Name: הדמיה ניגודיות בעכבר עוברים באמצעות תדר גבוהים אולטראסאונד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: למד הדמיית אולטראסאונד מוגברת ניגודיות בעכבר עוברים באמצעות זריקת מיקרו-בועות לרשת הדם השליה. שיטה זו מאפשרת מדידת פרמטרי הדף ואבחון סמנים מולקולריים כלי דם בעוברים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית טרי פוקס של המכון הלאומי לסרטן של קנדה.

<ol><li>Voigt, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+molecular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Ultrasound molecular imaging.</a> Methods. 48 (2), 92-97 (2009).</li>
<li>Klibanov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+targeted+microbubbles%3A+Ultrasound+contrast+agents+for+molecular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Biological+Engineering+Computing%22%5BJournal%5D)">Preparation of targeted microbubbles: Ultrasound contrast agents for molecular imaging.</a> Medical Biological Engineering Computing. 47 (8), 875-882 (2009).</li>
<li>Cosgrove, D., Lassau, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+perfusion+using+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+Of+Nuclear+Medicine+And+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Imaging of perfusion using ultrasound.</a> European Journal Of Nuclear Medicine And Molecular Imaging. 37 (S1), 65(2010).</li>
<li>Williams, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+microbubble+contrast-enhanced+US+to+measure+tumor+response+to+targeted+therapy%3A+A+proposed+clinical+protocol+with+results+from+renal+cell+carcinoma+patients+receiving+antiangiogenic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Dynamic microbubble contrast-enhanced US to measure tumor response to targeted therapy: A proposed clinical protocol with results from renal cell carcinoma patients receiving antiangiogenic therapy.</a> Radiology. 260 (2), 581(2011).</li>
<li>Burns, P. N., Wilson, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+liver+masses%3A+Enhancement+patterns+on+contrast-enhanced+Images+-+Concordance+of+US+scans+with+CT+scans+and+MR+images%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Focal liver masses: Enhancement patterns on contrast-enhanced Images - Concordance of US scans with CT scans and MR images.</a> Radiology. 242 (1), 162(2006).</li>
<li>Phoon, C. K. L., Aristizabal, O., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((40+MHz+doppler+characterization+of+umbilical+and+dorsal+aortic+Blood+flow+in+the+early+mouse+embryo.+Ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22In+Medicine+And+Biology%22%5BJournal%5D)">40 MHz doppler characterization of umbilical and dorsal aortic Blood flow in the early mouse embryo. Ultrasound.</a> In Medicine And Biology. 26 (8), 1275-1283 (2000).</li>
<li>Phoon, C. K. L., Aristizabal, O., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+velocity+profile+in+mouse+embryonic+aorta+and+doppler-derived+volumetric+flow%3A+A+preliminary+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Spatial velocity profile in mouse embryonic aorta and doppler-derived volumetric flow: A preliminary model.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 283, H908-H916 (2002).</li>
<li>Aristizábal, O., Williamson, R., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAristiz%C3%A1bal%2C+O+%2212A-4+in+vivo+3D+contrast-enhanced+imaging+of+the+embryonic+mouse+vasculature.+Paper+presented+at+Ultrasonics+Symposium%22">12A-4 in vivo 3D contrast-enhanced imaging of the embryonic mouse vasculature. Paper presented at Ultrasonics Symposium</a>. , IEEE. New York, NY. (2007).</li>
<li>Bartelle, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+genetic+approach+for+in+vivo+vascular+imaging+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.Res%22%5BJournal%5D)">Novel genetic approach for in vivo vascular imaging in mice.</a> Circ.Res. 110 (7), 938-947 (2012).</li>
<li>Endoh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+gene+transfer+by+intrauterine+injection+with+microbubble-enhanced+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Fetal gene transfer by intrauterine injection with microbubble-enhanced ultrasound.</a> Molecular Therapy. 5 (5), 501-508 (2002).</li>
<li>Yamada, M., Hatta, T., Otani, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+exo+utero+development+system%3A+Protocol+and+troubleshooting%5BTitle%5D)+AND+%22Congenital+Anomalies%22%5BJournal%5D)">Mouse exo utero development system: Protocol and troubleshooting.</a> Congenital Anomalies. 48 (4), 183-187 (2008).</li>
<li>Denbeigh, J. M., Nixon, B. A., Hudson, J. M., Purin, M. C., Foster, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFR2-targeted+molecular+imaging+in+the+mouse+embryo%3A+An+alternative+to+the+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+medicine+and+biology%22%5BJournal%5D)">VEGFR2-targeted molecular imaging in the mouse embryo: An alternative to the tumor model.</a> Ultrasound in medicine and biology. 40 (2), 389-399 (2014).</li>
<li>Paauwe, M., Dijke, ten, P,, Hawinkels, L. J. A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoglin+for+tumor+imaging+and+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+On+Therapeutic+Targets%22%5BJournal%5D)">Endoglin for tumor imaging and targeted cancer therapy.</a> Expert Opinion On Therapeutic Targets. 17 (4), 421-435 (2013).</li>
<li>Bourdeau, A., Faughnan, M. E., Letarte, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoglin-deficient+mice%2C+a+unique+model+to+study+hereditary+hemorrhagic+telangiectasia%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cardiovasc.+Med%22%5BJournal%5D)">Endoglin-deficient mice, a unique model to study hereditary hemorrhagic telangiectasia.</a> Trends Cardiovasc. Med. 10 (7), 279-285 (2000).</li>
<li>Whiteley, K. J., Adamson, S. L., Pfarrer, C. D. Vascular corrosion casting of the uteroplacental and fetoplacental vasculature in mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWhiteley%2C+KJ+%22Placenta+And+Trophoblast%3A+Methods+And+Protocols%22">Placenta And Trophoblast: Methods And Protocols</a>. 121 (121), Humana Press. Totowa, NJ. 371-392 (2006).</li>
<li>Kulandavelu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+and+neonatal+phenotyping+of+genetically+engineered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice.</a> ILAR Journal. 47 (2), 103-10 (2006).</li>
<li>Kalaskar, V. K., Lauderdale, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+embryonic+development+in+a+serum-free+whole+embryo+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mouse embryonic development in a serum-free whole embryo culture system.</a> Journal of Visualized Experiments. 85, (2014).</li>
<li>Willmann, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+contrast-enhanced+ultrasound+imaging+of+tumor+angiogenesis+with+contrast+microbubbles+conjugated+to+integrin-binding+knottin+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Targeted contrast-enhanced ultrasound imaging of tumor angiogenesis with contrast microbubbles conjugated to integrin-binding knottin peptides.</a> The Journal of Nuclear Medicine. 51 (3), 433-440 (2010).</li>
<li>Deshpande, N., Ren, Y., Foygel, K., Rosenberg, J., Willmann, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+angiogenic+marker+expression+levels+during+tumor+growth%3A+Longitudinal+assessment+with+molecularly+targeted+microbubbles+and+US+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Tumor angiogenic marker expression levels during tumor growth: Longitudinal assessment with molecularly targeted microbubbles and US imaging.</a> Radiology. 258 (3), 804-811 (2011).</li>
<li>Lyshchik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+2+expression+using+targeted+contrast-enhanced+high-frequency+ultrasonography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Ultrasound+In+Medicine%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of vascular endothelial growth factor receptor 2 expression using targeted contrast-enhanced high-frequency ultrasonography.</a> Journal Of Ultrasound In Medicine. 26 (11), 1575-1586 (2007).</li>
