Name: בידוד וכריתה של אב העורקים Murine; טכניקה רב-תכליתית בחקר לב וכלי דם מחלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: למד שיטה לבידוד וכריתת אב העורקים Murine לחקר מחלות לב וכלי דם. הפרוטוקול כולל חשיפת החלל התורקי והבטני, השטפה בסליין קר וניקוי רקמות מקיפות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אי לנו תודות.

נהלי כל החיה בוצעו באישורה של ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים המוסדיים של אוניברסיטת סינסינטי ובהתאם למדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה מהמכון הלאומי לבריאות (NIH פרסום מס &#39;85-23, מתוקן 1996). 1. הכנת העכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים על ידי חשיפת בעלי החיים למנת supratherapeutic של הרדמה, isoflurane בשאיפה להשפעה. ודא המתת חסד ראשונית באמצעות קמצוץ הבוהן כגירוי מזיק. שיטה משנית של המתת חסד, חיתוך סרעפת, תתרחש בשלב הקרוב. שיטות חלופיות ניתן להשתמש בהמתת חסד שהוענק מתקבלת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Sanitizie פני השטח החיצוני של העכבר על ידי ריסוס הפרווה לאורך אזור הבטן, שבו הקיצוצים הראשוניים ייעשו, עם 70% אתנול לנקודה של לחות, כך שהפרווה היא רטובה עם אתנול וכל שערות שנשר / יבשות לא נכנסות האזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על surלוח gical במצב שכיבה עם נספחים העליונים ותחתונים מורחב כלפי חוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נספחים מאובטחים ללוח באמצעות קלטת כירורגית. </li></ol> 2. בידוד של הלב ואב העורקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיצוב נכון של העכבר, להשתמש במלקחיים כדי לאתר ולבודד עור בטן רק נחותה לתהליך xiphoid של עצם החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליצור מתח על ידי ההרמה ישר את העור ולהשתמש במספריים כדי להסיר את העור השטחי, חושף את החלק העליון של הצפק והחלק נחות של חלל בית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את חלל הצפק על ידי הרמת תהליך xiphoid וביצוע חתכים רוחב פשוט נחותים לתהליך בשולי subcostal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח לתוך חלל בית החזה, הולך דרך הסרעפת, להיות בטוח שלא לקרוע את הלב או כל כלי דם גדולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאריך את החתכים הרוחב שנעשו בשלב 2.3 cranially כדי להסיר את החלק הקדמי של בית החזה. אםהכרחי, לשחרר את הלב מהחזה הקדמי באמצעות לנתיחה בוטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את חלל החזה של דם ונוזל זרים באמצעות גזה סטרילית לקלוט חומר. ברגע שהאזור הוא גלוי יותר, להסיר את הריאות כדי לחשוף את הלב ואב עורקים טוב יותר. </li></ol> 3. זלוף של לב ואב עורקים הערה: לקבלת דם באמצעות לנקב לב, לעשות זאת רק לפני שלב זה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממלאי מזרק 10 סמ&quot;ק עם 10 מיליליטר של תמיסת חיץ פוספט 1x הקר כקרח סטרילי (PBS), ולצרף מחט 25 מד למזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בעדינות את המחט לתוך החדר השמאלי של הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את אטריום הזכות להקל הצטברות לחץ מזלוף. Perfuse את תוכן המזרק לתוך העכבר מעל 2-3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בגזה סטרילית בפתיחה בעלייה הימנית לקלוט זלוף נוזל. </li></ol> 4. בידוד וכריתה של אב העורקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם השלמת PErfusion, להשתמש גזה סטרילית על מנת לספוג את נוזלים שנותרו מעיבים על שדה הראייה בחלל בית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את התוכן של מערכת העיכול על ידי חיתוך caudally דרך דופן הבטן, הארכת החתך לאזור suprapubic. להאריך את החתך נוסף לקראת הגפיים התחתונים דו-צדדי ליצירת דשי עור אשר יכול להיות מרותק או נכרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את האונות של הכבד, לבלב, קיבה, טחול, מעי ולדמיין את אב העורקים טוב יותר. היזהר בעת לנתח ליד אזור perirenal, כאב העורקים הוא שטחי בסניפים של עורקי הכליה. הערה: בצע פעולה זו באופן מדויק ותעודה בגרות כמערכת העיכול עשירה בחיידקים אשר מגביר את הנטייה לזיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את האזור עם 1x PBS ולהסיר את כל הנוזל על ידי קליטה עם גזה סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש microscissors וmicroforceps סטרילי, להפריד את אב העורקים מdorsally עמוד השדרה והוושט ventrally.עדיף להשתמש בנתיחה בוטה וניצול מיקרוסקופ לנתיחה לזה. הערה: בבידוד אב העורקים, להתחיל caudally בהסתעפות הכסל ולעבור cranially ניקוי והפרדת אב העורקים מפני השטח הגבי של החלל או להתחיל cranially בעורקי הצוואר ועורקי brachiocephalic לנתח caudally. שתי השיטות מתאימה ועד לנוחות החוקרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את רקמת שומן perivascular באמצעות microscissors בסדר להיות בטוח שלא להסיר חלק מהקיר של אב העורקים. זה חיוני כדי לצמצם את הסיכון לזיהום פיברובלסטים כאשר culturing תאי שריר חלק באב עורקים. </li></ol>

