Name: הערכה של מאפייני תא גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות Multi ומבחני Spheres מבוסס תא בודדים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: חקור מאפייני תאי גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות מבחני Spheres מבוססי תא בודדים ורב-תאיים. השיטה מאפשרת זיהוי מדויק של אוכלוסיות תאי גזע סרטניים וחישוב שכיחותם בגידול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענק מקרן באדן-וירטמברג (תוכנית תאי גזע בוגרים II) שהוענק ל-C.L. אנו מודים לד"ר מרטינה קוננץ על המשוב הביקורתי והסקירה של כתב היד. אנו מודים לעמנואל טראונקר וטוני קרבס ממתקן DBM FACS (בית החולים האוניברסיטאי באזל) על הסיוע במיון FACS.

1. דור של תאי השחלה אדם OVCAR-3 Carcinoma transduced ביציבות עם Lentiviruses מכיל לבנות כתב Sox2 התקינה האזור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליצור חלקיקי lentiviral על ידי transfecting קו תא 293T-אריזת HEK עם לבנות כתב הכרת אזור רגולציה Sox2 כ10,21 תיארו. הערה: הכתב לבנות עוד מכיל תחום יציבות של מערכת חומת ProteoTuner לפני חלבון פלואורסצנטי tdTomato. Shield1 נקשר לתחום היציבות ובכך למנוע פרוטאזום להשפיל חלבון פלואורסצנטי 22. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transduce OVCAR-3 תאים עם חלקיקי lentiviral על פני תקופה של 24 שעות זמן. לאחר מכן, להסיר את supernatant ויראלי ולשטוף את התאים עם ופר פוספט (PBS) ותרבית בינונית שלם (RPMI בתוספת 10% FBS, 100 U / ml פניצילין, 100 מיקרוגרם / מיליליטר סטרפטומיצין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 48 שעות מאוחר יותר, 10 מיקרוגרם / מיליליטר פורmycin נוספו לתרבויות ונשמר במשך 5 ימים, כדי לאפשר בחירה של תאי transduced כראוי. </li></ol> 2. הכנת Cell המיון והציפוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף Shield1 ב 1: 1000 שעות דילול 24 לפני מיון תא. השתמש OVCAR-3 תאי transduced ביציבות ללא טיפול Shield1 כפקדים שליליים (איור 1). תקשורת לשאוב מבקבוק, לשטוף תאים עם 1x PBS וtrypsinize תאים עם 0.05% טריפסין- EDTA במשך 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפסיק טריפסין באמצעות מדיום מלא (ראה לעיל), לספור מספרי תא, תאי צנטריפוגות ב 300 XG ב RT (15 - 25 מעלות צלזיוס) במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למזוג supernatant ותאי resuspend בזהירות ב 0.5 - PBS סטרילי 1 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במסנן כובע מסננת תא 40 מיקרומטר להשיג השעיה תא בודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם ספירת תאים 5 מיליון תאים לכל מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 96-גם צלחות נמוכות מצורפים אולטרה עם 100 μl הישות הזכרית והנקביות בינוניים (MEGM בתוספת גורמי גדילה, ציטוקינים, ותוספי מזון,B-27, heparine-נתרן; או DMEM / F12 בתוספת גורמי גדילה, ציטוקינים, ותוספי מזון, B-27, heparine-נתרן, עם או בלי תוספת של 1% methylcellulose, ראה גם לוח 1). לחלופין להוסיף אנטיביוטיקה למדיום בריכוז של 100 U פניצילין מיליליטר / 100 מיקרוגרם / מיליליטר סטרפטומיצין כדי למזער את הסיכון לזיהום אפשרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיין + RFP ותאי RFP- ל96-גם צלחות שהוכנו מלמעלה, תא 1 בכל טוב (assay מבוסס תאים בודדים תחומים) וכל גם 100 תאים (assay תחומים מבוססי תאים רב), בהתאמה. בצע סדרן תא מין על זמין מסחרי (ראה חומרים) שימוש במצב תא בודד, מיין התקנה: 100 μ זרבובית, לחץ נדן 20 psi, ומסכת תשואת 0, מסכת טוהר 32, מסכת שלב 16. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את היעילות על ידי ציפוי מיקרוסקופי הבקיע בארות המכילות תאים (עבור assay מבוסס התאים הבודד) ועל ידי ספירת מספר תאים בבארות בודדות (לassay מבוסס תאים הרב; איור 2 </stronז&gt;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה תאים בתנאים סטנדרטיים בתחומים בינוניים (להרכב ראה שלב 2.6) על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. להשלים bFGF היומי (20 ng / ml) וEGF (מיליליטר / 20 ng). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שבוע אחד, לספור מספרים של מתעוררים תחומי גידול באמצעות מיקרוסקופ רגיל עם הגדלה 4X או 10X ומיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לזהות אותות הקרינה ממערכת הכתב המשולבת. רוזן התחומים בקוטר העולה על כתחומים &quot;גדולים&quot; 100 מיקרומטר, ותחומים בקוטר 100 - 50 כתחומים &quot;קטנים&quot; מיקרומטר (איור 3). להיות בטוח שאתה לספור תחומים אמיתיים ולא תא אשכולות. הערה: במבחנים מבוססי תאים בודדים היווצרות כדור קלה יותר להבקיע מיקרוסקופי לאחר 10 (לעומת 7) ימים של התרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את חלקם של תאי יוצרי כדור ב+ RFP ותאי בהתאמה RFP- במבחנים מבוססי תאים בודדים (96-גם צלחת אחת לכל ניסוי בודד) או תא-ba הרבמבחני SED תחומים (טוב אחד עבור כל ניסוי בודד) כפי שהוצג על ידי et al שו. 16 הערה: חלקם של תאי תחום יצירה (%) = (מספר תחומים) / (מספר תאי זרע) x 100 </li></ol> 3. Passaging הסידורי של Spheres <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את התוכן של כל אחד גם בצינור סטרילי מתאים וצנטריפוגות ב XG 300 עבור 10 דקות ב RT. עבור מבחני מבוססי תאים רב התחומים, לאסוף יחד את התחומים מאחד גם. לשטוף היטב 3-5 פעמים עם PBS ו צנטריפוגות 2 דקות יותר. עבור מבחני מבוססי תאים בודדים תחומים, לאסוף כדורים בודדים. לאור המספרים הנמוכים של תאים, להשתמש צינורות 1.5 מיליליטר לצעדי צנטריפוגה וכביסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר supernatant וגלול גלול ב200 μl של 0.05% טריפסין- EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להשיג הפרדת תא אופטימלית, דגירה ההשעיה התא ב 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות בייקרו רך. לייעל trypsinization זמן לקו הסלולרי שלך לשיעור מוות של תאים תחתון: אם לא גדולהתחומים הוא triturate הגלוי בעדינות באמצעות קצה פיפטה 100 μl. במקרה תחומים גדולים עדיין קיימים, דגירה עם טריפסין עוד 3 דקות ולאחר מכן להמשיך לשלב טחינה דקה. במקרה של יחיד מבחני מבוססי תאים לוודא כדי לייעל את הזמן לתשואת תא אופטימלי של תאי חיים במהלך שלב trypsinization. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להשבית טריפסין, להוסיף 500 μl בינוני ו צנטריפוגות מלאים ב XG 300 במשך 10 דקות, במקרה של מבחני תא בודדים, צנטריפוגות במשך 2 דקות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת תאי supernatant ו resuspend בזהירות במדיום תחומים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במסנן כובע מסננת תא 40 מיקרומטר לקבל השעיה תא בודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרה של שימוש ב+ RFP ותאי RFP- במבחנים-bassed תא רב, להעריך את אחוז תאי ניאון בכל אחד גם לאחר resuspension באמצעות cytometer זרימת הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מבחני סידוריים replating של תאים בודדים, זרע תא 1 לכל גם לתוך צלחת אולטרה חדשה נמוכה מצורף 96-גם הכינו כמפורט לעיל. מכדור אחד בודד, זרע כ 20 בארות בודדות. עבור מבחני replating תחומים עיקריים המבוסס על תאים רב, תאי זרע המתקבלים מכן אחד מתחומים עיקריים לצלחת 96-היטב חדשה ולספור את מספר התאים למחרת על ידי מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את חלקם של תאי יוצרי כדור במבחני תחומים משניים באמצעות הנוסחא המתוארת בשלב 2.11. </li></ol> ניתוח 4. תוצאה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את התוצאות מניסויים שבוצעו בtriplicates העצמאי ולהשתמש במבחן t דו-צדדי לנתח ערכים מתפלגים נורמלי ואחר Mann-Whitney-בדיקות לניתוח סטטיסטי. </li></ol>