<li>Jerkic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoglin+regulates+nitric+oxide-dependent+vasodilatation%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Endoglin regulates nitric oxide-dependent vasodilatation.</a> The FASEB Journal. 18 (3), 609-611 (2004).</li>
<li>Denbeigh, J. M., Nixon, B. A., Lee, J. J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDenbeigh%2C+JM+%22Contrast-Enhanced+Molecular+Ultrasound+Differentiates+Endoglin+Genotypes+in+Mouse+Embryos%22">Contrast-Enhanced Molecular Ultrasound Differentiates Endoglin Genotypes in Mouse Embryos</a>. , Angiogenesis. Press. (2014).</li>
<li>Adamson, S. L., Lu, Y., Whiteley, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+trophoblast+cells+and+the+maternal+and+fetal+circulation+in+the+mouse+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Interactions between trophoblast cells and the maternal and fetal circulation in the mouse placenta.</a> Dev Biol. 250, 358-35 (2002).</li>
<li>Needles, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+contrast+imaging+with+an+array-based+micro-ultrasound+system.+Ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+Biology%22%5BJournal%5D)">Nonlinear contrast imaging with an array-based micro-ultrasound system. Ultrasound.</a> Medicine Biology. 36 (12), 2097(2010).</li>
<li>Watson, E. D., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+structures+and+transport+functions+in+the+mouse+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Development of structures and transport functions in the mouse placenta.</a> Physiology. 20 (3), 180-193 (2005).</li>
<li>Shalaby, F., Rossant, J., Yamaguchi, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+blood-island+formation+and+vasculogenesis+in+Flk-1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Failure of blood-island formation and vasculogenesis in Flk-1-deficient mice.</a> Nature. 376, 62-66 (1995).</li>
<li>Kwee, L., Baldwin, H. S., Shen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+development+of+the+embryonic+and+extraembryonic+circulatory+systems+in+vascular+cell+adhesion+molecule+%28VCAM-1%29+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Defective development of the embryonic and extraembryonic circulatory systems in vascular cell adhesion molecule (VCAM-1) deficient mice.</a> Development. 121, (1995).</li>
<li>Mercurio, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+the+%CE%B12+integrin+knockout+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">Lessons from the α2 integrin knockout mouse.</a> The American journal of pathology. , 161-163 (2002).</li>
<li>Hodivala-Dilke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1v%CE%B23+integrin+and+angiogenesis%3A+a+moody+integrin+in+a+changing+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">αvβ3 integrin and angiogenesis: a moody integrin in a changing environment.</a> Curr Opin Cell Biol. 20, 514-519 (2008).</li>
<li>Pysz, M. A., Gambhir, S. S., Willmann, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging%3A+current+status+and+emerging+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+radiology%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging: current status and emerging strategies.</a> Clinical radiology. 65, 500-516 (2010).</li>
<li>Cybulsky, M. I., Iiyama, K., Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+major+role+for+VCAM-1%2C+but+not+ICAM-1%2C+in+early+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">A major role for VCAM-1, but not ICAM-1, in early atherosclerosis.</a> J Clin Invest. 107, 1255-1262 (2001).</li>
<li>Xu, H., Gonzalo, J. A., St Pierre,, Y,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocytosis+and+resistance+to+septic+shock+in+intercellular+adhesion+molecule+1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Leukocytosis and resistance to septic shock in intercellular adhesion molecule 1-deficient mice.</a> J Exp Med. 180, 95-109 (1994).</li>
<li>Gerwin, N., Gonzalo, J. A., Lloyd, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+eosinophil+accumulation+in+allergic+lung+interstitium+of+ICAM-2-deficient+mice+results+in+extended+hyperresponsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Prolonged eosinophil accumulation in allergic lung interstitium of ICAM-2-deficient mice results in extended hyperresponsiveness.</a> Immunity. 10, 9-19 (1999).</li>
<li>Johnson, R. C., Mayadas, T. N., Frenette, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+cell+dynamics+in+P-selectin-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Blood cell dynamics in P-selectin-deficient mice.</a> Blood. 86, 1106-1114 (1995).</li>
<li>Corrigan, N., Brazil, D., McAuliffe, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+ultrasound+assessment+of+the+murine+heart+from+embryo+through+to+juvenile%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Sciences%22%5BJournal%5D)">High-frequency ultrasound assessment of the murine heart from embryo through to juvenile.</a> Reproductive Sciences. 17 (2), 147-14 (2010).</li>
<li>Turnbull, D. H., Bloomfield, T. S., Baldwin, H. S., Foster, F. S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+backscatter+microscope+analysis+of+early+mouse+embryonic+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Ultrasound backscatter microscope analysis of early mouse embryonic brain development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92, 2239-2243 (1995).</li>
<li>Greco, A., Mancini, M. L., Gargiulo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+Biomicroscopy+in+Small+Animal+Research%3A+Applications+in+Molecular+and+Preclinical+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Ultrasound Biomicroscopy in Small Animal Research: Applications in Molecular and Preclinical Imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, (2012).</li>
<li>Pysz, M. A., Guracar, I., Foygel, K., Tian, L., Willmann, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tumor+angiogenesis+using+real-time+motion-compensated+contrast-enhanced+ultrasound+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tumor angiogenesis using real-time motion-compensated contrast-enhanced ultrasound imaging.</a> Angiogenesis. 15, 433-442 (2012).</li>
<li>Larina, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+blood+flow+in+mammalian+embryos+using+doppler+swept-source+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J.Biomed.Opt%22%5BJournal%5D)">Live imaging of blood flow in mammalian embryos using doppler swept-source optical coherence tomography.</a> J.Biomed.Opt. 13 (6), 060506-06 (2008).</li>
<li>Garcia, M. D., Udan, R. S., Hadjantonakis, A. K., Dickinson, M. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGarcia%2C+MD+%22Live+imaging+of+mouse+embryos%22">Live imaging of mouse embryos</a>. 4 (4), Cold Spring Harbor. 104-10 (2011).</li>
<li>Teichert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+nitric+oxide+synthase+gene+expression+during+murine+embryogenesis.+Commencement+of+expression+in+the+embryo+occurs+with+the+establishment+of+a+unidirectional+circulatory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Endothelial nitric oxide synthase gene expression during murine embryogenesis. Commencement of expression in the embryo occurs with the establishment of a unidirectional circulatory system.</a> Circulation Research. 103 (1), 24-33 (2008).</li>
<li>Walls, J. R., Coultas, L., Rossant, J., Henkelman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+analysis+of+vascular+development+in+the+mouse+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional analysis of vascular development in the mouse embryo.</a> PLoS One. 3 (8), (2008).</li>
</ol>

