Name: איתור של יקוציט האדם Antigen Biomarkers בסרטן שד ניצול הטכנולוגיה biosensor ללא תווית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: למד לזהות ביומרקרים של אנטיגן HLA בסרטן שד באמצעות טכנולוגיית ביוסנסור ללא תווית. שיטה זו מאפשרת סיווג מהיר של חולים לטיפולים אימונותרפיים מותאמים אישית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקרים אלה נתמכו בחלקם על ידי תאגיד הפיתוח של אבילין המספק שטח מעבדה ותמיכה בשכר ל-Experimmune, מרכז לפיתוח אימונותרפי במרכז למדעי הבריאות של אוניברסיטת טקסס טק וחיישני תהודה משולבים.

הצהרת אתיקה: דגימות רקמה ופלזמה אנושיות זיהו-דה התקבלו מהמרכז הרפואי הנדריק תחת מועצה לביקורת מוסדית אישרה פרוטוקול. 1. תוספת של Biotinylated נוגדן הערה: הניטור של שלב זה הוא אופציונאלי. ראה פרוטוקול חלופי אם לא ניטור. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג צלחות נגזרות מצופה avidin זמינות מסחרי (ראה חומרים וציוד טבלה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף נאגר מלוח פוספט 50 μl pH (PBS) 7.2 לבארות. הערה: Preincubate PBS על 28 מעלות צלזיוס כדי למזער משמרות תהודה קשורות טמפרטורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוכנת סורק המבדק פתוחה ובצעו את אשף ההתקנה כדי להגדיר את ההליך ניסיוני הכולל מבחר של כדורי סרק, סטנדרטים ודגימות בפריסת הצלחת, הגדרת טמפרטורה (28 ° C), מספר הסריקות לדקה (1), ואורכו של הניסוי ( 150 דק &#39;כדי להתאים לשלבי הכנה של). </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את צלחת assay מוכנה לסורק המבדק ללא תווית ולהתחיל בסריקה הראשונה. כאשר הסריקה הראשונה היא שלמה, בחר &quot;התייחסות עצמית כדי להתחיל&quot;. נקודת ההתחלה היא הקבוצה הראשונית של סריקות שנאספו בתחילת הניסוי. אם זה הקריאה הראשונה בוצעה על הצלחת הספציפית הזה, לאפשר הסורק לרוץ לאזן טמפרטורה ולמנוע סחף בתחילת מחקר. ראה איור 2 לצילום מסך של בסיס ואחריו תוספת מדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תחילת המחקר התייצבה, או לפחות 5 סריקות, להשהות את הקריאה ולהוציא את הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר PBS על ידי הצפת השוק בכיור ולהוסיף נוגדן biotinylated 50 RL21A μl ב[ 10 מיקרוגרם / מיליליטר בpH PBS 7.2] לכל אבל בארות שליטה על הצלחת. הוסף 50 μl PBS לבארות שליטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצלחת בחזרה לתוך סורק המבדק ולחדש את הקריאה עד שהגיעה לרוויה, כ -1.5 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשהות את הקריאה ולהוציא את הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף<html> צלחת 3 פעמים עם 200 μl / גם מלוח Tween פוספט שנאגרו + 0.05% 20 (PBST) ואחריו 3 שטיפות עם 200 μl / גם PBS pH 7.2. חזור עם PBS. הקש PBS העודף מצלחת על מגבות נייר לפני המעבר לשלב הבא. הערה: ניתן לבצע צעד זה על מכונת כביסה צלחת אוטומטית או לשטוף את הצלחת 3 פעמים עם 200 PBST μl על ידי השלכת נוזל לתוך כיור והחלפת PBST עם טפטפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 50 μl pH 7.2 PBS לכל הבארות הפעילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצלחת בחזרה לתוך סורק המבדק ולחדש את הקריאה לפקח תהודת פוסט-לשטוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפסיק לקרוא ולהוציא את הצלחת. </li></ol> פרוטוקול חלופי לשלב 1: <ol start="13" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף נוגדן biotinylated 50 RL21A μl ב[ 10 מיקרוגרם / מיליליטר PBS] לכל הבארות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה בטמפרטורת חדר למשך 1.5 שעות או הלילה ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הצלחת 3 פעמים עם 200 μl / גם אחרי PBST על ידי 3 שטיפות עם 200 μl / גם PBS כמו בשלב 1.9. </li></ol>jove_title &quot;&gt; 2. תוספת של חומר אנליטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את PBS ולהוסיף 50 μl לכל טוב של חיץ assay המתאים. עבור assay זה, סרום אנושי רגיל זמין מסחרי שימש 01:20 מדולל PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוכנת סורק המבדק פתוחה ובצע את אשף ההתקנה להגדיר הליך ניסיוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצלחת לתוך סורק המבדק ולהתחיל בנקודת ההתחלה לקרוא. אם זה הקריאה הראשונה בוצעה על הצלחת הספציפית הזה, לאפשר הפעלת הסורק לאזן טמפרטורה ולמנוע סחף בתחילת מחקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תחילת המחקר התייצבה, או לפחות 5 סריקות, להשהות את הקריאה ולהוציא את הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את חיץ assay מהבארות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקרות ספייק עם HLA * 02: 01 מונומר נושאים רלוונטי (FLSL) או פפטידים לא רלוונטיים (SLLV, YLEV, או KVL) בריכוזים הנע בין [.625-10 מיקרוגרם / מיליליטר] במאגר assay. הוסף 50 μl של סטנדרטים לבארות שליטה בצלחת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 50 μl של אנליטי במאגר assay לדוגמאבארות של הצלחת. עבור assay זה, ממוסמר סרום אנושי זמין מסחרי היה בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצלחת בחזרה לתוך סורק המבדק ולחדש את הקריאה עד שהגיעה לרוויה, כ 30-60 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשהות את הקריאה ולהוציא את הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הצלחת 3 פעמים עם 200 μl / גם אחרי PBST על ידי 3 שטיפות עם 200 μl / גם PBS כמו בשלב 1.9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף חוצץ assay 50 μl לכל הבארות הפעילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצלחת בחזרה לתוך סורק המבדק ולחדש את הקריאה לפקח תהודת פוסט-לשטוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפסיק לקרוא ולהוציא את הצלחת. הערה: חיץ assay יכול להיות PBS, תקשורת ותרבות רקמות, או בסרום אנושי בדילול 01:20 בPBS בהתאם למטרה של assay. </li></ol> ניתוח 3. נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח באמצעות תוכנת סורק המבדק או לייצא קבצי נתונים גולמיים לתוכנת ניתוח סטטיסטית מועדפת. תוכנת סורק המבדק באופן אוטומטי את העקומה מחייבת המבוססת עלפריסת צלחת סיפקה במהלך התקנה ניסיונית. הערה: אם אינך משתמש בתוכנת סורק המבדק לניתוח, בצע את השלבים 3.2-3.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסר תחילת המחקר וביקורת שלילית מכל נקודת נתונים שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את הממוצע וסטיית התקן לבארות לשכפל בכל נקודת זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור גרף של העקומה מחייבת או נתונים נקודת סיום בחרו לגרפים בר. </li></ol>

