Name: מתודולוגיה סינתטית למערכות ביו-המצומד Asymmetric Ferrocene נגזרו באמצעות מתודולוגיה המבוססת על שרף שלב מוצקה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: למד סינתזה של ביוקוניוגטים א-סימטריים מבוססי פרוצן-ביוטין בשיטת סינתזה מוצקה. השיטה מאפשרת טיהור פשוט והידוק יעיל על משטחי זהב ליישומי ביוסנסינג.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

KG נתמכה על ידי P-1,760 מענק RA וולש הקרן, TCU אנדרוס מכון למתמטיקה וחינוך מדעי (לק&quot;ג), מחקר TCU ויצירתיות הפעילות גרנט (לק&quot;ג) וTCU SERC גרנט (לJHS).

1. סינתזה של ביוטין-FC-ציסטאין (1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטות שלב מוצקות לייצר שרף הנכנס 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שרף ביוטין טעון (250 מ&quot;ג, 0.145 mmol) לתוך מזרק fritted ולהתנפח השרף על ידי ציור את dimethylformamide (5 מיליליטר) ולוחץ את המזרק על שייקר מעבדה במשך 20 דקות. לגרש את הפתרון ולחזור dimethylformamide נפיחות עוד פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את קבוצת הגנת Fmoc על ידי הוספת 4-6 מיליליטר של piperidine 20% בdimethylformamide למזרק ואחרי 10-15 דקות של רועד. חזור על תהליך deprotection עם עוד 4-6 מיליליטר של piperidine. לשטוף את השרף עם רצף של dimethylformamide 3x, 3x dimethylformamide: מתנול (1: 1), מתנול 3x: dichloromethane (1: 1), dichloromethane 3x, ~ 5 מיליליטר כל אחד. האם מבחן ninhydrin (+) בדגימה קטנה (~ 10) של חרוזים כדי לאשר deprotection מוצלח על ידי הנוכחות של כחול על חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים תמיסה המכילה חומצה 1&#39;-Fmoc-אמינו--1-קרבוקסיליות ferrocene(203.3 מ&quot;ג, .4350 mmol), 1-hydroxybenzotriazole מימה (מ&quot;ג 58.8, .413 mmol), diisopropyl carbodiimide (.0673 מיליליטר, .435 mmol), (.0757 מיליליטר, .435 mmol) diisopropyl אתיל אמין, ו4: תערובת 1 של dichloromethane ו dimethylformamide. לצייר את זה לתוך מזרק fritted ועדינות לנער על מעבדה שייקר במשך 6 שעות. ואז לגרש את הפתרון מן המזרק ולשטוף כפי שתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את בדיקת ninhydrin (-) כפי שתואר לעיל כדי לאשר צימוד. מבחן ninhydrin עדיין יכול להיות שימושי במאשר צימוד למרות הצבע הכתום של חרוז נגזר מהחיבור של הברזל המכיל מחצית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז להסיר את קבוצת Fmoc על ידי התוספת של 20% בpiperidine dimethylformamide ורחץ כפי שתואר לעיל. מבחן ninhydrin (+) יש להשתמש כדי לאשר את הסרת Fmoc. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן, 1-hydroxybenzotriazole מימה (מ&quot;ג 58.8, .4125 mmol), diisopropyl carbodiimide פתרון המורכב מFmoc-Cys (TRT) אה (254.8 מ&quot;ג, .4350 mmol) (.0673 מיליליטר, .4350mmol), diisopropyl אמין אתיל (.0757 מיליליטר, .4350 mmol), ושל 4: 1 תערובת של dichloromethane וdimethylformamide. הוסף קוקטייל צימוד ציסטאין זה מזרק fritted ועדינות לנער במשך 6 שעות. לשטוף באמצעות הפרוטוקול שתואר קודם לכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר צימוד באמצעות בדיקת ninhydrin (-), ואחריו ההסרה של רכיב Fmoc עם piperidine 20% וכביסה. ודא מסוף החופשי אמין באמצעות בדיקת ninhydrin (+). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחשוף של 1 מהשרף. