Name: מותאם באופן מיטבי Ex-אובו Culturing של Chick עוברים לשלבים מתקדמים של פיתוח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: למד שיטת תרבית ex ovo מותאמת לעוברי תרנגולות, המאפשרת תצפית בפיתוח עוברי משלב 19 ועד שלב 40 של המבורגר והמילטון. שיטה זו מתאימה למעבדות ביולוגיה התפתחותית ולמחקר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לפול Poirier, מפיק Media, בסיינט וינסנט אוניברסיטת הר לעבודתו בצילום ועריכת וידאו החלק של כתב היד הזה. אנו מכירים במדעי הטבע והנדסת מועצת מחקר של קנדה למימון.

הערה: כל הציוד מפורטים בטבלה 1. 1. אחסון עוברי העופות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ביצי תרנגולת של זן גאלוס גאלוס אופקי על 37 מעלות צלסיוס ולחות כ -40% ולהפוך ביצי פעם או פעמיים ביום. הפיכת ביצים היא חשובה כדי למנוע את העובר מהקפדה על קליפת הביצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לא להפוך את הביצה בשעה 24 לפני הקמת התרבות אחרת העובר יהיה ממוקם הגחון למסת החלמון ויהיה פגום על פתיחת הביצה בשלב 3. בנוסף, לשמור על הביצים ב 4 o C מעלות ללא יותר משבוע אחד לפני הדגירה לפיתוח &quot;עצירה&quot; אבל זה לא אידיאלי. </li></ol> 2. Staging עוברי עופות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לביים את עוברי העוף באמצעות המבורגר ושולחן בימוי המילטון 12. השלב האידיאלי להקמת culturing לשעבר אובו הוא HH שלב 19-20 (כ 3 ימים של דגירה) BECause זה זמן קצר לאחר שהראש מסתובב על 53 hpf. הערה: שלב HH 19-20 מתאפיין בתכונות המורפולוגיות הבאות: somites מורחבים למרבית הזנב, אך סופו של הזנב נשאר unsegmented, ניצן הזנב מסולסל, allantois הוא קטן וכלי דם מוגבל, הרגל-הניצנים הם גדולים יותר מאשר באגף-ניצנים והעיניים הן חסרות צבע או שיש לו גוון אפרפר. </li></ol> 3. הסרת העובר מShell <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הסרת העובר מהפגז, לרסס את הפגז עם אתנול 70% ולאפשר לו להתייבש. אל תכבה את הביצה במהירות כמו זה יגרום ניזק לעובר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נזהר שלא לשנות את הכיוון של הביצה, לפצח בזהירות את הביצה בצד התחתון (כלומר, הצד שהיה הגחון במהלך דגירה) ולשחרר את העובר לסטרילי לשקול סירה (88 x 88 x 23 מ&quot;מ). נגב את לשקול סירות עם אתנול 70%. בדוק את העובר על מנת להבטיח כי שק החלמון אינו פגום. אם h החלמוןכשבור, לבטל את העובר, כפי שהוא לא ישרוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לעובר, כדי להבטיח שזה בר-קיימא; הלב פועם, כלי דם מופיע נורמלים, ואין חריגות ברורות נוכחים. ודא שהקצוות של הסירה לשקול יבשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת פיפטה, ירידה של 40 μl של פניצילין / סטרפטומיצין (פניצילין 5,000 יחידות, 5 סטרפטומיצין מ&quot;ג למ&quot;ל) על גבי אלבומין כדי למנוע זיהום. </li></ol> 4. הכנת תא לחות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח ערמה קטנה של kim-מגבונים ו / או כרית סופגת עשויה כותנה בחלק התחתון של מיכל פלסטיק סטרילי (12 x 12 x 6 סנטימטרים) ניגב עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף מים סטריליים, מזוקקים כדי ללחלח את kim-המגבונים ו / או כותנה (כ -150 מיליליטר מים). </li></ol> 5. הרכבת Ex אוב התרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הסירה לשקול מכילה את העובר על גבי הריפוד הלח. לאחר מכן, מחצית מקום של צלחת פטרי רבועה סטרילי (9.5 x 9.5 סנטימטר) על גבי tהוא שוקל סירה כדי ליצור מכסה רופף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסה את מיכל הפלסטיק עם המכסה שלה. לחץ כלפי מטה שתי פינות של המכסה, להבטיח חותם חלקי שעדיין מאפשר לזרימת אוויר טוב בתוך החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות במקום ההתקנה לתוך חממת C 37 o עד שלב רצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מכולות של מים בחממה כדי לעזור לשלוט בלחות, אם חממת לחות מבוקרת אינה זמינה. לעקר את כל המים בתאי לחות ובחממה ולחדש במידת הצורך במהלך תקופת הדגירה. לחות 40% היא אידיאלית. </li></ol>

