Name: עצבי פעילות הרבייה בהיפוקמפוס הכנה פרש בחודר מיקרו-אלקטרודה Array (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: למדו את שיטת פרישת ההיפוקמפוס בעכברים לרישום פעילות עצבית באמצעות מערך מיקרו-אלקטרודות חודרות. טכניקה זו מאפשרת מעקב סימולטני בשני הכיוונים האורכי והרוחבי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי) מענק 1R01NS060757-01 ועל ידי הקתדרה שהוענקה על ידי E.L. Lindseth לדומיניק מ. דורנד. אנו מודים למעבדה של ד"ר אנדרו מ. רולינס על העזרה בהדמיית OCT.

הערה: בעלי חיים פרוטוקולי ניסוי נבדקו ואושרו על ידי ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים המוסדיים באוניברסיטה. עכברי CD1 של שני מינים בגיל P10 P20 למשמשים במחקר זה. 1. פתרונות לכירורגיה והקלטה ניסויית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן חיץ נורמלי מלאכותי נוזל השדרתי (aCSF) המכיל (מ&quot;מ): 124 NaCl, KCl 3.75, 1.25 KH 2 PO 4, 4 MgSO 2, NaHCO 3 26, דקסטרוז 10, וCaCl 2 2. השתמש aCSF הנורמלי הזה לשחזור רקמות לאחר נתיחה, כמו גם עבור מערכת שטיפה בתחילת הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן aCSF סוכרוז המשמש במהלך נתיחת ההיפוקמפוס ומכיל (מ&quot;מ): 220 סוכרוז, KCl 2.95, Nah 2 1.3 PO4, 4 MgSO 2, NaHCO 3 26, דקסטרוז 10, וCaCl 2 2. כדי לגרום לפעילות epileptiform בהכנת הרקמה בהיפוקמפוס בשלמות, להוסיף 4-aminopyridine (4-AP) לaCSF הנורמלי בהריכוז של 100 מיקרומטר. </li></ol> 2. נוהל כירורגי לHippocampus הכנת השלמים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרוק isoflurane (1 מיליליטר) לתוך התא בתחתית צנצנת זכוכית ייבוש (מס &#39;1 בחומרים ספציפיים וציוד) ולהשתמש במגבת נייר רגילה כדי לכסות את פני השטח של השלב התחתון כל כך החיה לא מקבלת במגע עם הנוזל. לאחר מכן, הנח את עכבר CD1 לתוך הצנצנת ולסגור את המכסה. לשמור על בעלי החיים בצנצנת הסגורה לדקות על 1 עד 2 דקות. כאשר תדירות נשימה היא אחד לשנייה בערך, להסיר את העכבר מהצנצנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על הבמה הניתוח ולערוף עם מספריים מתאימים. מייד לאחר עריפת הראש, הנח את הראש ל( 3-4 מעלות צלזיוס) קר כקרח, aCSF סוכרוז מחומצן לכ -30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספריים עדינים (מס &#39;5 בחומרים וציוד ספציפיים) כדי להסיר את העור בחלקו העליון של הגולגולת ולחתוך את הגולגולת לאורך קו האמצע של הראש, כמו גם בשני קצוות ליד הטמפואונת RAL. מלקחיים שימוש (מס &#39;6 בחומרים וציוד ספציפיים) לקלף את גולגולת החתך כלפי כל צד של הראש כדי לחשוף את המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מרית מעבדה מיקרו (מס &#39;8 בחומרים ספציפיים וציוד) לפער בין האונות הקודקודית של המוח והגולגולת לקלף בזהירות את המוח מהחלק התחתון של הגולגולת ולאחר מכן שחרר אותו על גבי מוכן (קר כקרח 3 -4 ° C) שלב כירורגית מכוסים בנייר רטוב מסנן (מס &#39;2 בחומרים ספציפיים וציוד). הסר את המוח הקטן עם להב קרח צונן ולהפריד בין שתי ההמיספרות על ידי חיתוך קו האמצע של המוח. ואז, במקום שתי ההמיספרות מופרדות לכוס מלאה aCSF סוכרוז קר כקרח מבעבע עם 95% O CO 2/5% 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח מחצית מחצי הכדור ומניחים על הבמה נייר סינון קר כקרח. מניחים מגבות נייר רגילות או נייר סינון סביב המוח למצוץ פתרון הנוסף. השתמש בשני כלים פיפטה זכוכית אש מלוטשת (מס &#39;10 בחומרים וציוד) כדי להפריד את הקליפה משאר חלק במוח המרכזי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר היפוקמפוס חשוף מהחלק הפנימי של קליפת המוח ולשים על הבמה קרה כקרח, מקום שתיים או שלוש טיפות של aCSF סוכרוז קר כקרח על הרקמה ולאחר מכן להסיר את פתרון נוסף סביב היפוקמפוס. חותך את הקשרים עם הקליפה בשני קצוות של ההיפוקמפוס. לאחר מכן, לנתח את ההיפוקמפוס מתוך