Name: מדידות דיוק אבץ איזוטופי גבוהות יישומים לאיברי עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: למד מדידת יחסי איזוטופי אבץ בדיוק גבוה באיברי עכבר. השיטה כוללת מסיסת איברים, טיהור כרומטוגרפי וספקטרומטריית מסה לניתוח הרכב איזוטופי. זה מסייע לחוקרים להבין מנגנוני תחבורת אבץ ולאבחן מחלות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

FM מכיר מימון מANR דרך אקסלנס IDEX סורבון בפריז Cité chaire d&#39;, INSU באמצעות מענק PNP, Institut Universitaire de France, כמו גם את תכנית Labex UniverEarth בסורבון בפריז סיטה (ANR-10-LABX-0023 וANR -11-IDEX-0005-02). אנו מודים גם מימון ממועצת המחקר האירופי במסגרת תכנית מסגרת H2020 הסכם מענק # של הקהילה האירופית / ERC 637,503 (הטהורה).

הערה: נהלים כרוכים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) באוניברסיטה של ​​פאריס דידרו. 1. הכנת חומרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תת-רתיחה לזקק 1 ליטר של החומצות (3 HNO, HBr) כדי לטהר אותם מטומאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את הכוסות ומתאם קצה ב( ~ 100 מעלות צלזיוס) חמה מרוכז HNO 3 אמבטיה חומצה לפחות יומיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את הטיפים פיפטה בN 3 HNO אמבטיה 3 קרה במשך כמה ימים ולשטוף בנפרד שלוש פעמים במי דה מיונן. </li></ol> הכנת 2. דוגמא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים בזריקת intraperitoneal של קטמין ו xylazine. להעריך הרדמה בשיטת צביטת הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הדם על ידי לנקב לב בנוכחות של הפרין בצינורות 1.5 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את הפלזמה מתאי דם על ידי צנטריפוגה (10 דקות, 1500 XG) ולהעביר את הפלזמה לפוליפרופילן גבקבוקוני ryogenic באמצעות טיפים פוליפרופילן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הדם שנותר מאיברים על ידי חיתוך ורידי הכבד והזרקת DPBS דרך הלב. להעריך מותו של העכבר על ידי נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקצור את האיברים עם מכשירי נירוסטה סטרילי, לשחרר אותם מסביב שומן אם בכלל, וצמד-להקפיא אותם בצלוחיות קריוגני פוליפרופילן. </li></ol> 3. כימי טיהור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, לפזר את הדגימות בתערובת של ~ 1 מיליליטר של (30%) מרוכזים H 2 O 2 ו~ 1 מיליליטר של HNO המרוכז (~ 15 M) 3. האם כל הצעדים הללו בתוך מנדף. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את כל האיבר של עניין לתוך כוס טפלון 15 מיליליטר. לאחר מכן, להוסיף H 2 O 2 / HNO 3 לכוס 5. שמור את הכוס פתוחה לכמה דקות על מנת למנוע כתמים בשל תגובת חמצון של החומר האורגני והשחרור של CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, לשים את הכוס על צלחת חמה בABOC ° 100 ut לכמה שעות או עד הפתרון הוא ברור לחלוטין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הכוס ולייבש את הפתרון על צלחת חמה בכ -100 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר המדגם הוא יבש, להוסיף 1 מיליליטר של 1.5 N HBr לדגימות; לסגור את הכוס ולתת לו לפזר על צלחת חמה ב 100 מעלות צלזיוס במשך כמה שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בינתיים מכין את 500 העמודים μl. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 500 μl של שרף רשת AG1X8 200-400 לעמודה ולשים אותו על מדף הטור עם כוס אשפה מתחתיו. לשטוף את השרף על ידי לסירוגין: 5 מיליליטר של 18.2 MΩ ⋅ מים סנטימטר, 5 מיליליטר של 0.5 N HNO 3, 5 מיליליטר של מים, 5 מיליליטר של 0.5 N HNO 3, ולאחר מכן 5 מיליליטר של מים. להתנות את השרף עם 5 מיליליטר של 1.5 N HBr. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכוסות מהצלחת החמה ולשים אותם באמבטיה קולית לכ -30 דקות, ולאחר מכן לתת לכוסות להתקרר RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהכוס היא מקוררת והשרף הוא שטף, לפתוח את הכוס. שים את מתאם הקצה לtהוא המזרק, להוסיף טיפ פיפטה; פיפטה 1 מיליליטר של מדגם ולטעון אותו על השרף (מאוד לאט כדי לא להתסיס את השרף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שכל הנוזל עובר דרך הטור, להוסיף 5 מיליליטר של 1.5 N HBr. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע 5 מיליליטר של 1.5 N HBr לעבור הטור, להחליף את כוס האשפה עם כוס 15 מיליליטר נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מיליליטר של 0.5 N HNO 3 2.5 מיליליטר בכל פעם. בשלב זה Zn הוא eluted מהשרף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע 5 מיליליטר של HNO 3 עובר דרך הטור, להסיר את הכוס ומניח אותו על צלחת חמה ב 100 מעלות צלזיוס עד יבשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את העמודה מבעל הטור; האשפה השרף (להשתמש שרף חדש עבור כל דגימה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר המדגם הוא יבש, לחזור על הפרוטוקול עם אותו הנפח של חומצות על עמודה קטנה יותר (100 μl) ולאחר מכן הנח אותו על צלחת חמה עד יבשה. המדגם מוכן כעת לספקטרומטר מסה. </li></ol> 4. ספקטרומטר מסת מדידה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח compo איזוטופים Znsition בספקטרומטר פלזמה המונית בשילוב אספן-אינדוקטיבי רב (MC-ICP-MS). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בפרמטרי המכונה מסוכמים בטבלה 1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את כוסות פאראדיי לאסוף במסה (m / z) של 62 Ni, 63 Cu, Zn 64, 65 Cu, Zn 66, 67 ו -68 Zn Zn. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תמיסה המכילה Zn 500 ppb 0.1 M HNO 3 לניתוח איזוטופי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתח את פתרון 500 ppb של Zn באמצעות תא תרסיס בשילוב עם 100 μl / nebulizer טפלון דק &#39;. עבור כל דגימה, למדוד 30 סריקות (בלוק 1 של 30 מחזורים) שבזמן האינטגרציה של כל סריקה הוא 8.389 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את הרקע על ידי הפחתת עוצמות אפס על-שיא מפתרון ריק (M HNO הפתרון 3 0.1 שימוש מחדש לפזר את הדגימות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקרה והתערבות נכונה 64 אפשריים Ni isobaric על ידי מדידת עוצמת שיא ניקל 62.תניח ש/ 62 יחס ניקל 64 Ni הוא טבעי (.2548), נכונים ערך זה מההטיה ההמונית אינסטרומנטלי, ולאחר מכן להסיר 64 Ni במסה 64 כ: 64 = 64 Zn Zn האמיתי נמדד - 64 Ni = 64 Zn נמדד - (64 ניקל / 62 Ni) הטבעי x 62 נמדד ניקל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתקן את ההטיה ההמונית אינסטרומנטלי ידי bracketing כל אחת מהדגימות עם פתרון 500 ppb סטנדרטי של תקן JMC ליון Zn (או אחר סטנדרטית זמין כגון IRMM-3702). בצע מדורגת הסטנדרטי על ידי חלוקת יחס Zn 66 Zn / 64 של המדגם בממוצע של יחס Zn 66 Zn / 64 של שני הסטנדרטים נמדדו לפני ואחרי מדגם מינוס 1 ומוכפלים 1000 (ראה משוואה 1). דיוק חיצוני אופייני על תקן JMC ליון Zn הוא 0.05 permil / האמו (2 סטיית תקן, 2 SD). </li></ol>