<ol><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 41, 391-394 (1974).</li>
<li>Gennaro, L. D., Packard, D. S., Stach, R. W., Wagner, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+differentiation+of+chicken+embryos+in+simplified+shell-less+cultures+under+ordinary+conditions+of+incubation%5BTitle%5D)+AND+%22Growth%22%5BJournal%5D)">Growth and differentiation of chicken embryos in simplified shell-less cultures under ordinary conditions of incubation.</a> Growth. 44, 343-354 (1980).</li>
<li>Tufan, C. A., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+developmental+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of developmental neurobiology.</a> Neuroanat. 3, 8-11 (2004).</li>
<li>Duench, K., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP+and+Hedgehog+signaling+during+the+development+of+scleral+ossicles%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">BMP and Hedgehog signaling during the development of scleral ossicles.</a> Dev. Biol. 365 (1), 251-258 (2012).</li>
<li>Datar, S., Bhonde, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+Chick+Embryo+Culture+as+an+Alternative+in+vitro+Model+to+Investigate+Glucose-Induced+Malformation+in+Mammalian+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Diabet+Stud%22%5BJournal%5D)">Shell-less Chick Embryo Culture as an Alternative in vitro Model to Investigate Glucose-Induced Malformation in Mammalian Embryos.</a> Rev Diabet Stud. 2 (4), 221-227 (2005).</li>
<li>Chick embryos in shell-less culture. Tested studies for laboratory teaching. Fisher, C. J. 5th Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory Education (ABLE), , (1983).</li>
<li>Dunn, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+for+shell-less+culture+of+the+72-hour+avian+embryo%29%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Technique for shell-less culture of the 72-hour avian embryo).</a> Poultry Science. 53, 409-412 (1974).</li>
<li>Yalcin, H., Shekhar, A., Rane, A. A., Butcher, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex-ovo+chicken+embryo+culture+system+suitable+for+imaging+and+microsurgery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An ex-ovo chicken embryo culture system suitable for imaging and microsurgery applications.</a> J. Vis. Exp. (44), (2010).</li>
<li>Silver, P. H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Special+problems+of+experimenting+in+ovo+on+the+early+chick+embryo%2C+and+a+solution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morph%22%5BJournal%5D)">Special problems of experimenting in ovo on the early chick embryo, and a solution.</a> J Embryol Exp Morph. 8 (4), 369-375 (1960).</li>
<li>Spurlin, J., Lwigale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+to+increase+accessibility+to+late-stage+chick+embryos+for+in+ovo+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">A technique to increase accessibility to late-stage chick embryos for in ovo manipulations.</a> Dev. Dyn. 242 (2), 148-154 (2012).</li>
<li>Dorrell, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+ovo+model+for+directly+visualizing+chicken+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Ex ovo model for directly visualizing chicken embryo development.</a> American Biology Teacher. 74 (9), (2012).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morph%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morph. 88, 49-92 (1951).</li>
<li>Drossopoulou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+anteroposterior+patterning+of+the+vertebrate+limb+based+on+sequential+long-and+short-range+Shh+signaling+and+Bmp+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A model for anteroposterior patterning of the vertebrate limb based on sequential long-and short-range Shh signaling and Bmp signaling.</a> Development. , 127-1337 (2000).</li>
<li>Sys, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+in+ovo+CAM-assay+as+a+xenograft+model+for+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The in ovo CAM-assay as a xenograft model for sarcoma.</a> J. Vis. Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Franz-Odendaal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+understanding+the+development+of+scleral+ossicles+in+chicken%2C+Gallus+gallus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Towards understanding the development of scleral ossicles in chicken, Gallus gallus.</a> Dev. Dyn. 237, 3240-3251 (2008).</li>
</ol>

אי לנו אינטרסים כלכליים מתחרים בכל הקשור למידע המוצג בכתב היד הזה.