<ol><li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 129 (3), 28-292 (2014).</li>
<li>Ross, R., Harker, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperlipidemia+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hyperlipidemia and atherosclerosis.</a> Science. 193 (4258), 1094-1100 (1976).</li>
<li>Clouse, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+aortic+dissection%3A+population-based+incidence+compared+with+degenerative+aortic+aneurysm+rupture%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Acute aortic dissection: population-based incidence compared with degenerative aortic aneurysm rupture.</a> Mayo Clin Proc. 79 (2), 176-180 (2004).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (3), 429-434 (2004).</li>
<li>Pleumeekers, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneurysms+of+the+abdominal+aorta+in+older+adults.+The+Rotterdam+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Aneurysms of the abdominal aorta in older adults. The Rotterdam Study.</a> Am J Epidemiol. 142 (12), 1291-1299 (1995).</li>
<li>Brophy, C. M., Reilly, J. M., Smit, G. J., Tilson, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+inflammation+in+nonspecific+abdominal+aortic+aneurysm+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">The role of inflammation in nonspecific abdominal aortic aneurysm disease.</a> Ann Vasc Surg. 5 (3), 229-233 (1991).</li>
<li>Ray, J. L., Leach, R., Herbert, J. M., Benson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+vascular+smooth+muscle+cells+from+a+single+murine+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Isolation of vascular smooth muscle cells from a single murine aorta.</a> Methods Cell Sci. 23 (4), 185-188 (2001).</li>
<li>Weiss, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+murine+cardiovascular+system+with+magnetic+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging the murine cardiovascular system with magnetic resonance.</a> Circ Res. 88 (6), 550-551 (2001).</li>
<li>Graham, E. L., Balla, C., Franchino, H., Melman, Y., del Monte, F., Das, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+culture%2C+and+functional+characterization+of+adult+mouse+cardiomyoctyes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes.</a> J Vis Exp. (79), 50289(2013).</li>
<li>Wassef, M., Upchurch, G. R. Jr, Kuivaniemi, H., Thompson, R. W., Tilson, M. D. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+opportunities+in+abdominal+aortic+aneurysm+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Challenges and opportunities in abdominal aortic aneurysm research.</a> J Vasc Surg. 45 (1), 192-198 (2007).</li>
</ol>

יש לי המחברים אין לחשוף.

