Name: Intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT): מערכת לא פולשני, ריאות ספציפי משלוח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: למדו שיטת IMIT להחדרת חיידקים ישירות לריאות עכברים ללא ניתוח. טכניקה זו מאפשרת מסירה מדויקת ושחזור של מעל 98% מהחומר לחקר מחלות נשימה ופיתוח טיפולים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים אסירי תודה על התמיכה של המרכז לרפואה פרדיקטיבית של מודלים של בעלי חיים (קרול ואנובר, אשלי בילר וג'ניפר קרנזל) ומתקני הליבה של המיקרוביולוגיה (דניאל קרמר וג'ולי סוצקי). עבודה זו נתמכה על ידי מימון מה-NIH (HHSN272201000033I ל-M.B.L ו-J.M.W).

הערה: כל הנהלים שתוארו כאן היו נבדקו ואושרה על ידי האוניברסיטה לואיוויל הוועדה מוסדית בטיחות ביולוגית (פרוטוקול # 13-056) ומוסדי טיפול בבעלי חיים ושימוש הוועדה (פרוטוקול # 13-064). 1. הכנת צבע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל 0.1% (w / v) הצבעים קומסי בPBS ולסנן לעקר באמצעות מסנן מזרק 0.45 מיקרומטר. </li></ol> 2. הכנת Pseudomonas aeruginosa התרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 שעות לפני החדרה, לחסן 3 מיליליטר של תרבות מרק עם מושבת חיידקים בודדת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדול hr תרבות 15 על 37 מעלות צלזיוס על שייקר (200 סל&quot;ד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה מיליליטר 1 של התרבות בXG -1.5 מיליליטר צינור microfuge 12,000 למשך 30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המדיום וresuspend את הכדור ב1ml של PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל aliquot של ההשעיה מניית חיידקי 1:10 ב PBS ולמדוד את OD 600 של ההשעיה חיידקים המדולל כדי לקבוע אתריכוז חיידקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את ההשעיה מניית החיידקים בPBS לריכוז הרצוי של הבידוד חיידקים, באמצעות משלוח נפח של 50 μl חיסון IMIT. </li></ol> 3. IMIT החדרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח קבוצה של עכברים לחדר אינדוקציה ההרדמה isoflurane ולהרדים באמצעות 2 - 3% תערובת isoflurane / חמצן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתחילה הראשונית של הרגעה, עורף העכבר, מחזיק את העכבר זקוף, ולנהל 10 μl של פתרון לידוקאין 2% על ידי מחט gavage לחלק האחורי של הגרון ולאפשר הפתרון לניקוז עד למכסה הקנה. החזר את העכבר לתא ההרדמה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר מינימום של 5 דקות על מנת לאפשר לידוקאין ייכנס לתוקף מלא כחומר הרדמה מקומית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר עכברים השיגו את הרמה רצויה של הרגעה (קצב נשימה של ~ 60 פעימות לדקה), להפחית את isoflurane עד 2% כדי לשמור על הרגעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צבע Preload או הבידוד חיידקים לתוך μl 250 גז חזקכושר מזרק דיוק עם מחט קהה ארוכה 22 G. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשון לצייר עד 150 μl של אוויר, הנמדד על ידי בוכנת הטפלון של המזרק. בשלב הבא, להכין 50 μl של הבידוד על ידי קידום בוכנת הטפלון מסימן 150 μl לציון 200 μl על גוף המזרק. הערה: כאשר המדגם ייפלט לעכבר מחובר לצינורות, ההשעיה 50 μl תימסר ראשונה, ואחריו 150 על כרית אוויר של μl אשר תפיץ הבידוד לאורך כל הריאה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר עכבר אחד מחדר האינדוקציה ושכב פרקדן על פלטפורמת אינטובציה. לאבטח את העכבר לפלטפורמה ידי משדלת החותכות שלה עם טבעת O מחוברת לרצועה ולקרו, והאבטחה וולקרו לפלטפורמה. הרם את העכבר לשיפוע של 45 °. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות המוליך כותנה מיקרו, לחזור בו מהלשון בתנועת גלגול, באמצעות היד הדומיננטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם nondominant היד, להשתמש בכושר Otoscope פועל עם מצפה אינטובציה לשני maintain הכחשה לשון ולדמיין את מייתרי הקול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם היד הדומיננטית, להשתמש חוט מדריך מושחל דרך 20 קטטר G לצנרר העכבר, ישיבה הצנתר עד לעומק 10 מ&quot;מ לתוך קנה הנשימה של העכבר (קטטר הוא בכושר עם שרוול סיליקון עם 10 מ&quot;מ של קטטר החשוף). הסר את otoscope / המצפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהעכבר כבר מחובר לצינורות בצורה נכונה על ידי הבטחת קטטר עם nondominant היד בזמן מצרף אורך מחובר Luer של 1/16 &quot;צינורות שקופים המכילים צבע בצבע בקצרה. הערה: הצבע יהיה במהירות יעבור הלוך ושוב בתגובה לנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תמשיך בצעדים הבאים אם אישור של אינטובציה לא הוקם בשלב זה. אם אינטובציה ניסתה לכפות נכשלה, לאפס את חוט קטטר ומדריך לניסיון נוסף אחד באינטובציה. הערה: זה unadvisable לנסות יותר משני intubations של עכבר בפגישה אחת מבלי לגרום לטראומה לעכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשךלאבטח את הצנתר עם nondominant היד תוך שהוא מחדיר את מזרק דיוק / מחט קהה המכילה את כרית השעיה / אוויר הנוזלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר נוזל / האוויר ישירות לתוך הריאות בתנועה חלקה אחת ולהסיר באופן מיידי את המחט / קטטר מהעכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את העכבר לכלוב ולאפשר התאוששות מן ההרדמה. </li></ol> 4. אפיון של משלוח IMT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר החדרת IMIT, להרדים את העכבר על ידי CO 2 חנק בלאחר חיסון זמן מתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את העכבר מורדמים על קרש חיתוך ולהשרות את החזה והבטן עם 70% EtOH באמצעות בקבוק להשפריץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הערכת הפצת סוכן הדמיה של ברחבי הריאות, להסיר את הריאות מבעלי החיים באמצעות טכניקה סטרילית ולהציג את הריאות כמתאימות להדמיה. הערה:. ריאות יכולות להיות מוכנות לטכניקות צביעה היסטולוגית נוספות באמצעות קיבוע או הקפאה מתאים &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הערכת נטל החיידקים של רקמת ריאה נגועה, להסיר את הריאות מבעלי החיים באמצעות טכניקה סטרילית. ריאות מקום לסטרילי, preweighed תיק מדגם 1 גר &#39;. לשקול ולהקליט את המשקל של תיק המדגם + ריאות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מיליליטר סטרילי 1X PBS על כל תיק מדגם + רקמות. יש לחתום מחדש תיק מדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Homogenize רקמות על ידי עדין מתגלגלות פיפטה סרולוגית 25 מיליליטר מעל לכריות הדגימה + הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור דילולים סידוריים של homogenate הריאות בPBS סטרילי וצלחת על צלחת אגר (LB, או כפי שמתאימים למיני חיידקים הנלמדים): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל דילול סדרתי של פי שש בצלחת גם 96 U-תחתונה על ידי pipettor רבת ערוצים ואז צלחת דגימות בשלושה עותקים על ידי רב-ערוצית בצלחת אגר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה צלחות אגר לילה בשעה 37 ° C ולמנות יוצרי יחידות מושבה למחרת. