Name: דגם לב מבודד עכברי של Associated מקסימה שריר הלב עם מעצר Cardioplegic (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: למדו הערכת תפקוד לב עכברי לאחר מעצר קרדיופלגי איסכמי באמצעות הפרפוזיה רטרוגרדית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחרי התאוששות שריר הלב ומנגנוני המעיכה הלבבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kloner, R. a, Jennings, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consequences+of+Brief+Ischemia%3A+Stunning%2C+Preconditioning%2C+and+Their+Clinical+Implications%3A+Part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Consequences of Brief Ischemia: Stunning, Preconditioning, and Their Clinical Implications: Part 1.</a> Circulation. 104 (24), 2981-2989 (2001).</li>
<li>Mentzer, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+protection+in+heart+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Myocardial protection in heart surgery.</a> J Cardiovasc Pharmacol Ther. 16 (3-4), 290-297 (2011).</li>
<li>Chambers, D. J., Fallouh, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardioplegia+and+cardiac+surgery%3A+pharmacological+arrest+and+cardioprotection+during+global+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Cardioplegia and cardiac surgery: pharmacological arrest and cardioprotection during global ischemia and reperfusion.</a> Pharmacol Ther. 127 (1), 41-52 (2010).</li>
<li>Bolli, R., Marbán, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+mechanisms+of+myocardial+stunning%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular mechanisms of myocardial stunning.</a> Physiol Rev. 79 (2), 609-634 (1999).</li>
<li>Kloner, R. a, Bolli, R., Marban, E., Reinlib, L., Braunwald, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medical+and+Cellular+Implications+of+Stunning%2C+Hibernation%2C+and+Preconditioning+An+NHLBI+Workshop%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Medical and Cellular Implications of Stunning, Hibernation, and Preconditioning An NHLBI Workshop.</a> Circulation. 97 (18), 1848-1867 (1998).</li>
<li>Mersmann, J., Latsch, K., Habeck, K., Zacharowski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measure+for+measure-determination+of+infarct+size+in+murine+models+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Shock+%28Augusta%2C+Ga%29%22%5BJournal%5D)">Measure for measure-determination of infarct size in murine models of myocardial ischemia and reperfusion: a systematic review.</a> Shock (Augusta, Ga). 35 (5), 449-455 (2011).</li>
<li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+heart+perfusion%3A+the+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion).</a> J Mol Cell Cardiol. 50 (6), 940-950 (2011).</li>
<li>Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szelag, A., Schulz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff---still+viable+in+the+new+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolated heart perfusion according to Langendorff---still viable in the new millennium.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li>
<li>Sutherland, F. J., Shattock, M. J., Baker, K. E., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+isolated+perfused+heart+characteristics+and+cautions%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mouse isolated perfused heart characteristics and cautions.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 30 (11), 867-878 (2003).</li>
<li>Guide for the Care and Use of Laboratory AnimalsSource. , National Research Council. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://grants.nih.gov/grants/olaw/Guide-for-the-care-and-use-of-laboratory-animals.pdf">http://grants.nih.gov/grants/olaw/Guide-for-the-care-and-use-of-laboratory-animals.pdf</a> (2011).</li>
<li>Miller, A., Wright, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+Murine+Ventricular+Balloons+for+the+Langendorff+Heart+Preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biotecnol+Biomater%22%5BJournal%5D)">Fabrication of Murine Ventricular Balloons for the Langendorff Heart Preparation.</a> J Biotecnol Biomater. 1 (101), 1-4 (2011).</li>
<li>Curtis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation%2C+utilisation+and+clinical+relevance+of+isolated+perfused+heart+models+of+ischaemia-induced+ventricular+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Characterisation, utilisation and clinical relevance of isolated perfused heart models of ischaemia-induced ventricular fibrillation.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 194-215 (1998).</li>
<li>Clements, R. T., Feng, J., Cordeiro, B., Bianchi, C., Sellke, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p38+MAPK-dependent+small+HSP27+and+%CE%B1B-crystallin+phosphorylation+in+regulation+of+myocardial+function+following+cardioplegic+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Heart+and+circulatory+physiology%22%5BJournal%5D)">p38 MAPK-dependent small HSP27 and αB-crystallin phosphorylation in regulation of myocardial function following cardioplegic arrest.</a> American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 300 (5), H1669-H1677 (2011).</li>
<li>Clements, R. T., Cordeiro, B., Feng, J., Bianchi, C., Sellke, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rottlerin+increases+cardiac+contractile+performance+and+coronary+perfusion+through+BKCa%2B%2B+channel+activation+after+cold+cardioplegic+arrest+in+isolated+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Rottlerin increases cardiac contractile performance and coronary perfusion through BKCa++ channel activation after cold cardioplegic arrest in isolated hearts.</a> Circulation. 124 (11 Suppl), S55-S61 (2011).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שיטות פרטי פרוטוקול הקודמת להעריך מדהים משנית שריר לב לאיסכמיה הגלובלית הקשורים מעצר cardioplegic. בידיים שלנו פרוטוקול זה מייצר ירידה של 40% בקירוב ~ בתפקוד לב (LVDP, +/- DP / DT) עם שינויים מינימאליים בקצב לב בנקודת הזמן שלאחר reperfusion-30 דק &#39;. כלב reperfused ומחמם מחדש את כל הפרמטרים של תפקוד לב מופחתים בנקודות זמן ראשוניות עם קצב לב מופחת במידה ניכרת לפני הייצוב בין 20 ל 30 דקות. זרימה כלילית היא בדרך כלל גדלה מאוד במהלך reperfusion המוקדם בשל hyperemia, ואז נופלת ל~ 20...

