי עיקרי להעברת מידע על תנועות ותנוחות המשותפת מידע פרופריוצפטיביות עבור חיה. מטרה נוספת של דו"ח זה היא להציג את האנטומיה של התכשיר על ידי לנתיחה וצפייה של נוירונים תחת מיקרוסקופ לנתח.

קולטן שרירים איברים בבטן סרטן הנהרות: מעבדה הסטודנטים תרגיל הפרופריוספציה

זוהי הפגנה של כמה ממברנות ביולוגיות ניתן להבין באמצעות מודלים חשמל. אנחנו גם מדגימים נהלים הקלטה פוטנציאל פעולה מחוט עצב הגחון של סרטנים עבור מעבדות סטודנט חוקיים.

דוגמנות ממברנות ביולוגיות עם מעגלים מדידת אותות חשמליים בתוך האקסונים: מעבדה תרגילים סטודנטים

מאמר זה מתאר שלוש הכנות מערכת עצבים באמצעות עלוקות: הקלטה תאית מהנוירונים בגרעיני הגחון, culturing נוירונים מגרעיני הגחון, והקלטה מתיקון של עור מעוצבבים למפה שדות חושיים.

תאית הקלטה, חושי שדה מיפוי, ונוירונים שזוהו Culturing בעלוקה, Medicinalis Hirudo</i

טכניקות האנטומי ופיסיולוגיות הם הפגינו כדי לטפל בתפקוד ומבנה לproprioceptors משותף וקולטניים מתח שרירים בגפיים הליכה סרטנים.

רצפטורים פרופריוספציה והמתח בסרטן איברים: תרגילי מעבדה הסטודנטים

מאמר זה מציג מערכת של אפידמיולוגיה סביבתית לא פולשנית הקלטה רציפה וניתוחים של סרטני הלב ופעילות גינקולוגיות. מערכת זו כוללת חיישן אופטי אינפרא אדום, מודול מעקב וידאו וכן תוכנה להערכת סרטני פעימות זה משקף את מצבו פיזיולוגיים, מאפיינת התנהגות סרטני במהלך פעימת לב תנודות.

מדידה רציפה לא פולשנית של פעילויות לב והתנהגותיים סרטני

אנו מתארים פרוטוקול לניטור שינויים בפעילות הנוירונים האדיבים במהלך פקודות מוטוריות במערכת תאי שיער של בעלי חוליות מודל.

פעילות של נוירונים אפרנט קו לרוחב אחורי במהלך שחייה בזברהפיש

למדו את שיטת הפריסה של חוט העצב הבטני בסרטן הנהרות לצורך הקלטות אלקטרופיזיולוגיות של תאי עצב מוטוריים במערכת Swimmeret. טכניקה זו מאפשרת חקר תבניות תנועה ותיאום גנרטורים מרכזיים במערכת העצבים.

מערכת Swimmeret של סרטן הנהרות: מדריך מעשי לDissection של חוט העצב ותאי הקלטות של התבנית מוטורית

גלה סרטונים נוספים