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Reznik, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+anatomy%2C+physiology%2C+and+function+of+the+upper+respiratory+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Comparative anatomy, physiology, and function of the upper respiratory tract.</a> Environ Health Perspect. 85, 171-176 (1990).</li>
<li>Hoyt, R. F. J., Hawkins, J. V., St. Clair, M. B., Kennet, M. B., et al. Chapter 2. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHoyt%2C+RFJ+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%2C+Volume+2%2C+Second+Edition%3A+Diseases+%28American+College+of+Laboratory+Animal+Medicine%29%22">The Mouse in Biomedical Research, Volume 2, Second Edition: Diseases (American College of Laboratory Animal Medicine)</a>. Fox, J. G. 2, Academic Press. 23-90 (2007).</li>
<li>Visweswaraiah, A., Novotny, L. A., Hjemdahl-Monsen, E. J., Bakaletz, L. O., Thanavala, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+the+tissue+distribution+of+marker+dye+following+intranasal+delivery+in+mice+and+chinchillas%3A+a+multifactorial+analysis+of+parameters+affecting+nasal+retention%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Tracking the tissue distribution of marker dye following intranasal delivery in mice and chinchillas: a multifactorial analysis of parameters affecting nasal retention.</a> Vaccine. 20, 3209-3220 (2002).</li>
<li>Eyles, J. E., Spiers, I. D., Williamson, E. D., Alpar, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+distribution+of+radioactivity+following+intranasal+administration+of+radioactive+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Tissue distribution of radioactivity following intranasal administration of radioactive microspheres.</a> J Pharm Pharmacol. 53, 601-607 (2001).</li>
<li>Southam, D. S., Dolovich, M., O'Byrne, P. M., Inman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+intranasal+instillations+in+mice%3A+effects+of+volume%2C+time%2C+body+position%2C+and+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Distribution of intranasal instillations in mice: effects of volume, time, body position, and anesthesia.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 282, 833-839 (2002).</li>
<li>Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+murine+intranasal+dosing+efficiency+using+luminescent+Francisella+tularensis%3A+effect+of+instillation+volume+and+form+of+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Visualization of murine intranasal dosing efficiency using luminescent Francisella tularensis: effect of instillation volume and form of anesthesia.</a> PLoS ONE. 7, (2012).</li>
<li>Lathem, W. W., Crosby, S. D., Miller, V. L., Goldman, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+of+primary+pneumonic+plague%3A+a+mouse+model+of+infection%2C+pathology%2C+and+bacterial+transcriptional+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Progression of primary pneumonic plague: a mouse model of infection, pathology, and bacterial transcriptional activity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 17786-17791 (2005).</li>
<li>Warawa, J. M., Long, D., Rosenke, R., Gardner, D., Gherardini, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+diagnostic+imaging+to+characterize+altered+respiratory+tract+colonization+by+the+Burkholderia+pseudomallei+capsule+mutant%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent diagnostic imaging to characterize altered respiratory tract colonization by the Burkholderia pseudomallei capsule mutant.</a> Front Microbiol. 2, 133(2011).</li>
<li>Gutierrez, M., Pfeffer, T. L., Warawa, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+3+Secretion+System+cluster+3+is+a+critical+virulence+determinant+for+lung-specific+melioidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Submitted%22%5BJournal%5D)">Type 3 Secretion System cluster 3 is a critical virulence determinant for lung-specific melioidosis.</a> Submitted. , (2014).</li>
<li>Fodah, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+Klebsiella+pneumoniae+comparative+genetic+analyses+with+virulence+profiles+in+a+murine+respiratory+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Correlation of Klebsiella pneumoniae comparative genetic analyses with virulence profiles in a murine respiratory disease model.</a> PLoS ONE. In revision, (2014).</li>
<li>Soto-Montenegro, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+airway+distribution+of+transnasal+solutions+in+mice+by+PET%2FCT+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessment of airway distribution of transnasal solutions in mice by PET/CT imaging.</a> Mol Imaging Biol. 11, 263-268 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

