Name: לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: למדו לזהות ולכרות בסיסי שומן שונים בעכברים בוגרים לצורך ניתוח היסטולוגי וביטוי גנים. השיטה מאפשרת בידוד מרובה עם מינימום חיתוך וזיהום לתוצאות אמינות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין אישורים.

הערה: כל הנהלים בבעלי החיים בוצעו באישור הוועדה המוסדי הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) מאוניברסיטת סינסינטי ובהתאם למדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה מהמכון הלאומי לבריאות (NIH פרסום מס . 85-23, מתוקן 1996). 1. להרדים ולעקר את העכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בdropbox המכיל מינון supratheraputic של isoflurane ולאפשר לשאוף להשפעה. לאחר העכבר הוא מורדמים, להסיר מהתיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cervically לנקוע כאמצעי שני של המתת חסד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את פני השטח החיצוניים של העכבר על ידי ניקוי את החיה עם אתנול 70%. </li></ol> 2. זיהוי ובידוד של שלושה בסיס מיון שומן שונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות שומן חום בידוד (BAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהפרווה היא רטובה מטיהור האלכוהול כדי לסייע בחיתוך דרך Laye אפידרמיס ועוריrs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכבר במצב שכיבה עם גב על השולחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את העור ממש מתחת לסרעפת עם מלקחיים, מעלית ולחתוך עם מספריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך רוחבי סביב ההיקף של העכבר כדי לחשוף את הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את מחסן BAT בצורת פרפר על ידי degloving המחצית העליונה של העכבר. החזק את הנספחים והבטן התחתונים ביד אחת ומושך את העור כלפי מעלה, אל הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את העכבר, כך שהוא נמצא בעמדה נוטה על השולחן. היזהר שלא לזהם את המחסן החשוף עם שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירים נקיים כירורגית ושינוי לזוג טרי של כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את השכמות ומחסן מקביל. מוציא בזהירות את כל שומן לבן שטחי על גבי הפרפר ולאחר מכן לנתח את הפרפר של שומן חום interscapular. להיות זהיר, כדי למנוע את השריר קשור קשר הדוק עם שומן החום. הערה: השימוש במיקרוסקופ לנתיחה מומלצת להסרת wשומן היט, כמו גם בהפרדה של שומן החום מעצם השכמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את שומן המחסן ולהעביר לצינור microcentrifuge 2 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של רקמה התת עורית שומן (SQ), רקמות שומן לבן דיפו (WAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים על זוג טרי של כפפות כדי לא לזהם צולב בין מחסני שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את המפשעה, מחסני SQ משולשים על ידי דה-gloving המחצית התחתונה של העכבר. החזק את הנספחים ובית החזה העליונים ביד אחת ומושך את העור כלפי מטה לכיוון הרגליים ביד השנייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את העכבר במצב שכיבה בזמן נזהר שלא לזהם את המחסן החשוף עם שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> surgica הנקימכשירי l ושינוי לזוג טרי של כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח המשולשים של שומן SQ. היזהר שלא לזהם את הדגימה עם שריר, שומן השכן, בלוטות החלב או על ידי חיתוך כל כלים ולזהם את דגימת דם. הערה: השימוש במיקרוסקופ לנתיחה מומלצת אם גבולות אינם מוגדרים באופן ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מחסני שומן ולהעביר עד 2 מיליליטר צינורות microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מכתים, לתקן או להטביע באוקטובר אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של אשכי שומן קרבי שומן רקמות (מע&quot;מ) ולבן שומן רקמות (WAT) דיפו: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים על זוג טרי של כפפות כדי לא לזהם צולב בין מחסני שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם מדעssors, לחתוך את הצפק רוחבי, ישירות מתחת לסרעפת. חותך את הצפק מהסרעפת לאמצע פי הטבעת coronally לחשוף אברי בטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את האשכים או שחלות ולזהות את רקמת שומן הלבנה המצורפת, הידועה בשם שומן epididymal בזכרים או שומן אשכים אצל נקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירים נקיים כירורגית ושינוי לזוג כפפות חדש </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח שני מחסני שומן epididymal מהאשכים, epididymides, וdeferentia Vasa. או אם נקבה, לנתח בזהירות את שני רפידות שומן האשכים מהשחלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מחסני שומן ולהעביר אותם ל- 2 צינורות microcentrifuge מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מכתים, לתקן או להטביע באוקטובר אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li&gt; </ol></li></ol> 3. בידוד של רקמות שומן perivascular (PVAT) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של הלב: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר במצב שכיבה עם נספחים העליונים ותחתונים מורחבים כלפי חוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נספחים מאובטחים באמצעות קלטת כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיצוב העכבר כמפורט לעיל, ליצור מתח על ידי ההרמה על תהליך xiphoid עם מלקחיים. חותך אופקי דרך הסרעפת, חושף את החלק התחתון של חלל בית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוך שמירה על מתח, על ידי ההרמה על תהליך xiphoid, לחתוך דרך בית החזה superiorly לכיוון הראש, רק לצד של עצם החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרים את כלוב הצלעות רק נחותה עצם הבריח, ולחתוך לאורכו הנחותים של עצם הבריח לעבר הבית השחי בשני הכיוונים. חלל בית החזה ובתכניו (לב, ריאות, וכו &#39;) צריכים עכשיו להיות ברור לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את חלל בית החזה של דם ונוזל זרים באמצעות ga סטריליuze לספוג את הנוזל. אם איברים או כלי איסוף הקפידו שופע (מידע נוסף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהאזור מנוקה של נוזל, לחתוך את כלי הסמפונות ומצרפים להסיר את הריאות, המאפשר חשיפה טובה יותר של הלב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוקליזציה ורקמות כריתה של אבי העורקים perivascular השומן (PVAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את האיברים הבאים כלזהות טוב יותר את החלקים הנחותים של אב העורקים: כבד, קיבה, טחול, לבלב, מעי, ומעי גס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית תתחיל עם זיהוי של הקיבה והוושט. חותך את הוושט בצומת גסטרו-הוושט כדי לשחרר את הבטן מהגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, לזהות את המעיים ולפדר שמסביב. לחתוך באופן שטחי דרך לפדר, כפי שהוא נמצא קרוב מאוד לחלק הכליות של אב העורקים, ואז &quot;להפעיל את המעיים.