<ol><li>Pardal, R., Clarke, M. F., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applying+the+principles+of+stem-cell+biology+to+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Applying the principles of stem-cell biology to cancer.</a> Nat Rev Cancer. 3 (12), 895-902 (2003).</li>
<li>Reya, T., Morrison, S. J., Clarke, M. F., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells%2C+cancer%2C+and+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Stem cells, cancer, and cancer stem cells.</a> Nature. 414 (6859), 105-111 (2001).</li>
<li>Ahmed, N., Abubaker, K., Findlay, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer+stem+cells%3A+Molecular+concepts+and+relevance+as+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer stem cells: Molecular concepts and relevance as therapeutic targets.</a> Mol Aspects Med. 39, 110-125 (2014).</li>
<li>Silva, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aldehyde+dehydrogenase+in+combination+with+CD133+defines+angiogenic+ovarian+cancer+stem+cells+that+portend+poor+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Aldehyde dehydrogenase in combination with CD133 defines angiogenic ovarian cancer stem cells that portend poor patient survival.</a> Cancer Res. 71 (11), 3991-4001 (2011).</li>
<li>Kryczek, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+aldehyde+dehydrogenase+and+CD133+defines+ovarian+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Expression of aldehyde dehydrogenase and CD133 defines ovarian cancer stem cells.</a> Int J Cancer. 130 (1), 29-39 (2012).</li>
<li>Stewart, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+heterogeneity+and+instability+of+human+ovarian+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Phenotypic heterogeneity and instability of human ovarian tumor-initiating cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (16), 6468-6473 (2011).</li>
<li>Ginestier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALDH1+is+a+marker+of+normal+and+malignant+human+mammary+stem+cells+and+a+predictor+of+poor+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">ALDH1 is a marker of normal and malignant human mammary stem cells and a predictor of poor clinical outcome.</a> Cell Stem Cell. 1 (5), 555-567 (2007).</li>
<li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALDH1+expression+correlates+with+favorable+prognosis+in+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">ALDH1 expression correlates with favorable prognosis in ovarian cancers.</a> Mod Pathol. 22 (6), 817-823 (2009).</li>
<li>Cannistra, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD44+variant+expression+is+a+common+feature+of+epithelial+ovarian+cancer%3A+lack+of+association+with+standard+prognostic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">CD44 variant expression is a common feature of epithelial ovarian cancer: lack of association with standard prognostic factors.</a> J Clin Oncol. 13 (8), 1912-1921 (1995).</li>
<li>Bareiss, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SOX2+expression+associates+with+stem+cell+state+in+human+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">SOX2 expression associates with stem cell state in human ovarian carcinoma.</a> Cancer Res. 73 (17), 5544-5555 (2013).</li>
<li>Pham, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SOX2+expression+and+prognostic+significance+in+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Gynecol+Pathol%22%5BJournal%5D)">SOX2 expression and prognostic significance in ovarian carcinoma.</a> Int J Gynecol Pathol. 32 (4), 358-367 (2013).</li>
<li>Lengerke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+embryonic+stem+cell+marker+SOX2+in+early-stage+breast+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Expression of the embryonic stem cell marker SOX2 in early-stage breast carcinoma.</a> BMC Cancer. 11, 42(2011).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).</li>
<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255 (5052), 1707-1710 (1992).</li>
<li>Dontu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+propagation+and+transcriptional+profiling+of+human+mammary+stem%2Fprogenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">In vitro propagation and transcriptional profiling of human mammary stem/progenitor cells.</a> Genes Dev. 17 (10), 1253-1270 (2003).</li>
<li>Shaw, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+detailed+mammosphere+assay+protocol+for+the+quantification+of+breast+stem+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mammary+Gland+Biol+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">A detailed mammosphere assay protocol for the quantification of breast stem cell activity.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 17 (2), 111-117 (2012).</li>
<li>Leis, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sox2+expression+in+breast+tumours+and+activation+in+breast+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Sox2 expression in breast tumours and activation in breast cancer stem cells.</a> Oncogene. 31 (11), 1354-1365 (2012).</li>
<li>Higgins, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+tumor+stem+cell+multipotency+correlates+with+nanog+expression+and+extent+of+passaging+in+human+glioblastoma+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Brain tumor stem cell multipotency correlates with nanog expression and extent of passaging in human glioblastoma xenografts.</a> Oncotarget. 4 (5), 792-801 (2013).</li>
<li>Wang, Y. J., Bailey, J. M., Rovira, M., Leach, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+assays+for+assessment+of+benign+and+malignant+pancreatic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming assays for assessment of benign and malignant pancreatic stem cells.</a> Methods Mol Biol. 980, 281-290 (2013).</li>
<li>Li, Y. F., Xiao, B., Tu, S. F., Wang, Y. Y., Zhang, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+and+identification+of+colon+cancer+stem+cell-derived+spheres+from+the+Colo205+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Med+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">Cultivation and identification of colon cancer stem cell-derived spheres from the Colo205 cell line.</a> Braz J Med Biol Res. 45 (3), 197-204 (2012).</li>