המוח עם כלים מזכוכית מלוטש אש ולהסיר את החלק הנותר של המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את כל ההיפוקמפוס עם צד alveus פונה כלפי מעלה ומענית בהיפוקמפוס פונה כלפי מטה. מהירות שחרר שתיים או שלוש טיפות של aCSF סוכרוז קר כקרח על הרקמה שוב ולהסיר את הפתרון הנוסף סביב הרקמות באמצעות פיסת מגבת נייר. השתמש בכלי זכוכית מלוטש אש להתהפך כל ההיפוקמפוס כדי לחשוף את מענית (איור 1 ב, ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ אופטי רגיל, להכניס מחט מחוייט זכוכית (מס &#39;11 בMateri ספציפיals וציוד) לקצה אחד של מענית ולחתוך את חיבורי סיבים, מgyrus המשונן (DG) לsubiculum או שדה CA1, לאורך הכיוון של מענית (איור 1 ג). החל להב קר כקרח לקצץ את הקצוות במחיצה ובזמן של ההיפוקמפוס במידת צורך. הכנס לולאה מותאמת אישית עשה חוט מתכת (מס &#39;12 בחומרים ספציפיים וציוד) למענית הקיצוץ ולעצור בצד דרך DG מן הרקמה תוך החזקת סוף subiculum / CA1 של ההיפוקמפוס בכלי זכוכית מלוטשת אש (1D איור) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהמשך להליך התגלגלות לעיל, להוסיף שתיים או שלוש טיפות נוספות של aCSF סוכרוז קר כקרח על הרקמות ולהסיר את הפתרון הנוסף סביב הרקמה. לאחר מכן, חתוך את ההיפוקמפוס פרש עם הלהב קר כקרח בקצוות (איור 1E) ולמקם את ההכנה על ידי מרית לתוך התא מתאושש מלא aCSF הנורמלי ומבעבע עם 95% O 2/5% CO 2 בRT (כ 25 ° C). השאררקמת ההיפוקמפוס פרש להתאושש על 1 שעות לפני הצבתו בתא ההקלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את חצי הכדור האחר במוח ולהשתמש בו כדי לעבור את שלבים 2.5-2.9. בדרך כלל, לוקח על 1 עד 2 דקות כדי לסיים את ההליך כולו להתגלות היפוקמפוס אחת ושחרר aCSF סוכרוז קר כקרח ברציפות כדי לשמור על הרקמה מחומצן והתייבשות. </li></ol> הגדרת מערכת הניסויית 3. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבק PMEA מפוברק מותאם אישית על חבילת מערך רשת סיכה (PGA) ולהשתמש מליטה חוט מיקרו לחיבור כל משטח מmicroelectrode יחיד לכרית של סיכה על האריזה (איור 3). לאחר מכן, הכנס את החבילה לתוך השקע בלוח מעגלים מותאם אישית 13. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנפרד להתחבר כל microelectrode למסננים שלה עם תדרים חתוכים לעבור להקה מרץ 1 עד 4 קילוהרץ ומגברים עם רווח של 100 על המנהג עשה המעגלים 13. עבר דיגיטציה היציאה האנלוגית מהמעגלים על ידי / המרה Derting מערכת, ולרכוש ולאחסן את הנתונים במחשב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבק תא הקלטת פלסטיק מחוייט סביב המערך עם כניסה וצינורות לשקע לזרימת הפתרון (איור 4 א). השתמש בלפחות שני בקבוקים כדי לשמור על פתרונות שונים במערכת, ולהצטרף ולשלוט בצינורות הפלט של הבקבוקים על ידי תלת-סתום. חבר את הפלט של תלת-השסתום למערכת צינורות עם תא עירוי המנחה את הפתרון לתא ההקלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בין שלושה שסתום והכניסה של חדר ההקלטה, להוסיף מחמם חשמלי כדי לחמם את הפתרון לטמפרטורה מבוקרת (35 ° C) לפני הפתרון מודרך לתא ההקלטה. צרף את היציאה של תא ההקלטה לצינור ואקום כדי לאסוף את הפתרון לתוך בקבוק מחובר צינור ואקום. לא ממחזר כל פתרון בכל ניסוי במחקר זה. </li></ol> 4. הצבת Hippocampus מצב הפרישה על PMEA כדי להקליט את הפעילות עצבית </p&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את ההתקנה הניסיונית, למלא בקבוק אחד עם aCSF הנורמלי ועוד בקבוק עם 4-AP aCSF. בשני הבקבוקים, בועה 95% O 2/5% CO 2 מתחילת כל ניסוי מאוד. השתמש במחבר תלת-סתום לשלוט בי הפתרון ייבחר במהלך ניסוי. חבר צינור ואקום ביציאה של החדר לשאוב הפתרון למכל אבק. מחממים את הצינור לפני מסירתו לחדר ההקלטה ולשמור על הפתרון ברמת טמפרטורה מבוקרת (35 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הכניסה והיציאה של הקלטת תא סגורות, להשתמש טפטפתי טפטפת זכוכית מותאמת אישית כדי להעביר ולמקם את ההיפוקמפוס המקופל לתוך תא ההקלטה. מתחת למיקרוסקופ, מקם את ההיפוקמפוס פרש בעזרת מברשת צבע קטנה רגילה תוך הרקמה צף בפתרון. הנח את ההיפוקמפוס פרש עם צד alveus פונה כלפי מטה, אזור CA3 מצביע משם, ושדה CA1 והצביע לעבר החוקר. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> למצוץ בזהירות הפתרון בתא באמצעות פיפטה ואקום מהקצה של חדר ההקלטה להוריד את רמת הפתרון עד הקאמרית הוא מיובש והרקמה היא הורידה על גבי המערך. ואז, בזהירות במקום עוגן רקמה מותאמת אישית (איור 4) (מס &#39;14 בחומרים ספציפיים וציוד) על גבי הרקמה להחזיק היפוקמפוס פרש על גבי המערך. לשים כמה טיפות של תמיסה לתוך תא ההקלטה כדי למלא אותו, ובהדרגה לפתוח את הכניסה ויציאה להתאים קצב זרימה לכשתי טיפות לשנייה בתא טפטוף IV. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הרקמה בחדר ההקלטה עם aCSF הנורמלי כ 1 דקות כדי להתאושש, ולאחר מכן לעבור את אספקת הפתרון ל4-AP aCSF המומס ולהתאים את קצב הזרימה כראוי. דגירה הרקמה ב 4-AP מומסת aCSF לכ -5 עד 10 דקות ולאחר מכן החוקר יכול להפעיל את התוכנה כדי להקליט את האות כאשר פעילות ספונטנית מופיעה. </li></ol> 5. הסרתרקמה מPMEA לאחר ניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשלוט עוגן הרקמה על ידי micromanipulator ולהרים רקמות מתא ההקלטה בהדרגה. כבה את שניהם כניסה ויציאה להפסקת הזרימה בתא ההקלטה. חדר ההקלטה צריך להיות מלא עם פתרון או להוסיף כמה טיפות של פתרון ללמלא את התא אם תא ההקלטה אינו מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במברשת צבע קטנה כדי להרים כל פינה של הרקמה. אם הרקמה לא צף בפתרון, ואז להעסיק את השפופרת הריק לייבוש קאמרי בזהירות עם הרקמה עדיין יושבת על המערך. לאחר מכן, פתח בזהירות את הכניסה כדי למלא בהדרגה את החדר וסגר את הכניסה כדי לעצור את הזרם כאשר תא ההקלטה מלא. החל מברשת הצבע הקטנה כדי להרים כל פינה של הרקמה שוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 5.2 עד הרקמה מנותק מהמערך וצף בפתרון. אם הרקמה צף בפתרון, ולאחר מכן להשתמש צינור הוואקום למצוץ את הרקמה משם. t הפתוחהוא זורם בכניסה ולפתוח את הוואקום בשקע. לשטוף את המערכת עם מים מזוקקים ולייבש אותו. </li></ol>

<ol><li>Richardson, K. A., Schiff, S. J., Gluckman, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+traveling+waves+in+the+Mammalian+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+Lett%22%5BJournal%5D)">Control of traveling waves in the Mammalian cortex.</a> Phys Rev Lett. 94 (2), 028103-028112 (2005).</li>
<li>Luhmann, H. J., Dzhala, V. I., Ben-Ari, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+propagation+of+4-AP-induced+epileptiform+activity+in+neonatal+intact+limbic+structures+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Generation and propagation of 4-AP-induced epileptiform activity in neonatal intact limbic structures in vitro.</a> Eur J Neurosci. 12 (8), 2757-2768 (2000).</li>
<li>Grinvald, A., Manker, A., Segal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+the+spread+of+electrical+activity+in+rat+hippocampal+slices+by+voltage-sensitive+optical+probes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Visualization of the spread of electrical activity in rat hippocampal slices by voltage-sensitive optical probes.</a> J Physiol. 333, 269-291 (1982).</li>
<li>Gloveli, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthogonal+arrangement+of+rhythm-generating+microcircuits+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Orthogonal arrangement of rhythm-generating microcircuits in the hippocampus.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102 (37), 13295-13300 (2005).</li>