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך פתרון של TFA (9.45 מיליליטר), מים (0.25 מיליליטר), 1,2-ethanedithiol (0.25 מיליליטר), וsilane triisopropyl (0.1 מיליליטר), להוסיף אותו למזרק וללחוץ בעדינות במשך 4 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הפתרון חום-אדום וכתוצאה מכך צינור Eppendorf ולהתאדות TFA באמצעות זרם של אוויר לאט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת אתר diethyl קר (~ 15 מיליליטר) לצינור Eppendorf כדי לזרז 1, אשר יהווה תסיסה עדינה. לבודד את המוצר באמצעות צנטריפוגה (ז 1, 5 דקות). Tמחזורים חוזרים תרנגולת של כביסות אתר diethyl (~ 60 מיליליטר סה&quot;כ) ו צנטריפוגות כדי להשיג 1 כאדום / חום מוצק. </li></ol></li></ol> 2. אפיון וניתוח של 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהזהות תואמת את הקישוריות והרכב שמוצג באיור 2 באמצעות H 1 (16 סריקות) ו- 13 C NMR (512 סריקות) במתנול deuterated (300 μl) וניתוח ESI-MS. מצפה את התוצאות הבאות: 1 ספקטרום NMR H (CD 3 OD) δ / עמודים לדקה: 1.407-1.684 (מ &#39;, 6 שעות), 2.245 (t, 2H), 2.665-3.150 (מ&#39;, 12H), 4.015 (t, 1H), 4.104 (ד, 2H ), 4.274 (q, 1H), 4.426 (ד, 2H), 4.479 (q, 1H), 4.595 (t, 1H) ו -13 ספקטרום NMR C (CD 3 OD) δ / עמודים לדקה: 24.644 (CH 2), 25.472 (CH 2), 28.051 (CH 2), 28.300 (CH 2), 35.474 (CH 2), 38.698 (CH 2), 39.241 (CH 2), 39.717 (CH 2), 55.340 / 55.538 (CP-טבעת), 60.286 (CH), 61.964 (CH), 62.521 / 62.821 (CP-טבעת), 66.038 / 66.170 (CP-טבעת), 69.153 / 69.328 (CP-טבעת), 71.468 / 71.593 (CP-טבעת), 76.466 (CH), 171.770 (C = O), 175.361 (C = O). ESI-MS (m / z): נמצא: 639.00 [1 + Na] +, תיאורטי: 639.1 [1 + Na] + וHR-MS (m / z): נמצא: 617.2049 [1 + H] +, תיאורטי: 617.1622 [1 + H] +. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע HPLC, ניתוח יסודות כדי לאשר את ההרכב של 1 מבודד. לבצע chromatograms HPLC באמצעות C8 הפוך טור שלב עם 100% MeOH בקצב זרימה של 0.5 מיליליטר / דקה. הערה: פעמים שמירת HPLC היו: 3.198-4.674 דקות. </li></ol> 3. קיבוע של 1 על משטח זהב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פולימר Cut מגובה שקופיות זהב לריבועים של ~ 0.25 ב 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא כוס 50 מיליליטר עם פתרון מים DI של 1 (~ 1 מ&quot;מ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף את שקופיות זהב לכוס ומכסה בזכוכית שעון. כלow שקופיות הזכוכית כדי לדגור O / N ב RT ללא תסיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את שקופית זהב מהפתרון ולאפשר לו להתייבש באוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג סריקת תמונות מיקרוסקופ אלקטרונים באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורקים (או שווה ערך) כדי לצפות במשותק 1. </li></ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הסינתזה של נגזרי ferrocene סימטריים מאתגרת בפתרון. לדוגמא, מנסה לייצר 1 בפתרון הביא לתשואות נמוכות של המוצר הרצוי (פחות מ -20%). כמו כן, תגובות ניצול 1&#39;-אמינו-ferrocene חומצה קרבוקסילית (sans Fmoc) וביוטין מחויב השרף הביאו מוצר מסיס בקנה אחד עם מוצר polymerized שדווח על ידי et al Baristic. ומוצר מינימאלי. 47 זה מסתבך עוד יותר על ידי ferrocene ונגזרותיו להיות רגיש לאור ושקרוב באמינו נוטה dimerize בפתרון. סוגיות אלו הופכות את תגובות ...