פוסטר מכיר בתפקידו כיועץ ל-VisualSonics Inc.

הסוכנים בניגוד אולטראסאונד הוזרקו לעוברי עכבר הריון בשלב מאוחר ותמונות עם ניגודיות קוי נרכשו למדוד פרמטרים זלוף וממוקד microbubble מחייב. הדמיה מוצלחת של microbubbles בתוך כלי דם עובריים הייתה תלויה במספר גורמים, את כדאיות העובר להיות הראשונה. כל הציוד ומכשירים הוכנו מראש כדי למזער את הזמן הנדרש לבידודה של עוברים מהרחם לתחילת הזרקה. מאז את ההשפעות של חשיפה בודדת או חוזרת ונשנית להרדמה על עכברים עובריים לא נחקרו בפירוט, השימוש בהרדמה באם נמנעה לפני להקריב 16. במהלך בידוד...

ההדמיה אולטרסאונד contrast-enhanced עושה שימוש בחומרי ניגוד microbubble לדמיין ולאפיין את הסביבה של כלי הדם. סוכנים אלה מאפשרים הערכה לא פולשנית של זרימת הדם, כלי הדם ותפקוד לב וכלי דם. בנוסף, שינוי של פני השטח הבועה יכול לגרום microbubble ממוקד מחייב סמנים ביולוגיים אנדותל, כפי שהודגם ביישומים פרה-קליניים של אנגיוגנזה, טרשת עורקים ודלקת 1,2 עושים הדמיה אולטרסאונד מולקולרית של אירועי לב וכלי דם אפשריים. אולטרסאונד חומר ניגוד ולכן יכול לשמש כדי לזהות את הסביבות המורכבות ומגוונות המשפיעות על כלי דם בריאים ומדינות נגועות 3-5. במספר האחרון של שנה, עניין בשירות של ההדמיה microbubble האריך למודל עובר עכבר תכליתי. כמודל להתפתחות יונקים, כניסתה של microbubbles לכלי הדם העוברי משפרת פיזיולוגית<html> מחקר של מערכת הדם המתפתחת (זרימה למשל, דם, תפוקת לב) ובמקרים של מהונדס ומודלים של עכברים שעברו מוטציה ממוקדת של מחלות לב 6,7, עשוי להניב תובנות כיצד גנטי לשנות את תפקוד לב וכלי דם גורמים. למעשה, 2D כמותיים ואיכותי ניתוחים של כלי דם במוח עובריים כבר הושג 8. יתר על כן, את עובר העכבר מציג כמודל מצוין לבחינת המחייבת של microbubbles ממוקדת לסמני כלי דם in vivo. Bartelle et al. 9, למשל, הציג microbubbles avidin לתוך חדרי לב עובר להעריך ממוקדים מחייב בעוברים מהונדסים Biotag-בירה ולבחון האנטומיה של כלי דם. הדור של דגמי עכבר הטרוזיגוטיים והומוזיגוטים ניתן לשמש גם כתחליף ללימודי מודל גידול במטרה להגדיר את האופי הכמותי של אולטרסאונד המולקולרי - אמת מידה חשובה בתרגום בטכניקה זו למרפאת. התחת = &quot;jove_content&quot;&gt; microbubbles בתדירות הגבוהה ביותר הציג למחזור העוברי באמצעות זריקות תוך-לב לעוברי בודדים נחשפו דרך laparotomy 8-10. בזריקות ברחם, לעומת זאת, מתמודד עם מספר האתגרים. אלה כוללים הדרכת הזרקה, צורך לפעול נגד תנועה באמא ועובר exteriorized, תחזוקה של כדאיות hemodynamic באמא ועוברי exteriorized, פונים השפעות ארוכות הטווח של הרדמה וסיבוכים עקב דימום 11. לכן, המטרה של החקירה הייתה לפתח טכניקה להזרקת microbubbles לעוברי בשלב מאוחר חיים מבודדים 12. אפשרות זו מציעה יותר חופש במונחים של שליטת הזרקה ומיצוב, שחזור של מטוס ההדמיה ללא חסימה, וניתוח תמונה פשוט וכימות. במחקר הנוכחי, אנו מתארים הליך חדשני להזרקה של microbubbles לעוברי עכבריים חיים for המטרות של לימוד התנהגות הקינטית microbubble ולימוד ממוקד microbubble מחייב סמני משטח אנדותל אנדוגני. הדמיה אולטרסאונד שאינו ליניארי ניגוד ספציפי משמשת למדידה של מספר הפרמטרים זלוף הבסיסיים כוללים שיפור שיא (PE), לשטוף-בשיעור ובזמן השיא (TTP) בעוברי E17.5 מבודדים. אנחנו גם מדגימים את תוקפו של מודל העובר להערכה כמותית של טבע אולטרסאונד המולקולרי באובדן endoglin עוברי של מודל עכבר מהונדס פונקציה, שבו endoglin הוא יעד רלוונטי מבחינה קלינית בשל הביטוי הגבוה שלה בתאי האנדותל של כלי דם באתרים של אנגיוגנזה הפעילה 13 . ההידבקות של שליטה (MB E), ממוקד endoglin אלוטיפ עכברוש IgG 2 (MB C) וmicrobubbles לא ממוקדת (MB U) מוערכת בendoglin הטרוזיגוטיים (Eng +/-) וendoglin הומוזיגוטים (Eng + / +) להביע עוברים. ניתוח של בינדי הממוקדng מגלה כי אולטרסאונד המולקולרי הוא מסוגל להבדיל בין גנוטיפים endoglin ונוגעים צפיפות קולטני לרמות אולטרסאונד מולקולריות לכימות.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><חזק>ריאגנטים</חזקים></td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>נוגדנים</חזקים> (ביוטינילציה, eBioscience) &#8212; בחירת הנוגדנים תלויה בניסוי</td></tr><tr><td><ul style="padding:0px; margin:0px"><li>rat isotype IgG2 control</li></ul></td><td>eBioscience</td><td>13-4321-85</td><td>שילוב זה של נוגדנים/מיקרו-בועות נדרש לעתים קרובות כבקרה ניסיונית&nbsp;</td></tr><tr><td><ul style="padding:0px; margin:0px"><li>biotin anti-mouse CD309</li></ul></td><td>eBioscience</td><td>13-5821-85</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן ביוטינילציה של חולדה MJ 7/18 לאנדוגלין עכבר</td><td>בהיברידומה</td><td></td> ביתית <td>נוגדנים חיצוניים עשויים להיות גם מתאימים: השתמשנו בעבר ב-eBioscience (13-1051-85) במים</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr> מזוקקים<td colspan="4"><חזק>מדיה עוברית</חזקה></td></tr><tr><td><ul style="padding:0px; שוליים: 0px"><li>500 מ"ל Dulbecco' s Modified Eagle' s בינוני עם גלוקוז גבוה</li></ul></td><td>Sigma</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td><ul style="ריפוד: 0px; margin:0px"><li>50 מ"ל סרום בקר עוברי</li></ul></td><td>ATCC</td><td>30-2020</td><td>פריט # 7592456</td></tr><tr><td><ul style="ריפוד:0px; margin:0px"><li>Hepes</li></ul></td><td>Gibco</td><td>15630</td><td>5 מ"ל, 1 M</td></tr><tr><td><ul style="padding:0px; margin:0px"><li>Penicillin-Streptomycin</li></ul></td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>5 מ"ל, 10,000 יחידות Pen., 10,000 &#956; גרם סטרפטוקוס</td></tr><tr><td>אתנול, 70%</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>קרח</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td>סיגמא</td><td>76240</td><td>4%</td></tr> <tr><td>פוספט בופר מלח [1x]&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td>1x, ללא סידן כלורי ומגנזיום כלוריד</td></tr><tr><td>עכבר בהריון, CD-1</td><td>Charles River Laboratories Inc.