<ol><li>Marechal, C. N., Telouk, P., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+analysis+of+copper+and+zinc+isotopic+compositions+by+plasma-source+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Precise analysis of copper and zinc isotopic compositions by plasma-source mass spectrometry.</a> Chemical Geology. 156 (1), 251-273 (1999).</li>
<li>Marechal, C. N., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-exchange+fractionation+of+copper+and+zinc+isotopes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Ion-exchange fractionation of copper and zinc isotopes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 66 (9), 1499-1509 (2001).</li>
<li>Weiss, D. J., Mason, T. F. D., Zhao, F. J., Kirk, G. J. D., Coles, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+discrimination+of+zinc+in+higher+plants%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytologist%22%5BJournal%5D)">Isotopic discrimination of zinc in higher plants.</a> New Phytologist. 165 (3), 703-710 (2005).</li>
<li>Jouvin, D., Louvat, P., N, M. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotopic+fractionation%3A+why+organic+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Zinc isotopic fractionation: why organic matters.</a> Environ Sci Technol. 43 (15), 5747-5754 (2009).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+and+transport+mechanisms+of+Zn+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation and transport mechanisms of Zn in plants.</a> Chemical Geology. 267 (3-4), 125-130 (2009).</li>
<li>Moynier, F., Herzog, G., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+composition+of+zinc%2C+copper%2C+and+iron+in+lunar+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Isotopic composition of zinc, copper, and iron in lunar samples.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 70 (24), 6103-6117 (2006).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+of+zinc+in+tektites%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation of zinc in tektites.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 277 (3-4), 482-489 (2009).</li>
<li>Chen, H., Savage, P., Teng, F. Z., Helz, R., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+fractionation+during+magmatic+differentiation+and+the+isotopic+composition+of+the+bulk+Earth%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope fractionation during magmatic differentiation and the isotopic composition of the bulk Earth.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 369-370, 34-42 (2013).</li>
<li>Moeller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calibration+of+the+new+certified+materials+ERM-AE633+and+ERM-AE6447+for+copper+and+IRMM+3702+for+zinc+isotope+amount+ratio+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Geostd.+Geoan.+Res%22%5BJournal%5D)">Calibration of the new certified materials ERM-AE633 and ERM-AE6447 for copper and IRMM 3702 for zinc isotope amount ratio determination.</a> Geostd. Geoan. Res. 36 (2), 177-199 (2012).</li>
<li>Bigeleisen, J., Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+equilibrium+constants+for+isotopic+exchange+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Calculation of equilibrium constants for isotopic exchange reactions.</a> J. Chem. Phys. 15, 261-267 (1947).</li>
<li>Luck, J. M., Ben Othman, D., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+and+Cu+isotopic+variations+in+chondrites+and+iron+meteorites%3A+Early+solar+nebula+reservoirs+and+parent-body+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Zn and Cu isotopic variations in chondrites and iron meteorites: Early solar nebula reservoirs and parent-body processes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 69 (22), 5351-5363 (2005).</li>
<li>Moynier, F., Dauphas, N., Podosek, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Search+for+70Zn+Anomalies+in+Meteorites%5BTitle%5D)+AND+%22Astrophys.+J%22%5BJournal%5D)">A Search for 70Zn Anomalies in Meteorites.</a> Astrophys. J. 700 (2), L92-L95 (2009).</li>
<li>Paniello, R., Day, J., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+isotope+evidence+for+the+origin+of+the+Moon%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zn isotope evidence for the origin of the Moon.</a> Nature. 490 (7420), 376-380 (2012).</li>
<li>Pichat, S., Douchet, C., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+variations+in+deep-sea+carbonates+from+the+eastern+equatorial+Pacific+over+the+last+175+ka%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+and+Planetary+Science+Letters%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope variations in deep-sea carbonates from the eastern equatorial Pacific over the last 175 ka.</a> Earth and Planetary Science Letters. 210 (1-2), 167-178 (2003).</li>
<li>Moynier, F., Fujii, T., Shaw, A., Le Borgne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+of+natural+Zn+isotopes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous of natural Zn isotopes in mice.</a> Metallomics. 5 (6), 693-699 (2013).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bodily+variability+of+zinc+natural+isotope+abundance+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Com.+Mass.+Spec%22%5BJournal%5D)">Bodily variability of zinc natural isotope abundance in sheep.</a> Rapid Com. Mass. Spec. 24, 605-612 (2010).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+Cu%2C+Fe%2C+and+Zn+isotopic+patterns+in+organs+and+body+fluids+of+mice+and+sheep%2C+with+emphasis+on+cellular+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Contrasting Cu, Fe, and Zn isotopic patterns in organs and body fluids of mice and sheep, with emphasis on cellular fractionation.</a> Metallomics. 5 (11), 1470-1482 (2010).</li>
<li>Urgast, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+ratio+imaging+of+rat+brain+thin+sections+from+stable+isotope+tracer+by+LA-MC-ICP-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope ratio imaging of rat brain thin sections from stable isotope tracer by LA-MC-ICP-MS.</a> Metallomics. 4, 1057-1063 (2012).</li>
<li>Marin-Carbonne, J., Rollion-Bard, C., Luais, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-situ+measurements+of+iron+isotopes+by+SIMS%3A+MC-ICP-MS+intercalibration+and+application+to+a+magnetite+crystal+from+the+Gunflint+chert%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Geol%22%5BJournal%5D)">In-situ measurements of iron isotopes by SIMS: MC-ICP-MS intercalibration and application to a magnetite crystal from the Gunflint chert.</a> Chem. Geol. 285 (1-4), 50-61 (2011).</li>
<li>Fietzke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boron+isotope+ratio+determination+in+carbonates+via+LA-MC-ICP-MS+using+soda-lime+glass+standards+as+reference+material%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Atom.+Spec%22%5BJournal%5D)">Boron isotope ratio determination in carbonates via LA-MC-ICP-MS using soda-lime glass standards as reference material.</a> J. Anal. Atom. Spec. 25, 1953-1957 (2010).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