<ol><li>Shastri, N., Schwab, S., Serwold, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Producing+nature%27s+gene-chips%3A+the+generation+of+peptides+for+display+by+MHC+class+I+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Producing nature's gene-chips: the generation of peptides for display by MHC class I molecules.</a> Annu Rev Immunol. 20, 463-493 (2002).</li>
<li>Peaper, D. R., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+MHC+class+I+assembly+and+peptide+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of MHC class I assembly and peptide binding.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 343-368 (2008).</li>
<li>Hawkins, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+HLA-presented+fragment+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+is+a+therapeutic+target+for+invasive+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">An HLA-presented fragment of macrophage migration inhibitory factor is a therapeutic target for invasive breast cancer.</a> J Immunol. 186 (11), 6607-6616 (2011).</li>
<li>Verma, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TCR+mimic+monoclonal+antibody+targets+a+specific+peptide%2FHLA+class+I+complex+and+significantly+impedes+tumor+growth+in+vivo+using+breast+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">TCR mimic monoclonal antibody targets a specific peptide/HLA class I complex and significantly impedes tumor growth in vivo using breast cancer models.</a> J Immunol. 184 (4), 2156-2165 (2010).</li>
<li>Verma, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TCR+mimic+monoclonal+antibodies+induce+apoptosis+of+tumor+cells+via+immune+effector-independent+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">TCR mimic monoclonal antibodies induce apoptosis of tumor cells via immune effector-independent mechanisms.</a> J Immunol. 186 (5), 3265-3276 (2011).</li>
<li>Bassani-Sternberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+plasma+HLA+peptidome+as+a+potential+source+for+cancer+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Soluble plasma HLA peptidome as a potential source for cancer biomarkers.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (44), 18769-18776 (2010).</li>
<li>Hickman, H. D., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mining+the+plasma+immunopeptidome+for+cancer+peptides+as+biomarkers+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mining the plasma immunopeptidome for cancer peptides as biomarkers and beyond.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (44), 18747-18748 (2010).</li>
<li>Neethling, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+vaccine+potency+using+TCRmimic+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Assessing vaccine potency using TCRmimic antibodies.</a> Vaccine. 26 (25), 3092-3102 (2008).</li>
<li>Mittendorf, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trial+results+of+the+HER-2%2Fneu+%28E75%29+vaccine+to+prevent+breast+cancer+recurrence+in+high-risk+patients%3A+from%5BTitle%5D)+AND+%22US+Military+Cancer+Institute+Clinical+Trials+Group+Study+I-01+and+I-02.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Clinical trial results of the HER-2/neu (E75) vaccine to prevent breast cancer recurrence in high-risk patients: from.</a> US Military Cancer Institute Clinical Trials Group Study I-01 and I-02. Cancer. 118 (10), 2594-2602 (2012).</li>
<li>Winter, H., Fox, B. A., Ruttinger, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+of+cancer+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Future of cancer vaccines.</a> Methods Mol Biol. 1139, 555-564 (2014).</li>
<li>Magnusson, R., Wawro, D., Zimmerman, S., Ding, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resonant+photonic+biosensors+with+polarization-based+multiparametric+discrimination+in+each+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors%22%5BJournal%5D)">Resonant photonic biosensors with polarization-based multiparametric discrimination in each channel.</a> Sensors. 11 (2), 1476-1488 (2011).</li>
<li>Kaja, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+novel+biomarkers+for+ovarian+cancer+with+an+optical+nanotechnology+detection+system+enabling+label-free+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Detection of novel biomarkers for ovarian cancer with an optical nanotechnology detection system enabling label-free diagnostics.</a> J Biomed Opt. 17 (8), 081412-081411 (2012).</li>
<li>Magnusson, R., Wang, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+principle+for+optical+filters%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Phys.+Lett%22%5BJournal%5D)">New principle for optical filters.</a> Appl. Phys. Lett. 61, 1022-1024 (1992).</li>
<li>Wawro, D., Tibuleac, S., Magnusson, R., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+fiber+endface+biosensor+based+on+resonances+in+dielectric+waveguide+gratings%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+SPIE%22%5BJournal%5D)">Optical fiber endface biosensor based on resonances in dielectric waveguide gratings.</a> Proc. SPIE. 3911, 86-94 (2000).</li>
<li>Altman, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+analysis+of+antigen-specific+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Phenotypic analysis of antigen-specific T lymphocytes.</a> Science. 274 (5284), 94-96 (1996).</li>
</ol>

המחברים, דברה Wawro Weidanz ורוברט מגנוסון, הם בהתאמה מנכ&quot;ל ומנהל טכנולוגיה ראשית בIncorporated חיישני התהודה, אשר מייצר את צלחות קורא וassay צלחת המבדק משמשות במאמר זה.