החדרת IMIT מציעה שיפורי מפתח למודלים של מחלות בדרכי הנשימה קיימות ביכולת להחדיר חומרים כימיים reproducibly ישירות לתוך הריאות. זוהי גישה מהירה הממוקמת באופן אידיאלי לצוות של שני חוקרים, שאחד מהם מנהל את הלוגיסטיקה של הרדמה וכליאה, ואחרת שמבצעת את טכניקת IMIT. מחקרים גדולים שיכולים להתבצע באמצעות IMIT עם מחויבות זמן ממוצעת של 3 - 2 דקות לכל עכבר. בגלל שהגישה עושה שימוש בisoflurane כחומר הרדמה, עכברים להתאושש במהירות מההרדמה, צמצום הזמן בעלי מעקב בעלי חיים באמצעות התאוששות. האספקט הכי המאתגר מבחינה טכנית של שיטת IMIT הוא השלב הראשוני של intubating עכברים. אנשים לומדים לבצע IMIT יכולים להתמקד בשלב זה ראשון של מיקום קטטר והבטחת אינטובציה שהושג באמצעות האישור החזותי של תנועת צבע. היתרון של הגישה הוא שריאות המפרטהחדרת ific מובטחת באמצעות שימוש באישור לאינטובציה, מה שמגביר את אמונן של החוקר החדש, כמו גם המומחה מנסה צנרר חיה קשה. המרכיבים העיקריים של אופטימיזציה של הסבירות לאינטובציה מוצלחת הם: א) השיג הרגעה עמוקה כדי לאפשר זמן עבודה מספק, ii) מיקום נכון של המצפה בפה כדי לאפשר הדמיה טובה של מכסה הקנה, iii) מיקום עומק טוב של מצפה כך שהלשון נשארה חזרה לאורך כל ההליך, וiv) שימוש בפלטפורמת ההטיה לתמוך ידיו של החוקר, כך שההליך מתנהל רגוע ועם גישה קבועה. אחת המגבלות של הליך IMIT קשור לשכיחות של אירועי החדרת IMIT. בשל הטראומה הפוטנציאלית הקשורים עם אינטובציה החמיצה, זה לא מומלץ שיותר משני ניסיונות אינטובציה ייערכו בפגישה אחת (עד שתי החטאות). IMITיש פוטנציאל מצוין ביכולתה לשמש כדי לספק תרופות לריאות העכבריות, משטרי טיפול זאת אשר עושים שימוש במשלוח תכוף מאוד של מגיב לריאות לא יכול להיות מתאים לIMIT. זה יכול להיות אפשרי, כי IMIT יכול לשמש יומי כדי לספק חומרים כימיים לתוך ריאות עכבריות מבלי לגרום לטראומה משמעותית, אבל הוא חשב רק כאשר שנערך על ידי חוקר מיומן, כמו רוב הטראומה יחד עם אינטובציה להיות מזוהה עם אירוע אינטובציה החמיץ . IMIT בתדר גבוה כזה יש לדון עם וטרינרים מקומיים וIACUC. מגבלה פוטנציאלית נוספת של IMIT היא בגודל של העכבר אשר נמצאת בתהליך מונשם. הליך IMIT שתואר לעיל פותח באמצעות עכברים של כ 17-22 g, שבו קטטר 20 G נמצא בגודל מתאים לקנה הנשימה של עכברים בטווח גדלים זה. צנתרים גדולים יותר היו בשימוש בהצלחה בעכברים מבוגרים; הפיתוח הראשוני של מטר IMITשימוש ADE של קטטר G 18 בעכברים / ג BALB שהם&gt; 20 גרמו. חשוב לציין, אם גדלי צנתר חלופיים משמשים, צריכים להיות שמקורו מחטים קהות אשר מתאימה לומן של הצנתר והם גזומים לאורך המשתרע רק 1 מ&quot;מ מעבר לקצה הצנתר. אינטובציה של עכברים קטנים יותר מ -17 גר &#39;עשויה להיות אפשרית אבל לא מומלצת בשל המומחיות הנדרשת, ותדרוש שימוש בצנתרים ומצפה מאשר תוארו לעיל קטנים יותר. יש לנו להשתמש IMIT למסירה של כמה פתוגנים נשימה בנוסף לפ aeruginosa, כולל ב &#39; pseudomallei 9 וקלבסיאלה pneumoniae 10. מודל IMIT עשה התקדמות חשובה למחקריהם של ב &#39;שלנו מחלות בדרכי הנשימה pseudomallei, לאחר שזיהו כי חיסון intranasal גורם תחלואה מוקדמת, אגדתי-קשורה של עכברים ולא נקודת סיום המחלה המערכתית שנצפתה במחלות של בני אדם 9. ב pseudomallei היא אין תמיכה בבחירה Tier 1סוכן לא של השפעת ההגנה מפני טרור ביולוגי, וכפי שמודלים כאלה, נשימה מחלה מפותחים עבור חשיפת תרסיס שמודלי מסלול הגנה מפני טרור ביולוגי הקשורים פוטנציאל של כניסה לפתוגנים מעובדים לנשק. מכיוון שמודלי תרסיס הנוכחיים לגרום לזיהום של שתי אגד וLRT, אותו פנוטיפים תחלואה מוקדמת הפוטנציאל זיהינו למודל אינטרה-ב &#39; מחלות בדרכי הנשימה pseudomallei עשויות לחול על מודל התרסיס. הסתגלות עתידית של מודל IMIT יכולה להיות משלוח בתיווך אינטובציה תרסיס (עימאד), שבו עכברים מחוברים לצינורות לאספקת תרסיס היעד רק לריאות. מאווררים מכאניים זמינים כעת כדי לשמור על ההרדמה isoflurane, אשר יכול להיות מותאמת כדי לספק ולא מבוסס נוזל אתגר תרסיס,, מחולל מחלה. IMIT פותח בתחילה כגישה כדי לייעל את המשלוח של חיידקים לריאות, אבל יש גם בקשה למשלוח של חומרים כימיים אחרים לריאות העכבר. כדיסקלל מעל, משלוח אינטרה של תרכובות לתוצאות עכברים ביעילות נמוכה, משלוח משתנה מאוד של חומרים כימיים לאיבר המטרה של הריאה. משלוח אינטרה של חומרים כימיים הדמיה Positron פליטת טומוגרפיה (PET) לריאות העכבריות הניב 40% יעילות משלוח 11, בעוד שאנחנו הוכחנו כי IMIT מציע אלטרנטיבה מצוינת למסירת ריאה אחרת מתקרבת עם 98% יעילותה&gt; משלוח והפצת multilobar. שיפור באספקה ​​ממוקדת לריאה זו יש הפוטנציאל להגדיל את שחזור של מסירה טיפולית לטיפול במחלת ריאות. IMIT דומה אפשר להציע הטבות ללימודים של: א) ההשפעה של חומרים מגרים ריאות סביבתיות, מחקרים פנוטיפי ii) סרטן ריאות, iii) siRNA ריאות ספציפיות לדפוק למטה.

