Name: השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של Contusive פגיעה בחוט השדרה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: למדו כיצד ליצור מודל פגיעת חבלה בעכברים ולהשתיל תאי גזע עצבית מסומנים ב-PKH 26. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר תאים לאחר השתלה וחקר פוטנציאל הריפוי בפגיעות חוט השדרה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מכירים בתמיכה הכלכלית של FAIP (Federazione Associazioni Italiane Paraplegici), קרן "Neurogel-en-Marche" (צרפת), Fondazione "La Colonna".

<ol><li>Cord Injury Statistical Center: spinal cord injury facts and figures at glance. , 
 
 <a target="_blank" href="https://www.nscisc.uab.edu/PublicDocuments/fact_figures_docs/Facts%202013.pdf">https://www.nscisc.uab.edu/PublicDocuments/fact_figures_docs/Facts%202013.pdf</a> (2013).</li>
<li>Yip, P. K., Malaspina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+trauma+and+the+molecular+point+of+no+return%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurodegeneration%22%5BJournal%5D)">Spinal cord trauma and the molecular point of no return.</a> Molecular Neurodegeneration. 7, 6(2012).</li>
<li>Fehlings, M. G., Cadotte, D. W., Fehlings, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+systematic+reviews+on+the+treatment+of+acute+spinal+cord+injury%3A+a+foundation+for+best+medical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A series of systematic reviews on the treatment of acute spinal cord injury: a foundation for best medical practice.</a> J Neurotrauma. 28 (8), 1329-1333 (2011).</li>
<li>Furlan, J. C., Noonan, V., Cadotte, D. W., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+decompressive+surgery+of+spinal+cord+after+traumatic+spinal+cord+injury%3A+an+evidence-based+examination+of+pre-clinical+and+clinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Timing of decompressive surgery of spinal cord after traumatic spinal cord injury: an evidence-based examination of pre-clinical and clinical studies.</a> J Neurotrauma. 28 (8), 1371-1399 (2011).</li>
<li>Sekhon, L. H., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology%2C+demographics%2C+and+pathophysiology+of+acute+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Epidemiology, demographics, and pathophysiology of acute spinal cord injury.</a> Spine. 26 (24), 2-12 (2001).</li>
<li>Gorio, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+human+erythropoietin+counteracts+secondary+injury+and+markedly+enhances+neurological+recovery+from+experimental+spinal+cord+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Recombinant human erythropoietin counteracts secondary injury and markedly enhances neurological recovery from experimental spinal cord trauma.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99 (14), 9450-9455 (2002).</li>
<li>Windle, W. F., Clemente, C. D., Chambers, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+formation+of+a+glial+barrier+as+a+means+of+permitting+a+peripheral+nerve+to+grow+into+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of formation of a glial barrier as a means of permitting a peripheral nerve to grow into the brain.</a> J Comp Neurol. 96 (2), 359-369 (1952).</li>
<li>Young, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+contusion+models%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Spinal cord contusion models.</a> Prog Brain Res. 137, 231-255 (2002).</li>
<li>Stokes, B. T., Noyes, D. H., Behrmann, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electromechanical+spinal+injury+device+with+dynamic+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">An electromechanical spinal injury device with dynamic sensitivity.</a> J Neurotrauma. 9 (3), 187-195 (1992).</li>
<li>Jakeman, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+spinal+cord+injury+produced+controlled+contusion+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Traumatic spinal cord injury produced controlled contusion in mouse.</a> J Neurotrauma. 17 (4), 299-319 (2000).</li>