השיטה המתוארת במסמך זה מציגה מערכת הקרנת סמן ביולוגי לאבחון הסרטן שיאפשר איתור מהיר של מתחמי פפטיד / HLA מסיסים בדגימות סרום, פלזמה, שתן או רוק מטופל בתפוקה גבוהה 96 או בפורמט 384 גם. מערכת assay זה ניצול קולט תא T מחקה נוגדנים חד-שבטיים ומערכת זיהוי ללא תווית חותכת את זמן ניתוח לשעה פחות מ 1 לעומת 3.5 שעות על ידי ELISA הקונבנציונלי. גישת תפוקה גבוהה זו מאפשרת ריבוד מהיר של חולים לניסויים קליניים לחיסוני סרטן טיפוליים או תרופות ביולוגיות. שיטות קיימים לגילוי מטרות מחלה אלה דורשים טיהור זיקה וHPLC-MS / MS של דגימות מטופל, תהליך שגוזל זמן ומסורבל. למרות ששיטה זו היא נוחה לטכניקות ELISA קונבנציונליות, קיים חשש כי ריאגנטים זיהוי משניים כגון נוגדני microglobulin אנטי-β2 יכולים לשנות את המבנה של HL המתהווהמולקולה ומעכבות מחייבת זיהוי הגבלת TCRm. זיהוי ללא תווית מקל חששות אלה. הליך זה יכול להיות שונה לשימוש במערכות ללא תווית אחרות כגון מערכת תהודת plasmon פני השטח. עם זאת, זה יפחית באופן משמעותי את יכולות התפוקה גבוהות יותר בהשוואה למערכת המבדק שימשה במחקר זה. פרוטוקול זה יכול להיות שונה באופן יעיל לגילוי של סמנים ביולוגיים שאינו HLA בסרום ופלזמה חולה עם דבקות בכמה שלבים קריטיים. ניטור של תהליך ציפוי נוגדן הראשוני מומלץ לאופטימיזציה של פני השטח, כמו &lt;משמרת 200 בערב צפוי לגרום לאות נמוכה לצעד זיהוי שלאחר מכן. קוראים תחילת המחקר ולאחר שטיפה-שימושיים לניתוח נקודת הסיום כשפע של חלבונים בסרום עלול להסוות מחייב של אנליטי ריכוז נמוך. לבסוף, שינויי הטמפרטורה של דגימות יכולות לגרום גם וריאציה גם ל. מומלץ כי כל הדגימות מראש מודגרותד בקר טמפרטורת יחידת biosassay ללא תווית להיות מוגדר ב2-3 מעלות צלזיוס מעל לטמפרטורת חדר. יש לאפשר דגימות בקירור מספיק זמן כדי להגיע לטמפרטורת ההפעלה. שינויים עתידיים של פרוטוקול זה יכללו ריבוב של TCRm על פני השטח הצלחת. מערכת המבדק היא כיום מקובל תצפית של בארות בצפיפות של לפחות 8-Plex. על ידי החדרת 4-8 TCRm היטב כל אחד, בכל כרכי מדגם בדיקה מופחתים ומאפשר איסוף נתונים מורכבים יותר ויותר למטופל. יכולת זו יכולה עוד ליידע את החולים לגבי אפשרויות טיפוליות.

דגימות הכיתה אנטיגן אני יקוציט האדם (HLA) פפטידים של 8-11 חומצות אמינו באורך נובעות משפלת proteasomal של רפרטואר החלבון תאיים ומציג פפטידים אלה על פני השטח של כל תא גרעיני 1,2. המורכב HLA הוא &quot;הסמן הביולוגי של הטבע&quot;, המציין את בריאותו של כל תא (איור 1) לימפוציטים מסוג T במחזור ציטוטוקסיות (CTL). הכרה בתוצאות פפטידים מחלה קשורה בחיסול של התא הפוגע בCTL. לפיכך, התגובה החיסונית אדפטיבית היא יעילה מאוד במניעת זיהום וגידול ויראלי. עם זאת, המערכת החיסונית מפעילה לחץ אשר לעתים קרובות מקדם בחירה לאיתור וירוסים או גידול מסוגל להתחמק תגובת CTL יעילה. קולט T-cell מחקה (TCRm) נוגדנים חד-שבטיים (מבז) אשר מזהה פפטיד / HLA-ספציפיים * 02: 01 מתחמים כגון אלה נגזרים מחלבונים הקשורים לסרטן השד, גורם מעכב הגירת מקרופאג (MIF19-27) 3 וNY-ESO 157-165-1, לאפשר זיהוי והרס של תאי סרטן השד בהעדר אנטי גידול יעיל CTL תגובת 4,5. עבודת נציג זה מתמקדת בHLA-A * 0201 המולקולה, אשר באה לידי ביטוי בשיעור של עד 30% מהאוכלוסייה. עם זאת, זיהוי של קומפלקסי HLA / פפטיד רלוונטיים אחרים, ואחריו את הייצור של TCRm מאפשר הפיתוח חיסוני ממוקדים ואבחון מחלה נלווית, הרחבת השירות של עבודה זו לאוכלוסייה רחבה בהרבה. חלק ממתחמי פפטיד / HLA מחויבים לתא השטח משתחרר לפלזמה. בשל האופי המורכב ביותר של פפטיד / בריכות HLA, שיטות קיימים לכרייה immunopeptidome לסמנים ביולוגיים HLA נלווים נמצאים זמן רב. תהליך זה דורש טיהור הזיקה של HLA המסיס מפלזמה, הפרדה של פפטידים הקשורים HLA על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה שלב הפוך(RP-HPLC) ורצף הפפטיד על ידי ספקטרומטריית טנדם מסה (MS / MS) 6,7. למרות שתהליך זה הוא אפשרות מעשית לגילוי מטרות טיפוליות חדשניות, זה תהליך מסורבל ככלי אבחון לוויה למטרות הקשורות HLA כבר בחיסון הטיפולי או הצינור ביולוגי 8-10. TCRm מכוון נגד מטרות אלה מספקות כלים לפיתוח אבחון לוויה מהיר שנועדו stratifying חולים לניסויים קליניים רלוונטיים ולספק אפשרויות טיפוליות מושכלות יותר. בעבודה זו, מערכת הקרנת סמן ביולוגי פריצת דרך לאבחון הסרטן מוצגת אשר מנצלת TCRm ומערכת המבדק ללא תווית העוקבת אחר אינטראקציות ביולוגיות בצעדי עיבוד מינימאליים. מערכת המבדק ללא תווית מבוססת על שיטה, אשר מנצלת את אפקט תהודה המודרך במצב (GMR) שמתרחש בתיל מוליך גל דיאלקטרי 11-14. כאשר אנשי קשר בפס רחב אור דיפרקטיביתצורם בלוחות דרושים למערכת זו, שני אורכי גל מסוימים באים לידי הביטוי. האינטראקציה מחייבת בין קולט משותק ויגנד הוא פיקוח בזמן אמת על ידי מעקב משמרת גל התהודה עם מנתח ספקטרום 12. פסגות תהודה נפרדות להתרחש אירוע TE (וקטור חשמלי רגיל למטוס של שכיחות) וTM (וקטור מגנטי רגיל למטוס של שכיחות) מצבי קיטוב מתן נקודות נתונים מרובים שעלול להגדיל את דיוק זיהוי 11,14. שימוש בצלחות מראש רגישות-נוגדן במערכת assay ללא תווית זו, זמן ריצת assay עם ניתוח הנתונים הוא כ -45 דקות. בנוסף, ניתן נחקרו דגימות חולים מרובות בפורמט 96 או 384 גם, יתרון ברור על פני פורמט המבוסס HPLC-MS / MS.