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.9% נתרן כלורי (מי מלח)</td><td>Hospira</td><td>0409-7984-11</td><td></td></tr><tr><td>חומר ניגוד אולטרסאונד, MicroMarker מוכן למטרה ולא ממוקד</td><td>; ויז'ואלסוניקס בע"מ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ג'ל אולטרסאונד (Aquasonic 100, חסר צבע)</td><td>CSP Medical</td><td>133-1009</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>ציוד</חזק></td></tr><tr><td>צלחות תרבית תאים חזקות (4): &nbsp; 100&nbsp; x&nbsp; 20&nbsp; מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-772-22</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית תאים (12) : 60&nbsp; x&nbsp; 15&nbsp; מ"מ</td><td>Sigma</td><td>D8054</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Sorvall Legend RT צנטריפוגה&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים, 50 מ"ל BD Falcon</td><td>VWR</td><td>21008-938</td><td></td></tr><tr><td>מדלל</td><td>בקמן קולטר</td><td>איזוטון II מדלל,</td> מספריים לדיסקציה 8448011 <td></td></tr><tr><td>(וגנר)</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>Wagner 14068-12</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים (2), Dumont SS (0.10 x 0.06 מ"מ)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11200-33</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים, רסיס</td><td>VWR</td><td>25601-134</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית, 2 ליטר (גריפין)VWR</td><td></td> <td>89000-216</td><td></td></tr><tr><td>נימי זכוכית, 1 x 90&nbsp; מ"מ GD-1 עם נימה</td><td>Narishige</td><td>GD-1</td><td></td></tr><tr><td>חולץ מחט זכוכית</td><td>Narishige</td><td>PN-30</td><td></td></tr><tr><td>כפפות</td><td>Ansell</td><td>4002</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת אנטומיה ברוטו</td><td>Fine Science Tools</td><td>10088-15</td><td></td></tr><tr><td>פלטה חמה</td><td>VWR</td><td>89090-994</td><td></td></tr><tr><td>דלי קרח</td><td>קול פארמר</td><td>RK 06274-01</td><td></td></tr><tr><td>הדמיה פלטפורמה:</td><td>VisualSonics Inc.</td>מערכת <td></td><td>מסילה משולבת</td></tr><tr><td>מקור אור, סיבים אופטיים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-562-36</td><td>באופן אידיאלי יש זרועות מתכווננות</td></tr><tr><td>לורס (12), פוליפרופילן דוקרני נקבה &frac14;-28 חוט UNF</td><td>קול פארמר</td><td>45500-30</td><td></td></tr><tr><td>מערכת מיקרו-אולטרסאונד, תדר גבוה</td><td>VisualSonics Inc.</td><td>מחטי Vevo2100</td><td></td></tr>, <tr><td>מד 21&nbsp; (1 אינץ')</td><td>מנתח גודל חלקיקים VWR</td><td>305165</td><td></td></tr><tr><td></td><td>בקמן קולטר</td><td>Multisizer 3 כף מחוררת נגד</td><td></td>קולטר</tr><tr><td>(מוריה)</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>MC 17 10373-17</td><td></td></tr><tr><td>פינים (6), מינוטיין אנודייז שחור 0.15 מ"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-15</td><td></td></tr><tr><td>פיפטורים [2-20 & #956; l, 20-200 &#956; l, 100-1,000 &#956; l]</td><td>Eppendorf</td><td>Research Plus&nbsp; 3120000038 מתכוונן; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 3120000054; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; </td><td></td></tr><tr><td>3120000062 טיפים לפיפטורים [2-200&nbsp; &#956; l, 50-1,000&nbsp; &#956; l]</td><td>Eppendorf</td><td>epT.I.P.S.&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 22491334; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; </td><td></td></tr><tr><td>022491351 מספריים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 ערכת אלסטומר סיליקון</td><td>צינורות דאו קורנינג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, מעבדת טיגון 1/32 אינץ' x 3/32 אינץ'</td><td>VWR</td><td>63010-007</td><td></td></tr><tr><td>מקל מוליך עץ (ספוגית, ראש כותנה)</td> <td>VWR</td><td>CA89031-270</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי 5-8 הגדלה פישר</td><td>סיינטיפיק</td><td>סטרומאסטר</td><td></td></tr><tr><td>, 1 מ"ל מזרקי Normject</td><td>Fisher</td><td>14-817-25</td><td></td></tr><tr><td>(10), 30 מ"ל</td><td>VWR</td><td>CA64000-041</td><td></td></tr><tr><td>משאבת עירוי מזרק&nbsp;</td><td>ביו-לינקס&nbsp;</td><td>מדחום NE-1000</td><td></td></tr><tr><td>, -20-110&nbsp; &#176; C</td><td>VWR</td><td>89095-598</td><td></td></tr><tr><td>טיימר</td><td>VWR</td><td>33501-418</td><td></td></tr><tr><td>צינורות, Eppendorf</td><td>VWR</td><td>20170-577</td><td></td></tr><tr><td>מתלי צינורות (3)</td> <td>VWR</td><td>82024-462</td><td></td></tr><tr><td>מתמר אולטרסאונד, 20 מגה-הרץ</td><td>VisualSonics Inc.</td><td>MS250</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tubingen, זווית כלפי מעלה</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15005-08</td><td></td></tr></tbody></table>