<li>Sahni, V., Kessler, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+therapies+for+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Stem cell therapies for spinal cord injury.</a> Nat Rev Neurol. 6, 363-372 (2010).</li>
<li>Marfia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neural+precursors+isolated+from+post+mortem+brain+yield+mostly+neurons%3A+an+erythropoietin-dependent+process%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Adult neural precursors isolated from post mortem brain yield mostly neurons: an erythropoietin-dependent process.</a> Neurobiol Dis. 43 (1), 86-98 (2011).</li>
<li>Gritti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+neural+stem+cells+reside+into+the+rostral+extension+and+olfactory+bulb+of+adult+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multipotent neural stem cells reside into the rostral extension and olfactory bulb of adult rodents.</a> J Neurosci. 22 (2), 437-445 (2002).</li>
<li>Whetstone, W. D., Hsu, J. Y., Eisenberg, M., Werb, Z., Noble-Haeusslein, L. J. J Neurosci Res. 74 (2), 227-239 (2003).</li>
<li>Gonzalez-Lara, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+cellular+magnetic+resonance+imaging+to+track+the+fate+of+iron-labeled+multipotent+stromal+cells+after+direct+transplantation+in+a+mouse+model+of+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">The use of cellular magnetic resonance imaging to track the fate of iron-labeled multipotent stromal cells after direct transplantation in a mouse model of spinal cord injury.</a> Mol Imaging Biol. 13 (4), 702-711 (2010).</li>
<li>Ottobrini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+stem+cell+transplantation+in+injured+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+R4%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of stem cell transplantation in injured mouse spinal cord.</a> Cell R4. 2 (3), e963(2014).</li>
<li>Janowwski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransplantation+in+mice%3A+The+concorde-like+position+ensures+minimal+cell+leakage+and+widespread+distribution+of+cells+transplanted+into+the+cistern+magna%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letter%22%5BJournal%5D)">Neurotransplantation in mice: The concorde-like position ensures minimal cell leakage and widespread distribution of cells transplanted into the cistern magna.</a> Neuroscience Letter. 430 (2), 169-174 (2008).</li>
<li>Basso, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basso+Mouse+Scale+for+locomotion+detects+differences+in+recovery+after+spinal+cord+injury+in+five+common+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains.</a> J Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).</li>
<li>Hofstetter, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allodynia+limits+the+usefulness+of+intraspinal+neural+stem+cell+grafts%3B+directed+differentiation+improves+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Allodynia limits the usefulness of intraspinal neural stem cell grafts; directed differentiation improves outcome.</a> Nat Neurosci. 8 (3), 346-353 (2005).</li>
<li>Bottai, D., Madaschi, L., Di Giulio, A. M., Gorio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability-dependent+promoting+action+of+adult+neural+precursors+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Viability-dependent promoting action of adult neural precursors in spinal cord injury.</a> Mol. Med. 14 (9-10), 634-644 (2008).</li>
<li>Bottai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cells+promote+motor+recovery+and+affect+inflammatorycell+infiltration+in+spinal+cord+injured+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cells promote motor recovery and affect inflammatorycell infiltration in spinal cord injured mice.</a> Exp Neurol. 223 (2), 452-463 (2010).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שום אינטרס כלכלי מתחרה.