<table><tbody><tr><td>מערכת גילוי ביו-מבחן ללא תוויות של ResoSens</td><td>חיישני תהודה משולבים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Avidin צלחות ביונטיות רגישות 96 בארות</td><td>חיישני תהודה משולבים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוכנת ResoVu</td><td>חיישני תהודה משולבים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RL21A TCRm ביוטיניל mAb&nbsp;</td><td>PureMHC, LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RL9A TCRm ביוטיניל mAb&nbsp;</td><td>PureMHC, LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FLSL HLA-A*02:01 מונומר&nbsp;</td>רצף פפטידים מלא <td>Experimmuno</td><td></td><td>: FLSELTQQL</td></tr><tr><td>SLLV HLA-A*02:01 מונומר&nbsp;</td>רצף פפטידים מלא <td>Experimmuno</td><td></td><td>: SLLMWITQV</td></tr><tr><td>YLEV HLA-A*02:01 מונומר&nbsp;</td>רצף פפטידים מלא <td>Experimmuno</td><td></td><td>: YLEPGPVTV</td></tr><tr><td>KVL HLA-A*02:01 מונומר&nbsp;</td>רצף פפטידים מלא <td>של Experimmuno</td><td></td><td>: KVLEYVIKV</td></tr><tr><td>Pooled Normal Human Serum&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>BP2657100</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231 Cell Supernatant</td><td>ATCC</td><td>HTB-26</td><td>תאים הגדלים ב-IMDM, 10% FBS ו-1% penn/strep. סופרנטנטים שנקטפו מתרביות קונפלואנט של 3 ימים.</td></tr><tr><td>השינוי של Iscove של Dulbecco's Medium (IMDM)</td><td>Life Technologies</td><td>12440-053</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Life Technologies</td><td>10082-147</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>15070-63</td><td></td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד</td><td>ThermoFisher</td><td>5318-1</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח (PBS)</td><td>ThermoFisher</td><td>BP665-1</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח + 0.05% טווין 20 (PBST)</td><td>ThermoFisher</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>2,2'-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]-מלח דיאמוניום (ABTS)</td><td>ThermoFisher</td><td>37615</td><td></td></tr><tr><td>ארנב אנטי-אנושי ובטא; 2 מיקרוגלובולין&nbsp;</td><td>Dako</td><td>A0072</td><td></td></tr><tr><td>Peroxidase מצומד עז נגד ארנב IgG&nbsp;</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>111-035-144</td><td></td></tr><tr><td>Nunc&nbsp; מיקרו-פלטות</td><td>ThermoFisher</td><td>439454</td><td></td></tr><tr><td>Synergy 2 קורא מיקרו-פלטות</td><td>Biotek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Immpress Reagent Kit</td><td>וקטור</td><td>MP-7402</td><td></td></tr><tr><td>וקטור DAB Immpact</td><td></td><td>SK-4105</td><td></td></tr><tr><td>המטוקסילין QS</td><td>וקטור</td><td>H3403</td><td></td></tr><tr><td>IgG2a</td><td>MP BioMedicals</td><td>50328</td><td></td></tr><tr><td>IgG2b</td><td>MP BioMedicals</td><td>50330</td><td></td></tr><tr><td>anti-HLA-A2 (BB7.2)</td> <td>Experimmune</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism 5</td><td>Graphpad</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

איתור של יקוציט האדם antigen biomarkers בסרטן שד ניצול הטכנולוגיה biosensor ללא תווית

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

על פי האגודה האמריקנית לסרטן, יותר מ -200,000 נשים יאובחנו עם סרטן שד פולשני בכל שנה וכ -40,000 ימותו מהמחלה. כיתת אנטיגן לויקוציטים האנושי (HLA) אני דגימות פפטידים הנגזרים משפלת proteasomal של חלבונים תאיים ומציג קטעים אלה על פני התא לחקירה על ידי לימפוציטים במחזור T ציטוטוקסי (CTL). דור של לחקות קולט T-cell (TCRm) נוגדנים חד-שבטיים (מבז) שיכיר בסרטן השד פפטיד / HLA-ספציפי * 02: 01 מתחמים כגון אלה נגזרים מגורם הגירת מקרופאג מעכב (MIF 19-27) וNY-ESO- 1 157-165 מאפשר זיהוי והרס של תאי סרטן השד בהעדר תגובת CTL אנטי גידול יעיל. מתחמי HLA / פפטיד אני כיתה שלמים הם מזילים על ידי תאי סרטן שד ומייצגים סמנים לסרטן שעשוי להיות רלוונטיים. בעבודה זו, מערכת הקרנת סמן ביולוגי פריצת דרך לטיפול בסרטן אבחוןs שילוב קולטן תא T נוגדנים חד-שבטיים לחקות בשילוב עם רומן, biosensor ללא תווית ניצול טכנולוגיית חיישן תהודה מודרכת במצב (GMR) מוצג. איתור של הסככה MIF / HLA-A * 02: 01 מתחמים בsupernatants תא מד&quot;א MB-231, זינקו בסרום אנושי, והפלזמה חולה הפגינה. ההשפעה על עבודה זו יכולה לחולל מהפכה ברפואה מותאמת אישית באמצעות פיתוח של אבחון מחלה נלווה עבור חיסוניים ממוקד.