<li>Wu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+two+novel+phenotypically+distinct+breast+cancer+cell+subsets+based+on+Sox2+transcription+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Signal%22%5BJournal%5D)">Identification of two novel phenotypically distinct breast cancer cell subsets based on Sox2 transcription activity.</a> Cell Signal. 24 (11), 1989-1998 (2012).</li>
<li>Banaszynski, L. A., Chen, L. C., Maynard-Smith, L. A., Ooi, A. G., Wandless, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+reversible%2C+and+tunable+method+to+regulate+protein+function+in+living+cells+using+synthetic+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A rapid, reversible, and tunable method to regulate protein function in living cells using synthetic small molecules.</a> Cell. 126 (5), 995-1004 (2006).</li>
<li>Kawase, Y., Yanagi, Y., Takato, T., Fujimoto, M., Okochi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+multipotent+adult+stem+cells+from+the+skin%3A+transforming+growth+factor-beta+%28TGF-beta%29+facilitates+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of multipotent adult stem cells from the skin: transforming growth factor-beta (TGF-beta) facilitates cell growth.</a> Exp Cell Res. 295 (1), 194-203 (2004).</li>
<li>Walia, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+breast+epithelial+marker+hCLCA2+promotes+epithelial-to-mesenchymal+transition+and+indicates+higher+risk+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Loss of breast epithelial marker hCLCA2 promotes epithelial-to-mesenchymal transition and indicates higher risk of metastasis.</a> Oncogene. 31 (17), 2237-2246 (2012).</li>
<li>Leung, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-small+cell+lung+cancer+cells+expressing+CD44+are+enriched+for+stem+cell-like+properties%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Non-small cell lung cancer cells expressing CD44 are enriched for stem cell-like properties.</a> PLoS One. 5 (11), e14062(2010).</li>
<li>Bertolini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+tumorigenic+lung+cancer+CD133%2B+cells+display+stem-like+features+and+are+spared+by+cisplatin+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Highly tumorigenic lung cancer CD133+ cells display stem-like features and are spared by cisplatin treatment.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (38), 16281-16286 (2009).</li>
<li>Ma, L., Lai, D., Liu, T., Cheng, W., Guo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem-like+cells+can+be+isolated+with+drug+selection+in+human+ovarian+cancer+cell+line+SKOV3%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim+Biophys+Sin+%28Shanghai%29%22%5BJournal%5D)">Cancer stem-like cells can be isolated with drug selection in human ovarian cancer cell line SKOV3.</a> Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 42 (9), 593-602 (2010).</li>
<li>Wang, H., Zhang, Y., Du, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+and+breast+cancer+spheres+are+similar+in+transcriptomic+features+and+sensitive+to+fenretinide%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Ovarian and breast cancer spheres are similar in transcriptomic features and sensitive to fenretinide).</a> Biomed Res Int. 2013, 510905(2013).</li>
<li>Du, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+and+mechanisms+of+anti-CD44+monoclonal+antibody+A3D8+on+proliferation+and+apoptosis+of+sphere-forming+cells+with+stemness+from+human+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Gynecol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Effects and mechanisms of anti-CD44 monoclonal antibody A3D8 on proliferation and apoptosis of sphere-forming cells with stemness from human ovarian cancer.</a> Int J Gynecol Cancer. 23 (8), 1367-1375 (2013).</li>
<li>Xiang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-17+produced+by+tumor+microenvironment+promotes+self-renewal+of+CD133+cancer+stem-like+cells+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Interleukin-17 produced by tumor microenvironment promotes self-renewal of CD133 cancer stem-like cells in ovarian cancer.</a> Oncogene. , (2013).</li>
<li>Liu, T., Cheng, W., Lai, D., Huang, Y., Guo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+primary+ovarian+cancer+cells+in+different+culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Rep%22%5BJournal%5D)">Characterization of primary ovarian cancer cells in different culture systems.</a> Oncol Rep. 23 (5), 1277-1284 (2010).</li>
<li>Soritau, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+chemoresistance+and+tumor+sphere+formation+as+a+laboratory+model+for+peritoneal+micrometastasis+in+epithelial+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Rom+J+Morphol+Embryol%22%5BJournal%5D)">Enhanced chemoresistance and tumor sphere formation as a laboratory model for peritoneal micrometastasis in epithelial ovarian cancer.</a> Rom J Morphol Embryol. 51 (2), 259-264 (2010).</li>
<li>Shi, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+cancer+stem+cell-like+cells+from+human+epithelial+ovarian+carcinoma+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Identification of cancer stem cell-like cells from human epithelial ovarian carcinoma cell line.</a> Cell Mol Life Sci. 67 (22), 3915-3925 (2010).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+ovarian+cancer-initiating+cells+from+primary+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of ovarian cancer-initiating cells from primary human tumors.</a> Cancer Res. 68 (11), 4311-4320 (2008).</li>
<li>Liang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypoxic+microenvironment+upgrades+stem-like+properties+of+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The hypoxic microenvironment upgrades stem-like properties of ovarian cancer cells.</a> BMC Cancer. 12, 201(2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