Ex אוב culturing וחלונאית לשניהם יש יתרונות ואתגרים. כאן אנו משווים את היתרונות והאתגרים של האקס קלקר כוס אוב השיטה ושיטת חלונאית לשעבר המותאם אוב השיטה שמוצגת כאן. השיטה שלנו מאפשרת מניפולציה והתבוננות קלה של עובר אפרוח בשלבים מאוחרים של התפתחות והחידודים שלנו לשעבר המסורתיים אוב השיטה 1, 2, 3 לעשות את זה גם מאוד קל לשימוש בשיעורי מעבדה הוראה לתואר ראשון. <p class="jove_content" style=";text-align:right...

תרבית אקס אובו מילאה תפקיד חשוב בחקר התפתחות התרנגולת1, 2. שיטת תרבות זו שימשה לחקר מחלות נוירולוגיות, התפתחות גפיים, התפתחות גולגולת, וכמודל לחקירת מומים הקשורים לסוכרת 3, 4, 5.
ישנן וריאציות רבות לטכניקת ex ovo. הגישה הנפוצה ביותר היא להשתמש בכוס קלקר6,7,8 או בקערת זכוכית5. בשיטות אלה, הכוס או הקערה מרופדת בניילון נצמד כדי לערסל את העובר, מניחים מכסה על הכוס, ולאחר מכן מניחים את העובר באינקובטור עם לחות מתאימה6. עם זאת, הגדרה זו יכולה להיות מאתגרת מבחינה טכנית. האתגר הראשון הוא הניילון הנצמד המשמש לעריסת העובר. עטיפה זו קשה לעבודה ולעתים קרובות אינה נדבקת לגביעונית היטב. כדי לפתור בעיה זו, מניחים רצועה אלסטית סביב הכוס כדי להחזיק את העטיפה במקומה. למרות זאת, העטיפה עדיין יכולה להחליק, וזה קטלני לעובר. לעטיפת הפלסטיק יש פוטנציאל להיקרע או לנקב על ידי מלקחיים או מחטים שעשויים לשמש במהלך מניפולציות ותצפיות עוברים. לבסוף, מערך זה אינו יציב במיוחד והתלמידים יכולים בקלות להפיל את הכוסות. גובה הכוסות גם מקשה מאוד על הצבת העובר תחת סטריאומיקרוסקופ, שמטרתו מוגבלת לגובה הבמה. אתגרים אלה מקשים על סטודנטים לתואר ראשון לעבוד עם עוברי אפרוחים חיים במעבדות הוראה, כגון קורסים מתקדמים בביולוגיה התפתחותית. 
האתגרים הנ"ל בשיטת ex ovo גרמו לכך שהחוקרים פונים לשיטת החלונות 9,10 כדי לראות את התפתחות הגוזלים העובריים. בטכניקה זו נוצר חור או "חלון" בקליפת הביצה המכסה את העובר. ניתן לאטום מחדש את החור עם סרט או שעווה9 כדי לאפשר התפתחות עוברית נוספת. למרות שלשיטת החלונות יש כמה יתרונות, כמו היכולת לראות התפתחות עוברית ותחזוקה קלה, לשיטה זו יש גם מספר מגבלות. הראשון הוא שהחלון צריך להיות גדול למדי על מנת לראות את העובר כולו (במיוחד בשלבים מאוחרים). שנית, קשה לאטום חלונות גדולים; איטום לא תקין יוביל לבעיות סטריליות ושרידות. שימוש בשעווה מותכת כחומר איטום מוסיף עוד שלב לא נוח ומבולגן לפרוטוקול. לכן, למרות ששיטת החלונות עשויה להיות אידיאלית עבור עוברי אפרוחים בשלבים צעירים (HH 11 - HH 27), צפייה בעובר כולו בשלבים מאוחרים אינה מושגת בקלות. 
כאן, אנו מתארים טכניקה משופרת ופשוטה של תרבית ביצית 11 המונעת את הצורך בציוד טכנולוגי מתקדם, קלה לטיפול תחת סטריאומיקרוסקופ, מעניקה לעובר מספיק תמיכה לביצוע מניפולציות מיקרוסקופיות, ומאפשרת לחוקרים לראות את גדילת העובר בשלמותו היטב בשלבי ההתפתחות המאוחרים יותר (עד HH 40-41). עם ההתקדמות הללו בטכניקת ex ovo, אנשים מקבלים גישה להבנה מלאה יותר של התפתחות עוברית. לדוגמה, צמיחה לשלבים מאוחרים יותר מאפשרת לאנשים להתבונן בתהליכים התפתחותיים שאינם מתרחשים עד לנקודת זמן זו, כגון התעצמות, התפתחות נוצות והתפתחות מתקדמת של הגפיים והעיניים. כל העובר והממברנות החוץ-עובריות וכלי הדם נראים בבירור. ניתן לבצע גם מחקרים מתקדמים יותר, כגון מניפולציות עובריות (כלומר, השתלת חרוזים ספוגים במעכבים או החדרת מחסומים בין שכבות הרקמה), ואז החוקרים יכולים לצפות בהשפעת המניפולציות בעוברים בשלב מאוחר יותר.

