השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של Contusive פגיעה בחוט השדרה

המטרה הכוללת של הליך זה היא לתאר בפירוט מודל חבלה של פגיעה בחוט השדרה בעכברים, ואחריו השתלה של תאי גזע עצביים. זה מושג על ידי תיוג ראשוני לאחר המוות, תאי מבשר עצביים או NPCs PM עם העוקב החיוני PKH 26. לאחר מכן, מבצעים חתך גבי על העכבר וחוט השדרה נחשף.

לאחר מכן נעשה שימוש באופק אינסופי או במכשיר פגיעה IH ליצירת נגע בחוט השדרה. לבסוף, ה-PKH 26 המסומן PM ו-PCs מוזרקים לווריד הזנב של העכבר. בסופו של דבר, עוקבים אחר גורלם של PKH 20 מושתל בשעה 18:00 ומחשבים אישיים באתר הנגע.

מודל הפגיעה משכפל את האדם שנפגע בחוט השדרה. הפגיעה המכנית הראשונית מלווה בניוון משני מתקדם שבו נחקר טיפול תאי ותרופתי. היישומים המתוארים עשויים לספק בסיס מתודולוגי להשגת תובנות נוספות על האמונה.

השראת תאי גזע המושתלים בחוט השדרה תוך כדי ניוון ואירועים דלקתיים. מי שידגים את הנגע יהיה ד"ר טוני לאג'ה לונגו, דוקטורנט במעבדה. בעוד שהזרקת הזנב תבוצע על ידי ד"ר אצ'ה, מדובר בפוסט-דוקטורנט במעבדה, החל מתאי גזע עצביים העומדים בקריטריונים כמתואר בפרוטוקול הטקסט.

Resus משהה את התאים לריכוז של אחד כפול 10 עד ששת התאים לכל 150 מיקרוליטר. הכן לפחות 1.2 כפול 10 לששת התאים לכל עכבר כדי שיהיו מספיק תאים להעמסת הפיפטה. בעזרת מדיום תאי גזע עצביים, שטפו את התאים שלוש פעמים בבקבוקון חרוטי של 10 מיליליטר, וסובבו במהירות של 500 פעמים G במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר כדי לגלול את התאים.

לאחר כל שטיפה, לפני ספירת הסחיטה הסופית, התאים לאחר הסיבוב, שואבים את הסופרנטנט, ומשאירים כ-25 מיקרוליטר נוזל כדי למנוע שאיבת תאים כלשהם. לאחר מכן, הכינו תרחיף שני X על ידי הוספת מיליליטר אחד של מדלל C לחיך התא והשתמשו בפיפטינג עדין כדי להשעות אותו מיד. לפני הצביעה, הכינו תמיסת צבע כפולה במדלל C על ידי הוספת ארבעה מיקרוליטר של תמיסת אתנול D PKH 26 למיליליטר אחד של מדלל C בצינור וערבבו היטב.

כדי להתפזר במהירות, הוסף את המיליליטר האחד של תרחיף שני תאי x למיליליטר אחד של שתי תמיסות XD וערבב מיד את הדגימה על ידי פיפטינג. לאחר הדגירה של תרחיף התאים למשך דקה עד חמש דקות, עצור את הצביעה על ידי הוספת נפח שווה של תמיסת BSA של 1% ב-HBSS ודגירה למשך דקה אחת. לאחר מכן צנטריפוגה את התאים ב 500 פעמים G למשך 10 דקות והסר בזהירות את הסופרנטנט.

השתמש ב-10 מיליליטר של מדיום שלם כדי להשעות מחדש את כדור התא להערכת התאוששות התאים, כדאיות התא ועוצמת הקרינה. צנטריפוגה התאים משליכים את הסופרנטנט ומוסיפים 10 מיליליטר של HBSS לגלולת התא. יש לשטוף פעמיים עם HBSS ולהשעות את התאים בתמיסה פיזיולוגית סטרילית.

לאחר הכנת אזור הניתוח ועכבר על פי פרוטוקול הטקסט, הנח את הצד הגבי של החיה כלפי מעלה על מחמם שקופיות כדי למנוע היפותרמיה במהלך הניתוח בעזרת אזמל, בצע חתך אנכי מעל אזור העניין מ-T 7 עד T 12 באמצעות מלקחיים. החזק את העור ואת כרית השומן השטחית שנמצאת בין המרווח בין התהליך החמישי לשישי של בית החזה תחת מיקרוסקופ סטריאו. ספרו את התהליך מתחת לכלי הדם כ-T שש, ואז עברו ל-T שבע.