תרבויות תחומים הן שיטה נפוצה לassay תא גזע סרטני פוטנציאלי ולהעשיר לתאי גזע כמו-במגוון רחב של תאים סרטניים אנושיים 15,25,26. בתנאים אלה התרבות, תאי סרטן שאין יכולת התחדשות עצמית צפויים לבדל וסופו של דבר לעבור מוות של תאים. למרות שהם עשויים בתחילה יוצרים צבירי תאים או אפילו תחומים גידול במיוחד במבחנים ראשוניים, הם לא יוכלו לקיים את היכולת להרכיב תחום על replating הסידורי בשל חוסר תכונות עצמי חידוש. מבחני Spheres משמשים כפונדקאיים מבחני לזהות ולהעריך CSCS תדירותם באוכלוסי...

ישנן עדויות הולכות וגדלות לכך שקרצינומות בשחלות מורכבות מתערובות הטרוגניות של תאים ומכילות מה שמכונה "תאי גזע סרטניים" (CSCs) האחראים להתחלה, תחזוקה והישנות של המחלה לאחר טיפולים ציטוטוקסיים קונבנציונליים1-3. לכן, פיתוח אסטרטגיות מולקולריות המכוונות ל-CSCs בשחלות הוא מטרה חשובה ומבטיח לשפר את הטיפול בחולי סרטן השחלות.
תנאי מוקדם להבנת התכונות המולקולריות של CSCs הוא הבידוד האמין שלהם מה-CSCs שאינם CSCs. עם זאת, זיהוי CSCs בשחלות נראה מאתגר. בעוד שביטוי CD133 ופעילות אלדהיד דהידרוגנאז (ALDH)4,5 דווחו כמסמנים CSCs בשחלות, נתונים מסוימים מצביעים על כך שסמנים אלה אינם יציבים6. באופן עקבי, בסרטן השחלות, מלבד למשל בקרצינומה של השד7, ביטוי של ALDH1 קשור לתוצאה חיובית8 ולביטוי של סמן תאי הגזע המוצע CD44 אין ערך פרוגנוסטי9. לאחרונה, הראינו כי ביטוי של חלבון תאי גזע עובריים SOX2 מעניק גזע לתאי קרצינומה בשחלות10 וביטוי גבוה של SOX2 קשור לקרצינומות שחלות ושד אגרסיביות קלינית11,12. לכן, בדוח זה אנו משתמשים במבנה מדווח לנטי-ויראלי המכיל חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) שהביטוי שלו נשלט על ידי אזור רגולטורי SOX2, כשיטה לבידוד CSCs שחלות משוערות.
בהגדרה, CSCs יכולים גם לחדש את עצמם וגם להתמיין, מה שמוליד את כל סוגי תאי הגידול. יש לנתח אוכלוסיות CSC משוערות במבחנים פונקציונליים המבוצעים in vivo. מסיבות ברורות, בתאים אנושיים בדיקות תפקודיות כאלה מוגבלות לבדיקות קסנוגרפטים, הכוללות בעיקר השתלת תאי גידול אנושיים בעכברים מדוכאי חיסון10,13.
שיטה חלופית במבחנה הוצעה על ידי ברנט ריינולדס וסם וייס שדיווחו לראשונה על מה שנקרא בדיקת נוירוספירה כבדיקה חלופית המעריכה את פוטנציאל הגזע בתאים עצביים14. דונטו ועמיתיו אישרו מאוחר יותר את השימוש בבדיקה זו להערכת פוטנציאל תאי גזע בתאי שד15,16. כאן, תאי חלב אנושיים צופו במספרים שונים במדיום נטול סרום בתוספת גורם גדילה אפידרמיס (EGF), גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי (bFGF), B-27 והפרין ותרבית בתנאים לא דבקים במשך שבעה עד עשרה ימים לפני היווצרות הכדור במיקרוסקופיה. בעקבות פרוטוקול זה עם התאמות מסוימות במספר התאים, מצע הגידול והתוספים, מספר קבוצות חקרו את פוטנציאל תאי הגזע במבחנה ממספר סוגי סרטן כגון גידולי שד17, מוח18, לבלב19 ומעי20. בקרצינומה של השחלות, דיווחנו לאחרונה על היתכנות של בדיקת הכדורים והשווינו את תוצאותיה לאלו שנאספו במודלים של קסנוגרפט עכברי in vivo 10. מצאנו שביטוי יתר של חלבון תאי הגזע SOX2 שיפר הן את היווצרות הכדור במבחנה והן את הגידול in vivo של תאי קרצינומה בשחלותאנושיות 10. עם זאת, תדירות התאים יוזמי הכדור הייתה גבוהה מתדירות התאים יוזמי הגידול שנמדדו in vivo10, מה שמצביע על כך שבדיקת הכדור עלולה להוביל לתוצאות חיוביות כוזבות מסיבות טכניות או, לחילופין, בדיקת in vivo עשויה להיות לא יעילה ולגרום לתוצאות שליליות כוזבות.
בדוח זה, אנו מנתחים ביתר פירוט מבחני שחלות מבוססי תאים מרובים, סוקרים את הפרוטוקולים השונים הקיימים בספרות ומשווים אותם לבדיקה מבוססת תא בודד. אנו מראים כי הבדיקה המבוססת על תא בודד מספקת תוצאות מדויקות וניתנות לשחזור יותר מאשר בדיקות מבוססות תאים מרובים, שיכולות להיות מושפעות מאוד מצפיפות התאים המצופים אלא אם כן מתווסף מתיל צלולוז לתרביות כדי לשתק תאים. עם זאת, גם במבחנים מבוססי תא בודד, פוטנציאל התחלת כדור במבחנה נצפה בתדירות גבוהה יותר מאשר פוטנציאל התחלת גידול in vivo.