<li>Amaral, D. G., Witter, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+three-dimensional+organization+of+the+hippocampal+formation%3A+a+review+of+anatomical+data%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The three-dimensional organization of the hippocampal formation: a review of anatomical data.</a> Neuroscience. 31 (3), 571-591 (1989).</li>
<li>Albani, S. H., McHail, D. G., Dumas, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+studies+of+the+hippocampus+and+hippocampal-dependent+behaviors%3A+insights+from+interdisciplinary+studies+and+tips+for+new+investigators%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">Developmental studies of the hippocampus and hippocampal-dependent behaviors: insights from interdisciplinary studies and tips for new investigators.</a> Neurosci Biobehav Rev. 43, 183-190 (2014).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation+of+Epileptiform+Activity+Can+Be+Independent+of+Synaptic+Transmission%2C+Gap+Junctions%2C+or+Diffusion+and+Is+Consistent+with+Electrical+Field+Transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Propagation of Epileptiform Activity Can Be Independent of Synaptic Transmission, Gap Junctions, or Diffusion and Is Consistent with Electrical Field Transmission.</a> J Neurosci. 34 (4), 1409-1419 (2014).</li>
<li>Kibler, A. B., Durand, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthogonal+wave+propagation+of+epileptiform+activity+in+the+planar+mouse+hippocampus+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Orthogonal wave propagation of epileptiform activity in the planar mouse hippocampus in vitro.</a> Epilepsia. 52 (9), 1590-1600 (2011).</li>
<li>Wang, D., McMahon, S., Zhang, Z., Jackson, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+voltage+sensor+imaging+of+electrical+activity+from+neurons+in+hippocampal+slices+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Hybrid voltage sensor imaging of electrical activity from neurons in hippocampal slices from transgenic mice.</a> J Neurophysiol. 108 (11), 3147-3160 (2012).</li>
<li>Wingenfeld, K., Wolf, O. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+%2C+memory%2C+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stress , memory, the hippocampus.</a> Front Neurol Neurosci. 34, 109-121 (2014).</li>
<li>Liu, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+dynamics+of+high-K%2B-induced+epileptiform+discharges+in+hippocampal+slice+and+the+effects+of+valproate%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Bull%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal dynamics of high-K+-induced epileptiform discharges in hippocampal slice and the effects of valproate.</a> Neurosci Bull. 29 (1), 28-36 (2013).</li>
<li>Oka, H., Shimono, K., Ogawa, R., Sugihara, H., Taketani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+planar+multielectrode+array+for+extracellular+recording%3A+application+to+hippocampal+acute+slice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A new planar multielectrode array for extracellular recording: application to hippocampal acute slice.</a> J Neurosci Methods. 93, 61-68 (1999).</li>
<li>Kibler, A. B., Jamieson, B. G., Durand, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+aspect+ratio+microelectrode+array+for+mapping+neural+activity+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A high aspect ratio microelectrode array for mapping neural activity in vitro.</a> J Neurosci Methods. 204 (2), 296-305 (2012).</li>