&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את המעי הגס לשחרר קרוב לפי הטבעת ככל האפשר. לפיכך, לשחרר את הקיבה, המעי ומעי גס מהעכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Reלהזיז את הקיבה, מעי, מעי גס, הלבלב וטחול על ידי חיתוך דרך לפדר המצרף וכלי דם. הלבלב והטחול צריך לבוא בחינם עם הקיבה, המעי ומעי גס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכבד על ידי חיתוך דרך ורידי הכבד ומצרף לפדר, להסיר את כל האונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את שכבת שומן הקרביים ומקיף את הכליות. השאר את הכליות מחוברים לאב העורקים בvivo לשמש כסמנים גיאוגרפיים למגזרים שונים של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את האזור עם סטרילי 1X PBS ולהסיר את כל הנוזל על ידי קליטה עם גזה סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרו המספריים ומיקרו-מלקחיים, להפריד את אב העורקים מזיקתו לגב עמוד השדרה והקובץ המצורף גחונו לוושט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את אב העורקים על ידי ביצוע וניתוק אב העורקים האורך של אב העורקים היורדים מהמוצא בלב להסתעפות באזור הכסל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות ולבודד את כלי subclavian. לבודד הכלים האלהמהצוואר ועד שורש אב העורקים לחשוף טוב יותר לצומת אב העורקים ושורש בלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את בלוטת התימוס ואז לחתוך את עורק brachiocephalic, עורק התרדמה המשותף שמאל, ועורק subclavian שמאל, המאפשר תנועה של הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסיוע מיקרוסקופ לנתיחה, להציג את שכבת perivascular רקמת שומן (PVAT) המקיפה את אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקיטת זהירות רבה שלא לצבוט או לסחוט PVAT, משוך בעדינות את דרך PVAT מאב העורקים עם מיקרו-מלקחיים. בעדינות לחתוך את הקובץ המצורף של PVAT לאב העורקים עם מיקרו המספריים החל משעת אזור בית החזה פשוט מעולה למקום שבי הסרעפת ממוקמת. הערה: מיקרוסקופ לנתיחה מומלץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה לכל האורך של אב העורקים, שסיים באזור אב העורקים infrarenal, הנמצא רק מעולה להסתעפות הכסל של כלי השיט של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם PVAT קשת אב העורקים הוא רצוי, השתמש באותה השיטה כדי להסיר את PVAT מג פחותיםurvature של הקשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח דגימות PVAT לתוך 2 מיליליטר צינור microcentrifuge (ים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). הערה: מחסני שומן נוספים לשקול אם מעוניין בניתוח מחסן שומן מקיף כוללת: retroperitoneal, mesenteric, omental, קרום הלב וpopliteal. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li>
<li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults%2C+1999-2010%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li>
<li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+medical+care+costs+of+obesity%3A+an+instrumental+variables+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Health+Economics%22%5BJournal%5D)">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li>
<li>Obesity accounts for 21 percent of U.S. health care costs, study finds. , Cornell University. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm">http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm</a> (2012).</li>
<li>Marder, W., Chang, S. Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarder%2C+W+%22Thomson+Medstat+Research+Brief%22">Thomson Medstat Research Brief</a>. , (2006).</li>
<li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-fat+diet+increases+IL-1%2C+IL-6%2C+and+TNF-%CE%B1+production+by+increasing+NF-%CE%BAB+and+attenuating+PPAR-%CE%B3+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-α production by increasing NF-κB and attenuating PPAR-γ expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTEN+loss+in+the+Myf5+lineage+redistributes+body+fat+and+reveals+subsets+of+white+adipocytes+that+arise+from+Myf5+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors.</a> Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).</li>
<li>Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+adipocyte+biology.+Adipose+tissue+function+and+plasticity+orchestrate+nutritional+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation.</a> J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).</li>
<li>Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li>
<li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinction+of+white%2C+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li>
<li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White%2C+brown%2C+beige%2Fbrite%3A+different+adipose+cells+for+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li>
<li>Casteilla, L., Pénicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling%3A+factors+in+selection+and+depot+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li>
<li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים או ניגודי אינטרסים אחרים.