עכברים כבר משמשים מודל ביטויים רבים אדם מחלה, כוללים מספר עצום של מחלות בדרכי הנשימה. מודלים של מחלות פונדקאיות הם לעתים קרובות מסוגלים לשחזר את כל ההיבטים של מחלת מודל, בדרך כלל עקב פיסיולוגי חשוב או הבדלים חיסוניים בשני דגמי המארח. כך, במטרה לשפר את מערכות מודל היא לפתח גישות שתאפשרנה תחליפים לשקף באופן הדוק יותר תהליך מחלה או לארח תגובה כפי שנצפו במערכת המארח המקורית. ישנם מספר הבדלים עיקריים פיסיולוגיים בין עכברים ובני האדם במנגנון שבאמצעותו הם השראה לאוויר. כלולים בהבדלים אלה הבדלי ratiometric משמעותיים בגודל בין אגד ורכבת הקלה. הערכה הוא שעכברים בעלי&gt; 100 לקפל את שטח הפנים אגדו לא ביחס לבני אדם, מנורמל נגד כולל 1,2 קיבולת ריאות. כך, turbinates האף של העכבר מאפשר סינון נרחב יותר של אוויר השראה כדי להקל על שיעור גדול בהרבה של breathing, אשר עשוי להשפיע באופן משמעותי על מחקרים של דלקת ריאות אם זיהום של חלל האף משחק תפקיד משמעותי בהתקדמות מחלה. מספר גישות שונות נוצלו כדי להחדיר חיידקים לריאות של עכברים ללמוד מחלות בדרכי הנשימה כמו בני-. הנפוץ ביותר של גישות אלו הוא חיסון אינטרה, שבו השעיה נוזלית מיושמת בnares אחד או שניהם של עכבר. בעוד פשוט יחסית, אזהרות כגון החדרת כמות וסוג של הרדמה המשמשת יכול להשפיע על היעילות של החדרה לרכבת הקלה באמצעות חיסון אינטרה-3-5. באופן ספציפי, מילר et al. הראה שהחדרת אינטרה של tularensis Francisella בכמויות פחות מ -50 μl לא הביא להחדרה של החיידקים לרכבת הקלה 6. הם התבוננו נוספים החדרת LRT טובה יותר בעת שימוש isoflurane בשאיפה לעומת הזריק קטמין / xylazine להרדמה. עם זאת, experienc שלנודואר עם חיסון intranasal Yersinia pestis מציין חיסון עקבי יותר יכול להיות מושגים באמצעות קטמין / xylazine לעומת isoflurane (MBL, נתונים שלא פורסמו). הבדלים אלו ניתן לייחס לפתוגן בשימוש או לשינוי בנהלי מעבדה, אבל חשוב להדגיש את השונות הפוטנציאליות בטכניקה זו. יתר על כן, ריאות שנקטפו זמן קצר לאחר תכנית החדרת אינטרה כי אחוז נמוך יחסי של הבידוד החיידקים הראשוני מגיע הריאות (במקרה של י &#39;pestis, רק 10% נמצאו 1 שעה לאחר החדרת 7), המצביעה על כך מספר רב של חיידקים יכול להישמר באגדתי (או נבלע בתוך מערכת העיכול). במודלים של מחלות מסוימות, בתצהיר משמעותי זו של חיידקים ברירית אגד לא יכול לבלבל את ההבנה של התקדמות המחלה שלנו, אם האורגניזם מסוגל מיישב את חלל האף העכברי באופן עקבי עם המחלות של בני האדם. לדוגמא, באמצעות in vivo &lt;/ Em&gt; הדמיה, היא נצפתה כי Burkholderia pseudomallei, שאינו ליישב אגדו לא האנושי, גורם לזיהום אופורטוניסטי מכריע של חלל האף העכברי כאשר נמסר על ידי שיטת החדרת אינטרה 8. שיטות אחרות לצורך הקניית חיידקים לריאות של עכברים גם להיות מועסקת במחקר מחלות מדבקות. עם זאת, בהשוואה להחדרת אינטרה שיטות אלה נוטים לדרוש מומחיות טכנית יותר ו / או ציוד יקר מבלי לבטל את הפוטנציאל לייזום זיהום במספר רב של אתרים (לדוגמא, בתרסיס [אגדתי ורכבת הקלה]; [מערכת עיכול ורכבת הקלה] transoral; וintratracheal כירורגית [רכבת קלה וזרם דם]). בהתחשב בסיבוכים האפשריים שיכול להיות קשורים לאתרים משניים לזיהום, שבקשנו לפתח גישת intratracheal שעוקף את אגד ומספקת הפתוגן ישירות לתוך הריאות של עכברים מורדמים, אבל גם מגביל inoculat בשוגגיון לתוך זרם הדם או במערכת עיכול. לצורך זה, intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT) פותחה כהליך ניתוחי אשר מבטיח החדרת LRT של הבידוד על ידי הכללת שלב ביניים כדי לוודא מיקום צנתר נכון לפני החדרה. שיטה זו מתוארת באמצעות החדרת צבע להפגין חזותי הפצה רחבה של הבידוד לאורך כל הריאה, ופ החדרת aeruginosa כדי להדגים את האספקה ​​יעילה מאוד (&gt; 98% מהבידוד) של שיטה זו לריאות. חשוב לציין, בזמן שפותח במקור למסירה בקטריאלי, IMIT מציע גם כלי יעיל ל: i) החדרה של מולקולות שונות לחקר מודלים אחרים בדרכי הנשימה מחלה, ii) אספקה ​​טיפולית ריאות ספציפיות, וiii) את הלימודים בתפקוד ריאות בסיסיות, לרבות ממוקד משלוח siRNA לריאות.