<li>Schechter, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potassium+channel+blockers+4-aminopyridine+and+tetraethylammonium+increase+the+spontaneous+basal+release+of+%5B3H%5D5-hydroxytryptamine+in+rat+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">The potassium channel blockers 4-aminopyridine and tetraethylammonium increase the spontaneous basal release of [3H]5-hydroxytryptamine in rat hippocampal slices.</a> J Pharmacol Exp Ther. 282 (1), 262-270 (1997).</li>
<li>Perreault, P., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4-aminopyridine-induced+epileptiform+activity+and+a+GABA-mediated+long-lasting+depolarization+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">4-aminopyridine-induced epileptiform activity and a GABA-mediated long-lasting depolarization in the rat hippocampus.</a> J Neurosci. 12 (1), 104-115 (1992).</li>
<li>Chesnut, T. J., Swann, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epileptiform+activity+induced+by+4-aminopyridine+in+immature+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Res%22%5BJournal%5D)">Epileptiform activity induced by 4-aminopyridine in immature hippocampus.</a> Epilepsy Res. 2 (3), 187-195 (1988).</li>
<li>Nam, Y., Wheeler, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Microelectrode+Array+Technology+and+Neural+Recordings%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">In Vitro Microelectrode Array Technology and Neural Recordings.</a> Crit Rev Biomed Eng. 39 (1), 45-62 (2011).</li>
<li>Gonzalez-Sulser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+neuron+firing+and+local+field+potentials+in+the+in+vitro+4-aminopyridine+epilepsy+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Hippocampal neuron firing and local field potentials in the in vitro 4-aminopyridine epilepsy model.</a> J Neurophysiol. 108 (9), 2568-2580 (2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הפיתוח של תכשיר היפוקמפוס המקופל, שבו צירי האורך ורוחב של ההיפוקמפוס נשמרים בשילוב עם מערך microelectrode חודר, מספק כלי רב עוצמה כדי לחקור את קשרי האנטומיה או התפשטות עצבית בהיפוקמפוס 7. הליך התגלגלות גם לגבי ללימוד היפוקמפוס בעכברים בוגרים. מחקרים שנעשה לאחרונה עם הכנה זו הראו כי פעילות epileptiform המושרית-4-AP יכולה להפיץ בחזית גל אלכסונית על פני כל השטח של ההיפוקמפוס המקופל (איור 6) 7,8. מחקרים אלה הראו כי ההיפוקמפוס פרש שלם מספק יתרונות...

הבנת ההולכה או התפשטות העצבית של אותות עצביים היא קריטית לקביעת המנגנון של תקשורת עצבית בשני התפקוד הנורמלי ומצבים פתולוגיים במוח 1-3. ההיפוקמפוס הוא אחד המבנים הנחקרים ביותר בהרחבה במוח מאז שהיא ממלאת תפקיד בסיסי בכמה תפקודי מוח כגון זיכרון, ומעקב במרחב ובמעורב במספר שינויים פתולוגיים באופן דרמטי את ההשפעה על התנהגות, כמו גם 1,6. אמנם, ההיפוקמפוס מציג ארגון מורכב, האלמנטים השונים של המבנה שלו ניתן לזהות בקלות והגישה בהכנת פרוסה 4-6. בכיוון הרוחבי של ההיפוקמפוס, פעילות עצבית ידועה להפיץ דרך המסלול תלת-סינפטי המרכיב את המשונן gyrus (DG), CA3, CA1 andsubiculum 4,5. הוא האמין כי שידור סינפטי והולכת axonal לשחק תפקיד מרכזי לcommunicatiבמעגל רוחבי זה 4,6. עם זאת, התפשטות של אות עצבית מתרחשת בשני כיוונים רוחביים ואורך 4,6. משמעות הדבר הוא כי ההיפוקמפוס לא יכול להיחקר באופן מלא על ידי שימוש בהכנות פרוסה המגבילות את התצפית לכיוון מסוים של התפשטות 