חיישנים ביולוגיים הם התקנים קטנים המעסיקים טכנולוגיית זיהוי biomolecular כפלטפורמה לניתוח סלקטיביים, ומנוצלים לספציפיות שלהם, מהירות, ובעלות נמוכה. biosensors אלקטרוכימי לגילוי מולקולות הביולוגיים הוא בחוד החנית של תחום זה בשל הפשטות שלהם, עלות תועלת, ורגישות גבוהה. 1,3 האנטומיה הכללית של חיישנים אלה היא אלקטרודה מצוידת במולקולת הכרה ספציפית לסמן הביולוגי של עניין . הכריכה של הסמן הביולוגי על ידי מולקולת ההכרה מביאה לשינוי מקומי של פוטנציאל או נוכחי שיכול להיות מזוהה על ידי מדידה פשוטה. עד כה מחצית ההכרה יכולה לנוע בין אנזימים, נוגדנים 4-8, 9-12 תאים שלמים, 13-16 קולטנים, 17-20 פפטידים 21-23 ו -24 DNA והתמקד בעיקר במולקולות גדולות יותר, ביולוגיות. מחקר 25-28 מאמצים בתחום זה התמקדו בעיקר בimmunosensors wheמחדש אימונוגלובולינים הוא משותק עם ליבה פעילה חיזור (כגון ferrocene) ומשמשים לאיתור נוגדנים של עניין. מחקרים אלה לא נכללו ביישומים קליניים בשל דיוק עני וצריכת זמן נובעים מהסיבוכים הנובעים משימוש של אנטיגן / נוגדנים. תשומת לב גוברת 1,3 התמקדה בזיהוי של מולקולות קטנות (פחות מ 1 קילוגרם / mol) של יו-רפואי , מזון ואיכות הסביבה ריבית בנוסף לביטחון לאומי. 29 דוגמאות הידועות ביותר של התקני biosensor הם צגי גלוקוז בדיקה עצמית, שיש להם אלקטרודות אנזים מסך מודפסות מצמידים את מד אמפרומטריים כיס בגודל. מערכות אלו בדרך כלל לנצל שיטת coulometric כאשר הסכום הכולל של מטען שנוצר על ידי תגובת חמצון הגלוקוז נמדד על פני תקופה של זמן. מכשירים סחירים חייבים להיות ניידים, חזקים והחזיק ביד לעשות שימוש קליל לאוכלוסייה בכללותה. תגי חיזור כגון ferrocene הם necessaר&quot;י לספק זיהוי אלקטרוכימי של סמנים ביולוגיים או מולקולות קטנות בפתרון כמו רוב הסמנים הביולוגיים אינם במהות אלקטרוכימי פעילים. 30-38 Ferrocene היא מולקולה אורגנה-מתכתית שהיא סטנדרט זהב לאלקטרוכימיה, מה שהופך אותו לבחירה מצוינת להשתלבות biosensors אלקטרוכימיים. מינים פעילים חיזור מבוסס Ferrocene כבר זכו לתשומת לב רבה בשל גודלם הקטן, יציבות טובה, גישה נוחה סינתטית, שינוי כימי קל, lipophilicity היחסי, וקלות כוונון חיזור. 3,30-42 מולקולות קטנות המבוססים על הליבה שיש לי ferrocene נעשה שימוש נרחב כגלאים של יוני מתכת ומולקולות קטנות. 32-38,43 מערכות מיקוד מינים גדולים כגון מולקולות ביולוגיות נצלו את הקובץ המצורף של נוגדנים או אימונוגלובולינים גדולים לנגזרי ferrocene שכבר מוטבעים על גבי משטח אלקטרוכימיים. 1,3,39 , 44 בכל מקרה, התעצם הפוטנציאלי ונוכחיty של בני זוג רדוקס Fe III / II Fe שונה על צימוד מולקולרי, ובכך לייצר ידית ספקטרוסקופיות חדשה המעידה על הנוכחות של המולקולה אנליטי. שינוי זה נובע מהחפיפה הנרחבת המתרחשת בין pi-המערכת של טבעות cyclopentadienyl וד-אורביטלי הברזל. אם pi-המערכת היא שונה, כלומר, derivatized או הגיב, אז האינטראקציה מסלולית, בתורו, שינוי. זה ישפיע על הליבה פה וניתן לראות כשינוי בפוטנציאל של בני זוג Fe III / II פה. 40,45,46 תכונות אלו הופכות את מערכת כזו אטרקטיבית לשימוש כסוכן כימות בimmunoassay או biosensor אלקטרוכימי. על מנת לייצר מערכות ferrocene מכיל ספציפיות ליכולות biosensor זה הוא אופטימלי לשנות טבעת Cp אחד עם יו-קולטן ספציפי למולקולת מטרה ולנצל את טבעת Cp אחרת כמו לקשור מולקולרי לקריאה או elec אלקטרוכימייםtrode (איור 1). הסינתזה של נגזרי ferrocene א-סימטריים אלה נתקל בתגובות לוואי והיווצרותם של מיני dimeric ופולימרים נוצרו על cross-linking מולקולאריים. 47 עם זאת, כימיה צימוד ייצור קשר אמיד היא הדרך הישירה ביותר כדי לספק נגזרים פשוטים של ferrocene מעורב רכיבים ביולוגיים כגון כפפטידים ומטבוליטים שלהם. לכן, ניתן ליישם טכניקות שלב מוצקות ראשון שפותחו בשנת 1950 על ידי Merrifield לסינתזת פפטיד לתרכובות אורגנו-מתכתיות המכילות ferrocene. באמצעות השימוש במולקולה להחליף orthogonally 1-קרבוקסיליות 1&#39;-Fmoc-אמינו-ferrocene-החומצה, מערכת ferrocene שיכול להכיל מחצית קולט (ביוטין), קריאה אלקטרוכימיים (ferrocene), ומרכיב משתק-מקשר (ציסטאין) יש נבנה ומפורט במסמך זה. הסינתזה של ביו-המצומד זה נדונה, כמו גם ראיות לקיבוע על משטח זהב. represen עבודה זוts המצגת הראשונה של מערכת המורכבת של ביוטין, ferrocene וחומצת אמינו לקיבוע על משטח זהב.