שריר לב מדהים מוגדר כפעילות הפיכה מופחתת התכווצות למרות שיקום של זרימת דם נאותה לאחר תקופה קצרה של איסכמיה או תקופות ממושכות של עלבונות איסכמי עם 1,2,3,4,5 הלבבי. השיטה הוצגה משמשת במיוחד למודל עלבונות איסכמי רלוונטיים קליני אשר יכול לגרום לליקויים הפיכים בתפקוד התכווצות (כלומר, עלבונות איסכמי הקשורים לניתוח לב ניצול מעצר cardioplegic, תקופות קצרות של איסכמיה, תעוקת חזה, וכו &#39;). בניגוד למחקרים חמורים איסכמיה (אוטם שריר לב, נמק) פרוטוקול זה פותח כדי להעריך התאוששות שריר לב פונקציונלית ולבבי ללא פגיעה ברקמות, שיפוץ, ומוות של תאים. רוב הנייר דן פרוטוקול מעצר cardioplegic סטנדרטי עם אלמנטים דומים לניתוח לב באמצעות היפותרמיה ומשלוח cardioplegia לסירוגין. prot שריר לבשיקוף ברוב ניתוחי לב מסתמך על cardioplegia ומעקף לב-ריאה. למרות cardioplegia פתרונות (CP) ואסטרטגיות להשתנות במידה רבה (דם, גְבִישָׁן, וכו &#39;קר, חם) האלמנטים הנפוצים ביותר הם) היפרקלמיה 1 ו / או אסטרטגיות אחרות למעצר הלב בירוויח, וכך להגביל את ניצול אנרגיה כתוצאה מהתכווצות שריר לב, ו -2) היפותרמיה כדי להאט את חילוף החומרים ומסייעות לשמור על ATP ועתודות אנרגיה אחרות בזמן שנעצרה. פתרונות cardioplegia נוכחיים לספק הגנה ללב מפני עלבונות איסכמי שאחרת היה להוכיח קטלני. עם זאת, אסטרטגיות על הלב במהלך עלבונות איסכמי כירורגית אינן מושלמים, ולפציעתם איסכמי קלה כתוצאה עלולה לגרום לבעיות בתפקוד התכווצות לב הפיכה למרות זרימת דם מספקת (שריר לב מדהים), חמצת, נזק cardiomyocyte, והשפעות של כלי דם הכליליים כוללים זלוף המופחת וvasospasm. נבדל פרוטוקול זהממודלי איסכמיה לב מבודדים סטנדרטיים הערכת אוטם שריר לב ואיסכמיה קשה בכך שהוא מעריך עלבונות איסכמי מתונים יותר אשר יכול לגרום לתפקוד לב הלקוי הבא איסכמיה הקצרה או עלבונות איסכמי הקשורים מעצר cardioplegic. (לסקירה על טכניקות זלוף Langendorff ואני / לימודי R לראות 6-8). להנחיות כלליות וניתוח מעמיק של פרמטרים ניסוי קשורים מבודד לב perfused עכבר לראות אל t דואר סאתרלנד. 2,003 9 הטכניקה המוצגת כאן מפרטת את הציוד הדרוש, חומרים כימיים, צעדים, אסטרטגיות וטיפים כדי לגרום באופן מהימן מדהים בלב עכבר. שינויים קלים יש צורך ליישם את הטכנולוגיה על חולדות. בקצרה לבבות עכבר בודד הם Langendorff perfused לכ 30 דקות עם חיץ קרבס-Henseleit פיסיולוגי (KHB), ואחריו דום לב מוגן קר באמצעות משלוח של hypotherm hyperkalemicפתרון cardioplegia IC. בעקבות מעצר, התאוששות תפקודית לב להשגחה במהלך החימום מחדש וreperfusion של הלב עם KHB. שינויים במידת ההתאוששות של תפקוד התכווצות לב ניתן להעריך להעריך סוכנים על הלב ואסטרטגיות לבביות שונות.