לאחר מכן הניחו מעט מיסב מתחת לצד הגחון של העכבר כדי להגביר את עקמומיות עמוד השדרה והשתמשו במלקחיים כדי לחסום את עמוד השדרה כדי לשתק אותו. לאחר מכן, השתמש באזמל כדי לחתוך את הפרה של שרירי החוליות באופן דו-צדדי מ-T 7 עד T 10 ברמת החוליות עד שהמשטח הגבי של הלמינה יוצר קשר עם קצה האזמל. לאחר מכן השתמש באזמל כדי לסמן את הצומת מ-T 7 ל-T 10 בגובה החוליה עד שהמשטח הגבי של הלמינה יוצר קשר עם קצה האזמל במרווח שבין ה-T שמונה ל-T תשע בליטות זעירות.

לאחר מכן השתמש במספריים מיקרו כדי לחתוך את הרקמה בין T שמונה ל-T תשע ו-T תשע ו-T 10. כעת השתמש ב-rongeur כדי להסיר את תהליך ה-T 9. חשוף את הצומת באמצעות מספריים מיקרו כדי לגרד בזהירות את שכבת השריר.

המשך עד לחשיפת העצם. השתמש במלקחיים כדי להסיר את השרירים מהלמינה ולפתוח רווח קטן בין החוליות. ואז הכנס בעדינות את המספריים המיקרו מתחת לעצם.

חותכים את הלמינה משני הצדדים ומשתמשים במלקחיים כדי להסיר אותה, וחושפים את הכבל. השתמש ב-ron jour כדי להסיר שברי עצם חופשיים או משוננים שנותרו מאחור. לאחר מכן הסר את החצי העליון של תהליך הגב T תשע

לאחר ביצוע פרוטוקול מכשיר הפגיעה IH, על פי ההנחיות בטקסט, השתמש בארבעה תפרים נספגים כדי לסגור את החתך על ידי כיסוי ראשון של חוט השדרה החשוף באתר הלמינה שהוסרה. הקפד לא לצבוט את השרירים הבסיסיים. השתמש בשניים או שלושה קליפסים רפלקסיים כדי לסגור את העור.

הזרקו שני מיליליטר מי מלח בגב התחתון תת עורי והניחו את העכבר בכלוב חם מראש על כרית חימום כדי להתאושש. לבצע הזרקת וריד זנב של תאים. השעו מחדש את התאים במבחנה וטענו 75 מיקרוליטר למזרק של 0.3 מיליליטר, וודא שאין בועות בהשעיית התאים.

כדי למנוע שקיעת תאים, שמור את המזרק במצב אופקי. הנח את העכבר מתחת למנורת החום כדי להרחיב את ורידי הזנב. לאחר מכן משוך בעדינות את העכבר לתוך המסנן כדי לדמיין את וריד הזנב הרוחבי, המופיע כקו כחול צר.

השתמש במקלון אלכוהול כדי לנקות את הזנב, וברגע שרואים את הווריד, תפוס את וריד הזנב בין האצבע האמצעית לאגודל של יד שמאל. חבלת ה-T 9 שהודגמה בסרטון זה גרמה לאובדן חולף של תפקוד הגפה האחורית שלוש פעמים 10 עד התאים החמישיים או PBS הוזרקו לווריד הזנב בשלוש זריקות שבוצעו 30 דקות, שש שעות ו-18 שעות לאחר הפציעה. כפי שמוצג כאן, תוך שבועיים-שלושה, PBS טיפל בפצועים, בעכברים השתפר ותפקוד הגפיים האחוריות הגיע לשלוש נקודות של קשקשי עכבר בסיסיים או עכברי BMS שטופלו ב-PM.NPCs, לעומת זאת, הראו התאוששות גבוהה יותר והגיעו ל-4.5 נקודות של BMS כפי שניתן לראות כאן, רוב ה-NPCs המושתלים המסומנים ב-PKH 26, הצטברו בשולי האשכולות היוצרים את הנגע.

זמן קצר לאחר מתן התרופה, התאים המושתלים נדדו לאורך קצוות הנגע ובאופן מפוזר יותר שבו הם התמיינו לנוירונים. ב-30 יום לאחר הנגע וההשתלה, גוף התא של NPCs PM גדל בגודלו וברוב התאים, תהליכים דמויי דנדריטי היו ברורים וכתם חיסוני מלא על ידי הנוגדנים הספציפיים למיפוי בעת קבלת הליך פרו זה, חשוב לזכור שכוחות גבוהים יותר עשויים להגביר את התמותה בבעל החיים עקב פציעות חמורות יותר. לפיכך, אנו מציעים להשתמש בפרדיגמת הנגע שלנו שלאחריה תהליך החלמה ניתן לשחזור יותר.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשיג מודל ניסיוני הניתן לשחזור של פגיעה טראומטית בחוט השדרה בעכבר באמצעות פגיעת האופק האינסופית.