4. פרוסה האורך פותחה כדי לחקור את מסלולי axonal לאורך ציר אורך 5. חוקרים הבחינו תנודות גמא ותטא התנהגות ספציפית בעיקר לאורך רוחבי וצירה אורך בהתאמה 6. התנהגויות אלו נחקרו בנפרד, אך גישה בו זמנית לשני הכיוונים היא חיונית כדי להבין התנהגויות אלו. אפילו עם הפיתוח של תכשיר ההיפוקמפוס שלם, שקשה לפקח על ההתפשטות בכל רחבי הרקמה בשל מקופל המבנה של ההיפוקמפוס 4. ההיפוקמפוס פרש מספק גישה לתאי העצב ארוזבצורה של 7,8 שכבת תאים דו-ממדי שטוחה. על ידי התגלגלות gyrus המשונן (DG) (איור 1), ההיפוקמפוס מאמץ צורה שטוחה עם תצורה מלבנית שבשני רוחבי וחיבורי אורך להישאר שלמים עם שכבת תאי הפירמידה מסודרת בגיליון דו-ממדי המכיל את שני CA3 וCA1, משאיר פיסת הרקמה עצבית שיכול לשמש כדי לחקור התפשטות עצבית שטוחה (איור 2) 8. פעילות עצבית אז יכולה להיות במעקב עם טפטפות פרט זכוכית, מערכי microelectrode, אלקטרודות גירוי, כמו גם צבעי מתח רגישים (VSD) 3,7,8. בנוסף, מחוון מתח מקודד גנטי מעכברים הטרנסגניים ניתן להשתמש כדי לעקוב אחר התפשטות הדפוס 9. התצורה שטוחה של הרשת בהיפוקמפוס המקופלת היא גם מתאימה להקלטת שיטה אופטית אלא גם למערך microelectrode. Most של המערכים הזמינים המסחרית מיוצר עם אלקטרודות פרופיל שטוח או נמוך והוא יכול להקליט פעילות עצבית בשתי פרוסות רקמה ונוירונים בתרבית 10-12. עם זאת, יחס אות לרעש (SNR) יורד כאשר האותות המתקבלים מרקמה שלמה מאז סומה של תאי העצב ממוקמים עמוקה יותר לתוך הרקמה. מערכי אלקטרודה microelectrode עם יחס רוחב-גובה גבוה נדרשים כדי לשפר את יחס האות לרעש. ברוח זו, מערך microelectrode חודר (PMEA) פותח במעבדה שלנו, ומספק את היכולת לחקור ישירות לתוך הרקמות על ידי הוספת 64 קוצים בקוטר של 20 מיקרומטר וגובה של 200 מיקרומטר להיפוקמפוס פרש 7,13 . יש מערך microelectrode זה SNR גבוה יותר בהשוואה להדמית הצבע רגישה המתח ויחס האות לרעש נותר יציבה במהלך ניסוי 7,13. השילוב של ההכנה בהיפוקמפוס המקופלת וPMEA מספק דרך חדשה להשקיעIgate ההתפשטות העצבית על מטוס דו-ממדי. ניסויים באמצעות טכניקה זו כבר הניבו תוצאות משמעותיות על המנגנונים של התפשטות אות עצבית בהיפוקמפוס לפי פעילות עצבית יכולה להפיץ באופן עצמאי של סינפסות הסינפטי או חשמלית 7.

<table><tbody><tr><td>צנצנת ייבוש</td><td>LABRECYCLERS בע"מ</td><td>5410</td><td>יש להניח מגבות נייר רגילות בתחתית הצנצנת לשימוש בהרדמה של בעלי חיים.</td></tr><tr><td>להב ושלב כירורגי מתוצרת Custome לפתיחת ההיפוקמפוס</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>צלחת פטרי מונחת הפוכה (במרכז) בקרח עם נייר סינון רטוב מונח מעליו.</td></tr><tr><td>תא התאוששות רקמות בהתאמה אישית</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>צינורות פלסטיק הודבקו עם רשת פלסטיק בתחתית ובעבעו עם 95% O2/5% CO2 ב-aCSF.</td></tr><tr><td>הפעלה ישרה&nbsp; מספריים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S17336B&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; מדקו אינסטרומנטס מס': 81995&nbsp;</td><td>מספריים אלה משמשים ל &nbsp; &nbsp; ערפו את ראשי העכברים.</td></tr><tr><td>אינטגרה מילטקס גולדמן-פוקס&nbsp; מספריים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-460-517&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; מילטקס בע"מ&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; מס ':5-SC-320</td><td>מספריים אלה משמשים לחיתוך גולגולת העכברים.&nbsp;</td></tr><tr><td>Miltex מלקחיים לכריתת רחם</td><td>קלפלין ציוד רפואי</td><td>CESS-722033-00001</td><td>מלקחיים אלה משמשים לקילוף הגולגולת החתוכה כדי לחשוף את המוח</td></tr><tr><td>מיקרו מרית</td> בריאות <td></td><td>קרדינלית</td><td>מיקרו מרית זו משמשת להעברת כל המוח של חצי כדור לתוך תא ה-recorering.