השמנת יתר יכול להוביל למארח גדול של תחלואות וההבנה המלאה של התפקיד שממלא שומן אינו מובן במלואו; מחקר לכן המשיך בתחום השומן הוא הכרחי. מודלים של בעלי חיים, במיוחד מודלים עכבריים הם אידיאליים למחקר ראשוני בהתקדמות של מחלות ובדיקות של טיפולי תרופות פוטנציאליים. בשימוש במודלים אלה, בידוד וכריתה של מחסני שומן מדויקים הוא כלי חשוב וההכרחי ביותר במחקר של פתולוגיה של מחלות שומן מושפעת. בספרות הקיימת לגבי מחסני שומן, יש כ...

שומן היה חלש בולטת באור זרקורי התקשורת, כתוצאה מהעלייה הדרמטית של השמנת יתר במהלך העשורים האחרונים של המאה ה -20. השמנה כיום משפיעה על יותר משליש ממבוגרים ו -17% מילדים ובני הנוער בארצות הברית (ארה&quot;ב) 1. פורש את כל הקבוצות האתניות, מחקר סטטיסטי המקיף את מגיפת ההשמנה הראה שיש לי שחורים שאינו היספנים השיעור מותאם לגיל הגבוה ביותר של השמנת יתר (49.5%) בהשוואה לאמריקאים מקסיקניים (40.4%), כלל ההיספאנים (39.1%), ואי לבנים היספני (34.3%) 2. ההשפעה הכלכלית של השמנת יתר היא גם דאגה גוברת למערכת הבריאות. בשנת 2012, הוערך כי העלות השנתית של טיפול הרפואית לטיפול בהשמנה בארה&quot;ב בשנת 2005 הייתה $ 190,200,000,000, כמעט 21% מתקציב ההוצאות רפואיות הכללי. למרבה הצער, השמנה בילדות הייתה מוערך להיות אחראי על 14 מליארד דולרים בעלויות רפואיות ישירות לבד. מבחינה סטטיסטית, נקבע כי העלות הממוצעת של רפואיתאנשים עם השמנת יתר היו גבוה יותר 2741 $ בשנה מאשר אלו ללא תחלואה זה 3-5. השמנת יתר היא גורם סיכון עיקרי למגוון רחב של מצבים כגון: סוכרת מסוג 2, דיסליפידמיה, מחלות לב וכלי דם, סרטן, הפרעות שלד שרירים ודלקת כרונית. השמנה קשורה עמוק לפתוגנזה של תסמונת מטבולית ומחלות כרוניות אחרות 6-8. עם קשרי דרסטי ושליליים כגון בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר מדעי מיקד את תשומת לב כדי להבין את המגיפה הנוכחית ותפקידים המגוונים ומרכזיים שמילאו שומן טוב יותר. מבחינה הסטורית, רקמת שומן נחשבה חסרת חשיבות ונתפסה רק כרקמת מילוי פשוטה. נכון לעכשיו, שומן הוכח לשחק הרבה תפקידים חיוניים בתפקוד הגוף ב: חילוף חומרים, ויסות הורמון, דלקת, הגנה ובידוד 9. רקמת שומן מורכבת בעיקר מadipocytes אלא גם מכיל pericytes, תאי האנדותל, מונוציטים, מקרופאגים ותאי גזע pluripotent 8. רקמת שומן מופצת בכל הגוף בתחנות שונות. ניתן למצוא המחסנים העיקריים subdermally, תת-עורית, לשריר, ולעומק 10. מחסני שומן הוכחו