מחלת אבי העורקים עלולה להוביל לפתולוגיה מערכתית משמעותית ואולי למוות במקרים חמורים. אפשרויות הטיפול מוגבלות כיום ולכן יש צורך בהמשך המחקר בתחום10. מודלים של עכברים הם אידיאליים להמשך מחקר התקדמות המחלה ואפשרויות טיפוליות פוטנציאליות4. לכן, השלמה מוצלחת של השיטה המתוארת בכתב יד זה תספק לחוקרים את הכלים למדוד את התקדמות המחלה ואת יעילות התרופות. 
ניתן לשנות טכניקה זו בכמה דרכים על מנת לייעל את התוצאות. השימוש בזכוכית מגדלת כירורגית או במיקרוסקופ מנתח יכול לסייע בהדמיה של הא...

אב העורקים ממלאים תפקיד מרכזי בתפקוד לב וכלי דם מספק לגוף את הדם מחומצן וחלקים דומים לאחרים בגוף, הוא רגיש למחלות. מחלות אב העורקים נפוצות כוללות טרשת עורקים ופרצה, שהן התוצאה של גורמים גנטיים וסביבתיים הכוללים תזונה, עישון ואורח חיים בלתי פעיל 1. טרשת עורקים היא בתצהיר של סידן ורובד שומנים מבוסס לקיר אב העורקים נמצא בדרך כלל בחולים עם היפרליפידמיה כרונית 2. מפרצת מתאפיינת השפלה של הרכיבים המבניים של אב העורקים והדילול של קיר הכלי, ואחריו עלה שקוטר סופו של דבר עלול להוביל לקרע 3. מודלים של בעלי החיים הם כלים חשובים המשמשים ללמוד את המנגנון של מחלה ויעילות של טיפולים אפשריים. מודלים של בעלי חיים נפוצים בשימוש במחקר לב וכלי דם, המחקר ספציפי חוקרים הפרעות כלי דם וחילוף חומריםכוללים עכברים מהונדסים גנטי כדי לשנות את רמות שומנים בדם כגון נוקאאוט גן E אפוליפופרוטאין ועכברים נוקאאוט גן קולט ליפופרוטאין בצפיפות נמוך 4. רוב השיטות להערכת מנגנונים של מחלה ויעילות של טיפול יכלול בידוד וכריתה של אב העורקים. ברגע שהאב העורקים הוא מקומי ומבודד, ניתן לקבוע ניתוח morphometric, כגון נוכחות של מפרצת, בדרך כלל מוגדרת כעלייה של יותר מ 50% בקוטר 5. לאחר הצורך בניתוח אתרו הוא מוחלט, אב העורקים ניתן נכרת לניתוח נוסף. אב העורקים נכרתו ניתן פלאש קפוא לערוך מחקרים מולקולריים כגון חלבון ו / או מבחני ביטוי גנים או קבוע באמצעות paraformaldehyde 4% ולאחר מכן משובץ, מחולק ומוכתם לניתוח היסטולוגית. ניתוח היסטולוגית של אב העורקים יכול להדגים תכונות נפוצות של מחלת אב העורקים כגון השפלה מבנית, היווצרות רובד, וחדירה של לויקוציטים &lt;sup&gt; 6,7. בנוסף, אב העורקים נכרתו יכולים לשמש כדי לבודד שורות תאים עיקריות כוללים תאי שריר אנדותל וחלק אשר לאחר מכן יכול לשמש למגוון רחב של מחקרים במבחנת 7. נכון לעכשיו, אין שיטות אחרות כדי לספק אפיון מעמיק זה של מחלה באב עורקים, כמו גם לספק לחוקרי כלים ללמוד מחלות לב נוספת. שיטות הדמיה כמו הדמיה בתהודה מגנטית, טומוגרפיה ממוחשבת ובדיקה אולטרה סאונד הן השיטות הכי קרובה כדי להעריך את אב העורקים מורפולוגית, אולם זה קשה בבעלי חיים קטנים וקבלת מכשיר עם הטכנולוגיה מתאימה היא יקרה 8. ניתן לרכוש שורות תאים הונצחו לחקור מנגנונים אפשריים של מחלה ויעילות של טיפולים, אולם הטבע המלאכותי של תאים אלה מגבילים בחקר ההשפעות על מחזור החיים של התאים ואפופטוזיס 9. המטרה הכוללת שלכתב יד זה הוא להדגים את הבידוד וכריתת סטרילי של אב העורקים העכבריים בחקירה של מחלת לב וכלי דם.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>פישר</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr><tr><td>סרט כירורגי</td><td>3M</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>גזה סטרילית</td><td>Dukal Corporations</td><td>1312</td><td></td></tr><tr><td>25 מד מחט</td><td>BD</td><td></td><td></td>305122</tr><tr><td>מזרק 10 מ"ל</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד וכריתה של אב העורקים murine; טכניקה רב-תכליתית בחקר לב וכלי דם מחלות