שחזור של המדידות מוערך באמצעות ניתוחים משוכפלים של אותו הדגימות שבוצעו במהלך פגישות אנליטיות שונות. לדוגמא 6, יש לנו לשכפל את אותו הסלע יבשתי 7 פעמים והשגנו את התוצאות שדווחו בטבלה 2. כצפוי מהתאוריה של חלוקה איזוטופים 10 וכפי שנמדד בכל חומר מערכת שמש כל כך הרבה (למשל, מטאוריט 11-13, צמחים 3-5, משקעים עמוק-ים 14, בעלי החיים 15-17...

המדידה של דיוק גבוה הרכב איזוטופ היציב (טוב יותר מ -100 עמודים לדקה / יחידת מסה אטומית) אבץ הייתה אפשרית רק לכ -15 שנים הודות לפיתוח של מסה-ספקטרומטרים פלזמה מקור רב-אספן ומאז בעיקר מיושמת בכדור הארץ ומדעים פלנטריים. היישומים בתחום הרפואי הם רומן ויש לו פוטנציאל חזק כסמנים ביולוגיים למחלות שמשנות את חילוף החומרים של אבץ (למשל, מחלת אלצהיימר). מאמר זה מדווח שיטה למדוד עם דיוק גבוה יחסי איזוטופ יציבים הטבעיים של אבץ באיברים שונים בעכבר. אותו יהיה ישים לדגימות אנושיות. השיטה מורכבת מהפירוק של האיברים, הטיהור הכימית של אבץ משאר האטומים, ולאחר מכן הניתוח של יחס איזוטופ במסה-ספקטרומטר. האיכות של מדידות איזוטופים Zn תלויה באיכות של הטיהור הכימית (טוהר Zn, comp הריק הנמוךהנגר לסכום של Zn הווה במדגם, תשואה גבוהה כימית לנוהל) ועל השליטה בהטית אינסטרומנטלי. יש צורך בטוהר הגבוה של חלק Zn הסופי להסרת שני הפרעות isobaric והפרעות שאינן isobaric שיוצרות אפקט מטריקס. nuclides Isobaric ליצור הפרעות ישירות (לדוגמא, 64 ניקל). הפרעות ללא isobaric ליצור אפקט &quot;מטריקס&quot; שנקרא ולשנות את הדיוק אנליטי של המדידות על ידי שינוי מצבו של היינון בהשוואה לסטנדרטי אבץ הטהור שהדגימות לעומת 1. ריק (&lt;10 ng) נמוך מצביע על כך שאין זיהום של הדגימות על ידי Zn החיצוני שהיית הטיה ההרכב האיזוטופי נמדד. כפי שניתן מופרדים איזוטופים Zn במהלך חילופי יונים כרומטוגרפיה 2, האוסף של כל אטומי Zn מבטיח כי אין חלוקה איזוטופים מתרחשת, מה שמרמז כי ההליך הכימי צריך להיות תשואה מלאה. לבסוף, התיקון של חלוקה איזוטופים סייעה במהלך מדידת ספקטרומטר המסה נעשה באמצעות השיטה &quot;מדורגת סטנדרטי&quot;. מדידות מדויקות לכן, הקשיים העיקריים להשגה שולטים בזיהום החיצוני (כלומר, נמוכות ריק), הפקת טיהור כימית תשואה מלאה שהיא נקי מכל אטומים או מולקולות אחרים, ותיקון חלוקה איזוטופים סייעה במסה-ספקטרומטר. במאמר זה נתאר פרוטוקול האנליטיות שלנו להפריד בין Zn מאיברי העכבר, כמו גם מדידות ספקטרומטר המסה. החילוץ נעשה באמצעות כמות נמוכה של חומצות מדוללים (HBr / HNO 3 תקשורת) על מיקרו-טורים (0.5 μl 0.1 μl) של שרף אניון-חליפין. יש לה תשואה מלאה ויש לי מדידות שחזור חיצוני טוב יותר מאשר 50 עמודים לדקה על יחס Zn 66 Zn / 64. יתרון נוסף של ספידOD הוא שזה מאוד מהר. השיטה לכן מותאמת היטב למדעי רפואה, שבו יש צורך לנתח מספר גדול של דגימות בהשוואה למדעי כדור ארץ, שבו שיטות אנליטיות אלה פותחו.