לי פרופילי מחסן ספציפיים חילוף חומרים, אשר הראו רגישות ספציפית מחסן להשמנה והפרעות הקשורות 8. באופן מסורתי, רקמת שומן כבר מסווגת לשני סוגים עיקריים: רקמת שומן לבנה (WAT) ורקמת שומן חומה (BAT); למרות שהספרות האחרונה מציינת את הנוכחות של קבוצה שלישית הוטבלה שומן brite או בז &#39;11. רקמת שומן הוכח לי צבעים שונים, מורפולוגיות, פונקציות מטבוליות, תכונות ביוכימיות ודפוסים גנטיים ביטוי 10. יש לי adipocytes בWAT, טיפה אחת גדולה של שומנים וכמויות משתנות של המיטוכונדריה. WATנמצא דומיננטי ביישובים תת-עורי והקרביים של הגוף. פונקציות WAT כאתר של אחסון אנרגיה והגנה על איברים בעיקר. יש לי adipocytes בBAT מורפולוגיה multilocular והמיטוכונדריה בשפע. BAT ממוקם בעיקר בצוואר וכלי דם גדולים של בית החזה, כמו גם את השכמות 12. BAT פונקציות בעיקר בהתנהגויות משקיעה באנרגיה, המסדירות thermogenesis 7. שומן Brite או בז &#39;הוכח לשתף מורפולוגיה דומה וביטוי לBAT אבל כבר מצא להיות מקור מתאי שומן לבן 11. השיטה הניתוחית שתוארה בכתב היד הזה מספקת לחוקרים עם היכולת לנתח תופעות שונות שגורמים כגון: סביבה, תרופות, וגנטיקה, יש בשומן; כמו גם את תפקיד השומן מועיל או מזיק משחק במחלה ועל בריאות כללית. כמו כן, מספק דרך לזהות ולבודד סוגים שונים של רקמת שומן ללאפשר להבין טוב יותר של מערכות יחסים ביוכימיים והבדלים בין מחסנים. זה יכול לסייע בקביעת הקשר בין מיקום, פונקציה, וסוגים של שומן בגוף. שיטה מתוארת זה משיגה זאת על ידי מתן האמצעי להדמיה גולמית, ניתוח ביטוי גנים, ניתוח ביטוי חלבון, בדיקה היסטולוגית, ובידוד של שורות תאים עיקריות למחקרים במבחנה. נכון לעכשיו יש מאמרים רבים המספקים תובנה התנהגות חילוף חומרים של מחסנים שונים שומן, כמו גם במקומות אנטומיים שלהם; אבל לא מספק שיטה לעומק על איך למקם במיוחד, לזהות, ולבודד מחסנים אלה. שיטה ניתוחית זו מספקת טכניקה מדויקת שמאפשרת בידוד של מחסנים מרובים עם כמות מינימאלית של נתיחה וזיהום בהשוואה לאחרים שיטות שנועדו לבודד ממחסנים אחד או שתיים 13-14. המטרה של פרוטוקול זה היא לספקשיטה מדויקת לזיהוי ולבידוד סוגים שונים של מחסני שומן ממקומות אנטומיים רבים של.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>פישר</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>יש לחמם באמבט מים לפני הנחת טישו.</td></tr><tr><td>2 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון murine שומן