<table><tbody><tr><td>תמיסת קרדיופלגיה (סנט תומאס השני)</td><td></td><td></td><td>סמל / ריכוזים (mM)</td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td></td><td></td><td>NaCl; 110</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td></td><td></td><td>KCl; 16</td></tr><tr><td>סידן כלוריד</td><td></td><td></td><td>CaCL2; 1.5</td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד</td><td></td><td></td><td>MgCL2; 16</td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td></td><td></td><td>NaHCO3; 10</td></tr><tr>בופר <td></td><td></td><td></td><td>קרבס-היינסלט</td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td></td><td></td><td>NaCl; 118</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td></td><td></td><td>KCl; 4.8</td></tr><tr><td>מגנזיום גופרתי</td><td></td><td></td><td>MgSO4; 1.7</td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td></td><td></td><td>NaHCO3; 24.9</td></tr><tr><td>אשלגן פוספט (חד-בסיסי)</td><td></td><td></td><td>KH2PO4; 1.2</td></tr><tr><td>סידן כלוריד</td><td></td><td></td><td>CaCL2; 1.4</td></tr><tr><td>נתרן פירובט</td><td></td><td></td><td>נא פירובט; 2</td></tr><tr><td>C6H12O6 גלוקוז</td><td></td><td></td><td>; 6</td></tr><tr><td>ריאגנטים</td><td></td><td></td><td></td>לבלון</tr><tr><td>סירופ</td><td></td><td></td><td></td>תירס</tr><tr><td>ספגטי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סיליקון פיזור ג'ל</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>בלוק קלקר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>תנור מעבדה/אינקובטור (50C)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ציוד</td><td></td><td></td><td></td>זלוף לנגנדורף</tr><tr><td>מערכת לב מבודדת (IH-SR (הוגו-זקס) או שווה ערך)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מערכת איסוף נתונים (DSI, ADinstruments או שווה ערך)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סירקולטור</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr>מים מחומם<td>סירקולטור</td><td></td><td></td><td></td>מי קירור</tr><tr><td>משאבת זלוף המסוגלת ל-2-30 מ"ל/דקה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מסנני זלוף מוטבעים - 1 אום סיבי</td><td></td><td></td><td></td>זכוכית</tr><tr><td>חיישני לחץ ומגברים ל-LVP ולחץ</td><td></td><td></td><td></td>זלוף</tr><tr><td>צילינדר מדורג קטן (~10 מ"ל)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>בדיקה ומדחום טמפרטורה קטנים (ורנר או שווה ערך)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>מאגר זלוף (1L)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>מאגר קרדיופלגיה (~200 מ"ל)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>מבעבע</td><td></td><td></td><td></td>גז</tr><tr><td>95/5 O2 / CO2 mix</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלים כירורגיים וריאגנטים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td></td><td></td><td></td> כירורגיים של מצנבאום ופוטץ</tr><tr><td>שני מלקחיים</td><td></td><td></td><td></td>בגודל 5</tr><tr><td>קטמין</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>הפרין</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מהדק קטן עם דפנות רכות להחזקת אבי העורקים (כלומר מהדק מסוף עם קצוות מודבקים)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>תפרים</td><td></td><td></td><td></td> 2-0 ו-4-0</tr></tbody></table>