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

מחלות לב וכלי דם הוא מונח רחב המתאר מחלות לב ו/או כלי דם. כלי הדם העיקרי המספק לגוף דם מחומצן הוא אבי העורקים. אבי העורקים עלול להיפגע במחלות כמו טרשת עורקים ומפרצת. חוקרים החוקרים מחלות אלה יפיקו תועלת מהתבוננות ישירה באבי העורקים כדי לאפיין את התקדמות המחלה וכן להעריך את יעילותם של טיפולים פוטנציאליים. מטרת פרוטוקול זה היא לתאר בידוד וכריתת אבי העורקים כדי לסייע לחוקרים החוקרים מחלות לב וכלי דם. בידוד וכריתה של אבי העורקים מאפשרים לחוקרים להסתכל על שינויים מורפומטריים גסים כמו גם לאפשר להם לשמר ולצבוע את הרקמה כדי להסתכל על שינויים היסטולוגיים אם רוצים. אבי העורקים עשוי לשמש למחקרים מולקולריים להערכת ביטוי חלבונים וגנים לגילוי מטרות מעניינות ומנגנוני פעולה. טכניקה זו עדיפה על שיטות הדמיה מכיוון שיש להן מגבלות מובנות בטכנולוגיה ובעלות. בנוסף, תאים מבודדים ראשוניים מאבי העורקים שבודד ונכרת זה עתה יכולים לאפשר לחוקרים לבצע בדיקות נוספות באתרן ובמבחנה. לבידוד וכריתת אבי העורקים יש מגבלה של הצורך להקריב את בעל החיים, אולם במקרה זה היתרונות עולים על הנזק מכיוון שזו הטכניקה המגוונת ביותר בחקר מחלת אבי העורקים.

עם השלמת ההליך, יהיו אב העורקים שלמים שמקורם בלב, יורדים לתוך חללי בית החזה ובטן עם עורקי הכליות עדיין מחוברים (איור 1 א). מכאן, אב העורקים ניתן הדמיה באתר לכמת שינויי morphometric שאבחון במחקר של פרצות אב העורקים בבטן (איור 1 ו1C). בהמשך לכך, ניתן להסיר את אב העורקים, קבוע ומוכתמים להסתכל על שינויים היסטולוגית. כתם כללי ונפוץ של אב העורקים הוא hematoxylin וכתם eosin (איור 2 א ו -2 ב). בנוסף, את השלמות המ...

פתולוגיה של אבי העורקים עלולה להוביל לתחלואה ותמותה קשה, ולכן יש צורך במחקר על התקדמות המחלה וטיפולים פוטנציאליים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד וכריתת אבי העורקים העכברי כדי לסייע לחוקרים בחקירת מחלות לב וכלי דם.

