בידוד וכריתה של אב העורקים Murine; טכניקה רב-תכליתית בחקר לב וכלי דם מחלות

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבודד, לבודד ולכרות את אבי העורקים העכברי. זה מושג על ידי חשיפת חלל בית החזה והבטן תחילה. השלב השני הוא לחלחל במי מלח קרים וסטריליים.

לאחר מכן, מסירים את איברי חללי בית החזה והבטן, ומשאירים את הלב מחובר לאבי העורקים. השלב האחרון הוא כריתת רקמת השומן הפרי-וסקולרית ורקמת הכניסה מאבי העורקים. בסופו של דבר, נעשה שימוש במיקרוסקופ מנתח כדי לוודא שכל הרקמות שמסביב מוסרות, וניתן להשתמש באבי העורקים למגוון ניתוחים ניסיוניים.

לכן טכניקה זו עוזרת לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר הקרדיווסקולרי, כגון התפתחות מפרצת והיווצרות פלאק טרשת עורקים. ולכן אתה יכול להסתכל עליהם על ידי התבוננות בשינויים בביולוגיה המולקולרית, כגון ביטוי גנים וחלבונים. לאחר המתת החסד של העכבר, ודא את מצב המתת החסד על ידי צביטה בבוהן.

לאחר מכן, יש לעקר את העור על ידי הרטבת פרוות הבטן באתנול 70%. לאחר מכן אבטח את העכבר בלוח הניתוח בשכיבה עם נספחים מושטים. התחל את הניתוח באמצעות מלקחיים כדי לאתר ולבודד את עור הבטן הנחות מתהליך ה-xiphoid.

לאחר מכן, הרם את העור וחתוך אותו במספריים. זה אמור לחשוף את החלק העליון של הצפק ואת חלל בית החזה התחתון. לאחר מכן בעזרת מלקחיים ומספריים, הרם את תהליך ה- xiphoid ובצע חתכים רוחביים נחותים ממנו לאורך השוליים התת-צלעיים.

כדי לנתח את חלל בית החזה, יש להיכנס דרך הסרעפת, תוך הקפדה לא לפגוע בלב או בכלי דם מרכזיים בתהליך. כעת הגולגולת מאריכה את החתכים הרוחביים לאורך השוליים התת-צלעיים. לפיכך, הסר את החלק הקדמי של כלוב הצלעות.

ייתכן שתידרש דיסקציה קהה כדי להסיר את הלב מדופן החזה הקדמית כדי להשלים את החתכים הללו. כעת בעזרת גזה, נקה את חלל החזה מנוזלים עודפים כדי להקל על הגישה לאיברים. לאחר מכן הסר את הריאות באמצעות מלקחיים ומספריים אונה אחר אונה.

לאחר מכן יש לחשוף את הלב ואבי העורקים במלואם ולגשת אליהם בקלות כדי לאסוף דם באמצעות ניקוב לב. עשה זאת עכשיו לפני שתמשיך בזלוף כדי לחלחל את הלב, מלא מזרק של 10 סמ"ק ב-10 מיליליטר קר קרח סטרילי אחד XPBS. לאחר מכן חבר מחט בגודל 25.

הכנס בזהירות את המחט לחדר השמאלי. לאחר מכן בצע חתך באטריום הימני כדי שלא יצטבר לחץ מוגזם במערכת הדם בשלב הבא. כעת, במהלך שתיים-שלוש הדקות הבאות, הוציאו לאט לאט את ה-PBS מהמזרק לתוך הלב.

במהלך פליטת ה-PBS, השתמש בגזה סטרילית כדי לספוג נוזל שיישפך מהאטריום בחתך. כאשר כל ה-PERFUSE 8 נפלט, ספוג את כל הנוזל שנותר עם גזה המסתירה מבט נקי על חלל בית החזה. כדי לחשוף את תכולת מערכת העיכול, יש לחתוך בקלילות דרך דופן הבטן, ולהרחיב את החתך לאזור העל-ערווה.

ברגע שיש לחתוך דו-צדדית לכיוון הגפיים התחתונות כדי ליצור דש עור, אותו ניתן להצמיד או לכרות. המשך מסיר מספר איברים, אונות הכבד, הלבלב, הטחול, המעיים והוושט התחתון. זה פותח את הנוף אל אבי העורקים.

היזהר במיוחד בעת ניתוח אזור הפרן מכיוון שישנם ענפים שטחיים מאבי העורקים לעורקי הכליה באזור זה. בצע דיסקציה זו במדויק ובזהירות, מכיוון שהחיידקים של מערכת העיכול יכולים לזהם את הרקמות האחרות, לשטוף את האזור הנקי עם XPBS אחד ולספוג תמיסה עודפת בגזה, יש לגשת בקלות לאבי העורקים. אז בעזרת מספריים ומלקחיים, הפרד את אבי העורקים מעמוד השדרה.

דיסקציה קהה מתאימה, ומומלץ מאוד להשתמש במיקרוסקופ חיתוך. ניתן להסיר את אבי העורקים, להתחיל בצורה מעודכנת או קרנית. מה שחשוב הוא תהליך צמח מסודר של ניקוי והפרדת רקמות.

בעת ניתוח רקמת השומן הפרי-וסקולרית, הסר אותה באמצעות מספריים מיקרו עדינים כדי למנוע נזק לדופן אבי העורקים. זה ממזער את הסיכוי לזיהום פיברובלסטים בעת גידול תאי שריר חלק באבי העורקים. כריתה זהירה של רקמת פרי-וסקולרית, שומן ואדוונטיציה חשובה מאוד.

כל רקמה שנותרה עלולה לגרום לזיהום בתרבית תאים, אך גם להטות את הבדיקות המולקולריות שלך. באמצעות הליך זה, אבי העורקים השלם שמקורו בלב היורד לתוך חללי בית החזה והבטן. כאשר מתקבל עורקי הכליה שעדיין מחוברים, ניתן לדמות את אבי העורקים באתרו כדי לכמת שינויים מורפומטריים, האבחנתיים בחקר מפרצת אבי העורקים הבטני.

לאחר מכן, ניתן להסיר, לקבע ולהכתים את אבי העורקים כדי להסתכל על שינויים היסטולוגיים כגון עם צביעת המט, טואין ואואין, או עם צביעת הוף ואן ג'ין כדי להסתכל על רצועות האלסטין וכך לראות את השלמות המבנית של אבי העורקים. תאי אבי העורקים יכולים לשמש גם לבידוד תאים ראשוני ולמחקרי מבחנה כגון מחקרי כדאיות ולוקליזציה של חלבונים. לאחר ההליך, אתה יכול להשתמש בטכניקות אחרות כגון בידוד חלבון ו-RNA כדי לבחון את ביטוי החלבון, פעילות האנזים, כמו גם ביטוי גנים.