<table><tbody><tr><td>ביוטין Novatag שרף</td><td>NovaBiochem</td><td>8550510001</td><td></td></tr><tr><td>TORVIQ 10 מ"ל Luer Lock מזרק מטוגן</td><td>פישר</td><td>NC9299151</td><td></td></tr><tr><td>פיפרידין Acros</td><td></td><td>P/3520/PB05</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת נינהידרין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60017-1ea</td><td></td></tr><tr><td>1'-Fmoc-amino-ferrocene-1-carboxylic acid</td><td>Omm הזמנה</td><td>מיוחדת מדעית</td><td></td></tr><tr><td>N,N&prime; -Diisopropylcarbodiimide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D125407-5G</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys(Trt)-OH</td><td>Novabiochem</td><td>8520080025</td><td></td></tr><tr><td>חומצה טריפלואורואצטית</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5408</td><td></td></tr><tr><td>1,2-ethanedithiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2930</td><td></td></tr><tr><td>triisopropyl silane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>צינורות אפנדורף (20 מ"ל)</td><td>כל מקור</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>כל מקור</td><td></td><td>יבש עם מסננות מולקולריות לפני השימוש ואחסן בבקבוק מדיה 100 מ"ל לשימוש קל</td></tr><tr><td>דיכלורומתאן</td><td>כל מקור</td><td></td><td>יבש עם מסננות מולקולריות לפני השימוש ואחסן בבקבוק מדיה 100 מ"ל לשימוש קל</td></tr><tr><td>דימתילפורממיד</td><td>כל מקור</td><td></td><td>יבש עם מסננות מולקולריות לפני השימוש & יש לאחסן בבקבוק מדיה של 100 מ"ל לשימוש</td></tr><tr><td>קל בצנטריפוגה</td><td>בכל מקור</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מתודולוגיה סינתטית למערכות ביו-המצומד asymmetric ferrocene נגזרו באמצעות מתודולוגיה המבוססת על שרף שלב מוצקה