<table><tbody><tr><td>מכרסם, הטיה מעמד עבודה</td><td>Hallowell EMC</td><td>000A3467</td><td>יש לנתק את הבסיס בעת עבודה בראש</td></tr><tr><td>אוטוסקופ</td> הפעלה BSC <td>Welch Allyn</td><td>21700</td><td></td></tr><tr><td>אוטוסקופ 3.5 V Li סוללה</td><td>Welch Allyn</td><td>71900</td><td></td></tr><tr><td>אינטובציה של עכבר ספקולה קצרה, ניתנת לחיטוי</td><td>Hallowell EMC</td><td>200A3589S</td><td></td></tr><tr><td>לולאות חותכות</td><td>Hallowell EMC</td><td>210A3490A</td><td></td></tr><tr><td>מוליך כותנה עדין</td><td>קצה פוריטן</td><td>871-PC DBL&nbsp;</td><td>משמש לנסיגת לשון</td></tr><tr><td>צנתר IV, 20 G</td><td>Exel Int</td><td>26741</td><td>אופציונלי: מתאים לשרוול סיליקון עם משטח קטטר חשוף 10 מ"מ</td></tr><tr><td>מזרק אטום לגז, 250 ul</td><td>Hamilton</td><td>81120</td><td>משמש לאספקת חיסון נוזלי על ידי מחט קהה IMIT</td></tr><tr><td>, 22 G</td><td>Hamilton</td><td>91022</td><td>חתוך לאורך כדי לבלוט 1 מ"מ מ-20 G חוט מנחה צנתר</td></tr><tr><td>(חוט סיבים אופטיים, 0.5 מ"מ)TheFiberOpticStore.com</td><td></td> <td>FOF .50</td><td>חתוך לאורך 6 אינץ': משמש כחוט מנחה למזרק טוברקולין אינטובציה</td></tr><tr><td>, 1 מ"ל</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td>להרכיב עם חוט סיבים אופטיים כחוט מנחה</td></tr><tr><td>Brilliant Blue R (Coomassie)</td> <td>Sigma</td><td>B0149</td><td></td></tr><tr><td>Tygon Tubing, 1/16 אינץ'</td> <td>Saint Gobain</td><td>ALC00002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>זכר לואר 1/16 אינץ' דוקרני</td><td>קול פארמר</td><td>45503-22</td><td></td></tr><tr><td>נקבה לואר 1/16 אינץ' דוקרני</td><td>קול פארמר</td><td>45500-00</td><td></td></tr><tr><td>לידוקאין, USP</td><td>Spectrum</td><td>LI102</td><td>pH לידוקאין לתמיסה ב-2% (w/v) pH7.0</td></tr><tr><td>שקית דגימה, 1 אונקיה</td><td>Whirl-Pak</td><td>B01067</td><td></td></tr><tr><td>U-bottom 96 צלחת באר</td>, <td>גריינר</td> סטרילי <td>650161</td><td></td></tr></tbody></table>

intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (imit): מערכת לא פולשני, ריאות ספציפי משלוח

Intubation-mediated Intratracheal (IMIT) Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

מחקרי מחלות בדרכי הנשימה בדרך כלל כרוכים בשימוש במודלים עכבריים מערכות פונדקאיות. ואולם, יש הבדלים משמעותיים פיסיולוגיים בין העכברי ומערכות נשימה של אדם, ובמיוחד בשטחים שלהם בדרכי הנשימה העליונות (אגדו,). בחלק מהדגמים, הבדלים אלה בחלל האף העכברי יכולים להיות השפעה משמעותית על התקדמות מחלה ולהצגה בדרכי הנשימה התחתונה (LRT) בעת שימוש בטכניקות החדרת אינטרה, שעלול להגביל את התועלת של מודל העכבר ללמוד במחלות אלה. מסיבות אלה, זה יהיה יתרון לפתח טכניקה להחדיר חיידקים ישירות לתוך ריאות העכבר כדי ללמוד מחלה LRT בהיעדר המעורבות של אגד. יש לנו מכונים החדרת intratracheal תיווך אינטובציה טכניקת מסירה (IMIT,) ייחודית זה ריאות. טכניקה לא פולשנית זו מקטינה את הפוטנציאל להחדרה לזרם הדם, אשר יכול להתרחש במהלך traditi פולשניים יותרגישות onal כירורגית intratracheal זיהום, ומגביל את האפשרות של משלוח מערכת עיכול מקרי. IMIT הוא תהליך בן שני שלבים שבעכברים מונשמים ראשון, עם שלב ביניים כדי להבטיח מיקום קטטר נכון לתוך קנה הנשימה, ואחריו החדרת מחט בוטה לקטטר לתווך משלוח ישיר של חיידקים לריאות. גישה זו מאפשרת יעילות&gt; 98% מאספקה ​​לריאות עם הפצה מעולה של מגיב בכל הריאה. כך, IMIT מייצג גישה חדשנית ללימוד מחלה LRT ומשלוח טיפולי ישירות לתוך הריאות, שיפור על היכולת להשתמש בעכברים כממלאי מקום לחוות דעה על מחלת נשימה של אדם. יתר על כן, את הדיוק ואת שחזור של מערכת מסירה זה גם עושה את זה נוח לטוב תקני מעבדה עיסוק (GLPS), כמו גם אספקה ​​של מגוון רחב של חומרים כימיים הדורשים משלוח יעילות גבוה לריאות.