במאמר זה אנו תיארנו שיטה להשגת מודל לשחזור של פגיעה בחוט השדרה טראומטית באמצעות אופק Impactor אינסופית בכוח של 70 kdyne (חמור). שימוש בפרדיגמה גדולה יותר כוח (80 kdyne), אנחנו יכולים לגרום לפציעה חמורה יותר, כי למרבה הצער הוא קשור לתמותה גבוהה יותר עכברים. כדי להימנע מבעיה זו, אנחנו בדרך כלל לבחור פרדיגמה מתונה כוח (70 kdyne) המשויכת לנגע ​​הדיר עם התאוששות הדרגתית של תפקוד ותמותה נמוכה יותר. כדי לייצר פציעה יציבה כגון זה מאוד חשוב לשים לב במיוחד לקיבוע הנכון של בעלי החיים על פלטפ...

פגיעה בחוט השדרה (SCI) היא הפציעה השכיחה ביותר הנגרמת על ידי טראומת אנרגיה גבוהה כמו תאונות כלי רכב, נופלת, ספורט ואלימות 1. בSCI החמור, כוח הפציעה הורס או נזקי רקמה עצבית, גורם לאובדן פתאומי של תפקוד נוירולוגים. SCI הטראומתי מתרחש לעתים קרובות במבוגרים צעירים בין 10 ל 40 שנים של גיל. זה מאוד משפיע על מצבו הנפשי והפיזי של המטופל וגורם להשפעה כלכלית עצומה לחברה 2. גישת הטיפול בשלב האקוטי היא לעתים קרובות מוגבלת למינון גבוה של סטרואידים, ייצוב כירורגי ופריסה אולי כדי להחליש נזק נוסף 3-4, אבל התפקידים של שיטות אלה על ההתאוששות של תנועה לאחר SCI עדיין שנויים במחלוקת. בנוסף לאובדן חריף רקמה, פגיעה הטראומטית וההפעלה של מנגנונים משניים של demyelination ניוון הסיבה ומוות של סוגי תאים מרובים 5-6. התאוששות המסוימת של פונקציה יכולה שלעשר להיות מתואמים בהיקף של חומר לבן חסך באתר הפציעה 7. מודלים של בעלי החיים של SCI עשויים לשמש גם כדי לחקור את התגובות הביולוגיות של הרקמות לפציעה ולבדוק טיפולים פוטנציאליים. יתר על כן, מודל חיה שימושי של הפתולוגיה אנושית לא רק לשחזר כמה היבטים של מצב זה, אלא גם חייב להציע יתרונות על פני תצפית קלינית ישירה וניסוי. המודלים הנפוצים ביותר של פגיעה בחוט השדרה כרוכה פציעת חבלה או דחיסה נמסרה לחוט השדרה החשוף בניתוח 8. הפיתוח של פגיעת חבלת ירידה במשקל מבוקרת מייצג אבן דרך חשובה בהיסטוריה של מחקר SCI. מרכז מחקר חוט השדרה אוניברסיטת אוהיו רדף האתגר הטכנולוגי של מכשיר שיכול לשמש כדי לגרום דחיסה מסוימת של חוט השדרה עם פרמטרים של השפעה נשלטו על ידי מחשב 9. זה תוכנן במקור לשימוש wiחולדות ה; מאוחר יותר הוא שונה להחיל כלפי עכברים 10. יתרונותיה של גישה מסוג זה הם שביומכניקה של פציעה ניתן ללמוד יותר לעומק ואת הפרמטרים של פגיעה יכולים להיות מוגדרים באופן מלא יותר על מנת להשיג מודל ניסיוני לשחזור, ולכן מאפשר הערכה מדויקת יותר של ההשפעות של טיפולים נבדקו על תהליך ההחלמה התפקודי. מחקרים רבים בדקו את השפעות ההשתלה של מגוון רחב של תאי גזע בדגמי SCI 11. יש לנו לאחרונה מבודד תאי גזע בוגרים עצביים מהאזור תת-חדרית (SVZ) כמה שעות לאחר מותו של תורם עכבר 12-13. הליך זה מספק אוכלוסייה של תאי גזע עצביים, מבשרים עצביים הנקרא נתיחה שלאחר המוות (PM-NPCs), נראים שכדי להיות יתרון בגישת רפואת רגנרטיבית בריפוי SCI. במאמר זה נדגים: i) הפרוטוקול לתיוג תא עם PKH26 נותב החיוני, ii) Surgהליך iCal לבצע על SCI הטראומתי, וiii) (iv) העירוי לוריד של תאים שכותרתו. יתר על כן, בעבודה זו אנו מראים כי תאים מושתלים להגר לאתרי נגע חוט השדרה ולהבדיל בעיקר לחלבון microtubule קשור (MAP) 2 תאים חיוביים. יתר על כן, ההבחנה מלווה בקידום התאוששות יציבה של פונקצית גפיים אחוריות.