<table><tbody><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>סיגמא</td><td>P4458</td><td>הכינו מנות קטנות כדי למנוע אירועי הקפאה/הפשרה</td></tr><tr>צלחת <td></td><td></td><td>פטרי מרובעת</td><td>9.5 ס"מ x 9.5 ס"מ</td></tr><tr><td>שקילה סירה</td><td>פישר 8732113 מדעי</td><td></td><td>88 x 88 x 23 מ"מ</td></tr><tr><td>מיכל זיפלוק</td><td></td><td>זיפלוק מס'</td><td>12 ס"מ x 12 ס"מ x 6 ס"מ</td></tr></tbody></table>

מותאם באופן מיטבי ex-אובו culturing של chick עוברים לשלבים מתקדמים של פיתוח

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

מחקר באנטומיה, אמבריולוגיה וביולוגיה התפתחותית הסתמך במידה רבה על שימוש באורגניזמים מודלים. על מנת לחקור התפתחות בעוברים חיים משתמשים לעתים קרובות באורגניזמים מודלים, כמו התרנגולת. התרנגולת היא אורגניזם מודל מצוין בשל עלותה הנמוכה ותחזוקה מינימלית, אולם הם מציבים אתגרי תצפית מכיוון שהם סגורים בקליפת ביצה אטומה. על מנת לראות כראוי את העובר תוך כדי התפתחותו, יש לחלון או להסיר את הקליפה. הן טכניקות החלונות והן טכניקות ex ovo פותחו כדי לסייע לחוקרים בחקר ההתפתחות העוברית. עם זאת, לכל אחת מהשיטות יש מגבלות ואתגרים. כאן, אנו מציגים טכניקה פשוטה ואופטימלית של תרבית ביצית לעוברי תרנגולות המאפשרת התבוננות בהתפתחות עוברית משלב HH 19 ועד לשלבי התפתחות מאוחרים (HH 40), כאשר איברים רבים התפתחו. קל לאמץ טכניקה זו הן בכיתות לתואר ראשון והן במעבדות מחקר מתקדמות יותר בהן מתבצעות מניפולציות עוברים.

לשעבר זה אוב השיטה מאפשר התצפית של עוברים משלבים המוקדמים של פיתוח (HH 19/20) לשלבים המאוחרים של התפתחות (HH 40-41) (איור 1 א ו -1 B). הגדרת התרבות בHH 19-20 מגדילה שרידות של העוברים בתרבות. לפני ראש הפיכה (לפני 53 hpf) שרידות נמוכות מאוד בתרבות ובאחרי שלב 21, העובר נוטה להיצמד יותר למעטפת בהסרה כל כך עוברים שלמים פחות מתקבלים. באופן כללי, שרידות של העובר באובו לשעבר התרבות היא גבוהות עד HH 35-36 (90-100%), אך היא עושה ט...

צפייה וגישה לעובר התרנגולת במהלך ההתפתחות יכולה להיות מאתגרת. פיתחנו שיטת ex ovo שהיא פשוטה, חסכונית וניתן להשתמש בה בקלות בכיתה או במסגרת מחקר. שיטה זו מספקת גישה לעובר בשלבים מאוחרים של התפתחות עוברית (HH 40).