בידוד וכריתה של אב העורקים Murine; טכניקה רב-תכליתית בחקר לב וכלי דם מחלות

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבודד, לבודד ולכרות את אבי העורקים העכברי. זה מושג על ידי חשיפת חלל בית החזה והבטן תחילה. השלב השני הוא לחלחל במי מלח קרים וסטריליים.לאחר מכן, מסירים את איברי חללי בית החזה והבטן, ומשאירים את הלב מחובר לאבי העורקים. השלב האחרון הוא כריתת רקמת השומן הפרי-וסקולרית ורקמת הכניסה מאבי העורקים. בסופו של דבר, נעשה שימוש במיקרוסקופ מנתח כדי לוודא שכל הרקמות שמסביב מוסרות, וניתן להשתמש באבי העורקים למגוון ניתוחים ניסיוניים.לכן טכניקה זו עוזרת לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר הקרדיווסקולרי, כגון התפתחות מפרצת והיווצרות פלאק טרשת עורקים. ולכן אתה יכול להסתכל עליהם על ידי התבוננות בשינויים בביולוגיה המולקולרית, כגון ביטוי גנים וחלבונים. לאחר המתת החסד של העכבר, ודא את מצב המתת החסד על ידי צביטה בבוהן.לאחר מכן, יש לעקר את העור על ידי הרטבת פרוות הבטן באתנול 70%. לאחר מכן אבטח את העכבר בלוח הניתוח בשכיבה עם נספחים מושטים. התחל את הניתוח באמצעות מלקחיים כדי לאתר ולבודד את עור הבטן הנחות מתהליך ה-xiphoid.לאחר מכן, הרם את העור וחתוך אותו במספריים. זה אמור לחשוף את החלק העליון של הצפק ואת חלל בית החזה התחתון. לאחר מכן בעזרת מלקחיים ומספריים, הרם את תהליך ה- xiphoid ובצע חתכים רוחביים נחותים ממנו לאורך השוליים התת-צלעיים.כדי לנתח את חלל בית החזה, יש להיכנס דרך הסרעפת, תוך הקפדה לא לפגוע בלב או בכלי דם מרכזיים בתהליך. כעת הגולגולת מאריכה את החתכים הרוחביים לאורך השוליים התת-צלעיים. לפיכך, הסר את החלק הקדמי של כלוב הצלעות.ייתכן שתידרש דיסקציה קהה כדי להסיר את הלב מדופן החזה הקדמית כדי להשלים את החתכים הללו. כעת בעזרת גזה, נקה את חלל החזה מנוזלים עודפים כדי להקל על הגישה לאיברים. לאחר מכן הסר את הריאות באמצעות מלקחיים ומספריים אונה אחר אונה.לאחר מכן יש לחשוף את הלב ואבי העורקים במלואם ולגשת אליהם בקלות כדי לאסוף דם באמצעות ניקוב לב. עשה זאת עכשיו לפני שתמשיך בזלוף כדי לחלחל את הלב, מלא מזרק של 10 סמ"ק ב-10 מיליליטר קר קרח סטרילי אחד XPBS. לאחר מכן חבר מחט בגודל 25.הכנס בזהירות את המחט לחדר השמאלי. לאחר מכן בצע חתך באטריום הימני כדי שלא יצטבר לחץ מוגזם במערכת הדם בשלב הבא. כעת, במהלך שתיים-שלוש הדקות הבאות, הוציאו לאט לאט את ה-PBS מהמזרק לתוך הלב.