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

השמנת יתר עלתה באופן דרמטי בעשורים האחרונים ומשפיעה על יותר משליש מהאוכלוסייה הבוגרת בארה"ב. ההשפעה הכלכלית של השמנת יתר בשנת 2005 הגיעה לסכום מדהים של 190.2 מיליארד דולר בעלויות רפואיות ישירות בלבד. השמנת יתר היא גורם סיכון מרכזי לשורה רחבה של מחלות. מבחינה היסטורית, מעט היה ידוע על השומן ותפקידיו העיקריים והחיוניים בגוף. שומן חום ולבן הם שני הסוגים העיקריים של שומן, אך הספרות הנוכחית זיהתה סוג חדש של שומן הנקרא שומן בריט או בז'. מחקרים הראו כי למחסני שומן יש פרופילים מטבוליים ספציפיים ומחסנים מסוימים מאפשרים נטייה להשמנת יתר והפרעות קשורות אחרות. מטרת פרוטוקול זה היא לספק לחוקרים את היכולת לזהות ולכרות מצבורי שומן שיאפשרו ניתוח של השפעות פקטוריאליות שונות על שומן; כמו גם התפקיד המועיל או המזיק של השומן במחלות ובבריאות הכללית. בידוד וכריתת מצבורי שומן מאפשרים לחוקרים להסתכל על שינויים מורפולוגיים גסים כמו גם שינויים היסטולוגיים. השומן המבודד יכול לשמש גם למחקרים מולקולריים להערכת שינוי שעתוק ותרגום או לניסויים במבחנה לגילוי מטרות מעניינות ומנגנוני פעולה. טכניקה זו עדיפה על טכניקות אחרות שפורסמו בשל התכנון המאפשר בידוד של מספר מחסנים בפשטות ובזיהום מינימלי.

זיהוי, ולוקליזציה של שומן תת-עורי מפשעתי, שומן חום interscapular, שומן קרביים epididymal (איור 1), כמו גם את שומן קשת אב העורקים perivascular, שומן אב העורקים החזי, שומן אב העורקים suprarenal ושומן אב העורקים infrarenal (איור 2) הושג בהצלחה באמצעות השיטה הניתוחית שתוארה. בדיקה היסטולוגית ובידול בין דגימות BAT וWAT הוערכו באופן חיובי באמצעות Hematoxylin ו Eosin (H &amp; E) מכתים (איור 3). ניתוח של רמות RNA של אדיפונקטין, גמא קולט מ...

בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית.

