לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית.

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים את הזיהוי והכריתה של משקע שומן לניתוח השפעות פקטוריאליות שונות על ועל ידי שומן. זה מושג על ידי חשיפת האיברים הפנימיים ומחסני השומן של עכבר בוגר. בשלב השני מסירים את האיברים והרקמות המיותרות כדי לחשוף טוב יותר את המחסנים, מה שמאפשר לזהות את המחסנים במיקומם המתאים.

בשלב האחרון, רקמת השומן מופקת בזהירות מיוחדת כדי למנוע זיהום. בסופו של דבר, הבידוד והכריתה של משטחים אלה מספקים רקמה לניתוח היסטולוגי, ביטוי חלבונים, פעילות אנזימים וניתוח ביטוי גנים, כמו גם למחקרי מבחנה. היתרון העיקרי של פרוטוקול מסוים זה על פני המתודולוגיות הקיימות הוא שהוא מאפשר בידוד מרובה מחסנים עם חיתוך מינימלי, כמו גם זיהום מינימלי.

כך שהליך זה יכול לעזור לענות על שאלות בתחום ההשמנה. למשל, ההשפעות המזיקות או אפילו המועילות של רקמת השומן על מחלות אנושיות. כדי לבודד רקמת שומן חומה, התחל בהנחת עכבר בוגר אתנול, נקי ומורדם במצב שכיבה עם גבו אל השולחן.

לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להרים את העור ממש מתחת לסרעפת ולחתוך את העור במספריים. חותכים לרוחב סביב היקף העכבר כדי לחשוף את הצפק. לאחר מכן החזק את התוספות התחתונות והבטן ביד אחת, משוך את העור כלפי מעלה לכיוון הראש ביד השנייה כדי להסיר את החצי העליון של העכבר וחושף את מחסן השומן החום בצורת פרפר או עטלף.

לאחר מכן, אתר את הנוף ואת מחסן העטלפים המתאים. לאחר מכן השתמש במיקרוסקופ דיסקציה כדי להסיר בזהירות כל שומן לבן שטחי על גבי הפרפר ולנתח את השומן החום הבין-שכמי, תוך הקפדה להימנע מכל שריר נלווה. כדי לבודד את רקמת השומן התת-עורית או התת-עורית, החזק את התוספות העליונות ובית החזה ביד אחת, ומשוך את העור כלפי מטה לכיוון כפות הרגליים ביד השנייה כדי להסיר את הכפפה מהחצי התחתון של העכבר ולחשוף את משקעי המשנה המפשעתיים המשולשים.

לאחר מכן החזר את העכבר למצב שכיבה ונתח בזהירות את משולשי השומן המשנה כדי לבודד את שומן בלוטת המין מחלל הבטן. השתמש במספריים כדי לחתוך את הצפק לרוחב ישירות מתחת לסרעפת. לאחר מכן חותכים את הצפק מהסרעפת לפי הטבעת, באמצע העטרה כדי לחשוף את איברי הבטן ולנתח בזהירות את שני מצבורי השומן האפידרמיס מהאשכים epi ו-vasa deia.

כדי לבודד את רקמת השומן הפרי-וסקולרית, שמור על החיה במצב שכיבה, והאריך את התוספות העליונות והתחתונות כלפי חוץ. לאחר מכן, הרם את תהליך ה-xiphoid בעזרת מלקחיים כדי ליצור מתח על פני החלק העליון של הגוף וחתך אופקית דרך הסרעפת, תוך חשיפת החלק התחתון של חלל בית החזה. חותכים את כלוב הצלעות בצורה עליונה לכיוון הראש רק לצד עצם החזה, ואז מרימים את כלוב הצלעות נחות מעצם הבריח.

חיתוך לאורך התחתון של עצם הבריח לכיוון בית השחי בשני הכיוונים. חלל בית החזה ותכולתו אמורים כעת להיות גלויים בבירור. לאחר שהאזור מתנקה מנוזלים, חותכים את הסמפונות ואת כלי החיבור כדי להסיר את הריאות ולחשוף את הלב.