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

גילוי מוקדם הוא מפתח להצלחת טיפול ברוב המחלות, והכרחי במיוחד לאבחון וטיפול בסוגים רבים של הסרטן. הטכניקות הנפוצות ביותר בשימוש הן הדמיה שיטות כגון הדמיית תהודה מגנטית (MRI), Positron פליטת טופוגרפיה (PET), וממוחשב טופוגרפיה (CT) והם אופטימליים להבנת המבנה הפיזי של המחלה, אך יכולות להתבצע רק פעם אחת בכל ארבעה עד שישה שבועות עקב השימוש של סוכני הדמיה ועלות כוללת. עם זה בחשבון, כמו ההתפתחות של &quot;נקודת הטיפול&quot; טכניקות, כגון חיישנים ביולוגיים, המעריכים את השלב של מחלה ו / או יעילות של טיפול במשרדו של המטפל ולעשות זאת מבעוד מועד, היה לחולל מהפכה פרוטוקולי טיפול. 1 אמצעי לחקר biosensors ferrocene מבוסס על זיהוי של מולקולות ביולוגיות רלוונטיות 2, שיטות פותחו כדי לייצר ביו-conjugates ferrocene ביוטין המתואר כאן. דו&quot;ח זה יתמקד במערכת ביוטין-ferrocene-ציסטאין שיכול להיות משותקת על משטח זהב.

הטופס מחויב השרף של 1 מוצג באיור 2. הקובץ המצורף קוולנטיים של רכיב ferrocene מוליד גוון כתום לחרוזי השרף שהוא עקשן עם שטיפה רציפה ומעיד על ברזל משותק מכיל מורכב בניגוד לספיגת ברזל על ידי מרכיב PEG של גרגרי השרף. הטופס ללא שרף של 1 הוא זהה בצבע לחרוזי השרף. לאחר פינוי המתחם מהשרף-חרוזים, את הטוהר והתשואה (68%) כתוצאה מהשיטות הוא עדיף בהרבה על המתודולוגיה פתרון טיפוסית. ניתוח יסודות של המוצר הראה כי 1 היה מבודד כמו ...

הסינתזה של מינים אסימטריים של פרוקן מאתגרת באמצעות טכניקות תמיסה. דוח זה מתמקד בשיטות שבוצעו לייצור ביו-מצומד פרוקן-ביוטין באמצעות תגובות קלות ונקיות המושגות באמצעות סינתזה בשלב מוצק. שילוב של חלק תיולט הוכח כמקנה את היכולת לקיבוע על משטחי זהב.

