נוהל השתלה קאמרי בעמוד השדרה לאורך In vivo הדמיה של כבל עכבר השדרה

בסרטון הזה, אנו מתארים הליך להשתלת חדר הדמיה אופטי כרוני על חוט השדרה הגבי של עכבר חי. קאמרי, ההליך כירורגי, וההדמיה כרונית נבדקים והפגינו.

המטרה הכוללת של הליך זה היא להשתיל תא הדמיה מעל חוט השדרה הגבי של עכבר כדי לאפשר הדמיה אופטית אורכית ללא צורך בהתקפים כירורגיים חוזרים. זה מושג על ידי חשיפת שלוש חוליות בית החזה והסרת רקמות רכות מעל עמוד השדרה. השלב השני הוא להדק את החוליות החשופות באמצעות חלקי הצד של החדר ולבצע כריתת למינקטומיה גבית.

לאחר מכן, הצלחת העליונה של החדר מחוברת היטב מעל חוט השדרה החשוף ואטומה באמצעות אלסטומר סיליקון וזכוכית כיסוי. השלב האחרון הוא לאטום את העור סביב השתל באמצעות דבקים ולאפשר לבעל החיים להתאושש. בסופו של דבר, מיקרוסקופיה פלואורסצנטית מרובת פוטונים משמשת להדמיית התנהגות תאית ומבנה רקמות בחוט השדרה ברזולוציה תת-תאית לאורך זמן.

היתרון העיקרי של המתודולוגיה החדשה שלנו על פני שיטות קיימות, כגון פתיחה כירורגית חוזרת של חוט השדרה, הוא היכולת לקבל מספר כמעט שרירותי של נקודות זמן הדמיה הפרוסות על פני תקופה ארוכה ללא הסיבוכים הקשורים לניתוח חוזר, כגון זיהום פוטנציאלי, טראומה כירורגית או לחץ על בעלי חיים. הרעיון לשיטה הזו עלה לנו לראשונה כששקלנו את ההצלחה הקודמת של דימות אורך בעקבות פגיעה בחוט השדרה בדגי זברה שקופים. לאחר מכן החלטנו להרחיב את הפרדיגמה הזו למודל של יונקים.

התחל הליך זה על ידי גילוח אזור קשת בית החזה של עכבר מורדם באמצעות איזו פלואור. לאחר מכן הסר את השיער הקצוץ. לאחר מכן, יש לתת את התערובת של מי מלח, קטופרופן ודקסמתזון לעכבר תת עורית.

שימוש בצמר גפן. בצעו שלוש שטיפות לסירוגין של יוד ואתנול 70%, והמתינו דקה אחת בין השטיפות. לאחר מכן יש לתת 100 מיקרוליטר של 0.125% בופיבקאין למרכז המדבקה המגולחת באופן תת עורי כדי להפחית את הכאב במקום החתך.

לאחר מכן העבר את העכבר להתקפות הסטריאו המותאמות אישית. הכנס את מדחום פי הטבעת והמתן כ-10 דקות עד שהבופיבקאין ייכנס לתוקף תחת המיקרוסקופ. צור חתך של חמישה מילימטר מעל החוליות המעניינות בעזרת להב אזמל.

לאחר מכן, הגדל את גודל הפתח בעור על ידי דיסקציה קהה. לאחר מכן, נתק בעדינות את הפאשיה המחברת בין העור לשריר הבסיסי. החזק את העור לאחור לאזור עבודה גדול יותר עם המחזירים ולהיזהר לא להגביר משקל על החזה ולחסום את הנשימה.

לאחר מכן אחזו ברוסטרל, רוב החוליות שייחשפו דרך השריר שמעל בעזרת זוג מלקחיים. חותכים את הרקמה משני צידי התהליך הגבי הרחק משלוש חוליות. לאחר מכן, הסר את כל הרקמה העליונה מהלמינציה הגבית.

לאחר מכן, חתכו בזהירות את הגידים המחוברים לחוליות בשני הקצוות הצדדיים של עמוד השדרה. הסר בעדינות כמה שיותר רקמה מהקצוות הצדדיים של עמוד החוליה על מנת לספק משטח הידוק נקי. לאחר מכן הסירו בעדינות את החוליות של כל הרקמות הרכות שנותרו.

בעזרת מגרד עצמות וצמר גפן, חתוך כל רקמה לא מתאימה באמצעות המספריים הכירורגיים. לאחר מכן, כוונן את המחזירים כדי לעכב את הרקמה המקיפה את עמוד החוליות. יחד עם העור, חבר את מוטות הצד של השתל לשיניים בעמודי המסירה והנח אותם במחזיקי העמודים.

לאחר מכן, מהדק את שלוש החוליות. שימוש בסרגלי הצד על ידי הפעלת לחץ מספיק כדי להחזיק אותם היטב. לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להבטיח הידוק מפולס של שלוש החוליות.

ודא שפסי הצד מפולסים ומקבילים לפני ביצוע כריתת הלמינקטומיה. לאחר מכן, יש לנקות ולייבש בזהירות את משטח הגב של החוליות המהודקות בעזרת צמר גפן. בהליך זה, הכנס את קצות המספריים של Vana לחלל האפידורלי של החוליה המהודק המדיאלי וסחט קלות את הידיות.