הדמיה ניגודיות בעכבר עוברים באמצעות תדר גבוהים אולטראסאונד

Contrast Imaging in Mouse Embryos Using High-frequency Ultrasound

הדמיה משופרת בניגודיות אולטרסאונד יכולה להעביר מידע כמותי חיוני לגבי כלי דם וזלוף של רקמות, וביישומים ממוקדים, להקל על איתור ומדידה של סמנים ביולוגיים של כלי הדם ברמה המולקולרית. בתוך עובר העכבר, טכניקה לא פולשנית זו עשויה לשמש כדי לחשוף מנגנונים בסיסיים העומדים בבסיס התפתחות כלי הדם במערכת הדם המוקדמת של העכבר ובמודלים גנטיים של מחלות לב וכלי דם. עובר העכבר מוצג גם כמודל מצוין לחקר הידבקות של מיקרו-בועות למטרות אנגיוגניות (כולל קולטן גורם גדילה אנדותל כלי דם 2 (VEGFR2) או αvβ3) ולהערכת האופי הכמותי של אולטרסאונד מולקולרי. לכן פיתחנו שיטה להחדרת חומרי ניגוד אולטרסאונד לכלי הדם של עוברים חיים ומבודדים. זה מאפשר חופש במונחים של בקרת הזרקה ומיקום, שחזור של מישור ההדמיה ללא חסימה ותנועה, וניתוח וכימות תמונה פשוטים. בשלב ההריון המאוחר (יום עוברי (E)16.6 ו-E17.5) בודדו עוברי עכברים מהרחם, הוצאו בעדינות משק החלמון וחומרי ניגוד מיקרו-בועות הוזרקו לוורידים הנגישים על פני השטח הכוריוני של דיסק השליה. לאחר מכן נעשה שימוש בהדמיית אולטרסאונד ניגודיות לא ליניארית כדי לאסוף מספר פרמטרים בסיסיים של זלוף (שיפור שיא, קצב שטיפה וזמן לשיא) ולכמת קשירת מיקרו-בועות ממוקדת במודל עכבר אנדוגלין. אנו מראים את המחזור המוצלח של מיקרו-בועות בתוך עוברים חיים ואת התועלת של גישה זו באפיון כלי דם עובריים והתנהגות מיקרו-בועות.