מתודולוגיה סינתטית למערכות ביו-המצומד Asymmetric Ferrocene נגזרו באמצעות מתודולוגיה המבוססת על שרף שלב מוצקה

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא להפיק קונג'וגטים ביולוגיים אסימטריים של ferne ו-biotin שניתן להצמיד למשטח זהב. דבר זה מושג על ידי סינתזה של הקונג'וגט הביולוגי ferne-biotin על שרף פאזה מוצקה. כשלב שני, הקונג'וגט הביולוגי מוסר מהשרף, מה שמאפשר בידוד ואפיון של התרכובת.בשלב הבא, התוצר הביו-קונוג'וגטי (bio conjugate) מדגריר עם משטח זהב כדי לאפשר היצמדות של התיולטים אל הזהב. התוצאות מראות כי ניתן להפיק ביו-קונוג'וגט של ferne ביבול ובטוהרה גבוהים, ולאחר מכן לקבע אותו על משטח זהב. היתרון המרכזי בשימוש בטכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון שיטות המבוססות על תמיסה, הוא שהטיהור פשוט וישיר.בנוסף למניעת תוצרי לוואי הנוצרים בשיטות המבוססות על תמיסות, עלה הרעיון לשיטה זו כאשר חשבנו על היעילות והפרקטיות של חיישני גלוקוז המשמשים לניטור חולי סוכרת. את ההליך ידגימו שון רודיץ' מהמעבדה שלי ופאולינה גונזאלס, סטודנטית לתואר ראשון ולתואר מתקדם בה odpowiedית מהמעבדה שלי. ראשית, העבירו 250 milligrams של שרף טעון בביוטין לתוך מזרק עם פילטר.נפחו את השרף על ידי שאיבה של 5 mL של dimethylformamide וניעור של המזרק בשייקר מעבדה למשך 20 דקות. עם הסיום, רוקנו את התמיסה וחזרו על תהליך הנפיחה ב-dimethylformamide. לאחר מכן, הסירו את קבוצת ההגנה FOC על ידי הוספת 4 עד 6 mL של 20% papine ב-dimethylformamide למזרק, ולאחר מכן ניעור למשך 10 עד 15 דקות. לאחר חזרה על תהליך הסרת ההגנה, שטפו את השרף שלוש פעמים ברצף של dimethylformamide, תערובת של dimethylformamide ומנול ביחס של 1:1, תערובת של מתנול ו-dichloromethane ביחס של 1:1, ו-dichloromethane.לאחר ריקון התמיסה, בצעו בדיקת hyn על מדגם קטן של החרוזים כדי לאשר הגנה עמוקה מוצלחת על ידי הופעת צבע כחול בעת חימום. לאחר מכן, ערבבו תמיסה המכילה prime FM amino farin אחד, חומצה קרבוקסילית אחת, HOBT hydrate, DIC di, isopropyl ethyl amine, ותערובת של ארבעה למשך אחד של di chloro methane ו-dimethylformamide. שאבו תמיסה זו למזרק עם מסנן (fritted syringe) ונערו בעדינות על שייקר מעבדה במשך שש שעות.לאחר שטיפת הסורבן, בצע את בדיקת ה-hyran כפי שתואר בעבר כדי לאשר כי התרחב צימוד. לאחר מכן, הסר את קבוצת ה-FM o על ידי הוספת 20%ine בתוך dimethylformamide לסורבן שבמזרק, ולאחר ניעור שטוף באותו אופן כפי שנעשה קודם לכן. הכן תמיסה המורכבת מ-fmm cyst trit till O-H-O-B-T hydrate, DIC di, isopropyl eth lamine, ותערובת של di chloro methane ו-dimethylformamide ביחס של ארבעה לאחד.