אם העצם יבשה, היא צריכה להיסדק לאורך הלמינה הגבית. חזור על הליך זה בצד הנגדי כדי לשחרר את הלמינה תוך אחיזת הלמינה הרופפת בעדינות על ידי התהליך הגבי בעזרת מלקחיים, חתוך בזהירות כל רקמת חיבור בקצוות הרוסטרליים והמחבקים של הלמינה. לאחר מכן יש לשטוף היטב את כל הדם המכסה את חוט השדרה עם 0.9% מי מלח או עמוד שדרה מוחי מלאכותי לספוג עודפי נוזלים בעזרת צמר גפן.

לאחר מכן, חתוך את הקצוות הצדדיים של העצם והמשך לסרגלי הצד של השתל. לאחר מכן יש לשלוט בדימום באמצעות צמר גפן ותמיסת מלח. במקרה שחלק מהפריאוסטאום התנתק ומכסה את חוט השדרה, הסר בעדינות את הרקמה באמצעות צמר גפן ומחט בגודל 29 עד 30.

היזהר לא לפגוע בחוט השדרה ואל תבלבל את הפריאוסטאום הרופף עם דטור עטוף היטב. בסוף. אטום את הקצוות החשופים הנותרים של העצם עם שיניים, אקריליק וציאנואקרילט.

הקפד במיוחד למנוע מהדבק להגיע לחוט השדרה החשוף. כעת, מקם את הצלחת העליונה על החיה בזהירות כך שארבעת החריצים יתיישרו עם ארבעת החורים בסרגלי הצד והפתח יכסה את חוט השדרה החשוף. בעזרת מברג תכשיטן התחל בזהירות עם הבורג הראשון, ייצב את פיר המברג עם זוג מלקחיים נוסף.

אין להדק את הבורג בשלב זה, אלא להכניס אותו כך שהחוטים הראשונים יהיו מעורבים. חזור על תהליך זה עבור שלושת הברגים האחרים. כאשר כל ארבעת הברגים במקומם, הדק כל בורג לסירוגין באותן מרווחים קטנים עד שכל הברגים מאובטחים היטב.

לאחר מכן, השתמש באלסטומר סיליקון של מותג האדן המהיר כדי למלא את החלל בין חוט השדרה לחלון הזכוכית ולמרוח אותו על חוט השדרה החשוף. הקפד להיפטר מכל סיליקון המכיל בועות אוויר מקצה הערבוב לפני היישום שלו. לאחר מכן הניחו במהירות החלקת כיסוי של חמישה מילימטר לתוך התוספת בצלחת העליונה.

הפעל מספיק לחץ כדי לסחוט בהדרגה את האלסטומר הנוזלי כדי להקיף את חוט השדרה, אך לא לגרום לדחיסת חוט השדרה. לאחר מכן, כסו את שולי האלסטומר המופרש בשיניים, אקריליק וציאנואקרילט, והשתמשו בדבקים כדי להדביק את האלסטומר לעצם שמסביב ככל האפשר כדי למנוע מהאלסטומר לזוז על פני חוט השדרה. לאחר מכן, הסר את המחזירים ומשוך את העור כלפי מעלה סביב קצה השתל.

השתמש בציאנואקרילט כדי להדביק את העור לקצוות השתל. לאחר מכן, הכנס את הברגים לכנפיים של הצלחת העליונה. לאחר מכן אטמו את הרווחים בחריצי הברגים של הצלחת העליונה באמצעות אקריליק דנטלי לפני החזרת החיה לכלוב להתאוששות.

לפני מפגשי ההדמיה, יש להרדים שוב את העכבר ולחבר את הברגים החשופים של השתל לעמודי ההברגה לייצוב. איור זה מראה כי חדר עמוד שדרה כרוני נשאר שקוף אופטית לאורך מספר שבועות. מדובר בתמונות לבנות עד בהירות של חוט השדרה הנעות בין מספר דקות לשלושה שבועות לאחר הניתוח.

ניתן לזהות את ציוני הדרך של כלי הדם בכל נקודות הזמן. שינוי קטן נראה ביום אחד לאחר הניתוח. צמיחת יתר סיבית צפופה קיימת בחלק מהחלון כבר בשלושה ימים וגורמת לערפול חלקי של אזור ההדמיה.

קיימת גם ניאו-וסקולריזציה קלה אך אינה מטשטשת את כלי הדם המקוריים באור לבן או בשתי הדמיות PEF. תא עמוד השדרה הכרוני מאפשר הדמיה מרובת פוטונים חוזרת ללא צורך בניתוחים חוזרים ונשנים. להלן תמונות של עכבר טרנסגני המבטא YFP בתת-קבוצה של אקסונים DRG ב-fii הגבי של חוט השדרה.

כלי הדם סומנו על ידי הזרקת צבע תוך-וסקולרית המוצגת באדום. ניתן לעקוב אחר פעילות המיקרוגליה לאורך זמן גם בעכברים טרנסגניים כפולים בירך אחת, YFP, CX, שלושה CR, GFP כפול, בעוד שאקסונים ומיקרוגליה נשארים גלויים. הניגודיות והרזולוציה יורדות בצניעות עם הזמן.

ברגע ששולטים. טכניקה זו יכולה להיעשות תוך כשעה אם היא מבוצעת כראוי לאחר התפתחותה. הטכניקה הזו סללה לנו את הדרך לחקור את ההטרוגניות הזמנית והמרחבית של גסיסת אקסונים אחרי פגיעה בחוט השדרה.

ועכברים.