&nbsp;</td></tr><tr><td>Frey Scientific נירוסטה חצי מיקרו מרית</td><td>קרדינל בריאות</td><td></td><td>חצי מיקרו מיקרו מרית זו משמשת להעברת ההיפוקמפוס הנפרש לתוך הגלוקוז aCSF בתא ההתאוששות.</td></tr><tr><td>מברשת צבע קטנה</td><td>של Lowe's</td><td>tem #:&nbsp; 105657&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; דגם #:&nbsp; 90219</td><td>זה עם הגודל הקטן ביותר בחבילת מברשת צבע רגילה</td></tr><tr><td>כלי עזרה מזכוכית מלוטשת אש</td><td>N / A N</td><td>/ A</td><td>כלי זה היה מלוטש באש ועשוי מפיפטות הזכוכית הרגילות של פסטר.</td></tr><tr><td>מחט זכוכית בהתאמה אישית</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>כלי זה היה מלוטש באש ועשוי מפיפטות הזכוכית הרגילות של פסטר.</td></tr><tr><td>כלי זכוכית בהתאמה אישית עם לולאת חוט מתכת</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>כלי זה היה מלוטש באש ועשוי מפיפטות הזכוכית הרגילות של פסטר עם לולאת חוט מתכת מעוצבת מחדש.</td></tr><tr><td>טפטפת תמיסת זכוכית בהתאמה אישית</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>כלי זה היה עשוי מפיפטות הזכוכית הרגילות של פסטר עם קצותיו חתוכים וראש גומי מחובר לקצה החתוך.</td></tr><tr><td>עוגן רקמות בהתאמה אישית</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>רשת סיבי ניילון הודבקה על טבעת חוט נחושת מבודדת. עוגן הרקמה הוחזק על ידי מיקרומניפולטור.</td></tr><tr><td>מערך מיקרואלקטרודות בהתאמה אישית</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>פרטים נוספים על המערך אנא עיין ב &nbsp; Kibler, et al, 2011.&nbsp;</td></tr><tr><td>מעגלי מסנן ומגברים בהתאמה אישית למערך</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>פרטים נוספים על המערך אנא עיין ב&nbsp; Kibler, et al, 2011.&nbsp;</td></tr><tr><td>מעבד רכישת נתונים 3400a</td><td>Microstar Laboratories</td><td>N/A</td><td>זוהי מערכת רכישת נתונים מלאה עם ממיר A/D.</td></tr></tbody></table>

עצבי פעילות הרבייה בהיפוקמפוס הכנה פרש בחודר מיקרו-אלקטרודה array

Neural Activity Propagation in an Unfolded Hippocampal Preparation with a Penetrating Micro-electrode Array

פרוטוקול זה מתאר שיטה להכנה חדשה בהיפוקמפוס ההכנה השטוח מבחנה בשילוב עם מערך מיקרו-במכונה כדי למפות פעילות עצבית בהיפוקמפוס. ההכנה הפרוסה בהיפוקמפוס רוחבית היא הכנת רקמה הנפוצה ביותר ללמוד אלקטרופיזיולוגיה היפוקמפוס. פרוסה בהיפוקמפוס אורך פותח גם כדי לחקור קשרים אורך בהיפוקמפוס. ניתן גם לשמור על ההיפוקמפוס העכבר שלם במבחנה בגלל עוביו מאפשר דיפוזיה חמצן נאותה. עם זאת, שלושת תכשירים אלה אינם מספקים גישה ישירה להתפשטות עצבית שכן חלק מהרקמה חסר או מקופל. ההיפוקמפוס שלם המקופל מספק הן רוחבי וקשרים ארוכי טווח בתצורה שטוחה לגישה ישירה לרקמות לנתח את מלוא היקף התפשטות אות בהיפוקמפוס במבחנה. על מנת לפקח על הפעילות העצבית מt ביעילותהוא שכבת תאים, מנהג עשה חודר מערך מיקרו-אלקטרודה (PMEA) היה מפוברק ופנה להיפוקמפוס פרש. PMEA עם 64 אלקטרודות של 200 מיקרומטר בגובה יכול להקליט פעילות עצבית עמוק בתוך ההיפוקמפוס העכבר. שילוב הייחודי של הכנה בהיפוקמפוס מקופלת וPMEA מספק כלי חוץ הגופייה חדש ללמוד את המהירות וכיוון של התפשטות של פעילות עצבית באזורי CA1-CA3 דו-ממדיים של ההיפוקמפוס עם אות גבוהה יחס רעש.

הנתונים המוצגים בדמויות כאן נרשמו בהכנת היפוקמפוס פרש עם 4-AP (100 מיקרומטר) aCSF הוסיף במהלך הדגירה של הרקמה בחדר ההקלטה ב RT (25 ° C). בדרך כלל פעילות מתחילה תוך 5 דקות, אבל בכמה רקמות בהיפוקמפוס מבעלי החיים המבוגרים זה עלול לקחת זמן רב יותר. הירי העצבי הנגרם על-4-AP נצפה עם PMEA הוא אותו כפי שדווח בעבר 14,15. מאז יש לי אלקטרודות לגובה של 200 מיקרומטר, הטיפים אלקטרודה נמצאים ממש מתחת לשכבת התאים (איור 3 ג) כי שכבת התאים היא בדרך כלל 250 עד 300 מיקרומט...