סט נציג של ניסויים בוצע באמצעות TCRm, RL21A המאופיין היטב, נוגדן חד שבטי IgG2a עכברי שדווקא מכיר בפפטיד (MIF 19-27 או FLSL) בהקשר של HLA-A * 02: 01 מולקולה 3. מונומר מקור פפטיד / HLA, כמו גם מונומר HLA לא רלוונטי 15, שימש כדי להדגים את ההליך המתואר. איור 3 ממחיש את פורמט assay. RL21A הוא ספציפי למונומר FLSL / HLA עם תגובתיות צלב קטנה עם פפטיד האחר / HLA קומפלקסי 3. ייחוד זה סכם שימוש במערכת ללא תווית המבדק (איור 4). הרגישות של מערכת המבדק ללא תווית לצורך הניסוי הזה היא בטווח של ננו-מולר הנמוך כפי שנקבע על ידי טיטרציה של נוגדני RL21A על FLSL המשותק / מונומר HLA (איור 5). למרות שאות הרקע היא גדלה באופן משמעותי בדגימות סרום, זהזיהוי pecific של מונומר FLSL / HLA בסרום אנושי ממוסמר מושגת באיור 6 ומפל ריכוזים הוא בקלות להבחין בדוגמאות אלה. לבסוף, supernatants משורת תאי מד"א MB-231, הראה בעבר להציג את FLSL / HLA-A * 02: 01 המולקולה, מוצגים להכיל מונומר FLSL המסיס משתמש בפלטפורמה זו תווית חופשית assay (איור 7). בנוסף הבא של מונומר FLSL / HLA מגביר את האות בRL21A (איור 7). בשל הרגישות של המערכת, גם לווריאציה גם כוללים משמרות תהודה שליליות יכול להתרחש כתוצאה מתנודות טמפרטורה כפי שניתן לראות כפונקציה של סטיות תקן באיורים 4 ו -5. ניתן להפחית באופן דרמטי על ידי וריאציות אלה מראש דגירה של כל הדגימות וקורא צלחת המבדק בטמפרטורה לחרוג מעט מטמפרטורת חדר (כלומר, 28 ° C). באיור 8, בקצרה, 96"טוב צלחות קלקר היו מצופות [10 מיקרוגרם / מיליליטר] של RL21A לשעה 2 בטמפרטורת חדר, נשטפה עם PBST, חסמה עם 0.5% חלב דל שומן, לשטוף עם PBST, וטופחו במשך 2 שעות בטמפרטורת חדר עם דילולים סדרתי של מונומר FLSL HLA בסרום אנושי רגיל מדולל 1:10 ב PBS כדי ליצור עקומה סטנדרטית או פלזמה מטופל בדילול 1:10 ב PBS. הצלחת נשטפה עם PBST, מודגרות שעה 1 בטמפרטורת חדר עם ארנב אנטי אנושי microglobulin β2 [1: 5,000] כדי לזהות HLA שלם, ורחצתי בPBST. צלחות אז הודגרו למשך 30 דקות עם עז נגד הארנב IgG [1: 10,000] ורחצו עם PBST. זיהוי Colorimetric בוצע באמצעות ABTS (2,2'-Azinobis [חומצה 3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic] מלח -diammonium) מצע עם זמן דגירה 15 דקות ונצפו ב 405 ננומטר על קורא microplate. FLSL / HLA זוהה בשלוש דגימות מטופל. באיור 8B, RL.064 פלזמה החולה היה מדולל 01:20 בPBS ולאחר מכן להוסיףed לצלחת ופיקוח על הגלאי ללא תווית עבור 60 דקות. זיהוי ספציפי של מתחם FLSL / HLA בסרום המטופל הושג. מבחן t של הסטודנט בוצע באמצעות תוכנת גרפים ונתונים סטטיסטיים (p &lt;0.05). באיור 8C, קטעי רקמה הוכתמו ב1 מיקרוגרם / מיליליטר עם העכבר אנטי-HLA-A2 (BB7.2) כביקורת חיובית, RL21A, IgG2b וIgG2a בהתאמה בקרות שליליות. הצביעה זוהתה באמצעות ערכה אנטי עכבר זיהוי, DAB (diaminobenzadine), וQS hematoxylin מכתים גרעיני כפי שהורה על ידי היצרן. צביעה של רקמת גידול על ידי RL21A מאשרת מצגת של קומפלקסי FLSL / HLA. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig1highres.jpg"> איור 1:. מצגת אנטיגן סרטנית על ידי אנטיגן ויקוציטים האנושי אני כיתת שינוי סרטני הוא הפרעה תוך-תאית. intracellul מדגם HLAחלבוני ar ולגלות שינויים הקשורים לסרטן על פני התא. CTL וTCRm מסוגל לזהות תאים סרטניים באמצעות מתחמי HLA-פפטיד ברורים לתאים אלה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig2highres.jpg"> איור 2:. צילום מסך של רכישת נתונים בתוכנת סורק המבדק דוגמא של רכישת נתונים המציגה את הבסיס הראשוני סריקה ואחריו תוספת נוגדני RL21A לצלחת מצופה 10 מיקרוגרם / מיליליטר של מורכב FLSL / HLA. ריכוזים של נוגדנים הם ציינו. כל שורה מייצגת בודד פיקוח טוב לאורך זמן. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig3highres.jpg"> איור 3:. פורמט Assay איור של נוגדנים משותק על פני השטח צורמים דיפרקטיבית של rel צלחת assay הלכידהפפטיד evant / מתחמי HLA בפתרון. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig4highres.jpg"> איור 4: ספציפי של RL21A לFLSL / HLA מורכב הפגנה של הספציפיות של TCRm RL21A biotinylated למונומר הרלוונטי HLA (FLSL) בהשוואה למונומר לא רלוונטי HLA (YLEV, SLLV, וKVL).. Biotinylated RL21A TCRm [10 מיקרוגרם / מיליליטר] היה משותק על פני השטח צלחת assay avidin מצופים וזיהוי בוצע באמצעות מונומר ללא תווית רלוונטית או לא רלוונטי HLA [10 מיקרוגרם / מיליליטר] בPBS. RL21A היה ספציפי לקומפלקס FLSL / HLA. דו-כיווני ANOVA בוצע באמצעות תוכנת גרפים ונתונים סטטיסטיים (p &lt;0.001). <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig5highres.jpg"> איור 5:. כריכת רגישות של RL21A לפפטיד / המורכב HLA המקור שלה איור של detectiעל גבול ומחייב רגישות של RL21A למתחם FLSL / HLA. Biotinylated HLA מונומר FLSL [10 מיקרוגרם / מיליליטר] היה משותק על פני השטח צלחת assay וRL21A ללא תווית התווסף לצלחת בדילולים סידוריים בPBS כפי שצוין. זיהוי עבור מערכת זו היה בטווח של ננו-מולר הנמוך. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig6highres.jpg"> איור 6: איתור של מתחמי HLA בממוסמר אדם סרום הפגנה של זיהוי של HLA בסרום אדם.. Biotinylated RL21A TCRm [10 מיקרוגרם / מיליליטר] היה משותק על פני השטח צלחת assay avidin המצופים. סרום אדם נורמלי ונקווה ממוסמרים עם רלוונטי (FLSL) או מונומר HLA לא רלוונטי (SLLV) היה מדולל 01:20 בPBS ולאחר מכן הוסיף לצלחת ופיקוח על הגלאי ללא תווית עבור 60 דקות. זיהוי ספציפי של מתחם FLSL / HLA בסרום אנושי הושג. באופן כללי, אות רקע (מונומר SLLV לא רלוונטי) היא גבוהה אה לדגימות סרום מדוללים בהשוואה לanalytes מטוהר בPBS (ראה איור 4). דו-כיווני ANOVA בוצע באמצעות תוכנת גרפים ונתונים סטטיסטיים (p &lt;0.0001). <img alt="איור 7" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig7highres.jpg"> איור 7:. מתחמי HLA מסיסים אותרו בsupernatants תרבית תאי סרטן שד היכולת לזהות HLA בsupernatants שד התא סרטני הוא הוכיח. Biotinylated RL21A TCRm, RL9A TCRm (בקרה שלילית), ושליטת אלוטיפ היו משותקות על פני השטח צלחת assay. ממוסמר [5 מיקרוגרם / מיליליטר] וsupernatants תרבית תאי unspiked מד"א-231 נוספו וכריכה היה במעקב במשך 60 דקות על הגלאי ללא תווית. FLSL ומונומר SLLV HLA ממוסמר דגימות מייצגות בקרות חיוביות לRL9A וRL21A מחייב. כיוון אחד ANOVA בוצע באמצעות תוכנת גרפים ונתונים סטטיסטיים (p &lt;0.0001). ogether.within-page = "תמיד"&gt; <img alt="איור 8" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig8highres.jpg"> איור 8:. זיהוי ספציפי של מתחמי FLSL / HLA בדגימות מטופל () אנזים מסורתי המקושר immunosorbent Assay (ELISA) נוצל כדי לזהות מתחמים ספציפיים FLSL / HLA בפלזמת מטופל. (ב) Biotinylated RL21A TCRm או IgG2a [10 מיקרוגרם / מיליליטר] היה משותק על צלחת assay avidin. (ג) רקמת גידול שד מRL.064 החולה הייתה מוכתמת כפי שתוארה לעיל 3 לאמת מצגת גידול של מתחמי FLSL / HLA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52159/52159fig8large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