כדי להמחיש את הפצתו של חומר החדיר באמצעות שיטת IMIT, 50 μl של 0.1% לצבוע צבעי קומסי הוחדר לריאות של עכבר בהרדמה. העכבר היה מורדמים באופן מיידי והריאות הוסרו על ידי נתיחה לאחר מות סטרילי. איור 1 מציג שהצבע נמסר לכל אונות הריאה. כדי לקבוע את כמות החיידקים מועברת אל הריאות באמצעות שיטת IMIT, שלוש קבוצות של עכברים (N = 3) היו החדיר עם שלושה ריכוזים שונים של פ aeruginosa (x 1.21 x 10 8, 1.21x10 7, ו1.21 10 6 יחידות מושבה להרכיב [CFU] לכל 50 μl). מייד לאחר החדרת IMIT, עכברים מורדמים, ריאות הוסרו, ומספרי חיידקים נפקדו ובהשוואה לinoculums (איור 2). משלוח של הבידוד הוא יעיל ביותר באמצעות שיטה זו, עם&gt; 98% מהבידוד התאושש מהריאות של החדירבעלי חיים. יתר על כן, החדרת IMIT הייתה מאוד לשחזור, ללא קשר לריכוז של הבידוד (R 2 = 0.9951). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52261/52261fig1highres.jpg" /> איור 1: החדרת IMIT מפיצה הבידוד לאורך כל ריאות ריאות מעכברים החדירו עם 50 μl של 0.1% צבע כחול תכנית הכחולה Coomassie מבריק מופץ בכל האונות.. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52261/52261fig2highres.jpg" /> איור 2:. החדרת IMIT של חיידקים לריאות עכברים החדירו עם פ aeruginosa ואת מספר החיידקים החדירו לתוך הריאות (התחבר 10 CFU - התאושש) הושוו להערכת הבידוד (התחבר 10 CFU - נמסר). כל עיגול מייצג את CFU / הריאות של עכבר בודד (n = 3 עבור כלמינון חיידקים).

intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT) של חומרים כימיים היא שיטה מצוינת, לא פולשנית ללימוד מחלות בדרכי הנשימה, כמו גם שיטה להחדרת חומרים כימיים טיפוליים ישירות לתוך הריאות. זוהי שיטה מהירה ושחזור ביותר אשר מתאימה לניסויים פרה-קליניים.

Intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT): מערכת לא פולשני, ריאות ספציפי משלוח