דגם לב מבודד עכברי של associated מקסימה שריר הלב עם מעצר cardioplegic

Murine Isolated Heart Model of Myocardial Stunning Associated with Cardioplegic Arrest

הפרוטוקול הבא הוא שימוש להעריך תפקוד לב לקוי או עלבונות איסכמי מתונים הבאים מדהים שריר לב. הטכניקה שימושית לדוגמנות פגיעת איסכמית קשורה עם תופעה רלוונטית קליני רב, כולל ניתוחי לב עם מעצר cardioplegic ומעקף לב-ריאה, CABG מחוץ למשאבה, השתלה, תעוקת חזה, איסכמיה קצרה, וכו &#39;. הפרוטוקול מציג שיטה כללית למודל מעצר היפותרמיה hyperkalemic cardioplegic וreperfusion בלב מכרסמים המתמקדים במדידה של תפקוד שריר לב התכווצות. בקיצור, לב עכבר perfused במצב Langendorff, instrumented עם בלון תוך חדרי, ופרמטרים תפקודיים לב בתחילת המחקר נרשמים. בעקבות ייצוב, הלב הוא אז נושא לתדרך עירוי של פתרון cardioplegia היפותרמיה על הלב ליזום מעצר הדיאסטולי. Cardioplegia מועבר לסירוגין מעל 2 שעות. הלב אז reperfused וwarmeד לטמפרטורות והתאוששות של תפקוד שריר לב normothermic מנוטר. שימוש בתוצאות פרוטוקול זה בפונקצית התכווצות אמינה מדוכאת לב ללא נזק לרקמות שריר לב ברוטו במכרסמים.

איור 1 מציג תוצאות טיפוסיות מניסוי עכבר אחד. LVP (קו אדום), DP / DT (קו ירוק), וטמפרטורה (קו סגול) נרשמו continusouly על ~ 3 שעות. מכתבים מצביעים - מדידת בסיס, B, C, D, E - משלוח של פתרון cardioplegia, ו - תחילת reperfusion, G, H, I, J - מדידה של זרימת cornary במהלך reperfusion. הערה, LVDP המדוכא וDP / DT על reperfusion לעומת תחילת המחקר. איור 1 כולל את הנתונים מ~ 2 שניות נרשמו מעל. שים לב, הירידה בLVP וDP / DT דומה ל, ירידות קלות בעליות HR וקלים ...

מטרת פרוטוקול זה להעריך הלם שריר הלב בעקבות דום לב איסכמי במכרסמים.