במהלך פליטת ה-PBS, השתמש בגזה סטרילית כדי לספוג נוזל שיישפך מהאטריום בחתך. כאשר כל ה-PERFUSE 8 נפלט, ספוג את כל הנוזל שנותר עם גזה המסתירה מבט נקי על חלל בית החזה. כדי לחשוף את תכולת מערכת העיכול, יש לחתוך בקלילות דרך דופן הבטן, ולהרחיב את החתך לאזור העל-ערווה.ברגע שיש לחתוך דו-צדדית לכיוון הגפיים התחתונות כדי ליצור דש עור, אותו ניתן להצמיד או לכרות. המשך מסיר מספר איברים, אונות הכבד, הלבלב, הטחול, המעיים והוושט התחתון. זה פותח את הנוף אל אבי העורקים.היזהר במיוחד בעת ניתוח אזור הפרן מכיוון שישנם ענפים שטחיים מאבי העורקים לעורקי הכליה באזור זה. בצע דיסקציה זו במדויק ובזהירות, מכיוון שהחיידקים של מערכת העיכול יכולים לזהם את הרקמות האחרות, לשטוף את האזור הנקי עם XPBS אחד ולספוג תמיסה עודפת בגזה, יש לגשת בקלות לאבי העורקים. אז בעזרת מספריים ומלקחיים, הפרד את אבי העורקים מעמוד השדרה.דיסקציה קהה מתאימה, ומומלץ מאוד להשתמש במיקרוסקופ חיתוך. ניתן להסיר את אבי העורקים, להתחיל בצורה מעודכנת או קרנית. מה שחשוב הוא תהליך צמח מסודר של ניקוי והפרדת רקמות.בעת ניתוח רקמת השומן הפרי-וסקולרית, הסר אותה באמצעות מספריים מיקרו עדינים כדי למנוע נזק לדופן אבי העורקים. זה ממזער את הסיכוי לזיהום פיברובלסטים בעת גידול תאי שריר חלק באבי העורקים. כריתה זהירה של רקמת פרי-וסקולרית, שומן ואדוונטיציה חשובה מאוד.כל רקמה שנותרה עלולה לגרום לזיהום בתרבית תאים, אך גם להטות את הבדיקות המולקולריות שלך. באמצעות הליך זה, אבי העורקים השלם שמקורו בלב היורד לתוך חללי בית החזה והבטן. כאשר מתקבל עורקי הכליה שעדיין מחוברים, ניתן לדמות את אבי העורקים באתרו כדי לכמת שינויים מורפומטריים, האבחנתיים בחקר מפרצת אבי העורקים הבטני.לאחר מכן, ניתן להסיר, לקבע ולהכתים את אבי העורקים כדי להסתכל על שינויים היסטולוגיים כגון עם צביעת המט, טואין ואואין, או עם צביעת הוף ואן ג'ין כדי להסתכל על רצועות האלסטין וכך לראות את השלמות המבנית של אבי העורקים. תאי אבי העורקים יכולים לשמש גם לבידוד תאים ראשוני ולמחקרי מבחנה כגון מחקרי כדאיות ולוקליזציה של חלבונים. לאחר ההליך, אתה יכול להשתמש בטכניקות אחרות כגון בידוד חלבון ו-RNA כדי לבחון את ביטוי החלבון, פעילות האנזים, כמו גם ביטוי גנים.