לאחר זיהוי הקיבה והוושט, חתכו את הוושט בצומת הקיבה והוושט כדי לשחרר את הקיבה. לאחר מכן, זהה את המעיים ואת המזנטריה שמסביב. חותכים באופן שטחי את המזנטריה ואז חותכים את המעי הגס קרוב ככל האפשר לרקטום כדי לשחרר את הקיבה, המעי, המעי הגס, הלבלב והטחול.

לאחר הסרת האיברים, חתכו את ורידי הכבד והמזנטריה המחברת והסירו את כל אונות הכבד. חותכים את השכבה הקרבית והשומן המקיפים את הכליות, ומשאירים את הכליות המחוברות לאבי העורקים in vivo כדי לשמש כסמנים גיאוגרפיים למקטעים השונים של אבי העורקים. לאחר מכן, כאשר האזור סביב הכליות פנוי, השתמש במספריים זעירים ובמיקרו מלקחיים כדי להפריד את אבי העורקים מהחיבור הגבי שלו לעמוד השדרה, ואת החיבור הגחוני שלו לוושט.

בבית החזה, עקוב ונתק את אבי העורקים ממקורו בלב להתפצלות באזור הכסל. כדי לבודד את רקמת השומן של אבי העורקים, בשלב זה ניתן לזהות את כלי הדם התת-בריחיים. בודדו את הכלים הללו מהצוואר לשורש אבי העורקים כדי לחשוף טוב יותר את צומת אבי העורקים והשורש בלב.

לאחר מכן הסר את התימוס וחתך את הברכיוצפלי, את הצוואר השמאלי ואת העורקים התת-בריחיים השמאליים כדי לאפשר תנועה של הלב. לבסוף, השתמש במיקרוסקופ מנתח כדי לראות את רקמת השומן הפרי-וסקולרית או שכבת P VVA T המקיפה את אבי העורקים. לאחר מכן השתמש במיקרו מלקחיים כדי למשוך בעדינות את הרקמה הרחק מאבי העורקים ומיקרו מספריים כדי לחתוך בעדינות את החיבור של ה-PVAT לאבי העורקים החל מאזור בית החזה, בדיוק עדיף על המקום שבו נמצאת הסרעפת.

לאחר מכן השתמש במלקחיים מיקרו כדי למשוך בעדינות את הרקמה הרחק מאבי העורקים ומספריים מיקרו כדי לחתוך בעדינות את החיבור של ה-PVAT לאבי העורקים החל מאזור בית החזה בדיוק מעל המקום שבו נמצאת הסרעפת. חזור על תהליך זה לכל אורך אבי העורקים ומסיים באזור אבי העורקים האינפרנלי, הממוקם בדיוק מעל להתפצלות הכסל של כלי אבי העורקים ונחות מענפי הכליה. וניתן להבדיל בין דגימות וואט על ידי ניתוח היסטולוגי עם צביעת h ו-e קווי תאים ראשוניים של אדיפוציטים תת עוריים, ופרי-וסקולריים.

לאחר מכן ניתן לתרבית אדיפוציטים ולהבדיל אותם מפרה-אדיפוציטים לאדיפוציטים לצורך ניתוח מיקרו-מערך. בתמונות מייצגות אלה, למשל, ההמרה של פרה-אדיפוציטים מתורבתים לאדיפוציטים אושרה עם אדום שמן O מכתים אדומים, ניתן להשתמש בבידוד ובתרבית ובהתמיינות בשיטה זו לניתוחים נוספים במבחנה. בניסוי מייצג זה, הפעילות האנזימטית של MM P 2 נצפתה בירידה באדיפוציטים פריוסקולריים מבודדים בתגובה לטיפול ניסיוני בהשוואה לבקרות שלא טופלו.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להחליף את הכפפות וכן לנקות את המכשירים לעתים קרובות כדי למזער את הזיהום. אז לאחר איסוף הרקמות הללו, ניתן לבצע עליהן מגוון הליכים. למשל, תרבית תאים, ניתוח היסטולוגי, מדידת חלבונים ואפילו ביטוי גנים.

ואז ניתן להשתמש בתוצאות אלה כדי לעזור להבין את היחסים והדמיון וההבדלים בין המחסנים השונים.