<table><tbody><tr><td>ספקטרומטר מסה פלזמה מרובה קולקציות אינדוקטיביות</td> שרף חילופי אניונים <td>תרמו-פישר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AG1 X8 200-400</td><td>Bio-Rad</td><td>140-1443-MSDS</td><td></td></tr><tr><td>כוסות טפלון</td><td>Savillex&nbsp;</td><td>200-015-12</td><td></td></tr><tr><td>קולונים טפלון תוצרת בית עשויים טפלון</td><td></td><td></td><td></td> מתכווץ</tr></tbody></table>

מדידות דיוק אבץ איזוטופי גבוהות יישומים לאיברי עכבר

High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs

אנו מציגים הליך למדידה עם יחס איזוטופ אבץ דיוק גבוה באיברי עכבר. האבץ מורכב 5 איזוטופים יציבים (64 Zn, 66 Zn, 67 Zn, 68 Zn ו -70 Zn) אשר מופרדים בין איברי עכבר באופן טבעי. אנחנו מראים תחילה כיצד לפזר את האיברים השונים כדי לשחרר את אטומי Zn; צעד זה מתממש על ידי תערובת של HNO 3 ו- H 2 O 2. לאחר מכן, אנו מטהרים את אטומי אבץ מכל הגורמים האחרים, בפרט מהפרעות isobaric (למשל, Ni), על ידי כרומטוגרפיה אניון-חליפין בHBr לדלל / HNO בינוני 3. שני שלבים הראשונים אלה מבוצעים במעבדה נקייה באמצעות כימיקלים טוהר גבוהים. לבסוף, יחסי איזוטופ נמדדים באמצעות רב-אספן ההמוני ספקטרומטר אינדוקטיבי מצמידים-פלזמה, ברזולוציה נמוכה. הדגימות מוזרקות באמצעות תא תרסיס וחלוקת איזוטופים הנגרמת על ידי ההמוני ספקטרומטר הוא correcטד על ידי השוואת היחס של הדגימות ליחס של סטנדרטי (טכניקה מדורגת סטנדרטית). הליך טיפוסי מלא זה מייצר יחס איזוטופ עם שחזור 50 עמודים לדקה (2 SD).

ב 1.5 N HBr, המינים העיקריים האבץ (ZnBr3-) צורות מתחמים חזקים מאוד עם שרף אניון-החליפין, בעוד שרוב אלמנטים אחרים לא אינטראקציה עם השרף. האבץ הוא התאושש לאחר מכן על ידי שינוי הבינוני עד HNO המדולל 3, לשנות את התפצלות של Zn לZn 2 + המשתחררת מ6,7 השרף. יחסי איזוטופ באים לידי ביטוי בדרך כלל כחלקים לכל 1,000 סטיות ביחס לסטנדרטי: <p class="jove_content" style=";text-align:right;dire...

אנו מציגים את הטכניקה למדידה ברמת דיוק גבוהה של יחסי איזוטופים של אבץ באיברי עכבר.