מתחמי HLA / פפטיד אני כיתה שלמים הם מזילים על ידי תאים סרטניים, המייצגים את סמן ביולוגי לסרטן רלוונטי פוטנציאלי. ניצול טכנולוגיה ללא תווית חיישן וקולט T-cell מחקה נוגדנים חד-שבטיים, זיהוי של הסככה MIF / HLA-A * 02: 01 מתחמים בsupernatants תא מד&quot;א MB-231, זינקו בסרום אנושי, ופלזמה חולה הפגינה, המאפשרת פיתוח של סרטן רומן פלטפורמת אבחון.

איתור של יקוציט האדם Antigen Biomarkers בסרטן שד ניצול הטכנולוגיה biosensor ללא תווית

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא למדוד אנטיגן לויקוציטים אנושיים או אנטיגנים גידוליים הקשורים ל-HLA בנוזלי המטופלים לצורך ריבוד של חולים לאימונותרפיה רלוונטית. זה מושג על ידי קיבוע ראשון של קולטן תאי T המחקה נוגדנים, הידועים בשם TCRM על פני ה-MICROPLATE. השלב השני הוא הוספת דגימת המטופל יחד עם דילול סדרתי של מונומרים HLA פפטידים מטרה ליצירת עקומה סטנדרטית, המאפשרת כימות של אנטיגן המטרה בדגימות חולים.לאחר מכן, קשירת אנטיגן המטרה לנוגדנים במערכת הבדיקה הביולוגית של התווית החופשית מנוטרת עד להגעה לשיווי משקל. השלב האחרון הוא לנתח את הנתונים המתקבלים על ידי שימוש בעקומה הסטנדרטית כדי לכמת את כמות אנטיגן המטרה בדגימות חולים. בסופו של דבר, טכנולוגיית חיישנים ביולוגיים ללא תוויות משמשת לאיתור סמנים ביולוגיים של סרטן בדגימות חולים.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני טכניקות קיימות כגון lc MSS, הוא זיהוי מהיר של תפוקה גבוהה של אנטיגנים הקשורים ל-HLA. זה מאפשר ריבוד מהיר של חולי סרטן לשיטות טיפול מכיוון שהוא משמש כפלטפורמה לזיהוי סמנים ביולוגיים. בעוד ששיטה זו קשורה לבדיקת סמנים ביולוגיים לסרטן, המערכת למעשה ישימה ליישומים רבים כולל בדיקות מבוססות תאים, סינון היברידי של אימונופנוטיפ או סינון של ספריות מולקולות קטנות.הרעיון לשיטה זו עלה לנו לראשונה כאשר פיתחנו נוגדן טיפולי המחקה קולטן תאי T. שאלנו את עצמנו, כיצד נזהה מטופלים שיפיקו את התועלת הגדולה ביותר מסוג זה של טיפול? מי שתדגים את ההליך הזה תהיה קריסטן דאל, סטודנטית לתואר שני בביוטכנולוגיה שעובדת במעבדה שלי.התחל בדגירה מוקדמת של מי מלח חוצץ פוספט או PBS ב-28 מעלות צלזיוס כדי למזער את שינויי התהודה הקשורים לטמפרטורה. הוסף 50 מיקרוליטר של מי מלח חוצץ פוספט או PBS pH 7.2 לבארות של לוחות מצופים נגזרת של avadon. לאחר מכן, פתח את תוכנת הסורק הביולוגי.עקוב אחר אשף ההתקנה כדי להגדיר את הליך הניסוי, הכולל בחירת ריקים, תקנים ודגימות בפריסת הצלחת, הגדרת טמפרטורה, מספר סריקות לדקה ואורך הניסוי. לאחר מכן הכנס את לוחית הבדיקה המוכנה לסורק הבדיקה הביולוגית ללא התווית והתחל את הסריקה הראשונה. קו הבסיס הוא סט הסריקות הראשוני שנאסף בתחילת הניסוי.אם זו הקריאה הראשונה שבוצעה על צלחת ספציפית זו, אפשר לסורק לפעול מספיק זמן כדי לאזן את הטמפרטורה ולמנוע סחיפה בקו הבסיס. לאחר התייצבות קו הבסיס או לאחר חמש סריקות לפחות, השהה את הקריאה והוצא את הצלחת. זרוק את ה-PBS והוסף 50 מיקרוליטר של RL 21, נוגדן ביוטיניל לכל הבארות בצלחת.לאחר מכן הוסף 50 מיקרוליטר PBS לבארות הבקרה. לאחר מכן, הכנס את הצלחת בחזרה לסורק הבדיקה הביולוגית והמשך לקרוא עד להגעה לרוויה. לאחר כ -1.5 שעות, השהה את הקריאה והוצא את הצלחת.