isolation-excision-murine-aorta-versatile-technique-study

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים טכניקה שבה קטע של אב העורקים בבטן מעכבר הושתל orthotopically ממש מתחת לעורקי הכליה בנמען אלוגנאית או syngeneic. טכניקה זו יכולה להיות שימושית במחקרים בם השתלה של עורקים גדולים של גודל אחיד נחשבת יתרון.

השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם

בסרטון זה אנו מדגימים הליך להסרה כירורגית של אבי העורקים מחזירים זעירים. תאי אנדותל שנקצרו מאבי העורקים המבודדים האלה יכולים לעבור תרבית נוספת בתנאי מבחנה כדי לחקור קרישה ותגובות חיסוניות.

בידוד אבי העורקים החזירי: הליך כירורגי להסרת אבי העורקים החזי מחזירים מיניאטוריים לניתוח במורד הזרם

אנו מתארים הליכים לכימות ואפיון נגעים טרשת עורקים במודלים של עכברים באמצעות חתך מדויק של סינוס אבי העורקים ואבי העורקים העולה בשילוב עם ניתוח היסטוכימי ואימונוהיסטוכימי.

ניתוח כמותי ואפיון של נגעים טרשת עורקים בסינוס אבי העורקים של העכברים

תאי האנדותל של כלי הדם ממלאים תפקיד משמעותי בהפרעות לב וכלי דם חשובות רבות. מאמר זה מתאר שיטה פשוטה לבידוד והרחבה של תאי אנדותל מאבי העורקים של העכבר ללא שימוש בציוד מיוחד. הפרוטוקול שלנו מספק אמצעי יעיל לזיהוי מנגנונים בפיזיופתולוגיה של תאי אנדותל.

בידוד והתרבות ראשית של לתאי אנדותל עכבר אב העורקים

מטרת פרוטוקול זה היא להדגים את טכניקות בידוד וההתרבות של תאי שריר חלק בכלי דם בעכברים עיקריים (VSMCs) מהמחזור כלילית. לאחר VSMCs בודד, הם יכולים לשמש עבור טכניקות תרבות סטנדרטיות רבות.

בידוד של תאי שריר חלק Murine כלילית דם

Restenosis לאחר הליכים Cardiovascular (ניתוח מעקף, אנגיופלסטיקה, או stenting) היא בעיה משמעותית להפחית את עמידות של נהלים אלה. טיפול אידיאלי יהיה לעכב תפוצת שריר חלקה (VSMC) תוך קידום התחדשות האנדותל. אנו מתארים מודל להערכה סימולטנית של התפשטות VSMC ותפקוד האנדותל in vivo.

Murine אבי העורקים למחוץ פגיעה: יעיל<em&gt; בויבו</em&gt; מודל של תאים שרירים חלקה תפוצת ו אנדותל פונקציה

פרוטוקולים ללמוד העורקים מאתר של הלידה באמצעות ויוו ניתוח המשובטים, מיפוי הגורל, אבי העורקים explants שריר חלק מבודד התאים מפורטים כאן. גישות מגוונות אלה לקדם את חקירת מורפוגנזה של אבי העורקים של הלידה בהתפתחות נורמלית, בפתוגנזה של המחלה.

באמצעות In Vivo , רקמות, תאים Explant גישות ללמוד מורפוגנזה ו פתוגנזה של הלידה של אבי העורקים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של הטרוסקסואלים השתלת אבי העורקים בעכברים באמצעות שימוש בטכניקת השרוול שאינו תפר במודל מורטין הצווארי. מודל זה יכול לשמש כדי ללמוד את הפתולוגיה הבסיסית של השתלת האלופתיה כרונית (קו) והוא יכול לעזור להעריך סוכנים רפואיים חדשים כדי למנוע את הקמתה.

מורי צוואר הרחם מורנה השתלת מודל באמצעות שינוי שאינו תפר שיטה השרוול

פרוטוקול זה מתאר שינויים בשיטת לנגנדורף כולל עומק שינון אבי העורקים לבידוד סימולטני של מיוציטים מפרזדורים חדריים מעכברים בוגרים.

שינויים בשיטת לנגנדורף לבידוד סימולטני של מיוציטים מפרשים בוגרים

אנו מציגים שיטה לבידוד תאי אנדותל וגרעינים מלומן של עורקי הצוואר של עכברים החשופים לתנאי זרימה יציבים או מופרעים כדי לבצע ניסויים באומיקה חד-תאית.

בידוד תאי אנדותל מהלומן של עורקי הצוואר של עכברים לניסויים רב-תאיים חד-תאיים

פרוטוקול זה מספק מתודולוגיה מקיפה לניתוח כמותי של פלאק טרשת עורקים כדי להקל על מחקר מעמיק יותר על המנגנונים וההתקדמות של טרשת עורקים.

בידוד וניתוח של נגעי קשת אבי העורקים ושורש במודל עכבר טרשת עורקים

למד שיטה לבידוד וכריתת אב העורקים Murine לחקר מחלות לב וכלי דם. הפרוטוקול כולל חשיפת החלל התורקי והבטני, השטפה בסליין קר וניקוי רקמות מקיפות.

בידוד וכריתה של אב העורקים Murine; טכניקה רב-תכליתית בחקר לב וכלי דם מחלות

גלה סרטונים נוספים