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים את הזיהוי והכריתה של משקע שומן לניתוח השפעות פקטוריאליות שונות על ועל ידי שומן. זה מושג על ידי חשיפת האיברים הפנימיים ומחסני השומן של עכבר בוגר. בשלב השני מסירים את האיברים והרקמות המיותרות כדי לחשוף טוב יותר את המחסנים, מה שמאפשר לזהות את המחסנים במיקומם המתאים.בשלב האחרון, רקמת השומן מופקת בזהירות מיוחדת כדי למנוע זיהום. בסופו של דבר, הבידוד והכריתה של משטחים אלה מספקים רקמה לניתוח היסטולוגי, ביטוי חלבונים, פעילות אנזימים וניתוח ביטוי גנים, כמו גם למחקרי מבחנה. היתרון העיקרי של פרוטוקול מסוים זה על פני המתודולוגיות הקיימות הוא שהוא מאפשר בידוד מרובה מחסנים עם חיתוך מינימלי, כמו גם זיהום מינימלי.כך שהליך זה יכול לעזור לענות על שאלות בתחום ההשמנה. למשל, ההשפעות המזיקות או אפילו המועילות של רקמת השומן על מחלות אנושיות. כדי לבודד רקמת שומן חומה, התחל בהנחת עכבר בוגר אתנול, נקי ומורדם במצב שכיבה עם גבו אל השולחן.לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להרים את העור ממש מתחת לסרעפת ולחתוך את העור במספריים. חותכים לרוחב סביב היקף העכבר כדי לחשוף את הצפק. לאחר מכן החזק את התוספות התחתונות והבטן ביד אחת, משוך את העור כלפי מעלה לכיוון הראש ביד השנייה כדי להסיר את החצי העליון של העכבר וחושף את מחסן השומן החום בצורת פרפר או עטלף.לאחר מכן, אתר את הנוף ואת מחסן העטלפים המתאים. לאחר מכן השתמש במיקרוסקופ דיסקציה כדי להסיר בזהירות כל שומן לבן שטחי על גבי הפרפר ולנתח את השומן החום הבין-שכמי, תוך הקפדה להימנע מכל שריר נלווה. כדי לבודד את רקמת השומן התת-עורית או התת-עורית, החזק את התוספות העליונות ובית החזה ביד אחת, ומשוך את העור כלפי מטה לכיוון כפות הרגליים ביד השנייה כדי להסיר את הכפפה מהחצי התחתון של העכבר ולחשוף את משקעי המשנה המפשעתיים המשולשים.לאחר מכן החזר את העכבר למצב שכיבה ונתח בזהירות את משולשי השומן המשנה כדי לבודד את שומן בלוטת המין מחלל הבטן. השתמש במספריים כדי לחתוך את הצפק לרוחב ישירות מתחת לסרעפת. לאחר מכן חותכים את הצפק מהסרעפת לפי הטבעת, באמצע העטרה כדי לחשוף את איברי הבטן ולנתח בזהירות את שני מצבורי השומן האפידרמיס מהאשכים epi ו-vasa deia.כדי לבודד את רקמת השומן הפרי-וסקולרית, שמור על החיה במצב שכיבה, והאריך את התוספות העליונות והתחתונות כלפי חוץ. לאחר מכן, הרם את תהליך ה-xiphoid בעזרת מלקחיים כדי ליצור מתח על פני החלק העליון של הגוף וחתך אופקית דרך הסרעפת, תוך חשיפת החלק התחתון של חלל בית החזה. חותכים את כלוב הצלעות בצורה עליונה לכיוון הראש רק לצד עצם החזה, ואז מרימים את כלוב הצלעות נחות מעצם הבריח.חיתוך לאורך התחתון של עצם הבריח לכיוון בית השחי בשני הכיוונים. חלל בית החזה ותכולתו אמורים כעת להיות גלויים בבירור. לאחר שהאזור מתנקה מנוזלים, חותכים את הסמפונות ואת כלי החיבור כדי להסיר את הריאות ולחשוף את הלב.