<table><tbody><tr><td>PKH26GL-1KT&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>091M0973</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר אימפקטור אופק אינסופי (IH)&nbsp;</td><td>Precision Systems and Instrumentation, LLC</td><td>דגם 0400 סידורי 0171</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycin 10 מ"ג/מ"ל</td><td>Euroclone</td><td>ECM0011B</td><td>1 מ"ג/מ"ל בתמיסת מלח סטרילית</td></tr><tr><td>Isoflurane-Vet 250 מ"ל</td><td>Merial</td><td>B142J12A</td><td></td></tr><tr><td>Blefarolin POM OFT 10 גרם</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחמם שקופיות</td><td>2Biological Instruments</td><td>HB101-sm-402</td><td></td></tr><tr><td>אזמל, גודל 10</td><td>Lance Paragon</td><td>26920</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים קטנים של Graefe</td><td>2Biological Instruments</td><td>11023-14</td><td></td></tr><tr><td>Rongeur</td><td>Medicon Instruments</td><td>07 60 07</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו</td><td>2Biological Instruments</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>תפרים נספגים (4/0)</td><td>Safil Quick</td><td>C0046203</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>2מכשירים ביולוגיים</td><td>13014-14</td><td></td></tr><tr><td>רפלקס 7 מוליך קליפ פצע</td><td>2מכשירים ביולוגיים</td><td>12031-07</td><td></td></tr><tr><td>7 מ"מ קליפס פצע רפלקס</td><td>2 מכשירים ביולוגיים</td><td>12032-07</td><td></td></tr><tr><td>NGS</td><td>Euroclone</td><td>ECS0200D</td><td></td></tr><tr><td>Triton X 100</td><td>Merck Millipore</td><td>1086431000</td><td></td></tr><tr><td>חלבון מצופה אנטי מיקרו-צינורות&nbsp; (מפה) 2</td><td>Millipore</td><td>AB5622</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td></td></tr><tr><td>FluorSave Reagent&nbsp;</td><td>Calbiochem</td><td>345789</td><td></td></tr><tr><td>תאי גזע עצביים בינוני</td><td></td><td></td><td>DMEM-F12 בינוני (Euroclone) המכיל 2 מ"מ L-גלוטמין (Euroclone), 0.6% גלוקוז (Sigma-Aldrich), 9.6 גרם/מ"ל פוטרסין (Sigma-Aldrich), 6.3 ננוגרם/מ"ל פרוגסטרון (Sigma-Aldrich), 5.2 ננוגרם/מ"ל נתרן סלניט (Sigma-Aldrich), 0.025 מ"ג/מ"ל אינסולין (Sigma-Aldrich), 0.1 מ"ג/מ"ל טרנספרין (Sigma-Aldrich) ו-2 &mu; גרם/מ"ל הפרין (מלח נתרן, דרגה II; סיגמא-אולדריץ'), bFGF (רקומביננט אנושי, 10 ננוגרם/מ"ל; Life Technologies) ו-EGF (רקומביננט אנושי, 20 ננוגרם/מ"ל; טכנולוגיות חיים)&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Euroclone</td><td>ASM5002</td><td></td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>Euroclone</td><td>ECB3000D</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270-100G</td><td></td></tr><tr><td>putrescine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5780-25G</td><td></td></tr><tr><td>פרוגסטרון</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6149-1MG</td><td></td></tr><tr><td>נתרן-סלניט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9133-1MG</td><td></td></tr><tr><td>טרנספרין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T 5391</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I1882</td><td></td></tr><tr><td>הפרין נתרן-מלח</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H0200000</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Life Technology</td><td>PHG0024</td><td></td></tr><tr><td>h-EGF</td><td>Life Technology</td><td>PHG6045</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 0.33 סמ"ק 29 גרם</td><td>טרומו</td><td>MYJECTOR&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>buprenorphine</td><td>Schering Plough SpA</td><td>ג'ל עיניים TEMGESIC</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Bausch & ליפוזי</td><td></td><td></td> לומב</tr></tbody></table>

השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של contusive פגיעה בחוט השדרה

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

פגיעה בחוט השדרה היא מצב קליני הרסני, המתאפיין בחוסר תפקוד נוירולוגים מורכב של. מודלים של בעלי החיים של פגיעה בחוט השדרה יכולים לשמש גם כדי לחקור את התגובות הביולוגיות לפציעה ולבדוק טיפולים פוטנציאליים. פציעת חבלה או דחיסה נמסרה לחוט השדרה החשוף בניתוח הן המודלים הנפוצים ביותר של פתולוגיה. בדוח זה החבלה הניסיונית מתבצעת על ידי שימוש במכשיר Impactor Infinite האופק (IH), המאפשר יצירה של מודל חיה פגיעה לשחזור באמצעות הגדרה של פרמטרים פציעה ספציפיים. השתלת תאי גזע נחשבת בדרך כלל אסטרטגיה שעשוי להיות שימושית עבור ריפוי מצב המתיש הזה. מחקרים רבים בדקו את ההשפעות של השתלת מגוון של תאי גזע. כאן אנו מדגימים שיטה מותאמת לפגיעה בחוט השדרה ואחרי הזרקה לוריד זנב של תאים בעכברי CD1. בקיצור, אנו מספקים הליכים ל: i) wi תיוג תאה נותב חיוני, ii) לטיפול טרום ניתוחי של עכברים, iii ביצוע) של פגיעה בחוט השדרה contusive, וiv) עירוי לוריד של נתיחה שלאחר מות מבשרים עצביים. מודל חבלה זה יכול להיות מנוצל כדי להעריך את היעילות ובטיחות של השתלת תאי גזע בגישת רפואת רגנרטיבית.