דגם לב מבודד עכברי של Associated מקסימה שריר הלב עם מעצר Cardioplegic

The following protocol is of use to evaluate impaired cardiac function or myocardial stunning following moderate ischemic insults. The technique is useful ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא להעריך את ההלמת השריר הלבבי (myocardial stunning) המתרחשת בעקבות עצירה קרדיופלגית איסכמית במכרסמים. זאת מושג תחילה על ידי ביצוע פרפוזיה רטרוגרדית ללב שהוצא מעכבר בוגר. בשלב השני, מוחדר בלון לחדר השמאלי של הלב ונרשמות מדידות הבקרה של קו הבסיס.לאחר מכן יושעה עצירה קרדיופלגית היפותרמית למשך התקופה הניסיונית המתאימה, ולאחריה תקופה של רפרפוזיה. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בטכניקה זו כדי לנטר את השינויים המתרחשים במהלך ההתאוששות של תפקוד המיוקרד לאחר פגיעה איסכמית. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי הלם שריר הלב (myocardial stunning) הקשור לפגיעות איסכמיות קלות בעכבר, ניתן להחילה אותה גם על יונקים אחרים, כגון חולדות, ועל שני מודלים של פגיעה חמורה מרפרפוזיה איסכמית.בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקשו בביצועה, כיוון שקניולציה מהירה של הלב, הדרושה להכנה יציבה וניתנת לשחזור, עלולה להיות מאתגרת. כדי להוציא את הלב, מבצעים תורקוטומיה. השלב הראשון הוא חיתוך חור קטן ממש מתחת לעצם החזה (sternum), תוך הרחבת החתך לצדדי העכבר.לאחר מכן, גזרו במהירות את הסרעפת ובמהירות לאורך דפנות בית החזה. פתחו את בית החזה לאחור, בדומה לצדף, כדי לחשוף את חלל בית החזה. לאחר מכן, אחזו בעדינות בלב, הניחו את המספריים מתחתיו והוציאו את האיבר.הניחו את הלב בתוך צלחית עם תמיסת Crebs-Henzle light buffer קרה במי קרח, או KHB, וגזרו חתיכות גדולות של רקמת ריאה. לאחר מכן, לחצו בעדינות על הלב. כל דם שיופיע יצביע על הקצה הפתוח של האביונה (aorta).לפני חיבור הלב, הפעילו את המשאבה ואשרו שלחץ הפרפוזיה הוא כ-20 millimeters of mercury. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה עדינה כדי להרים את הלב מקצה האורטה הפתוח, והשתמשו בסט נוסף של פינצטה עדינה כדי להחליק את הלב למעלה אל קנולת מערכת הפרפוזיה, תוך כדי החזקת הלב במקומו. השתמשו בתפסים בעלי קצוות רכים כדי לקבע באופן זמני את האורטה לקנולה.לאחר מכן, השתמשו בתפר משי במידה 4-0 כדי לקבע את האורטה לקנולה, ישירות מתחת לתסמין. יש להקפיד להניח את הקשירה גם סביב הקנולה, כדי למנוע חסימה של האורטה בעת הידוק הקשר. ברגע שהקשירה מיוצבת בבקיאות, הסירו את התסמין והשתמשו בתפרי משי נוספים כדי לקבע את האורטה לקנולה בצורה מאובטחת.קשרו את התפרים מתחת לכל פיסולי כלי דם היוצאים מהאאורטה שדרכם דולף או מזנב נוזל perfuse eight. בשלבים הראשוניים של הפרופוזיה, הדם אמור להישטף מהלב וכל האיבר צריך להפוך לצבע ורוד רך. לאחר שהקנולה הוחדקה, הגבירו באיטיות את לחץ הפרופוזיה ואת מהירות המשאבה עד שלחץ הפרופוזיה יגיע ל-70 millimeters of mercury. הסירו כל שארית רקמה שעדיין צמודה ללב.לאחר מכן, חתכו את העליות השמאליות כדי ליצור פתח בחדר השמאלי. כעת, הניחו בלון על המחזיק ורוקנו ממנו את האוויר. לאחר מכן, מקמו את קנולת הבלון ליד קנולת האורטה, ישירות מעל הפתח לחדר השמאלי, והחדירו בזהירות את הבלון כלפי מטה אל תוך החדר השמאלי תוך כדי החזקת הלב במקומו כדי למנוע קרע באורטה.