<table><tbody><tr><td>צלחת חיבור נמוכה</td><td>קורנינג</td><td>3474</td><td></td></tr><tr><td>MEGM</td><td>לונזה</td><td>CC-3151</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין</td><td>לונזה</td><td>CC-4136</td><td>SingleQuots&trade; ערכת</td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון</td><td>Lonza</td><td>CC-4136</td><td>SingleQuots&trade; ערכת</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Lonza</td><td>CC-4136</td><td>SingleQuots&trade; ערכת</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>ריכוז קצה: 20 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>FGF</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td><td>ריכוז קצה: 20 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>B-27</td><td>Invitrogen/ Gibco</td><td>17504-044</td><td>ריכוז קצה: 1X</td></tr><tr><td>Heparin-Natrium-25000 IE</td><td>Ratiopharm</td><td>N68542.02</td><td>דילול 1:1,000</td></tr><tr><td>עט/סטרפטוקוס</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Gibco</td><td>10500-064</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>21875-034</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s PBS (1X)</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>Shield1</td><td>Clontech</td><td>632189</td><td>דילול 1:1,000</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>21041-025</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 (אבקה)</td><td>Gibco</td><td>42400-010</td><td></td></tr><tr><td>מתיל צלולוז</td><td>Sigma</td><td>M0387</td><td></td></tr><tr><td>Puromycin dihydrochloride</td><td>Applichem</td><td>A2856</td><td></td></tr><tr><td>תא סדרן</td><td>BD</td><td></td><td>Aria III סדרן תאים</td></tr><tr><td>מנתח FACS BD</td><td></td><td></td><td>Accuri c6 ציטומטר זרימה</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td></td><td>IX50 Osiris</td></tr></tbody></table>

הערכה של מאפייני תא גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות multi ומבחני spheres מבוסס תא בודדים

Evaluation of Stem Cell Properties in Human Ovarian Carcinoma Cells Using Multi and Single Cell-based Spheres Assays