המספר הכולל של תאים מושתלים הוא 1 x 10 6 תאים והיה מחולק לשלוש זריקות רצופות בוריד הזנב. אנחנו מנוהלים 3.3 x 10 5 תאים ב -50 μl של פתרון חיץ פוספט (PBS). ההזרקה הראשונה בוצעה תוך 30 דקות לאחר פציעה, השניה 6 שעות מאוחר יותר ו-18 שעות האחרונות לאחר הפגיעה. הבחירה של מגבלת זמן של 18 שעות לאחר SCI לניהול PM-NPCs נקבעה על ידי החדירות אופטימליות של מחסום דם המוח בשלב זה 14. כדי להעריך את ההשפעה של הזרקת תאי גזע שזה יהיה שימושי לבעלים-חי יש laminectomies ...

פגיעה בחוט השדרה היא מצב טראומטי שגורם לתחלואה קשה ותמותה גבוהה. בעבודה זו אנו מתארים בפירוט מודל חבלה של פגיעה בחוט השדרה בעכברים ואחרי השתלה של תאי גזע עצביים.

השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של Contusive פגיעה בחוט השדרה

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לתאר בפירוט מודל חבלה של פגיעה בחוט השדרה בעכברים, ואחריו השתלה של תאי גזע עצביים. זה מושג על ידי תיוג ראשוני לאחר המוות, תאי מבשר עצביים או NPCs PM עם העוקב החיוני PKH 26. לאחר מכן, מבצעים חתך גבי על העכבר וחוט השדרה נחשף.לאחר מכן נעשה שימוש באופק אינסופי או במכשיר פגיעה IH ליצירת נגע בחוט השדרה. לבסוף, ה-PKH 26 המסומן PM ו-PCs מוזרקים לווריד הזנב של העכבר. בסופו של דבר, עוקבים אחר גורלם של PKH 20 מושתל בשעה 18:00 ומחשבים אישיים באתר הנגע.מודל הפגיעה משכפל את האדם שנפגע בחוט השדרה. הפגיעה המכנית הראשונית מלווה בניוון משני מתקדם שבו נחקר טיפול תאי ותרופתי. היישומים המתוארים עשויים לספק בסיס מתודולוגי להשגת תובנות נוספות על האמונה.השראת תאי גזע המושתלים בחוט השדרה תוך כדי ניוון ואירועים דלקתיים. מי שידגים את הנגע יהיה ד"ר טוני לאג'ה לונגו, דוקטורנט במעבדה. בעוד שהזרקת הזנב תבוצע על ידי ד"ר אצ'ה, מדובר בפוסט-דוקטורנט במעבדה, החל מתאי גזע עצביים העומדים בקריטריונים כמתואר בפרוטוקול הטקסט.Resus משהה את התאים לריכוז של אחד כפול 10 עד ששת התאים לכל 150 מיקרוליטר. הכן לפחות 1.2 כפול 10 לששת התאים לכל עכבר כדי שיהיו מספיק תאים להעמסת הפיפטה. בעזרת מדיום תאי גזע עצביים, שטפו את התאים שלוש פעמים בבקבוקון חרוטי של 10 מיליליטר, וסובבו במהירות של 500 פעמים G במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר כדי לגלול את התאים.לאחר כל שטיפה, לפני ספירת הסחיטה הסופית, התאים לאחר הסיבוב, שואבים את הסופרנטנט, ומשאירים כ-25 מיקרוליטר נוזל כדי למנוע שאיבת תאים כלשהם. לאחר מכן, הכינו תרחיף שני X על ידי הוספת מיליליטר אחד של מדלל C לחיך התא והשתמשו בפיפטינג עדין כדי להשעות אותו מיד. לפני הצביעה, הכינו תמיסת צבע כפולה במדלל C על ידי הוספת ארבעה מיקרוליטר של תמיסת אתנול D PKH 26 למיליליטר אחד של מדלל C בצינור וערבבו היטב.כדי להתפזר במהירות, הוסף את המיליליטר האחד של תרחיף שני תאי x למיליליטר אחד של שתי תמיסות XD וערבב מיד את הדגימה על ידי פיפטינג. לאחר הדגירה של תרחיף התאים למשך דקה עד חמש דקות, עצור את הצביעה על ידי הוספת נפח שווה של תמיסת BSA של 1% ב-HBSS ודגירה למשך דקה אחת. לאחר מכן צנטריפוגה את התאים ב 500 פעמים G למשך 10 דקות והסר בזהירות את הסופרנטנט.השתמש ב-10 מיליליטר של מדיום שלם כדי להשעות מחדש את כדור התא להערכת התאוששות התאים, כדאיות התא ועוצמת הקרינה. צנטריפוגה התאים משליכים את הסופרנטנט ומוסיפים 10 מיליליטר של HBSS לגלולת התא. יש לשטוף פעמיים עם HBSS ולהשעות את התאים בתמיסה פיזיולוגית סטרילית.