ברגע שהבלון במקומו, התחילו לנפח אותו באיטיות עד שהלחץ הדיאסטולי הסופי של החדר השמאלי מגיע לכ-8 mmHg. לאחר מכן, מקמו חיישן טמפרטורה בתחתית הלב, כדי למדוד את טמפרטורת השאיפה (effluent). כדי לבצע את המדידה הבסיסית, אטמו את הלב בתא פרפוזיה בעטיפת מים המוגדר ל-37 °C עם פרפוזיה רציפה של KHB.לאחר מכן, התחילו בהקלטה רציפה של המדידות התפקודיות הרלוונטיות באמצעות מערכת רכישת הנתונים המתאימה. ברגע שהשאיפה (effluent) מגיעה לכ-37 °C למשך 15 דקות לפחות, והפרמטרים התפקודיים של הלב יציבים, רשמו את זמן מדידות הבסיס. לאחר מכן, מדדו את זרימת הדם הכלילית באמצעות איסוף השאיפה הכלילית ושימוש במבחנה מדורגת.לאחר דקה אחת, סגרו את התא והמתינו עד שהטמפרטורה והתפקוד יחזרו לערכי הבסיס. כדי להתחיל את העצירה כעת, הוסיפו 100 milliliters של קרדיופלג קר או בופר CP למכל שני, והעבירו את קנולת מכל ה-KHB למכל ה-CP. באמצעות מחברי צינוריות מהירים, העבירו את בית המארז עם מעטפת המים ואת מעגל החממת הפרפוזיה מאמבט המים החמים למסרק הקירור, ועקבו אחר בועת האוויר שנכנסה לצינוריות הפרפוזיה במהלך ההחלפה.ברגע שהנוזל נכנס למלכודת הבועות סמוך ללב המבודד, התחיל את תזמון הקרדיופלגיה והזרם את התמיכה למשך שתי דקות. עם הגעת ה-CP והתקררות הלב, תפחת תפקוד הלב והוא יעצור בשלב הדיאסטולה לאחר המנה הראשונית. הפסק את פעולת המשאבה והשאר את הלב בתמיסת ה-CP למשך שעתיים בטמפרטורה של כ-20 °C, תוך הפעלת המשאבה מדי חצי שעה למשך דקה אחת. בסיום תקופת ה-CPE, העבר את קנולת המאגר בחזרה ל-KHB מחומצן וחבר את מעגלי בקרת הטמפרטורה למחזור החימום.לאחר מכן, הפעילו את המשאבה כדי להתחיל reperfusion למשך 30 דקות לשטיפת ה-CP buffer. לאחר שתי עד ארבע דקות, הטמפרטורה תעלה והלב יתחיל להכות באיטיות ובקצב קבוע; אספו את הנוזל המופרש לכלי מדידה מדורג למשך 30 עד 60 שניות בכל פעם כדי לקבל מדידות מדויקות של זרימת הדם המסביבה (coronary flow). כאן מוצגות תוצאות טיפוסיות מניסוי בעכבר אחד: הלחץ בחדר השמאלי (left ventricular pressure), הנגזרת הראשונה החיובית והשלילית של הלחץ בחדר השמאלי (LVP) והטמפרטורה נרשמו ברציפות לאורך כשלוש שעות, כפי שהודגם זה עתה. עם תחילת ה-reperfusion, נצפו LVP מופחת וכן נגזרת ראשונה חיובית ושלילית מופחתת של ה-LVP בהשוואה לבסליין.מוצגים לחץ הפרפוזיה LVP והנגזרת הראשונה החיובית והשלילית של נתוני ה-LVP מהאיור הקודם, שהוקלטו במשך שתי שניות לפני ואחרי עצירה איסכמית של CP. ניתן לראות כיצד נצפים שינויים ב-LVP ובנגזרת הראשונה החיובית והשלילית של נתוני ה-LVP לאחר השראת קרדיופלגיה; לאחר 30 דקות של רפרופוזיה, נצפית בדרך כלל ירידה של כ-30 עד 40% בתפקוד הלב, כפי שעולה מנתוני הלחץ המפותח של החדר השמאלי (left ventricular developed pressure) המעוקבים בגרף האחרון זה. ברגע שהתהליך נשלט, ניתן להוציא את הלב ולהרכיבו על מכשיר הפרפוזיה תוך כשתי דקות, אם הפעולה מבוצעת כראוי.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה של אופן ההסרה והביצוע של פרפוזיה ללב עכבר, והשלבים הבאים של עצירה קרדיופלקטית היפותרמית וreperfusion.