שנים של מחקר מצביעות על כך שסרטן השחלות מכיל תערובת הטרוגנית של תאים, כולל תת-אוכלוסייה של מה שמכונה "תאי גזע סרטניים" (CSCs) האחראים על התחלה, תחזוקה והישנות של גידול לאחר כימותרפיה קונבנציונלית. לכן זיהוי CSCs בשחלות הוא מטרה חשובה. שיטה נפוצה להערכת פוטנציאל CSC במבחנה היא בדיקת הכדורים שבה תאים מצופים בתנאי תרבית שאינם דבקים במדיום נטול סרום בתוספת גורמי גדילה והיווצרות הכדור מדורגת לאחר מספר ימים. כאן, אנו סוקרים את הפרוטוקולים הזמינים כיום לבדיקות סרטן שחלות אנושיות ומבצעים ניתוח זה לצד זה בין בדיקות מבוססות תאים מרובות תאים נפוצות לבין מערכת מדויקת יותר המבוססת על ציפוי תא בודד. התוצאות שלנו מצביעות על כך שניתן להשתמש הן במבחני כדורים מבוססי תאים מרובים והן במבחנים מבוססי תאים בודדים כדי לחקור היווצרות כדורים במבחנה. הבדיקות המבוססות על תא בודד המייגעות והיקרות יותר מתאימות יותר להערכה תפקודית של תאים בודדים ומובילות לתוצאות מדויקות יותר בעוד שבדיקות מבוססות תאים מרובות יכולות להיות מושפעות מאוד מצפיפות התאים המצופים ולדרוש ניסויי טיטרציה מראש. ניתן להשתמש ביעילות בתוספי מתיל צלולוז לבדיקות מרובות תאים להפחתת חפצים מכניים.

במבחני התחומים קונבנציונליים, כמעט 40% מRFP + OVCAR-3 תאים לעומת 20% מתאי RFP- הולידו תחום גידול בודד בassay תחומים העיקרי (איור 4 א). יתר על כן, תחומים שהוקמו על ידי RFP + תאים היו גדולים יותר בגודל יותר מאלה שהוקמו על ידי תאי RFP-. כאשר מצופים במבחנים מבוססי תאים בודדים, תאי RFP + גם יצרו יותר תחומים מאשר תאי RFP-, המאשרים את התוצאות לעיל. עם זאת, הייתה נטייה לכיוון הדור של פחות התחומים למצופים...

מבחני מבחנה משמשים בדרך כלל לזיהוי תאי גזע סרטניים. כאן אנו משווים מבחני כדורים בודדים עם רב-תאים מבוססי תאים. הבדיקות המבוססות על תאים בודדים או תוספי מתיל צלולוז נותנים תוצאות מדויקות יותר בעוד שבדיקות מבוססות תאים מרובות תאים המבוצעות במדיום נוזלי יכולות להיות מושפעות מאוד מצפיפות התאים.

הערכה של מאפייני תא גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות Multi ומבחני Spheres מבוסס תא בודדים