We present a procedure to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs. Zinc is composed of 5 stable isotopes (64Zn, 66Zn, 67Zn, 68Zn ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא למדוד יחסי איזוטופים של אבץ באיברים של עכברים בדיוק גבוה. הדבר מושג תחילה על ידי המסה של האיברים השונים בחומצות כדי לשחרר את כל האטומים לתמיסה, לאחר מכן ביצוע תמיסת סטייה, כאשר החומר המיובש מושעה מחדש בברומיד מימן. לאחר מכן נעשה שימוש בכרומטוגרפיית חילוף יונים כדי לטהר את האבץ מכל שאר האלמנטים של הדגימה באמצעות עמודת כבידה מותנית. האבץ נשטף מהשרף באמצעות חומצה חנקית.השלב הסופי הוא מדידת יחסי איזוטופי האבץ באמצעות ספקטרומטר מסות עם פלזמה מושרית ששראנית ואיסוף מרובה (multi collection inductively coupled plasma mass spectrometer). בסופו של דבר, ההרכב האיזוטופי משמש לאבחון מחלות המשנות את מאזן האבץ בגוף, וזאת באמצעות מדידת התפלגות השיווי משקל של איזוטופי האבץ באיברים שונים. לפיכך, שיטה זו פותחה כדי לספק תובנות לגבי מנגנוני ההפצה וההובלה הטבעיים של אבץ בין איברי עכבר.ניתן להחיל זאת על כל בעל חיים, ובסופו של דבר ניתן להשתמש בשיטה לאבחון מחלות המשנות את מאזן האבץ בין איברים, כגון מחלת אלצהיימר. התחילו את ההליך בהכנת החומרים והדגימה כפי שפורט בפרוטוקול הכתוב; בצעו את עבודת הניקוי הכימי בתוך מapay של מקרן עשן כדי להכין תערובת של כ-1 ml של מי חמצן 30% וכ-1 ml של חומצה חנקית רכזת. הניחו את האיבר השל הרלוונטי לתוך כלי PTFE בנפח של 15 ml.לאחר מכן, הוסיפו את התערובת לכלי הביקר. השאירו את הכלי פתוח למשך מספר דקות כדי למנוע נתזים כתוצאה מתגובת החמצון של החומר האורגני ושחרור פחמן דו-חמצני. לבסוף, הניחו את הכלי על פלטה מחממת בטמפרטורה של כ-100 °C למשך מספר שעות או עד שהתמיסה תהיה צלולה לחלוטין.בשלב הבא, פתחו את הכוס והייבשו את התמיסה על פלטה מחממת בטמפרטורה של כ-100 degrees Celsius. לאחר שהדגימה יבשה, הוסיפו לדגימה מיליליטר אחד של hydrogen bromide. סגרו את הכוס והניחו לה להתמוסס על פלטה מחממת בטמפרטורה של 100 degrees Celsius למשך מספר שעות.במקביל, הכינו את עמודי ה-500 microliter. הוסיפו 500 microliters של שרף Ag one x 8 200 400 mesh לעמוד והניחו אותו על מעמד העמודים כאשר כוס פסולת ממוקמת מתחתיו. שטפו את השרף על ידי שטיפה לסירוגין של חמישה מיליליטר של מים בטוהר של 18.2 mega ohm centimeter וחמישה מיליליטר של חומצה חנקית 0.5 normal פעמיים, ולאחר מכן שטפו עם חמישה מיליליטר מים.לבסוף, התנו את השרף עם 5 mL של מימן ברומיד. לאחר מכן, הסירו את הכוס מהלוח החם והניחו אותה במקלח אולטרסוני. השאירו את הכוס להתקרר לטמפרטורת החדר למשך כ-30 דקות. לאחר שהכוס התקררה והשרף נשטף, פתחו את הכוס.