לאחר מכן שטפו את הצלחת שלוש פעמים עם 200 מיקרוליטר לבאר PBS בתוספת 0.05% טווין 20 או PBST. לאחר הכביסה עם שלוש שטיפות של 200 מיקרוליטר לבאר של PBS pH 7.2 ללא חומר ניקוי. הקש על PBS עודף מהצלחת על מגבות נייר לפני המעבר לשלב הבא.לאחר מכן, הוסף 50 מיקרוליטר PBS לכל הבארות הפעילות. לאחר מכן הכנס את הצלחת בחזרה לסורק הבדיקה הביולוגית והמשך לקרוא כדי לנטר את התהודה לאחר הכביסה. לאחר הקריאה, הפסק את הקריאה והוצא את הצלחת.כדי להוסיף את האנליט. הסר את ה-PBS והוסף 50 מיקרוליטר לבאר של מאגר בדיקה מתאים לבדיקה זו. סרום אנושי רגיל זמין מסחרית דולל מ-1 עד 20 ב-PBS.לאחר מכן, פתח את תוכנת הסורק הביולוגי ופעל לפי אשף ההתקנה. כדי להגדיר את הליך הניסוי, הכנס את הצלחת לסורק הבדיקה הביולוגית והתחל בקריאת קו הבסיס לאחר שקו הבסיס התייצב או לאחר חמש סריקות לפחות, השהה את הקריאה והוצא את הצלחת. לאחר מכן הסר את מאגר הבדיקה מהבארות.לאחר מכן העלה את הבקרות עם מונומר HLAA oh 2 0 1 הנושא פפטידים רלוונטיים או לא רלוונטיים בריכוזים הנעים בין 0.625 ל -10 מיקרוגרם למיליליטר במאגר הבדיקה. לאחר מכן הוסף 50 מיקרוליטר מהתקנים לבארות הבקרה של הצלחת. לאחר מכן, הוסף 50 מיקרוליטר של האנליט במאגר הבדיקה לבארות הדגימה של הצלחת.לצורך בדיקה זו, נעשה שימוש בסרום אנושי זמין מסחרית. הכנס את הצלחת בחזרה לסורק הבדיקה הביולוגית והמשך את הקריאה עד להגעה לרוויה כ-30 עד 60 דקות לאחר הרוויה, השהה את הקריאה והוצא את הצלחת. המשך לשטוף את הצלחת שלוש פעמים עם 200 מיקרוליטר לבאר PBST, ולאחר מכן שלוש שטיפות עם 200 מיקרוליטר לבאר PBS כמו קודם ואז הוסף 50 מיקרוליטר של מאגר בדיקה לכל הבארות הפעילות.כעת הכנס את הצלחת בחזרה לסורק הבדיקה הביולוגית והמשך לקרוא כדי לנטר את התהודה לאחר הכביסה לפני הפסקת הקריאה והוצאת הצלחת. לבסוף, נתח את הנתונים באמצעות תוכנת הסורק הביולוגי או ייצא קבצי נתונים גולמיים לתוכנת ניתוח סטטיסטית מועדפת. תוכנת הסורק הביולוגי מייצרת אוטומטית את עקומת הכריכה על סמך פריסת הלוח שסופקה במהלך ההתקנה הניסיונית.RL ביוטיניל 21 A-T-C-R-M או IgG two A היה משותק בבדיקת AVID AVIDAN תוצאות מייצגות מראות זיהוי של אנטיגן גידול המטרה F-L-S-L-H-L-A בדגימת פלזמה של מטופל בשיווי משקל ולאחר הכביסה. IgG 2 A משמש כבקרה עבור קטעי רקמת קשירה לא ספציפיים נצבעו בבקרה חיובית ובקרות שליליות. ועבור RL 21 צביעה של רקמת הגידול על ידי RL 21 A מאשרת הצגה של קומפלקסים F-L-S-L-H-L-A.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד למדוד סמנים ביולוגיים הקשורים ל-HLA בנוזלי המטופלים באמצעות קולטן תאי T המחקים נוגדנים, וניטור קשירת אנטיגן המטרה לנוגדנים במערכת הבדיקה הביולוגית ללא התווית. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לדגור את כל מאגרי הדגימה לפני השימוש כדי למנוע עליות טמפרטורה ולהשתמש במאגר הדגימה הנכון עבור כל שלב.

detection-human-leukocyte-antigen-biomarkers-breast-cancer-utilizing

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

לקטינים, מצומדות חרוזים פורוס הועסקו על HPLC. סטנדרטים Glycopeptide שימש שולטת חיוביים ושליליים. מאדים 14 מדולדל, טריפסין-מתעכל פלזמה האדם היה chromatographed ו flow-through (FT) וכן שברים מחויב שנאספו עבור ניתוחים ESI-LC-MS/MS. Glycopeptides היו מועשר בשבריר מחויב לעומת FT.