ההזרקה של חומר הניגוד אולטרסאונד לעוברי עכבר לשעבר הרחם תלויה בבידוד המוצלח של חיים, עובר שלב מאוחר של הריון מהרחם והתחזוקה של כדאיות במהלך ההזרקה וההדמיה אולטרסאונד בנושא. ברגע שהעובר כבר exteriorized ואת מיקומו, כפי שמוצג באיור 1, הזרקה זהירה של חומר ניגוד לתוך כלי הדם העובריים היא אפשרית. תמונת אולטרסאונד B-מצב אופיינית לעובר עכבר E17.5 מוצגת באיור 2 א. לשטוף בשל microbubbles ושיפור מקביל בווריד הנבוב הנחות, הלב, המוח, ובכל בעל החיים י...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להזריק סוכני אולטרסאונד ניגוד microbubble לחיים, עוברים עכברי שלב מאוחר-הריון מבודד. שיטה זו מאפשרת הלימוד של פרמטרים זלוף ושל סמנים מולקולריים של כלי דם בתוך העובר באמצעות הדמיה אולטרסאונד בתדר גבוה חומר ניגוד.

Ultrasound contrast-enhanced imaging can convey essential quantitative information regarding tissue vascularity and perfusion and, in targeted ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להחדיר מיקרו-בועות לעוברים חיים ומבודדים של עכברים, לצורך דימות אולטרסאונד עם הגברת ניגודיות. דבר זה מתבצע תחילה על ידי קציר עוברים חיים בשלבים E 16.5 או E 17.5 מעכברה בהריון.לאחר הכנת המיקרובובלס (microbubbles) המכוונים, מזריקים את המיקרובובלס לעובר החי דרך רשת כלי הדם השילייתיים. השלב האחרון הוא דימוי של המיקרובובלס באמצעות דימוי אולטרסאונד. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בדימוי אולטרסאונד עם חומר ניגוד כדי למדוד פרמטרים של פרפוזיה וסקולרית ולהעריך את קישור המיקרובובלס המכוונים בעוברים.בדרך כלל, אנשים שאינם מיומנים בשיטה זו יתקשו בחלקים של טיפול בעובריו והזרקה בפרוטוקול, עד שיהיו להם מספיק תרגול ביישום הלחצים הנדרשים בעת שימוש במחט ובפינצטה לצורך ניסוי מוצלח. מי שידגים את הפרו prosedur יהיה Brian Nixon, סטודנט מהמעבדה שלנו. כדי להכין מחדש את מבחנות המטרה, התחילו בדילול של 20 micrograms של תמיסת הנוגדן לנפח סופי של 1 milliliter של סליין. שמרו את המבחנות על קרח. לאחר מכן, מלאו מזרק ב-1 milliliter של סליין.הסרה של כל בועות האוויר. הצמדו מחט בכי মাপ 21 והזריקו את התמיסה באיטיות לבקבוב המיקרו-בועות. משכו את הבוכנה באיטיות כדי להוציא מיליליטר אחד של אוויר, ולאחר מכן הוציאו את המחט.נער את הבחורה בעדינות והשאר אותה על קרח למשך חמש דקות. לאחר חמש דקות, מלא מזרק חדש בדילול הנוגדן והוסף אותו לבחורה המתאימה. לאחר הנעירה, הנח לתערובת להגיע כעת לשני מיליליטרים.המתינו 10 דקות על קרח. לשחזור של המבחנות הלא-מכוונות, מלאו מזרק ב-1 ml של תמיסת סליין. הסירו את כל בועות האוויר.חברו מחט בכי মাপ 21 והזריקו את התמיסה לאט למבחנה חדשה של מיקרובובלס. משכו את הבוכנה לאט כדי להוציא 1 ml של אוויר, ולאחר מכן הוציאו את המחט. ערבבו בעדינות והניחו לתמיסה לעמוד למשך חמש דקות.לאחר הוספת מיליליטר אחד נוסף של תמיסת סליין להבאת הנפח לשני מיליליטרים, ערבבו בעדינות והשאירו למשך 10 דקות על קרח. לאחר ערבוב עדין של מבחנת המיקרובבבלים הרצויה, השתמשו במחט 21 gauge במזרק של מיליליטר אחד כדי לשאוב כ-50 µL מהתמיסה. לאחר מכן, הזרקו את המיקרובבבלים למבחנת מיקרו-צנטריפוגה ריקה של שני מיליליטרים.בשלב הבא, העבירו בפיפט דגימה של 10 µL מתמיס מלאי המיקרובובלס (Microbubble) לתוך 10 mL של מדלל. לאחר ערבוב עדין, השתמשו בספירת קולטר (Coulter counting) כדי להעריך את הריכוז ואת התפלגויות הגודל של אוכלוסיית המיקרובובלס. בצעו לפחות שלוש מדידות של 50 µL לכל דגימה מבקבוקון.שימוש במפתח של 30 מיקרומטר. שלב זה מבוצע במקביל להזרקת המיקרו-בועות לעוברים. בזמן שהמנתח מזריק לעוברים, העוזר מכין את ההזרקה הבאה כדי להבטיח שהמנתח לא יהיה מודע לסוג הבועה המוזרקת.קבע את נפח תמיסת בועות המלאי הדרוש כדי להגיע לריכוז סופי של 100 מיליון מיקרו-בועות למיליליטר בנפח של 400 µL. העבר נקב של סליין בנפח המתאים למבחנה ריקה למיקרו-צנטריפוגה. לאחר ניעור עדין של מבחנת המיקרו-בועות שנבחרה, השתמש במזרק של 1 mL עם מחט בכילוי 21 כדי לשאוב נפח עודף של התמיסה.לאחר מכן, הזרקו את המיקרו-בועות למבחנת מיקרו-צנטריפוגה ריקה. בשלב הבא, שאבו בפיפטה את הנפח הנדרש של תמיסת המקור של המיקרו-בועות והוסיפו אותה למנת הסלין. ערבבו על ידי סירבול עדין באמצעות קצה הפיפטה.לאחר מכן, השתמשו במחט במידה 21 gauge כדי לשאוב את תמיסת המיקרו-בועות המדוללת לתוך מזרק נקי. לאחר הסרת המחט, הוציאו בועות אוויר מהמזרק וחברו את ה-lure ואת הפרו-טוברית. דחפו את התמינה באיטיות עד לקצה הפרו-טוברית, תוך הקפדה שלא לייצר בועות אוויר.