לאחר זיהוי הקיבה והוושט, חתכו את הוושט בצומת הקיבה והוושט כדי לשחרר את הקיבה. לאחר מכן, זהה את המעיים ואת המזנטריה שמסביב. חותכים באופן שטחי את המזנטריה ואז חותכים את המעי הגס קרוב ככל האפשר לרקטום כדי לשחרר את הקיבה, המעי, המעי הגס, הלבלב והטחול.לאחר הסרת האיברים, חתכו את ורידי הכבד והמזנטריה המחברת והסירו את כל אונות הכבד. חותכים את השכבה הקרבית והשומן המקיפים את הכליות, ומשאירים את הכליות המחוברות לאבי העורקים in vivo כדי לשמש כסמנים גיאוגרפיים למקטעים השונים של אבי העורקים. לאחר מכן, כאשר האזור סביב הכליות פנוי, השתמש במספריים זעירים ובמיקרו מלקחיים כדי להפריד את אבי העורקים מהחיבור הגבי שלו לעמוד השדרה, ואת החיבור הגחוני שלו לוושט.בבית החזה, עקוב ונתק את אבי העורקים ממקורו בלב להתפצלות באזור הכסל. כדי לבודד את רקמת השומן של אבי העורקים, בשלב זה ניתן לזהות את כלי הדם התת-בריחיים. בודדו את הכלים הללו מהצוואר לשורש אבי העורקים כדי לחשוף טוב יותר את צומת אבי העורקים והשורש בלב.לאחר מכן הסר את התימוס וחתך את הברכיוצפלי, את הצוואר השמאלי ואת העורקים התת-בריחיים השמאליים כדי לאפשר תנועה של הלב. לבסוף, השתמש במיקרוסקופ מנתח כדי לראות את רקמת השומן הפרי-וסקולרית או שכבת P VVA T המקיפה את אבי העורקים. לאחר מכן השתמש במיקרו מלקחיים כדי למשוך בעדינות את הרקמה הרחק מאבי העורקים ומיקרו מספריים כדי לחתוך בעדינות את החיבור של ה-PVAT לאבי העורקים החל מאזור בית החזה, בדיוק עדיף על המקום שבו נמצאת הסרעפת.לאחר מכן השתמש במלקחיים מיקרו כדי למשוך בעדינות את הרקמה הרחק מאבי העורקים ומספריים מיקרו כדי לחתוך בעדינות את החיבור של ה-PVAT לאבי העורקים החל מאזור בית החזה בדיוק מעל המקום שבו נמצאת הסרעפת. חזור על תהליך זה לכל אורך אבי העורקים ומסיים באזור אבי העורקים האינפרנלי, הממוקם בדיוק מעל להתפצלות הכסל של כלי אבי העורקים ונחות מענפי הכליה. וניתן להבדיל בין דגימות וואט על ידי ניתוח היסטולוגי עם צביעת h ו-e קווי תאים ראשוניים של אדיפוציטים תת עוריים, ופרי-וסקולריים.לאחר מכן ניתן לתרבית אדיפוציטים ולהבדיל אותם מפרה-אדיפוציטים לאדיפוציטים לצורך ניתוח מיקרו-מערך. בתמונות מייצגות אלה, למשל, ההמרה של פרה-אדיפוציטים מתורבתים לאדיפוציטים אושרה עם אדום שמן O מכתים אדומים, ניתן להשתמש בבידוד ובתרבית ובהתמיינות בשיטה זו לניתוחים נוספים במבחנה. בניסוי מייצג זה, הפעילות האנזימטית של MM P 2 נצפתה בירידה באדיפוציטים פריוסקולריים מבודדים בתגובה לטיפול ניסיוני בהשוואה לבקרות שלא טופלו.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להחליף את הכפפות וכן לנקות את המכשירים לעתים קרובות כדי למזער את הזיהום. אז לאחר איסוף הרקמות הללו, ניתן לבצע עליהן מגוון הליכים. למשל, תרבית תאים, ניתוח היסטולוגי, מדידת חלבונים ואפילו ביטוי גנים.ואז ניתן להשתמש בתוצאות אלה כדי לעזור להבין את היחסים והדמיון וההבדלים בין המחסנים השונים.