לאחר הכנת אזור הניתוח ועכבר על פי פרוטוקול הטקסט, הנח את הצד הגבי של החיה כלפי מעלה על מחמם שקופיות כדי למנוע היפותרמיה במהלך הניתוח בעזרת אזמל, בצע חתך אנכי מעל אזור העניין מ-T 7 עד T 12 באמצעות מלקחיים. החזק את העור ואת כרית השומן השטחית שנמצאת בין המרווח בין התהליך החמישי לשישי של בית החזה תחת מיקרוסקופ סטריאו. ספרו את התהליך מתחת לכלי הדם כ-T שש, ואז עברו ל-T שבע.לאחר מכן הניחו מעט מיסב מתחת לצד הגחון של העכבר כדי להגביר את עקמומיות עמוד השדרה והשתמשו במלקחיים כדי לחסום את עמוד השדרה כדי לשתק אותו. לאחר מכן, השתמש באזמל כדי לחתוך את הפרה של שרירי החוליות באופן דו-צדדי מ-T 7 עד T 10 ברמת החוליות עד שהמשטח הגבי של הלמינה יוצר קשר עם קצה האזמל. לאחר מכן השתמש באזמל כדי לסמן את הצומת מ-T 7 ל-T 10 בגובה החוליה עד שהמשטח הגבי של הלמינה יוצר קשר עם קצה האזמל במרווח שבין ה-T שמונה ל-T תשע בליטות זעירות.לאחר מכן השתמש במספריים מיקרו כדי לחתוך את הרקמה בין T שמונה ל-T תשע ו-T תשע ו-T 10. כעת השתמש ב-rongeur כדי להסיר את תהליך ה-T 9. חשוף את הצומת באמצעות מספריים מיקרו כדי לגרד בזהירות את שכבת השריר.המשך עד לחשיפת העצם. השתמש במלקחיים כדי להסיר את השרירים מהלמינה ולפתוח רווח קטן בין החוליות. ואז הכנס בעדינות את המספריים המיקרו מתחת לעצם.חותכים את הלמינה משני הצדדים ומשתמשים במלקחיים כדי להסיר אותה, וחושפים את הכבל. השתמש ב-ron jour כדי להסיר שברי עצם חופשיים או משוננים שנותרו מאחור. לאחר מכן הסר את החצי העליון של תהליך הגב T תשע.לאחר ביצוע פרוטוקול מכשיר הפגיעה IH, על פי ההנחיות בטקסט, השתמש בארבעה תפרים נספגים כדי לסגור את החתך על ידי כיסוי ראשון של חוט השדרה החשוף באתר הלמינה שהוסרה. הקפד לא לצבוט את השרירים הבסיסיים. השתמש בשניים או שלושה קליפסים רפלקסיים כדי לסגור את העור.הזרקו שני מיליליטר מי מלח בגב התחתון תת עורי והניחו את העכבר בכלוב חם מראש על כרית חימום כדי להתאושש. לבצע הזרקת וריד זנב של תאים. השעו מחדש את התאים במבחנה וטענו 75 מיקרוליטר למזרק של 0.3 מיליליטר, וודא שאין בועות בהשעיית התאים.כדי למנוע שקיעת תאים, שמור את המזרק במצב אופקי. הנח את העכבר מתחת למנורת החום כדי להרחיב את ורידי הזנב. לאחר מכן משוך בעדינות את העכבר לתוך המסנן כדי לדמיין את וריד הזנב הרוחבי, המופיע כקו כחול צר.השתמש במקלון אלכוהול כדי לנקות את הזנב, וברגע שרואים את הווריד, תפוס את וריד הזנב בין האצבע האמצעית לאגודל של יד שמאל. חבלת ה-T 9 שהודגמה בסרטון זה גרמה לאובדן חולף של תפקוד הגפה האחורית שלוש פעמים 10 עד התאים החמישיים או PBS הוזרקו לווריד הזנב בשלוש זריקות שבוצעו 30 דקות, שש שעות ו-18 שעות לאחר הפציעה. כפי שמוצג כאן, תוך שבועיים-שלושה, PBS טיפל בפצועים, בעכברים השתפר ותפקוד הגפיים האחוריות הגיע לשלוש נקודות של קשקשי עכבר בסיסיים או עכברי BMS שטופלו ב-PM.NPCs, לעומת זאת, הראו התאוששות גבוהה יותר והגיעו ל-4.5 נקודות של BMS כפי שניתן לראות כאן, רוב ה-NPCs המושתלים המסומנים ב-PKH 26, הצטברו בשולי האשכולות היוצרים את הנגע.זמן קצר לאחר מתן התרופה, התאים המושתלים נדדו לאורך קצוות הנגע ובאופן מפוזר יותר שבו הם התמיינו לנוירונים. ב-30 יום לאחר הנגע וההשתלה, גוף התא של NPCs PM גדל בגודלו וברוב התאים, תהליכים דמויי דנדריטי היו ברורים וכתם חיסוני מלא על ידי הנוגדנים הספציפיים למיפוי בעת קבלת הליך פרו זה, חשוב לזכור שכוחות גבוהים יותר עשויים להגביר את התמותה בבעל החיים עקב פציעות חמורות יותר. לפיכך, אנו מציעים להשתמש בפרדיגמת הנגע שלנו שלאחריה תהליך החלמה ניתן לשחזור יותר.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשיג מודל ניסיוני הניתן לשחזור של פגיעה טראומטית בחוט השדרה בעכבר באמצעות פגיעת האופק האינסופית.