מותאם באופן מיטבי Ex-אובו Culturing של Chick עוברים לשלבים מתקדמים של פיתוח

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

המטרה הכוללת של שיטה זו היא להציג טכניקת תרבית X ovo אופטימלית לעוברי תרנגולות, המאפשרת התבוננות בהתפתחות עוברית מההמבורגר והמילטון שלב 19 לשלבי התפתחות מאוחרים עד לשלב 40. שיטה זו שימושית לסטודנטים במסגרת מעבדה לביולוגיה התפתחותית, כמו גם לחוקרים שרוצים להשתמש בעובר התרנגולת כאורגניזם מודל להקמת שיטת תרבית X ovo זו. ראשית, הביצים מוכנות.הביצים הודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 40% לחות במשך כשלושה וחצי ימים, מה שמתאים בערך להמבורגר ולשלב 19 של המילטון. את הביצים מכינים על ידי ריסוס אתנול 70% כך שכאשר הקליפה נסדקת, העובר אינו מזוהם. לאחר ריסוס הביצים, הן נותרות לרגע לייבוש.בזמן שתא הלחות מוכן, תא הלחות עשוי ממיכל Ziploc. השלב הראשון בבניית תא הלחות הוא הוספת שכבה של סנטימטר עד שניים של ריפוד סופג. במקרה זה, קים מנגבת, אם כי ניתן להשתמש גם בשכבות של ריפוד כותנה.שכבה זו של ריפוד סופג מתאימה לבסיס מיכל ה-Ziploc המוצג כאן. לאחר שהשכבה הסופגת נמצאת במקומה, מוזגים כ-150 מיליליטר מים מזוקקים לבסיס המיכל. רוב המים הללו צריכים להיספג על ידי הריפוד.תא הלחות הושלם כעת וניתן למקם אותו בצד. סירה קטנה וסטרילית משמשת לעריסת העובר כאשר הוא מוסר מהקליפה. הדרך שבה הסירה מודדת 8.8 סנטימטרים בריבוע בגלל כיוון הביצים בחממה, העובר ממוקם על המשטח העליון של הביצה, ולכן יש לפצח את הקליפה בצד הנגדי.לאחר מכן הקליפה נסדקת בעדינות והביצה מונחת קרוב מאוד לסירה. בתנועה חלקה אחת, הביצית מתפרקת, ומשחררת את העובר בעדינות לתוך הדרך סירה. לאחר מכן העובר נבדק כדי לוודא שהעול עדיין שלם ושהעובר בר-קיימא, כפי שמוצג כאן עם פעימות לב גלויות וללא חריגות ברורות.לאחר מכן, אנו מוסיפים אנטיביוטיקה לעובר כדי לסייע להילחם בזיהום. סטרפטומיצין פניצילין בריכוז של 5,000 יחידות פניצילין וחמישה מיליגרם סטרפטומיצין למיל, מוקצה כדי למזער את תדירות הפשרת ההקפאה. אירועים. 40 מיקרוליטר נלקחים מהאליקוט ומוסיפים לאלבומין שמסביב באמצעות פיפטה.כעת העובר מוכן להכנסה בזהירות לתא הלחות. ברגע שהוא נכנס לתא הלחות, העובר מקבל מכסה כדי לסייע במניעת זיהום. מכסה צלחת פטרי מרובע בגודל תשעה וחצי סנטימטרים רבועים מונח מעל הסירה.חשוב לוודא שאין לחות בשולי הסירה כדי שלא ייווצר אטימה בין צלחת הפטרי לסירת הדרך, מה שיגביל את החמצן לעובר. לאחר מכן כדי להשלים את תא הלחות, מניחים מכסה על מיכל ה- Ziploc. עם זאת, רק שתי פינות של המכסה נלחצות למקומן, משאירות את הפינות האחרות פתוחות ומאפשרות לזרימת האוויר להגיע לעובר.לאחר השלמת תא הלחות, הוא מונח באינקובטור של 37 מעלות כדי שהעובר יוכל להמשיך להתפתח לאחר ארבעה וחצי ימים. ניתן להסיר את תא הלחות מהאינקובטור ולצפות בעובר בערך בשלב 34. בשלב זה, התלמידים יכולים להתבונן בקלות בעובר, כולל כלי הדם, העין הגדולה וניצני הגפיים.ניתן לצפות בעובר במיקרוסקופ מנתח, וניתן לבצע מחקר מתקדם יותר כגון מניפולציות עובריות. לאחר התבוננות בעובר בשלב זה, ניתן להחזירו לאינקובטור של 37 מעלות והוא ימשיך להתפתח לפחות עד שלב 40, שהוא 14 ימי דגירה. לסיכום, שיטה זו מציגה את האופטימיזציה של תרבית עוברי אפרוחים מחוץ לקליפת הביצה.זה מספק הזדמנות לסטודנטים להתבונן בהתפתחות עוברי אפרוחים בסביבת מעבדה עמוסה, ובנוסף, מספק לחוקרים גישה לעוברים אם הם מבצעים מניפולציות.

optimized-ex-ovo-culturing-chick-embryos-to-advanced-stages

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

צ'יק ב electroporation אובו היא טכניקה המאפשרת מניפולציה גנטית של העובר העופות. יישומים נפוצים של טכניקה זו כוללות אנליזה פונקציונלית של גנים המשוערת אלמנטים משפר. וידאו זה מדגים electroporation neural tube אצל ה"ה 10 עוברי אפרוח. טכניקת הזרקת וטיפול נאות ביצה הם דנו.