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעריך את תכונות תאי הגזע של תאי קרצינומה בשחלות אנושיות באמצעות מבחני כדורים מבוססי תאים מרובים ובודדים. זה מושג על ידי בחירה ראשונה של SOX שני מדווחים RFP lentivirus תאים שהועברו על ידי טיפול ב-Pur Mycin בשלב השני, התאים החיוביים ל-RFP ו-RFP שליליים מבודדים ומצופים על ידי עובדות כמושבות בודדות או מרובות תאים לכל באר. לאחר מכן, היווצרות הכדור הראשוני מנותחת במיקרוסקופ ולאחר מכן מפרקים את תרביות הכדור הראשוני ומצופים מחדש לניתוח היווצרות הכדור המשני.בסופו של דבר, מבחני הכדור הללו משמשים לחישוב שיעור תאי הגזע המשוערים של סרטן השחלות המציגים יכולת יצירת כדור. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום תאי הגזע הסרטניים, כגון מהן כמה אוכלוסיות פוטנציאליות של תאי גזע סרטניים ומה התדירות שהייתה בכל שקית הגידול. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי זיהוי תאי גזע של סרטן השחלות, היא עשויה להיות מיושמת גם לבידוד תאי גזע סרטניים מישויות גידול מוצקות אחרות כגון קרצינומה של השד.24 שעות לאחר התמרת תאי קרצינומה של שחלות אנושיות עם חלקיקים לנטי-ויראליים, הסר את הסופרנטנט הנגיפי ושטוף את התאים בתרבית PBS. התאים במדיום מלא למשך 48 שעות. לאחר מכן החלף את המדיום והוסף 10 מיקרוגרם למיליליטר פירו מיצין לאחר חמישה ימים.טפל בתרביות עם מגן אחד בדילול של 1 עד 1000 למחרת. שטפו את התאים ב-PBS ולאחר מכן נתקו אותם עם 0.05% טריפסין EDTA. לאחר שלוש דקות, הפסק את התגובה עם מדיום מלא.ספרו את התאים וצנטריפוגה אותם במשך חמש דקות בטמפרטורה של 300 פעמים G וטמפרטורת החדר. השעו מחדש את התאים בזהירות ב-0.5 עד מיליליטר אחד של PBS סטרילי ולאחר מכן סננו את תרחיף התאים שנוצר דרך מסנן של 40 מיקרומטר. התאם את התאים לחמש פעמים 10 לששת התאים לדילול מיליליטר, ולאחר מכן הוסף 100 מיקרוליטר של כדורים בינוניים לכל באר של צלחת חיבור נמוכה במיוחד של 96 בארות ליד לבדיקת כדור מבוססת תא בודד.השתמש במצב תא בודד כדי למיין תא אחד לכל באר של הצלחת. לאחר מכן מדרגים את התאים באופן מיקרוסקופי כדי להעריך את יעילות הציפוי. דגרו את התאים בכדורים טריים, בינוניים ב-37 מעלות צלזיוס, ו-5% CO2 עם גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי יומי ותוסף גורם גדילה אפידרמיס.לאחר שבוע, קבע את מספר כדורי הגידול המתעוררים על ידי מיקרוסקופ אור ואת נוכחות האות הפלואורסצנטי ממערכת המדווח המשולבת על ידי מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. ספרו את הכדורים בקוטר העולה על 100 מיקרומטר ככדורים גדולים ואת הכדורים בקוטר של 50 עד 100 מיקרומטר ככדורים קטנים. הקפדה על ספירת כדורים אמיתיים ולא אשכולות תאים.לאחר מכן חשב את שיעור הכדור היוצר תאים חיוביים RFP או RFP שליליים לפי הנוסחה למעבר. הכדורים מתחילים בהעברת התוכן של כל באר לצינורות מיקרו צנטריפוגה בודדים של 1.5 מיליליטר. לאחר מכן שטפו כל באר שלוש עד חמש פעמים עם PBS כדי להקפיד לאסוף את כל הכדורים ולסובב את התאים למשך 10 דקות בטמפרטורה של פי 300 G וטמפרטורת החדר.לאחר הצנטריפוגה, הסר את החטף והחזיר את הכדורים ב-200 מיקרוליטר של 0.05% טריפסין EDTA ב-37 מעלות צלזיוס בשייקר רך למשך חמש דקות. אם לא נראים כדורים גדולים לאחר חמש דקות, יש לערבב בעדינות את תמיסת התא עם קצה פיפטה של 100 מיקרוליטר ולהוסיף 500 מיקרוליטר של מדיום שלם כדי לנטרל את הטריפסין. תאים מסתובבים, משעים את הכדורים בזהירות בכדורים בינוניים ומנקזים את תרחיף התאים שנוצר דרך מסנן של 40 מיקרומטר כפי שדורג זה עתה.לבסוף, לציפוי מחדש סדרתי של התאים הבודדים, זרע תאים בודדים מכדור ראשוני אחד ב -100 מיקרוליטר של כדורים, בינוני לבאר בצלחת חדשה של 96 בארות חיבור נמוך במיוחד. לאחר מכן השתמש באותה נוסחה כמו עבור בדיקת הכדורים הראשוניים כדי להעריך את שיעור התאים היוצרים כדורים בכדורים המשניים. בדיקות בכדורים מבוססי תאים מרובי תאים מבחנים כמעט 40% מתאי קרצינומה בשחלות אנושיות חיוביים ל-RFP בהשוואה ל-20% בלבד מהתאים השליליים ל-RFP הולידו כדור גידול בודד בבדיקת הספירות הראשוניות.באופן מפתיע, מספרים גבוהים יותר של כדורים נספרים ממספרים נמוכים יותר של תאים מצופים הן במדיה מבוססת MGEM והן במדיה מבוססת D-M-E-M-F 12, מה שמדגים כי שיטות הציפוי מוטות מאוד את התוצאות בבדיקה זו. לעומת זאת, כאשר תאים משותקים על ידי תוספת של 1% מתיל צלולוז, יעילות היווצרות הכדור אינה תלויה בעיקר בצפיפות התאים בתרביות כדורים מבוססות תאים. כ-35% מהתאים מהכדורים החיוביים ל-RFP מאבדים את האות הפלואורסצנטי האדום שלהם לאחר שבעה ימים של תרבית, מה שמצביע על כך שתאים אלה עברו התמיינות בעוד שלמעלה מ-65% מהתאים שומרים על אות RFP המרמז על יכולת חידוש עצמי.לעומת זאת, תאים מכדורים שנוצרו מתאי RFP שליליים בתחילה נשארים שליליים ל-RFP, מה שמצביע על כך שהם אינם יכולים לבסס מחדש את פוטנציאל תאי הגזע בתנאים אלה. מיקרוסקופ פלואורסצנטי המבוצע על כדורים שנוצרו מתאים בודדים מאשר נתונים אלה ומדגים כי כדורים בודדים שמקורם בתאים חיוביים ל-RFP מכילים גם תאים חיוביים ל-RFP וגם תאים שליליים ל-RFP. ואילו כדורים שמקורם בתאים שליליים של RFP שומרים על היעדר האות האדום שלהם בעקבות הליך זה.ניתן לבצע שינויים אחרים כמו נוגדנים, צביעה או ניתוח ביטוי גנים באמצעות PCR כמותי כדי לאפיין עוד יותר את התאים בעלי יכולת יצירה חמורה. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי יש לבצע בדיקות השתלה in vivo בעכברים מדוכאי חיסון כדי לאמת את תכונות תאי הגזע של הגידול של התאים היוזמים של הכדור.

evaluation-stem-cell-properties-human-ovarian-carcinoma-cells-using

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

זה פרוטוקול וידאו מדגים את הבידוד והרחבת גזע כמו תאים mutliforme resected בניתוח גליובלסטומה אדם (GBM) רקמת הגידול בשיטת neurosphere תרבות assay.