Respiratory disease studies typically involve the use of murine models as surrogate systems. However, there are significant physiologic differences ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעביר חיידקים באופן לא פולשני ישירות לריאות של עכברים. זה מושג על ידי העמסת כרית אוויר של 150 מיקרוליטר למזרק אטום לגז, ולאחר מכן 50 מיקרוליטר של תרחיף החיידקים המוכן. בשלב השני, עכבר מורדם מוחדר עם קטטר בגודל 20 באמצעות חוט מנחה כדי לסייע במיקום.לאחר מכן, לאחר אישור הצלחת האינטובציה באמצעות מד זרימה פשוט, החיסון החיידקי מועבר דרך הצנתר ישירות לריאה עם מחט קהה ארוכה בגודל 22. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בחיסון תוך-קנה הנשימה או בהשמטת אינטובציה כדי לחקור מחלות בדרכי הנשימה התחתונות בעכברים, תוך הימנעות ממעורבות מקבילה של דרכי הנשימה העליונות. היתרון העיקרי של חיקוי על פני שיטות חיסון בין-אף הוא שטכניקה זו מאפשרת אספקה מדויקת וניתנת לשחזור של חיסון ישירות לריאות.מכיוון ש-IIT היא טכניקה לא כירורגית, היא גם מפחיתה את הפוטנציאל לסיבוכים הקשורים להליכים כירורגיים תוך קנה הנשימה. למרות ששיטה זו יכולה לספק מנגנון אמין להעברת חיידקים לריאה כדי לחקור פתוגנזה, ניתן ליישם IMA גם על העברת ריאגנטים אחרים, כגון תרכובות סביבתיות לחקר נזק לריאות, מתן מטרה של טיפולים לטיפול ומתן בדיקות הדמיה או SRNA לחקר ביולוגיה ריאתית בסיסית. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו עם שלב האינטובציה מכיוון שהשלב דורש מיקום זהיר של החיה וההיקף האוטומטי להכנסת חוט מנחה.הדגמה חזותית של שיטה זו מועילה מכיוון שקשה לתאר את המיקום הראשוני של חוט ההנחיה לתוך קנה הנשימה לחוקרים חדשים. 15 שעות לפני ההתקנה יש לחסן שלושה מיליליטר של תרבית מרק עם מושבת חיידקים אחת ולגדל את התרבית ב-37 מעלות צלזיוס ושייקר ב-200 סל"ד. לאחר 15 שעות, סובב מיליליטר אחד מהתאים בצינור מיקרו צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר, והשהה מחדש את החך במיליליטר אחד של PBS.לאחר מכן, מדוד דילול של 1 עד 10 של תרחיף מלאי החיידקים ב-OD 600 כדי לקבוע את ריכוז החיידקים. לאחר מכן יש לדלל את תאי החיידקים ב-PBS לריכוז הרצוי של חיידקים לכל 50 מיקרוליטר חיסון. עבור התקנת ה-IIT, עכברים מוכנים ל-IIT על ידי מתן תמיסת לידוקאין של 2% לעכבר מורדם קלות על ידי עכברי מחט גבאג'.חזרה להרדמה בזמן שהלידוקאין נכנס לתוקף. כעת שואבים 150 מיקרוליטר אוויר למזרק ביטול מסוג גז של 250 מיקרוליטר, המצויד במחט קהה ארוכה בגודל 22. לאחר מכן קדם את בוכנת הטפלון מסימן 150 מיקרוליטר לסימון 200 מיקרוליטר על גוף המזרק כדי לשאוב 50 מיקרוליטר של החיסון החיידקי בעת טעינת המזרק.LA, עכבר מורדם שוכב על משטח אינטובציה המאבטח את החיה על ידי החותכות על טבעת ללא טבעת המחוברת לרצועת סקוטש המחוברת לפלטפורמה. הרם את העכבר לשיפוע של 45 מעלות ולאחר מכן השתמש במוליך מיקרו כותנה כדי למשוך את הלשון בתנועת גלגול עם היד הדומיננטית. לאחר מכן, עם היד הלא דומיננטית, השתמש באוטוסקופ הפעלה המתאים לספקולציה של אינטובציה כדי לשמור על נסיגת הלשון ולדמיין את האפיגלוטיס.לאחר מכן החזיקו ביד הדומיננטית חוט מנחה המושחל דרך קטטר בגודל 20, החדירו את העכבר לעומק של 10 מילימטר בתוך קנה הנשימה והוציאו את האוטוסקופ. אבטח את הקטטר ביד הלא דומיננטית. לאחר מכן חבר לזמן קצר את הפיתוי המחובר באורך של צינור שקוף 16 המכיל צבע צבעוני לקטטר.הצבע אמור לנדוד במהירות קדימה ואחורה בתגובה לנשימת החיה כאשר בעל החיים עבר אינטובציה מוצלחת. הכנס את המחט הקהה בגודל 22 לתוך הצנתר והוציא את החיסון ישירות לריאה בתנועת נוזל אחת. לאחר מכן הסר מיד את המחט והצנתר מהחיה והחזיר את העכבר לכלוב שלו עם ניטור עד שהחיה תתאושש לחלוטין מההרדמה.כדי להעריך את העומס החיידקי של רקמת הריאה הנגועה, הסר את הריאות בטכניקה סטרילית והנח את הרקמה בשקית דגימה סטרילית של אונקיה אחת. לאחר שקילת שקית הדגימה בתוספת הריאות, הוסף מיליליטר אחד של PBS סטרילי לרקמה ומכור מחדש את שקית הדגימה. לאחר מכן גלגל בעדינות פיפטה סרולוגית של 25 מיליליטר על שקית הדגימה כדי להומוגניזציה של הרקמה.הסר את הרקמה המחוברת דרך מסנן קיר פוליאסטר סטרילי וטפל בהומוגנאט עם טריטון X 100 בריכוז סופי של 1% כדי לשחרר את החיידקים. לאחר מכן, השתמש בפיפטה רב-ערוצית כדי לבצע דילול סדרתי פי שישה של ההומוגנאט בצלחת באר UBO 96. לאחר מכן השתמש בשמונה בארות רב-ערוציות כדי לצלחת את המשולש ההומוגני של 10 מיקרוליטר על צלחת אגר LBA.לבסוף, דגרו את הלוחות למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס וספרו את היחידות היוצרות מושבה למחרת. העברת החיידקים יעילה ביותר בשיטה זו, כאשר למעלה מ-98% מהחיסון הפסאודומונס אירוגן הוחזר מריאות החיות שהוחדרו בניסוי מייצג זה. יתר על כן, התקנת IIT ניתנת לשחזור ללא קשר לריכוז החיסון הניתן.כדי לדמיין את התפלגות החומר המוחדר בשיטת IIT, ניתן להעביר לריאות 50 מיקרוליטר של 0.1% צבע כחול מבריק של קומאסי כפי שהודגם זה עתה עבור החיסון. שימו לב, חלוקת הצבע לכל אונות הריאה לאחר שליטה. ניתן לבצע שיטה זו במהירות עם צוות של שני חוקרים בזמן ממוצע של שתיים-שלוש דקות, כולל הרדמה, חיסון IMA והתאוששות מהרדמה.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לא לבצע יותר משני ניסיונות כושלים להחדיר את העכבר. אינטובציה כושלת עלולה לגרום לטראומה פוטנציאלית מהחדרת הקטטר לוושט במקום לקנה הנשימה. פתוגנים נשימתיים רבים, כולל אלה הדורשים הכלת שרירי הבטן L-3 יכולים להיות מועברים ביעילות על ידי imed מכיוון שניתן לבצע הליך זה כפי שמודגם על ידי ארונות בטיחות ובנוסף על ידי חוקרים הלובשים הגנה נשימתית מלאה כולל מגן פנים.הוכחנו כי imit היא שיטה מדויקת ויעילה מאוד להעברת חומרים ישירות לריאות של עכברים. מאפיינים אלה הופכים את האימיט למתאים היטב למחקרים מסוג GLP הדורשים מערכות מודל הניתנות לשחזור גבוה.

intubation-mediated-intratracheal-imit-instillation-noninvasive-lung

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Instillations Intratracheal לספק מומסים ישירות לריאות. הליך זה מטרות אספקת instillate לתוך אזורים דיסטלי של הריאה, ולכן שולבו לעתים קרובות במחקרים שמטרתם ללמוד alveoli. אנו מספקים הישרדות פרוטוקול מפורט לביצוע instillations intratracheal בעכברים.