neural-stem-cell-transplantation-experimental-contusive-model-spinal

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השתלת מבשר עצבית היא אסטרטגיה מבטיח הגנה ו / או החלפת אבוד / נוירונים מתפקדת צוואר הרחם מנוע הסרעפת של פגיעה בחוט השדרה (SCI) לבין הנוירון המוטורי הפרעה, amyotrophic laterals טרשת (ALS). אנו מספקים פרוטוקול למסירה התא בחוט השדרה הצווארי קרן הגחון במודלים של מכרסמים ALS ו SCI.

Intraspinal השתלת תאים עבור מיקוד הורן הגחון צוואר הרחם ב טרשת לרוחב amyotrophic וקורד טראומטית פגיעה בעמוד השדרה

מקור: Lakshman, N., et al. מבחן נוירוספרה להערכת הפעלת תאי גזע עצביים אנדוגניים במודל עכבר של פגיעה מינימלית בחוט השדרה. J. Vis. exp. (2018). סרטון זה מדגים את ההפעלה והנדידה של תאי גזע עצביים (NSCs) במודל פגיעה בחוט השדרה של עכבר. כדי לחשוף את חוט השדרה, מסירים חוליה מאזור בית החזה של עמוד השדרה מעכבר מורדם. לאחר מכן נוצרת פגיעה שטחית בחומר הלבן של חוט השדרה באמצעות מחט כפופה, המשמרת את התעלה המרכזית. בעקבות הפציעה, תאי גזע גזעיים המקיפים את התעלה מופעלים ונודדים לאתר הפציעה כדי לסייע בתיקון...

 מודל פגיעה מינימלית בחוט השדרה לחקר הפעלה ונדידה של תאי גזע עצביים

מודל חבורה של פגיעה בחוט השדרה חמורה מתואר. צעדים טרום ניתוחי, אופרטיביים ולאחר הניתוח מפורטים מתוארים להשיג מודל עקבי.

דגם חבורה של פגיעה בחוט השדרה חמורה בחולדות

מטריצות הפיברין המכילות גורמי גדילה שימשו כדי לשמר את תאי גזע עצביים מורכבים לתוך אתרים של חיתוך רוחב חוט השדרה. תאים מורכבים מלאים לחלוטין חלל הנגע ומובחן לסוגים שונים עצבי תאים, כוללים תאי עצב שהשתרעו אקסונים לחוט השדרה מארח על פני מרחקים ארוכים.