murine-isolated-heart-model-myocardial-stunning-associated-with

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מודל רב עוצמה עבור perioperative וביקורתית טיפול הקשור לפגיעה כליות חריפה מוצגת. שימוש hypoperfusion כל הגוף הנגרמת על ידי דום לב אפשר כמעט לשחזר את השינויים היסטולוגית ופונקציונלי של AKI קליניים.

דום לב Normothermic ו החייאה: במודל עכבר של פגיעה איסכמיה reperfusion

טראומה ניתוחית גורם לתגובה דלקתית. ציטוקינים ligands אנדוגניים ידועים לווסת את גודל האוטם בשריר הלב בעקבות איסכמיה ו reperfusion. אנו מציגים שונה סגור החזה מודל של איסכמיה reperfusion Murine באמצעות משקולות תלויות כדי למזער את ההשפעות של פתיחת בית החזה.

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

ניתן להשתמש במודלים מבודדים של לב עובד כדי למדוד את ההשפעה של תנאי העמסה, קצב לב ותרופות על ביצועי שריר הלב וצריכת החמצן. אנו מתארים שיטות להכנת מודל עבודה של לב שמאל של מכרסמים המאפשר מחקר של ביצועים סיסטוליים ודיאסטוליים וצריכת חמצן בתנאים שונים.

מכרסם עבודת לב דגם לחקר ביצועי שריר לב ואת צריכת חמצן

במהלך ניתוח איסכמיה/רפרפוזיה של שריר הלב בעכברים, מיקום נכון של הקשירה החוסמת מאושר בדרך כלל על ידי תצפית גלויה של חיוורון שריר הלב. כאן, שיטה לאישור אלקטרוקרדיוגרפי של איסכמיה ורפרפוזיה, להשלמת חיוורון שריר הלב שנצפה, מודגמת בעכברי C57Bl/6 זכרים.

אישור של שריר לב איסכמיה ופציעת reperfusion בעכברים באמצעות אלקטרוקרדיוגרפיה Pad Surface

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

מאמר זה מדגים מודל ללמוד שיפוץ לב לאחר שריר הלב קריופגיעה בעכברים.

מודל לפציעה בהקפאה לחקור אוטם שריר הלב בעכבר

פרוטוקול זה מתווה את השלבים לגרימת אוטם שריר הלב בעכברים תוך שמירה על קרום הלב ותכולתו.

מודל מכרסם איסכמי שלם של קרום הלב

מוצג כאן הליך כירורגי לקשירה קבועה של העורק הכלילי השמאלי בעכברים. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה ואת התגובה הדלקתית הקשורים לאחר אוטם שריר הלב.

קשירת עורקים כליליים שמאליים: מודל מורין כירורגי של אוטם שריר הלב

פרוטוקול זה מדגים מודל עכברי ייחודי של דום לב מחנק שאינו דורש דחיסת חזה לצורך החייאה. מודל זה שימושי לניטור והדמיה של הדינמיקה של הפיזיולוגיה של המוח במהלך דום לב והחייאה.

מודל דום לב עכברי להדמיית מוח וניטור פיזיולוגיה מוחית במהלך איסכמיה והחייאה

שיטה מדויקת ומעשית כדי למדוד פרמטרים כמו זן ברקמת שריר הלב הוא בעל ערך קליני רב, שכן הוכח, כי הלחץ הוא סמן רגיש יותר מוקדם עבור תפקוד כויץ מאשר שימוש תכוף פרמטר EF.

תהודה מגנטית נגזר מסננים הערכה שריר הלב באמצעות מעקב אחר תכונות

למדו הערכת תפקוד לב עכברי לאחר מעצר קרדיופלגי איסכמי באמצעות הפרפוזיה רטרוגרדית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחרי התאוששות שריר הלב ומנגנוני המעיכה הלבבית.

דגם לב מבודד עכברי של Associated מקסימה שריר הלב עם מעצר Cardioplegic

גלה סרטונים נוספים