הוסיפו תערובת צימוד זו של ציסטין למזרק עם המסנן וניערו בעדינות במשך שש שעות. לאחר אישור הצימוד באמצעות מבחן HYN, הסירו את רכיב ה-F MOC באמצעות 20%ine. עם סיום השטיפה, אמתו את האמין הטרימינלי החופשי באמצעות מבחן ההידרנטין.בשלב זה, הכינו תמיסה של חומצה טריכלורואצטית במים, אתנול ואיזופרופנול. לאחר מכן, העבירו את התמיסה למזרק. לאחר ניעור למשך ארבע שעות, אספו את התמיסה החומה-אדומה שנוצרה לשפופרת אפדורף והסִירו את חומצה הטריכלורואצטית באיחוי איטי באמצעות זרימת אוויר.לאחר מכן, הוסיפו למבחנה anor בערך 15 milliliters של diethel ether קר כדי להשקיע את המוצר, אשר ייווצר בעקבות ערבוב עדין. בודדו את המוצר באמצעות סנטריפוגה. לאחר מכן, חזרו על מחזורי שטיפה ב-diethel ether וסנטריפוגה.לקבלת התוצר הביו-קונוג'וגט ferne biotin כמוצק בצבע חום-אדום. יש לאשר את זהותו של הביו-קונוג'וגט ferne biotin באמצעות ספקטרוסקופיית NMR של פרוטון ופחמן ואנליזת E-S-I-M-S. בצע HPLC ואנליזה אלמנטרית כדי לאשר את הרכבו של התרכובת שהבודדה.לאחר שהמוצר אופיין במלואו, חתכו פרוסות זהב בעלות גב פולימרי לריבועים של כ-0.25 אינץ' רבוע. לאחר מכן, מלאו כוס כימית של 50 מיליליטר בתמיסת מים דה-יוניים בריכוז מילימולרי אחד של תבנית הביו-קונג'וגט ferne biotin. הוסיפו אחת מפרוסות הזהב לכוס כימית וכסו אותה באמצעות זכוכית שעון.השאירו את השקופית להדגירה למשך לילה בטמפרטורת החדר ללא ערבוב. לאחר ההדגירה, הוציאו את שקופית הזהב מהתמיסה ושטפו במים דה-יוניים. לאחר שהשקופית התייבשה, השכילו תמונות במיקרוסקופ אלקטרוני סורק באמצעות מיקרוסקופ אלקטרוני סורק כדי לצפות בביו-קונג'וגט של ferne biotin שהקובע.כאן מוצגת הצורה הקשורה לשרף של התוצר הביו-צמוד ferne biotin bio conjugate one. ההצמדה הקוולנטית של רכיב ה-ferne מעניקה לחרוזי השרף גוון כתום, המעיד על קומפלקס מכיל ברזל שמוגבל (immobilized), בניגוד לספיגת ברזל על ידי רכיב ה-PEG של חרוזי השרף. לאחר הסרת התרכובת מחרוזי השרף, הטוהר והתנובה המתקבלים עולים בהרבה על אלו המתקבלים במתודולוגיית תמיסה טיפוסית.לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע פרוצדורה זו בתוך שלושה ימים אם היא מבוצעת כראוי. זכרו כי עבודה עם chlor acidic acid ו-F ו-diet עלולה להיות מסוכנת ביותר; יש לנקוט תמיד באמצעי זהירות כגון שימוש בציוד מגן אישי וביצוע הפרוצדורה בתוך מCהוואת מעבדה בעת ביצוע שלב זה.