לבסוף, הכניסו את המזרק למשאבת מזרקים (syringe infusion pump) המכוונת להזרמת המיקרו-בועות בקצב של 20 µL לדקה. עבור נפח כולל של 20 µL, חברו מחט זכוכית משוחה לקצה הפיתול. העבירו את המשאבה קרוב לשלב ההזרקה.השתמשו בכף מחוררת כדי לבחור ולהוציא באופן אקראי עובר אחד מתוך צלחת המצע המקוררת. הניחו את העובר בצלחת דיסקציה הממוקמת על במת האולטרסאונד תחת הסטראיאוסקופ. לאחר מכן, אתרו את הצד של העובר שנראה כבעל הפחות כלי דם.כאן נמצא אזור בעל כלי דם דלילים, בדרך כלל סמוך לאזור הראש. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה עדינה כדי לחתוך או לקרוע חלק קטן בלבד משקי החלמון ומהקרומים השפירים, כך שניתן יהיה להוציא את העובר מבפנים, אך לא יותר מכך. לאחר מכן, הסירו בעדינות את השק מהעובר.לאחר מכן, הניחו את העובר על צדו, כאשר השילייה וכלי הדם של חבל הטבור נמצאים מלפנים. ייסבו את צלחת הניתוח באמצעות חתיכות קטנות של פלסטילין תוך שימוש בארבעה סיכות לחרקים כדי לקבע את שק החלמון ואת קצוות השילייה, תוך הימנעות מפגיעה בכלי דם מרכזיים, באמצעות מזרק המכיל תמיסה שחוממה מראש ל-45 degrees Celsius.שטפו את העוברית ב-PBS עד שניתן לראות דם זורם לתוך העוברית. ניתן לזהות את העורק הטבלי לפי הדם האדום הבהיר הפועם. הווריד הטבלי ורשת כלי הדם הנלווית לו מכילים דם כהה יותר, ובדרך כלל הם נמצאים מעל אלו של העורק הטבלי בצד השילשייה.בשלב זה, מקמו את הצלחת כך שניתן יהיה לבצע את ההזרקה בנוחות. לאחר שהעובר התאושש, כסו אותו, אך לא את השילייה. בעזרת ג'ל אולטרסאונד שחומם מראש, השתמשו בפינצטה עדינה כדי להסיר בעדינות בועות אוויר מסביב לעובר, והוסיפו לצלחת PBS שחומם מראש לאורך כל הפרוצדורה.עקוב אחר מפלס התמיסה במזרקי ה-PBS והג'ל והוסף מזרקים רזרביים לכלי החימום לפי הצורך. לאחר מכן, חבר את מחט הזכוכית לכדור גדול של פלסטלינה בקצה של צלחת הניתוח והכנס את קצה המחט לתוך ה-PBS. בחר וריד על פני השטח של הכוריון בדיסק השילשייה, במרחק סביר ככל האפשר מהענף הראשי.לאחר מכן, השתמשו במספריים כדי לקצץ את קצה המחט כך שיתאים לגודל כלי הדם, כאשר חותכים את הקצה בזווית קלה. השתמשו בקצה מספרי הקפיץ כדי להסיר שאריות זכוכית משוננות.כעת, באמצעות משאבת המזרקים, הזרים לאט את תמיסת המיקרו-בועות בอัตום של 20 µL לדקה אל תוך מחט הזכוכית, עד שכל האוויר יסולק מקצה המחט וניתן יהיה לראות את המיקרו-בועות זורמות בחופשיות אל ה-PBS. עצור את המשאבה ואתחל אותה לנפח הזרקה של 20 µL. אין לאפשר לאוויר להיכנס למחט ההזרקה כדי למנוע הזרקת אוויר למערכת כלי הדם של העובר.החדיר בעדינות את קצה מחט הזכוכית לווריד הנבחר בשיליה וודא שהיא נייד. הסט הצידה את ראש הסטריאוסקופ ומקם את המתמר האולטרסאונדי כך שהעובר ימוקם באופן שווה בין המוקדים בגובה 6 ו-10 מילימטרים. לאחר מכן, התחל בדימות והזרק בבוליס את המיקרובועות; לאחר דקה, כאשר ההזרקה הושלמה, הפעל את הטיימר לשלב רכישת הנתונים.תמונת אולטרסאונד במצב B זו מציגה עובר E 17.5 שהוצא החוצה מיד לפני הזרקת מיקרו-בועות ממוקדות. תמונת אולטרסאונד ניגודית לא-ליניארית זו מציגה את העובר לפני הזרקת המיקרו-בועות, כאשר רק ממשקים בעלי החזר חזק, כגון עצם, נראים עם אות מינימלי מהרקמות הרכות. הזרקת המיקרו-בועות מגבירה את הניגודיות בכל רחבי בעל החיים, כולל הווריד הרחב התחתון, הלב והמוח.תרשים עוצמה של מיקרו-בועות כפונקציה של זמן בתוך אזור עניין בודד במוח העוברי מאפשר זיהוי של פרמטרים שונים של פרפוזיה, כולל שיא העצמה או קצב שטיפה (wash in rate) המוצג על ידי השיפוע, והזמן עד להגעה לשיא (TTP). יחסי העוצמה הממוצעים של הניגוד ממיקרו-בועות המכוונות ל-endoglin היו גבוהים משמעותית מאלו שנאספו עבור ביקורת של מיקרו-בועות לא מכוונות. יתרה מכך, נמצא כי קישור של מיקרו-בועות המכוונות ל-endoglin היה גבוה משמעותית בעוברי ogly plus plus בהשוואה לעוברי ogly plus minus.לאחר רכישת המיומנות, ניתן להזריק ולדגם כל עובר תוך 15 דקות, במידה והטכניקה מבוצעת כהלכה.

contrast-imaging-in-mouse-embryos-using-high-frequency-ultrasound

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

בניתוח הישרדות ברחם אצל עכברים מאפשר מניפולציה המולקולרי של ביטוי גנים במהלך ההתפתחות. כאן אנו מתארים את השימוש בתדר גבוה הדמיה אולטרסאונד כדי להנחות את הזריקה של וקטורים retroviral לתוך המוח העכבר ביום עובריים (E) 9.5.