קידום ההישרדות וההתמיינות של תאי גזע עצביים עם פיברין וקוקטיילי גורם גדילה לאחר פגיעה בחוט השדרה חמורה

טיפול בפגיעה בחוט השדרה הצווארי עם פפטידים בהרכבה עצמית (SAP) ותאי מבשר עצביים (NPC), יחד עם גורמי גדילה, היא גישה מבטיחה לקידום התחדשות והתאוששות. הוקם מודל עכברוש קליפ מפרצת חבלה/דחיסה של SCI צוואר הרחם וטיפול משולב הכולל הזרקת SAP והשתלת NPC.

שימוש סינרגטי של תאים עצביים מבשר ופפטידים עצמי הרכבה בפגיעה בחוט השדרה הניסויית צוואר הרחם

פגיעות חמורות בחוט השדרה גורמות לעתים קרובות למומים ברקמות. שתי אפשרויות מתוארות כדי לגשר בהצלחה על פערים כאלה כדי לקדם הסתגלות רקמות, תגובות רגנרטיביות ושיפור תפקודי בחולדות באמצעות השתלת מערכת מיקרו-מחברים מכנית לאחר פציעה חריפה וחמישה שבועות לאחר חתך מלא של חוט השדרה.

אסטרטגיות ניסיון לגשר על פערים גדולים של רקמה בחוט השדרה נפגע לאחר חריפת נגע כרוני

מאמר זה מתאר שיטה להוספת צינור חלול בין גדמי חוט השדרה לאחר חיתוך מלא מילוי עם תאי שוואן (SCs), קרום המרתף להזרקה מטריקס על מנת לגשר, לקדם התחדשות האקסון על פני הפער.

השתלת של שוואן תאים בתוך תעלות PVDF-TrFE לגשר עכברוש Transected גדמי חוט השדרה כדי לקדם התחדשות האקסון על פני הפער

. הנה, נדגים את הביצועים של מודל פגיעה בחוט השדרה מינימלי עכבר למבוגרים זה חוסך הנישה התעלה המרכזית דיור אנדוגני תאי גזע עצביים (NSCs). אנו מראים כיצד ניתן להשתמש וזמינותו neurosphere לכמת הפעלה והעברה של NSCs סופית ופרימיטיבי בעקבות פגיעה.

Neurosphere Assay כדי להעריך את הפעלת אנדוגני תאי גזע עצביים במודל של עכברים של פגיעה בחוט השדרה מינימלי

פרוטוקול זה מדגים מתודולוגיות עבור מודל העכבר של פגיעה במוח הגולגולת טראומה טראומטית השתלת הגוף האנושי המושרה pluripotent שפעה התאים הנגזר לתוך האתר פציעה. מבחנים התנהגותיים והיסטולוגיים של תוצאות מהליכים אלה מתוארים גם בקצרה.

מבוקרת מודל השפעה בקליפת המוח של פגיעה במוחו של העכבר עם השתלת הטיפולית של האדם המושרה Pluripotent תא גזע תאים הנגזרים

במאמר זה, אנו מספקים שיטה ניתנת לשחזור ליצירה ותחזוקה של פרוסות אורגנוטיפיות ארוכות טווח של חוט השדרה שהושתלו בתאי גזע עצביים כמודל ex vivo לבדיקת טיפולים תחליפיים תאיים.

תרבית פרוסה אורגנוטיפית של חוט השדרה של עכבר לטווח ארוך כפלטפורמה לאימות השתלת תאים בפגיעה בחוט השדרה

במחקר זה, פותחו ואופיינו הידרוג'לים מרוכבים מחקי עצב שניתן להשתמש בהם כדי לחקור ולהפיק תועלת מההתנהגות הפרו-רגנרטיבית של תאי גזע שמקורם בשומן לתיקון פגיעות בחוט השדרה.

פיתוח טיפולים קומבינטוריים לפגיעות בחוט השדרה באמצעות העברת תאי גזע

למדו כיצד ליצור מודל פגיעת חבלה בעכברים ולהשתיל תאי גזע עצבית מסומנים ב-PKH 26. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר תאים לאחר השתלה וחקר פוטנציאל הריפוי בפגיעות חוט השדרה.

השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של Contusive פגיעה בחוט השדרה

גלה סרטונים נוספים