synthetic-methodology-for-asymmetric-ferrocene-derived-bio-conjugate

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

סינתזה יעילה מוצק בשלב פפטיד של trimer BIS-peptide פונקציונליות ניצול "בטיחות לתפוס" הליך מחשוף שרף HMBA מתואר.

סינתזה שלב מוצק של פפטיד Bis פונקציונליות שימוש &quot;בטיחות תפוס&quot; מתודולוגיה

פרוטוקול זה מפרט את הצעדים החשובים הנדרשים bioconjugation של ציסטאין המכיל חלבון על maleimide, כוללים טיהור מגיבה, תנאי תגובה, טיהור bioconjugate ואפיון bioconjugate.

סינתזה של חלבון Bioconjugates<em&gt; דרך</em&gt; כימיה ציסטאין-maleimide

מוצגת שיטה כללית פוטנציאלית לסינתזה של מערכים פפטידיים רב-מתכתיים מסיסים במים המכילים רצף קבוע מראש של מרכזי מתכת.

סינתזה של מערך מורכב מתכת-אורגנית נמס במים

אנו מציגים את פרוטוקול לבנייה של thioether/ויניל קשורה סולפיד פפטידים הסליל באמצעות צילום-induced תיול-ene/תיול-yne hydrothiolation.

בניית Thioether/ויניל גופרתי-קשורה Hydrothiolation תיול-ene/yne הנוצרות על-ידי פפטידים הסליל באמצעות צילום

כאן אנו מציגים פרוטוקול להפגין שיטה יעילה לסינתזה של spirocyclic heterocycles. תהליך חמישה צעדים מנצל מוצק-שלב הסינתזה והתחדשות מייקל מקשר אסטרטגיות. בדרך כלל קשה לסנתז, נציג שיטת הסינתזה של מולקולות spirocyclic אחרת נגיש גישות מודרניות אחרות הניתנות להתאמה אישית.

מוצק-שלב הסינתזה של Oximes Spirocyclic [4.4]

ב פרוטוקול זה, נתאר את הסינתזה של התרמילים, phenyoxadiazolyl מתיל מבוססי sulfone ריאגנט של הקובץ המצורף באתר סלקטיבית של מטענים תיולים של מולקולות, במיוחד נוגדנים. בנוסף, נתאר את סינתזה ואפיון של chelator bifunctional של תרמילי מניבי, ההטיה שלה נוגדן מודל.

סינתזה, Bioconjugation של תיול-תגובתי ריאגנטים עבור הקמת האתר באופן סלקטיבי שונה Immunoconjugates

פרוטוקול מוצג לסינתזה של תרופות מקודד מידע ועבור הרכבה עצמית מכוונת של הפטואידים האלה לתוך סולמות מולקולריים באמצעות אמינים ו-aldehydes כזוגות דינמיים בעלי הקשר הדינמי, לואיס חומצי נדיר-אדמה triflates מתכת כריאגנטים רב תפקידים.

סינתזה של מידע-מיסב פטואידים והרכבה עצמית בימוי דינמי

פרוטוקול זה מציג את הסינתזה של פפטידים מחזוריים באמצעות ביסלקילציה בין ציסטאין למתיונין ואת תגובת תיול-ין המופעלת על ידי מרכז פרופרגיל סולפוניום.

בניית פפטידים מחזוריים באמצעות מרכז סולפוניום על קשירה

פרוטוקול זה מתאר את הסינתזה של פפטידים מחזוריים החודרים לתאים עם קישורים צולבים ארומטיים ואת הערכת החדירות שלהם על פני מחסומים ביולוגיים.

בניית פפטידים מחזוריים חודרי תאים לחדירה מוגברת של מחסומים ביולוגיים

מנגנון תא לחץ הגבוה הספיר הוא כלי ייחודי כדי ללמוד, ללא דגימה, שלב התנהגות תחת מגוון רחב של לחצים. שימוש cathetometer, ניתן להקליט מדידות נפח מדויקות מאוד למדידת התרחבות נוזל והרכב שלב. לפיכך, שיטה סינתטית זה מאפשרת הלימוד (1) שיווי משקל שלב של תערובות מרובות רכיבים ו( 2) מחיצת ההתנהגות של תרכובות זרז או מודל כפונקציה של לחץ.

תא ספיר בלחץ גבוהים למדידות שלב שיווי משקל של CO<sub&gt; 2</sub&gt; מערכות אורגניות / / מים

למד סינתזה של ביוקוניוגטים א-סימטריים מבוססי פרוצן-ביוטין בשיטת סינתזה מוצקה. השיטה מאפשרת טיהור פשוט והידוק יעיל על משטחי זהב ליישומי ביוסנסינג.

מתודולוגיה סינתטית למערכות ביו-המצומד Asymmetric Ferrocene נגזרו באמצעות מתודולוגיה המבוססת על שרף שלב מוצקה

גלה סרטונים נוספים