ב Electroporations אובו של HH 10 עוברים שלב עוף

וידאו זה מדגים תרבות חדש, שיטה שבאמצעותה הם עוברים חומוס בתרבית מחוץ הביצה עד 24 שעות. שיטה זו מאפשרת ללמוד פיתוח מוקדם (פס פרימיטיביים עד 14 סום.), תקופה המקבילה E7-9 בעכבר. יישומים של טכניקה זו כוללים electroporation, ב הכלאה אימונוהיסטוכימיה באתרו.

שיטת לתרבות מוקדם של עוברים צ&#39;יק לשעבר vivo (תרבות חדש)

Chorioallantoic חומוס קרום (רמ"א) הוא ייחודי, immunodeficient באופן טבעי בסביבה תומכת תרבות ללמוד אנגיוגנזה tumorigenesis. מאמר זה וידאו מדגים את השלבים השונים...

אפרוח אובו לשעבר תרבות אובו לשעבר CAM Assay: איך זה באמת עובד

במאמר זה, אנו מציגים מתודולוגיה פשוטה כדי לאפשר לטווח...

לשעבר אובו העובר עוף התרבות מתאים ליישומים הדמיה microsurgery מערכת

המטרה הכללית של סרט זה היא להראות כיצד לבצע הזרקת רשתית...

ב electroporation לג&#39;ימי ברשתית צ&#39;יק עובריים

השיטה של ​​העברת גנים לעוברי עוף בשלבי דגירה מאוחר יותר (מעל גיל המבורגר המילטון הבמה (ה"ה) 22) מתואר. שיטה זו מתגברת על החסרונות...

ין העברת לעוברי עוף מבוגרים יותר על ידי<em&gt; לג&#39;ימי לשעבר</em&gt; Electroporation

כאן, אנו מציגים טכניקה חדשה לתרבית עוברי אפרוחים ex ovo להדמיית זמן-lapse באמצעות אור מועבר ומיקרוסקופיה פלואורסצנטית. כריך נייר הסינון השקוע הוא גרסה של טכניקת נושא נייר הסינוןהמבוססת 1 המאפשרת גידול של עוברי אפרוחים שקועים במלואם במדיום תרבית נוזלי.

כריך נייר מסנן מתחת למים במשך לטווח ארוך אקס אובו זמן לשגות הדמיה של מוקדם צ'יק עובר

פרוטוקול זה מתאר שלוש שיטות כיצד להשיג ולהשתמש בעוברי עוף בני 5 עד 8 ימים ובממברנה הכוריאואלנטואית שלהם (CAM) כמודל in vivo לחקר הדמיית אולטרסאונד משופרת ניגודיות ואספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות.

הכנת עוברי עוף אקס אובו וכלי קרום כוריואלנטואיים כמודל In Vivo להדמיית אולטרסאונד משופר ניגודיות ומחקרי אספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות

פלטפורמה משופרת לתרבות העוברים המלאים מאפשרת פיתוח רחם אקס רציף וחזק של עוברי עכבר לאחר ההשתלה עד שישה ימים, משלבי טרום ההדבקה ועד לאורגנוגנזה מתקדמת. בפרוטוקול זה, אנו מפרטים את ההליך הסטנדרטי לתרבות עוברית מוצלחת באמצעות לוחות סטטיים ומערכות בקבוק מסתובבות.

רחם לשעבר תרבות של עוברי עכבר מ pregastrulation כדי Organogenesis מתקדם

המטרה הכוללת של מאמר זה היא לתאר כיצד לבצע בהזרקה תוך תאית של אובו של חומרים אקסוגניים לעוברי עוף. גישה זו שימושית מאוד כדי לחקור את הביולוגיה ההתפתחותית של עוברי תרנגולות.

באובו הזרקה תוך-וסקולרית בעוברי עוף

למד שיטת תרבית ex ovo מותאמת לעוברי תרנגולות, המאפשרת תצפית בפיתוח עוברי משלב 19 ועד שלב 40 של המבורגר והמילטון. שיטה זו מתאימה למעבדות ביולוגיה התפתחותית ולמחקר.

מותאם באופן מיטבי Ex-אובו Culturing של Chick עוברים לשלבים מתקדמים של פיתוח

גלה סרטונים נוספים