localization-identification-and-excision-of-murine-adipose-depots

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בסרטון זה, אנו מדגימים את ההליך הכירורגי לבידוד רקמת השומן הלבן התת עורית ורקמת השומן החומה הבין-סקפולרית מעכבר שזה עתה נולד.

אוסף מחסן שומן לבן וחום מגור עכבר: הליך כירורגי לקצירת רקמת השומן הלבנה ורקמת השומן החומה מגור עכבר

רקמת שומן (AT) יכולה להשפיע על הומאוסטזיס של כל הגוף, ולכן יש חשיבות להבנת המנגנונים המולקולריים של התמיינות ותפקוד אדיפוציטים. אנו מספקים פרוטוקול להשגת תובנות חדשות לגבי תהליכים אלה על ידי ניתוח הומאוסטזיס, התמיינות וחשיפה להיפוקסיה כמודל לאפופטוזיס אדיפוציטים מושרים.

מנגנון הוויסות של מספרי adipocyte למבוגרים אורגניזמים באמצעות בידול הומאוסטזיס אפופטוזיס

אנו מציגים את הטכניקות הנדרשות לבידוד מקטע כלי הדם הסטרומלי (SVF) ממאגרי רקמות שומן מפשעתיים (תת עוריים) ופריגונדלים (קרביים) של עכברים כדי להעריך את ביטוי הגנים והפעילות הקולגנוליטית שלהם. שיטה זו כוללת העשרה של תאי גזעשמקורם בשומן גבוה Sca1 (ASCs) באמצעות הפרדת תאים אימונומגנטיים.

הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי Sca1<sup&gt; גבוה</sup&gt; בתאי גזע שמקורם שומן (ASCs)

אדיפוציטים קיימות במחסנים נפרדים ויש להם תפקידים מגוונים בתוך המיקרו-סביבות הייחודיות שלהם. כמו הבדלים אזוריים אופי ותפקוד הפונקציה נחשפים, זיהוי סטנדרטית בידוד של מחסני חיוני לקידום השדה. בזאת, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לגבי כריתה של מחסני שומן בעכבר.

זיהוי וניתוח של מחסני עכבר מגוונים

מטרת פרוטוקול זה היא לסנתז ליפוזומים בעלי תווית פלואורסצנטית ולהשתמש בציטומטריית זרימה כדי לזהות לוקליזציה in vivo של ליפוזומים ברמה התאית.

הכנה, מתן והערכה של ספיגה תאית ספציפית לרקמת in vivo של ליפוזומים בעלי תווית צבע פלואורסצנטי

פרוטוקול זה מתאר את הגישה הטכנית לבידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני רקמת שומן לבן תוך בטני (WAT) על ידי מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות או הפרדת חרוזים אימונומגנטית.

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

פרוטוקול זה מפרט שיטה לכריתת מחסני שומן של עכברים ולבידוד ועיכול של העורקים המתאימים כדי לשחרר ולאחר מכן לזהות את אוכלוסיית תאי האנדותל. תאים מבודדים טריים המשמשים ביישומים במורד הזרם יקדמו את ההבנה של הביולוגיה של תאי כלי הדם והמנגנונים של תפקוד לקוי של כלי הדם.

בידוד וזיהוי של תאי אנדותל וסקולריים ממחסני שומן נפרדים ליישומים במורד הזרם

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

כאן, אנו מספקים הליך מעשי לניתוח וביצוע ניתוחים היסטולוגיים וביטוי גנים של רקמת שומן חומה סופרקלאביקולרית.

דיסקציה, עיבוד היסטולוגי וניתוח ביטוי גנים של רקמת שומן חומה סופרקלאביקולרית מורין

הגודל והשבריריות של אדיפוציטים בוגרים הגבילו את הטכניקות והכלים הזמינים למחקר ולבידוד שלהם. כאן, מתואר פרוטוקול לבידוד של אדיפוציטים עכברים בוגרים, שניתן להתאים בקלות למחסני שומן שונים ולדיאטות עכברים.

בידוד ותרבות של אדיפוציטים עכבריים ראשוניים מעכברים רזים והשמנים

למדו לזהות ולכרות בסיסי שומן שונים בעכברים בוגרים לצורך ניתוח היסטולוגי וביטוי גנים. השיטה מאפשרת בידוד מרובה עם מינימום חיתוך וזיהום לתוצאות אמינות.

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

גלה סרטונים נוספים