אולטרסאונד מונחה Microinjection לתוך forebrain העכבר בתוך הרחם ב E9.5

מוות עובר ולידה הוא תכונה נפוצה כאשר לומדים שינויים גנטיים המשפיעים על התפתחות לב. הדמית אולטרסאונד בתדר גבוה השתפרה רזולוצית 2-D ויכולה לספק מידע מצוין על התפתחות מוקדמת ולב היא שיטה אידיאלית כדי לזהות את ההשפעה על מבנה ותפקוד לב לפני המוות.

אקו העוברי Murine

סרטון זה מדגים הליך להזרקת חומרי ניגוד מיקרו-בועתיים לעובר עכבר מבודד בשלב מאוחר של ההיריון. הדמיית אולטרסאונד המבוססת על סוכן ניגוד מיקרו-בועתי מסייעת לדמיין ולאפיין את סביבת כלי הדם של העובר.

הזרקת מיקרו-בועות לעוברי עכברים מבודדים: טכניקה להעברת חומרי ניגוד מיקרו-בועתיים לתוך כלי הדם של עוברי מורין חיים

בסרטון זה, אנו מדגימים אולטרה-סאונד בתדירות גבוהה כדי לדמיין אתרי השתלת עוברים במודל מורין בהריון. טכניקת הדמיה זו מזהה בהצלחה הריון בר קיימא ומאפיינת אתרי השתלת עוברים במהלך הריון מורין מוקדם.

אולטרה-סאונד בתדירות גבוהה מבוסס אפיון הריון מוקדם: טכניקה לחקר השתלת עוברים והתקדמות הריון במודל מורין בהריון

אולטרסאונד בתדירות גבוה במיוחד הוא כלי הדמיה חיה רב עוצמה כדי לבחון מומים לב בבעלי חיים קטנים. noninvasiveness שלו מאפשר שמירה על המצב הפיזיולוגי של עוברים. בזאת, אנו מציגים את השימוש באולטרסאונד M-mode כדי למדוד את קצב הלב של עוברים בE18.5 ברחם.

במדידת רחם של קצב לב בעכבר על ידי אקו M-המצב פולשנית

עכברים נמצאים בשימוש נרחב ללמוד ביולוגיה הריונית. עם זאת, סיום ההריון נדרשת עבור מחקרים כאלה אשר מונע חקירות האורך, מחייבת השימוש במספר גדול של בעלי חיים. לכן, אנו מתארים שיטה לא פולשנית של בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה לגילוי מוקדם ומעקב אחר האירועים שלאחר ההשתלה העכבר בהריון.

שימוש הרומן של בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה תלת מימדי אפיון בתחילת ההריון העכבר

אולטראסאונד בתדירות גבוהה הדמיה של העכבר עוברית השתפרה דימות ברזולוציה, יכול לספק אפיון פולשני מדויק של התפתחות הלב, פגמים מבניים. פרוטוקול המתוארים במסמך זה מיועדת לביצוע בזמן אמת עוברי עכברים אקוקרדיוגרפיה ויוו.

הדמיה באמצעות מערכת סאונד בתדירות גבוהה (30 / 45MHZ) וכלי דם עוברי העכבר

כאן נתאר את הטכניקה של אולטראסאונד בתדירות גבוהה עבור ויוו ניתוח של העוברים בעכברים. שיטה זו מאפשרת את המעקב של עוברים הניתוח של היפרדות פרמטרים, כמו גם זרימת דם אימהי ו העובר במהלך ההריון.

אולטרסאונד בתדירות גבוהה לניתוח של התפתחות עוברית היפרדות In Vivo

אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יכול לעזור לייעל ניסויים הדורשים עכברים מתוזמן בהריון על ידי קביעת מצב ההריון, גיל ההיריון, ואובדן הריון. מוצג כאן הוא פרוטוקול כדי להמחיש שיטות להערכת הריונות העכבר, כמו גם מלכודות פוטנציאליות (חפצי תמונה) שעשויים לחקות הריון.

העכבר שלי בהריון? הערכת אולטראסאונד בתדר גבוה

פרוטוקול זה מתאר שלוש שיטות כיצד להשיג ולהשתמש בעוברי עוף בני 5 עד 8 ימים ובממברנה הכוריאואלנטואית שלהם (CAM) כמודל in vivo לחקר הדמיית אולטרסאונד משופרת ניגודיות ואספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות.

הכנת עוברי עוף אקס אובו וכלי קרום כוריואלנטואיים כמודל In Vivo להדמיית אולטרסאונד משופר ניגודיות ומחקרי אספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות

אנו מציגים פרוטוקול מפורט לתרבית והדמיית עוברי עכבר המאפשר הדמיה תלת ממדית + זמן של תאי אב לבביים. ערכת כלי וידאו זו מתייחסת למיומנויות המפתח הנדרשות להדמיה חיה מוצלחת שאחרת קשה לרכוש מפרסומים של טקסט בלבד.

הדמיה חיה של אבות לב מוקדמים בעובר העכבר

למד הדמיית אולטראסאונד מוגברת ניגודיות בעכבר עוברים באמצעות זריקת מיקרו-בועות לרשת הדם השליה. שיטה זו מאפשרת מדידת פרמטרי הדף ואבחון סמנים מולקולריים כלי דם בעוברים.

הדמיה ניגודיות בעכבר עוברים באמצעות תדר גבוהים אולטראסאונד

גלה סרטונים נוספים