הרכיבו את מתאם הקצה למזרק והוסיפו טיפ פפיתה. לאחר מכן, שאבו מיליליטר אחד של הדגימה והעבירו אותה אל הרזין באיטיות רבה כדי לא להגדיש או לערבב את הרזין. לאחר שכל הנוזל יעבור דרך העמודה, הוסיפו חמישה מיליליטר של hydrogen bromide.העבירו את ברומיד המימן דרך העמודה ולאחר מכן החליפו את כלי האיסוף בכלי של 15 מיליליטר נקי. לאחר מכן הוסיפו חמישה מיליליטר של חומצה חנקית, בנפחים של 2.5 מיליליטר בכל פעם. בשלב זה, האבץ משתחרר מהשרף.לאחר שחומצה החנקתית עוברת דרך העמודה, הוצא את הכלי והנח אותו על פלטה מחממת בטמפרטורה של 100 °C עד לייבוש. הוצא את העמודה מתושבת העמודות והשלך את השרף. לאחר שהדגימה יבשה, חזור על הפרוטוקול עם אותו נפח של חומצות בעמודה קטנה יותר של 100 µL ולאחר מכן הנח אותה על פלטה מחממת עד לייבוש.הדגימה מוכנה כעת לספקטרומטריית מסה. נתוח את ההרכב האיזוטופי של האבץ באמצעות ספקטרומטר מסה עם פלסמה השריתה בעזרת שדה מגנטי ומסננים מרובים (multi collector inductively coupled plasma mass spectrometer). הגדר את המכשיר באמצעות הפרמטרים המסוכמים בפרוטוקול הכתוב.מקמו את כוסות פאראדיי כדי לאסוף את יחס המסה למטען של nickel 62, copper 63, zinc 64, copper 65, zinc 66, zinc 67, ו-zinc 68. לאחר מכן, נתוחו תמיסה של zinc בריכוז 500 parts per billion בתוך חומצה חנקית 0.1 molar, באמצעות תא התזה בשילוב עם nebulizer מטפלון בקצב של 100 µL לדקה. עבור כל דגימה, בצעו 30 סריקות שבהן זמן האינטגרציה של כל סריקה הוא 8.389 seconds.תקנו את הרקע על ידי חיסור עצימויות האפס בשיא (on-peak zero intensities) של בקרת תמיסת בלנק, ותקנו הפרעה איזובארית אפשרית של ניקל 64. על ידי מדידת העצימות של שיא הניקל 62, הניחו כי היחס בין ניקל 64 לניקל 62 הוא טבעי. תקנו ערך זה מהטיה מסיתית מכשירית (instrumental mass bias), ולאחר מכן הסירו את הניקל 64 מהמסה 64 כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב; תקנו את ההטיה המסיתית המכשירית על ידי ביצוע הכללה (bracketing) של כל אחת מהדגימות עם תמיסת סטנדרט של JMC Leon Zinc בריכוז 500 parts per billion, כפי שמוצג.להלן תוצאות טיפוסיות שהתקבלו בשיטה זו, המוצגות כגרף של שלושה איזוטופים של Delta Zinc 68 לעומת Delta Zinc 66. עבור איברים שונים, כל האיברים נמצאים על קו בעל שיפוע של 2. דבר זה מראה כי השבירה האיזוטופית תלויה במסה וכי איברי עכבר הם מובחנים איזוטופית.מעניין לציין כי תאי דם אדומים ועצמות עשירים יותר באיזוטופ Zinc 66 (דלתא) בהשוואה לסרום, למוח ולכבד. פракציונציה זו מוסברת היטב על ידי התפלגות שיווי המשקל של איזוטופים בין סביבות קישור שונות של אבץ באיברים שונים. לאחר צפייה בסרטון, תגיעו להבנה טובה של האופן שבו ניתן להשיג מדידות איזוטופיות של אבץ ברמת דיוק גבוהה באיברי עכבר.אל תשכחו כי הקושי המרכזי הוא הימנעות מזיהום של הדגימה שלכם באבץ חיצוני, ולכן חיוני לעבוד במעבדה נקייה ולהשתמש בריאגנטים כימיים בעלי רמת ניקיון גבוהה.