החדרה ישירה של קנה הנשימה אל הריאות מומסים עכבר

אנו מדגימים לא ניתוחי מסירה של חומרי הבדיקה לריאות של העכברים הרדים דרך קנה הנשימה. שיטה זו מאפשרת חשיפה הריאות לפתוגנים, ציטוקינים חיידקים ווירוסים, נוגדנים, חרוזים, כימיקלים, או צבעים. בנוסף, אנו מתארים קציר ועיבוד של הריאות ניקוז ריאה בלוטות לימפה (LDLNs) עבור cytometry הזרימה.

לא ניתוחי Intratracheal החדרה של עכברים עם ניתוח ריאות וניקוז ריאות בלוטות הלימפה על ידי זרימת cytometry

סרטון זה מתאר גישה תוך-סימפונית למתן חומר ניסיוני באופן סלקטיבי לתוך ריאה ימנית ושמאלית דיסטלית. בפרוטוקול המוצג, אנו ננהל בלומיצין תוך סימפוני לתוך עכבר כדי לקבל מודל טוב יותר עבור פיברוזיס ריאתי.

משלוח תוך סימפונות: טכניקה לניהול סוכן ניסיוני באופן סלקטיבי לתוך ריאה עכבר

השימוש במודל המחקה את המצב של מחלות ריאה בבני האדם הוא קריטי ללימוד הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלה מסוימת ולפתח התערבות טיפולית. הנה שיטת אינטובציה intratracheal לא פולשנית שיכול ישירות לספק חומרים אקסוגניים לריאות עכבר מוצגת.

פולשנית Intratracheal אינטובציה ללמוד פתולוגיה והפיזיולוגיה של עכבר ריאות

מאמר זה מציג שיטה מהירה ופשוטה לניהול בליאומיצין ישירות לתוך קנה הנשימה העכבר באמצעות אינטובציה. יתרונות עיקריים של שיטה זו הם כי הוא מאוד לשחזור, קל לשלוט, ואינו דורשים ציוד מיוחד או פעמי החלמה ממושכות.

שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים

Intratracheal (IT) המינהל של סוכנים ניסיוניים בעכברים לעתים קרובות מביא משלוח אסימטרי הריאות המרוחק.  בדוח זה, אנו מתארים גישה ישירה בלתי-מרורונצ'יאל (ליברות) כדי לאגור כל ריאה בעכברים חיים שאינם מבצעית.  גישה זו יכולה לשמש באופן סלקטיבי לניהול סוכנים לריאה אחת או להתאים כדי לשפר את מסירת הסוכן הסימטרי לשתי הריאות.

מינהל הארגון הישיר כדי לשפר את הסוכן הסלקטיבי התצהיר בתוך הריאה של העכבר

ניסוחים אבקה יבשה לשאיפה יש פוטנציאל גדול בטיפול במחלות בדרכי הנשימה. לפני הכניסה למחקרים בבני אדם, יש צורך להעריך את היעילות של ניסוח אבקה יבשה במחקרים פרה-קוליניים. מוצגת שיטה פשוטה ולא פולשנית לניהול אבקה יבשה בעכברים דרך המסלול התוך-מסלולי.

ניהול תוך-סחיר של ניסוח אבקה יבשה בעכברים

טכניקה זו של החדרת תרופות ישירות לקנה הנשימה של מכרסמים יילודים חשובה לחקר ההשפעה של תרופות או ביולוגים מקומיים על מחלות ריאה בילודים. בנוסף, שיטה זו יכולה לשמש גם לגרימת פגיעה בריאה במודלים של בעלי חיים.

שיטה זעיר פולשנית להחדרת תרופות תוך-רחמיות במכרסמים יילודים לטיפול במחלות ריאה

כאן, אנו מציעים פרוטוקול להעברת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי (LPS) באמצעות אינטובציה אנדוטרכאלית אורופרכאלית לא פולשנית. שיטה זו ממזערת את הטראומה של ההליך הכירורגי עבור החיה ומעבירה LPS מדויק לקנה הנשימה ולאחר מכן לריאות.

החדרת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי לא פולשני בעכברים

פרוטוקול זה מציג כיצד מיקום אופטימלי של עכבר והחדרת אוטוסקופ מבוסס מצלמה באופן טרנסאורלי מאפשר הדמיה של הגלוטיס, אינטובציה מהירה עם טראומה מינימלית לרקמות ואספקת נוזלים עקבית לריאות.

מתודולוגיה משופרת לאספקת נוזלים לריאת העכבר: אינטובציה באמצעות אוטוסקופ צרכני

טיפול תאי מציע התערבות מבטיחה לפיברוזיס ריאתי על ידי שימוש בתאי אב לתיקון רקמות פגועות ושיפור תפקוד הריאות. מכיוון שהדמיה ממלאת תפקיד מרכזי במעקב אחר אינטגרציה של תאים, כאן, אנו מתארים הדמיה מונחית חלקיקים מגנטיים מעקב in vivo של טיפול תאי בפיברוזיס ריאתי במודל עכבר.

מעקב In Vivo מונחה תמונה של תאי אב אפיתל ריאה דיסטליים מושתלים לפיברוזיס ריאתי באמצעות הדמיית חלקיקים מגנטית

למדו שיטת IMIT להחדרת חיידקים ישירות לריאות עכברים ללא ניתוח. טכניקה זו מאפשרת מסירה מדויקת ושחזור של מעל 98% מהחומר לחקר מחלות נשימה ופיתוח טיפולים.

Intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT): מערכת לא פולשני, ריאות ספציפי משלוח

גלה סרטונים נוספים