שיטה לקטינים HPLC להעשיר פפטידים סלקטיבי-glycosylated מ דגימות ביולוגיות מורכבות

מערכת מגנטית אפנון biosensing מנוצל במהירות, ברגישות פשוט לזהות מבחני ביולוגיים, כגון מולקולות דנ"א וחלבונים.

איתור מהיר של מבחני אחידים ביולוגית באמצעות מערכת מגנטית biosensing אפנון

התחל עם תרבית חיידקים ביוסנסורית המרחפת בתווך.חיידקים מהונדסים אלו מייצרים פקטור שעתוק, אשר כאשר הוא נקשר למטבוליט צואה מסוים, מפעיל פרומוטר המקושר לגן דיווח פלואורסצנטי.לתרבות זו, הוסיפו דגימת צואה מסוננת של אדם המכילה מטבוליטים, כמו לקטט, המעורבים באינטראקציות בין מארח למיקרוביום.מדלל תערובת זו עם מדיום טרי כדי לשמור על נפח תגובה אופטימלי.לדוגר בלי לרעוד כדי לחקות את סביבת המעיים האנושית.מטבוליטי הצואה מתפשטים לתא החיידקי ונקשרים לפקטור השעתוק.קומפלקס זה נקשר למקדם ומוביל לביטוי גנים של...

זיהוי מטבוליטים בצואה אנושית באמצעות חיישן חיידקי

טכניקות biosensor אופטיות יכולות לזהות שינויים במסה ליד קרום הפלזמה בתאים חיים ומאפשרות אחד כדי לעקוב אחר תגובות תאיות בתאים ובאוכלוסיות של תאים בודדים. פרוטוקול זה יתאר גילוי האפנון של תעלות אשלגן על ידי קולטנים בשילוב ה-G-חלבון בתאים שלמים באמצעות גישה זו.

שימוש בBiosensors האופטי ללא תווית לזיהוי מודולציה של תעלות אשלגן על ידי קולטנים מצמידים G-חלבון

אנו מציגים biochip אלקטרוכימיים המבוסס על microfluidic לגילוי הכלאת DNA. בעקבות functionalization הבדיקה ssDNA, הסגוליות, הרגישות, וגבול הגילוי נלמדים ביעדי ssDNA משלימים ולא משלימים. תוצאות ממחישות את השפעתם של אירועי הכלאת DNA על מערכת אלקטרוכימיים, עם גבול גילוי של 3.8 ננומטר.

Biochip אלקטרוכימי מבוסס Microfluidic לניתוח הכלאה DNA ללא תווית

תקשורת בין-תאית היא קריטית לשליטה בפעילות פיזיולוגית שונות בתוך ומחוץ לתא. מאמר זה מתאר פרוטוקול למדידת טבע מרחב ובזמן של הפרשות תא בודדות. כדי להשיג זאת, גישה רב תחומית המשלבת משמשת nanoplasmonic ללא תווית חישה עם הדמיה תא חי.

טכניקה ללא תווית להדמית החלל-הזמן של פרשות תא בודדת

אנו מתארים שיטת תיוג יציב של xenografts נגזרות החולות (PDXs) עם חלקיקי lentiviral להביע כתבי חלבון בלוציפראז ירוקים-ניאון. שיטה זו מאפשרת מעקב צמיחת PDXs המצוי באתר הראשי, כמו גם באיתור גרורות ספונטניות ניסיון באמצעות במערכות הדמית vivo.

תיוג של xenografts הנגזר חולה סרטן השד עם כתבים לעקיבים עבור צמיחת גידולים וגרורים מחקרים

בעבודה זו, אנו מדווחים על שיטה חדשה ללמוד אינטראקציות חלבון-חלבון באמצעות ביוסנסור conductimetric מבוסס על טכנולוגיית β לקטמאז היברידית. שיטה זו מתבססת על שחרורו של פרוטונים על הידרוליזה של β-lactams.

השימוש β-lactamase מבוססי ביוסנסור Conductimetric Assay לזהות אינטראקציות למערכות ביולוגיות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול זיהוי, כימות של מולקולות בשפע נמוך פתרונות מורכבים באמצעות מולקולרית החתמה בשילוב ביוסנסור קיבול.

זיהוי העדינה של סמנים ביולוגיים באמצעות הטבעה מולקולרית מבוסס ביוסנסור קיבולי

במחקר זה, פיתחנו ננו-פרובש טביעות אצבע מבוסס פיזור ראמאן (SERS) בעלות נמוכה עם תאימות ביולוגית חיובית כדי להראות הדמיה ביולוגית של תאים חיים ללא תוויות ולזהות שני זני חיידקים, ולהראות בפירוט כיצד להשיג ספקטרום SERS של תאים חיים בשיטה לא הרסנית.

ביואנליזה של פיזור ראמאן משופרת ללא תוויות ללא תוויות המבוססת על ננו-גשושיות Au@Carbon נקודות

פרוטוקול זה מציג גישה רב-מודאלית המשלבת ספקטרוסקופיה של ראמאן ומיקרוסקופ פאזה טומוגרפית לפנוטיפ נטול תוויות ולא פולשני של תאי סרטן שד אנושיים חיים. הוא כולל צינור ניתוח ידידותי למשתמש ונטול הטיות אנושיות לניתוח מורפו-כימי מהיר וכמותי, המספק תובנות מולקולריות ומבניות מפורטות עם יישומים בחקר הסרטן וביולוגיה של התא.

מסגרת הדמיה רב-מודאלית לקידום פנוטיפ של תאי סרטן שד חיים ללא תווית

למד לזהות ביומרקרים של אנטיגן HLA בסרטן שד באמצעות טכנולוגיית ביוסנסור ללא תווית. שיטה זו מאפשרת סיווג מהיר של חולים לטיפולים אימונותרפיים מותאמים אישית.

איתור של יקוציט האדם Antigen Biomarkers בסרטן שד ניצול הטכנולוגיה biosensor ללא תווית

גלה סרטונים נוספים