בידוד הרחבת האדם multiforme Glioblastoma גידול תאים שימוש Assay Neurosphere

Heterotypic תלת ממדי<em&gt; במבחנה</em&gt; מידול של אינטראקציות stromal-אפיתל בייזום והתקדמות סרטן השחלות

פלישת תאי סרטן השחלות לmesothelial הבטנה של הצפק היא תהליך דינמי לאורך זמן. ניצול מנתח בזמן אמת, את היכולת פולשני של תאי סרטן שחלות במודל תא שיתוף תרבות אליפטית-mesothelial ניתן לכמת על פני תקופות זמן ממושכות, המספקת תובנות גורמים המסדירים את התהליך גרורתי.

הערכה של קובץ מצורף סרטן השחלות אליפטית ופלישה של תאי mesothelial בזמן אמת

תאי גזע סרטני (CSCS) הם מעורבים בהישנות גידול עקב chemoresistance. יש לנו אופטימיזציה פרוטוקול לבחירה והרחבת CSCS משורות תאי סרטן השחלות. על ידי טיפול בתאים עם ציספלטין כימותרפיות וculturing בתאי גזע קידום תקשורת אנו מעשירים לתרבויות CSC לא חסידות.

העשרה לתאי גזע Chemoresistant סרטן השחלות משורות תאים אנושיות

בדיקות ממוספירה צפה יכולות לחקור את תת-הקבוצה של תאי סרטן שד דמויי גזע ששורדים בתנאי השעיה ומראים גידול משופר כאשר הם מושתלים בעכברים.  פרוטוקול זה מספק מדד נוח במבחנה של יכולת יצירת כדור, פרוקסי לגידול in vivo, תוך הקלה על ניתוח נוף השעתוק הקשור לגבעול.

Assay גיבוש Mammosphere משד אדם סרטן רקמות וקווים סלולריים

ניתן להרחיב תאי גזע של סרטן הלבלב (CSCs) במבחנה באמצעות טכניקת תרבית כדור בלתי תלויה בעיגון, המייצגת כלי רב עוצמה לחקר הביולוגיה של CSC ויכולה לשמש כצעד ראשון לפיתוח טיפולים חדשניים ממוקדי CSC. כאן ניתנת המתודולוגיה להרחבה, ניתוח ומיקוד של CSCs בלבלב.

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

הנוכחות של תאי גזע סרטניים (CSCS) ב סרקומות עצם נקשר לאחרונה בפתוגנזה שלהם. במאמר זה, אנו מציגים את הבידוד של CSCS מתרבויות תא ראשוניים המתקבלות ביופסיות אדם של אוסטאוסרקומה קונבנציונלי (OS) באמצעות היכולת של CSCS לגדול בתנאי nonadherent.

הקמת סרטן גזע תא תרבויות מן האדם הקונבנציונלי אוסטאוסרקומה

פרוטוקול זה מתאר את הדור של מטופלים שמקורם בחולים, וניתוח במורד הזרם כולל כימות של התפשטות, בדיקות ציטורעילות, הזרמת cy, כתמים והדמיה מיקוד, על מנת להעריך את התרופה פוטנציאל המועמדים כtherapeutics אנטינאופלסטית. פרוטוקול זה תומך ברפואה מדויקת עם זיהוי תרופות ספציפיות לכל מטופל ולשלב המחלה.

החולה הפיזיולוגי הנגזרות 3D Spheroids עבור הקרנת תרופות אנטי-נאופלסטית כדי למקד את תאי גזע הסרטן

מטרת מתודולוגיה זו היא לזהות את תאי גזע הסרטן (csc) בקווי התאים של סרטן ודגימות הגידול האנושי הראשוני עם הפרוטוקול ליצירת כדור, בצורה איתנה, באמצעות בחני פונקציונלי ואפיון פנוטימית עם זרימה cy, try ומערבי מחוק.

קבלת סרטן גזע כדורים מגינקולוגית סרטן השד גידולים

תאי גזע של סרטן השחלות (OCSC) אחראים על התחלת סרטן, הישנות, עמידות טיפולית וגרורות. נישת כלי הדם OCSC נחשבת לקידום התחדשות עצמית של OCSCs, מה שמוביל לכימורסטיות. פרוטוקול זה מספק את הבסיס להקמת מודל נישה כלי דם OCSC הניתן לשחזור במבחנה.

הערכת התכונות האנגיוגנטיות של תאים דמויי גזע של סרטן השחלות באמצעות מערכת תרבית קו-תרבית תלת-ממדית, NICO-1

פרוטוקול זה מציג מערכת תרבות חדשנית, חזקה וניתן לשחזור כדי ליצור ולגדל ספרואידים תלת מימדיים מתאי אדנוקרצינומה של המעי הגס Caco2. התוצאות מספקות את הוכחת הרעיון הראשונה לצורך ההתאמה של גישה זו לחקר ביולוגיה של תאי גזע סרטן, כולל התגובה לכימותרפיה.

מודל תלת מימדי של ספרואידים לחקר תאי גזע סרטניים המעי הגס

חקור מאפייני תאי גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות מבחני Spheres מבוססי תא בודדים ורב-תאיים. השיטה מאפשרת זיהוי מדויק של אוכלוסיות תאי גזע סרטניים וחישוב שכיחותם בגידול.

הערכה של מאפייני תא גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות Multi ומבחני Spheres מבוסס תא בודדים

גלה סרטונים נוספים