high-precision-zinc-isotopic-measurements-applied-to-mouse-organs

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

גרורות סרטן השחלות מאופיינת בנגעים תוך-צפקיים מפוזרים רבים, כך שכימות חזותי מדויק של עומס הגידול הוא מאתגר.  כאן אנו מתארים שיטה לכימות במקום ומחוץ לגוף של עומס גידול גרורתי באמצעות תאי גידול עם חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) והדמיה אופטית.

כימות של גרורות סרטן השחלות תוך הצפק

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לתיוג רדיו ובדיקות in vivo של נגזרות כלאט-טטרזין תלת-שיניים 99mTc(I) לכימיה מוקדמת וביו-אורתוגונלית.

הכנה והערכה של<sup&gt; 99m</sup&gt; Tc שכותרתו Tridentate chelates לחינוך קדם-מיקוד שימוש Bioorthogonal לכימיה

פרוטוקול זה מתאר את השימוש מנתח בהרכב הגוף ומערכת חילוף החומרים בעלי חיים ניטור לאפיין הרכב הגוף ופרמטרים מטבולית בעכברים. מודל השמנת יתר הנגרמת על ידי האכלה עתירי שומן משמש כדוגמה עבור היישום של טכניקות אלה.

הרכב הגוף וניתוח מטבולית שכולאת בעכברים פד שומן גבוה

קווי תאים ראשוניים או מבוססים משמשים בדרך כלל לטיפול בשאלות ביולוגיות ומכניסטיות בסיסיות כגישה ראשונית לפני השימוש במודלים של בעלי חיים. פרוטוקול זה מתאר כיצד להכין תמציות תאים שלמות ושברים תת-סלולאריים למחקרים של אבץ (Zn) ורכיבי מעקב אחרים עם ספקטרוסקופיה לספיגת האטום.

ספקטרוסקופיה לספיגה אטומית כדי למדוד בריכות אבץ תאיים בתאי מיונקים

המטרה של הפרוטוקול היא להדגים את הטכניקות המשמשות לחקירת מחלה נגיפית על ידי בידוד וכימות וירוס Zika, מאיברים מרובים בעכבר לאחר ההדבקה.

בידוד וקוונפיקציה של וירוס Zika ממספר איברים בעכבר

אנו מציגים שיטה חזקה, חסכונית, וגמיש למדידת שינויים במספר hepatocyte ובכלי הנשק הגרעיני בתוך קבוע/הקפאה דגימות רקמות שאינו דורש זרימה cy, try. הגישה שלנו מספקת חתימה רבת עוצמה לדוגמה של ציטולוגיה בכבד עבור מעקב אחר ההתקדמות של פגיעה בכבד ומחלות.

תפוקה גבוהה בשיטת באתרו להערכת הפטציט הגרעיני בעכברים

טומגוגרפיה מיקרו-ממוחשבת עם שרף כפול מאפשרת הדמיה, דיגיטציה וסגמנטציה של שתי מערכות צינוריות בו זמנית כדי להקל על ניתוח תלת-ממדי של ארכיטקטורת איברים. DUCT משלב הזרקת ex vivo של שני שרפים radiopaque ואחריו סריקת טומוגרפיה מיקרו ממוחשבת פילוח של הנתונים טומוגרפיים.

צינור: יציקת שרף כפול ואחריו טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת לניתוח כבד תלת-ממדי

מאמר זה מדגים כיצד להכין ולנהל ברזל איזוטופי לא-רדיואקטיבי הקשור לטרנספרין למחקרים על הובלת ברזל בהריון עכבר. כמו כן מתוארת הגישה לכימות ברזל איזוטופי בתאי fetoplacental.

הובלת ברזל כמותית על פני שליבת העכבר In Vivo באמצעות איזוטופים של ברזל לא רדיואקטיבי

מאמר זה מפרט מתודולוגיה לתיוג רדיואקטיבי של נוגדן חד-שבטי אנטי-CD19 ספציפי לבני אדם וכיצד להשתמש בו כדי לכמת תאי B במערכת העצבים המרכזית וברקמות היקפיות של מודל עכברי של טרשת נפוצה באמצעות הדמיית in vivo PET, ספירת גמא ex vivo וגישות אוטורדיוגרפיה.

הדמיה של תאי CD19+ B במודל ניסיוני של עכבר אנצפלומיאליטיס אוטואימונית באמצעות טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים

מאמר זה מתאר את הרדיוסינתזה, הניסוח, בקרת האיכות של בדיקה חדשה עם תווית רדיו (כלומר, 68ננו-גוף NM-02 עם תווית Ga), והשימוש בו להדמיית PET/CT של בעלי חיים קטנים במודל קסנוגרפ.

רדיוסינתזה, בקרת איכות והדמיית טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים של בעלי חיים קטנים של 68מולקולות ננו עם תווית Ga

למד מדידת יחסי איזוטופי אבץ בדיוק גבוה באיברי עכבר. השיטה כוללת מסיסת איברים, טיהור כרומטוגרפי וספקטרומטריית מסה לניתוח הרכב איזוטופי. זה מסייע לחוקרים להבין מנגנוני תחבורת אבץ ולאבחן מחלות.

מדידות דיוק אבץ איזוטופי גבוהות יישומים לאיברי עכבר

גלה סרטונים נוספים