פיתחנו היפוקמפוס פרש במבחנה השומר מערך CA1-CA3 של נוירונים. בשילוב עם מערך מיקרו-אלקטרודה החודרת, פעילות עצבית יכולה להיות במעקב בשתי אוריינטציות אורכי ורוחביות. שיטה זו מספקת יתרונות על פני הכנות פרוסה בהיפוקמפוס כמו ההתפשטות בכל היפוקמפוס ניתן להקליט בו זמנית.

עצבי פעילות הרבייה בהיפוקמפוס הכנה פרש בחודר מיקרו-אלקטרודה Array

This protocol describes a method for preparing a new in vitro flat hippocampus preparation combined with a micro-machined array to map neural activity in ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להציג את התהליך של פתיחת היפוקמפוס מכרסמים והנחת תכשיר הרקמה השטוחה על מערך המיקרו-אלקטרודות החודר. להקלטה. זה מושג על ידי בידוד היפוקמפוס של עכבר ממחצית המוח שלו.השלב השני הוא לפרוש את המבנה המעוקל של ההיפוקמפוס עם כלים מותאמים אישית. לאחר מכן, ההיפוקמפוס שנפרש מועבר לתא ההקלטה ומונח על מערך ההקלטה. השלב האחרון הוא להסיר את ההיפוקמפוס שנפרש מהמערך לאחר הניסוי.בסופו של דבר, שיטת מיפוי נורמליזציה אינדיבידואלית משמשת בניתוח נתונים כדי להראות את התפשטות הפעילות העצבית שנרשמה על ידי מערך המיקרו-אלקטרודות החודר. ובכן, היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת לנו להקליט פעילות עצבית בשני כיוונים רוחביים ואורכיים. כדי לראות את ההתפשטות האמיתית של הפעילות העצבית, אתה צריך היפוקמפוס שלם, לפרוש את צנצנות השקע ולהשכיב שטוח לתוך תא הקלטה, ואז ההתפשטות תתרחש הן בכיוונים רוחביים והן בכיוונים אורכיים.ואז הצלחנו להבין את מהירות ההתפשטות של הרקמה. היינו בפעילות בשני הכיוונים, והצלחנו לחקור את מנגנוני ההתפשטות, במיוחד את המנגנונים הסינפטיים הלא-סינפטיים. הצלחנו לראות פעילות מתפשטת עם התמסורת הסינפטית הזו עם צמתי הפער הזה, ובגלל המהירות, אנחנו יודעים שזה לא דיפוזיה.אז עכשיו אנחנו מנסים לפענח את המנגנונים האמיתיים של ההתפשטות הזו. בדרך כלל, אנשים חדשים בטכניקה זו יתקשו בגלל ההליכים המאתגרים של פתיחת ההיפוקמפוס ומניחים את הכנת הרקמה השטוחה על מערך המיקרו-אלקטרודות החודר הזה מבלי לפגוע ברקמה או במערך. כדי להתחיל בהליך זה, הנח את ראש העכבר בסוכרוז מחומצן קר כקרח.CSF משתמש במספריים עדינים כדי להסיר את עור הגולגולת. לאחר מכן, חותכים את הגולגולת לאורך קו האמצע ואת שני הקצוות ליד האונה הטמפורלית. לאחר מכן מקלפים את הגולגולת החתוכה לכיוון צידי הראש.על מנת לחשוף את המוח הסר בזהירות את המוח מהגולגולת בעזרת המרית. לאחר מכן, הניחו את המוח על שלב כירורגי קר כקרח מכוסה בנייר סינון רטוב. הסר את המוח הקטן בעזרת להב צונן קרח.לאחר מכן הפרד את שתי ההמיספרות על ידי חיתוך קו האמצע של המוח. לאחר מכן הניחו את שתי ההמיספרות המופרדות בכוס מלאה בסוכרוז קר כקרח. CSF בעבע עם 95% חמצן, 5% פחמן דו חמצני.העבירו חצי כדור אחד לשלב הקר כקרח מכוסה בנייר פילטר. הניחו מגבות נייר רגילות או ניירות סינון סביב המוח כדי לספוג את התמיסה הנוספת. לאחר מכן, השתמשו בשתי פיפטות זכוכית מלוטשות אש כדי להפריד את קליפת המוח מהחלק המרכזי של המוח על מנת לחשוף את ההיפוקמפוס.לאחר מכן, מרחו שתיים עד שלוש טיפות של CSF קר כקרח על הטישו, והסירו תמיסה נוספת. חתכו את הקשרים עם קליפת המוח בשני קצוות ההיפוקמפוס. לאחר מכן נתחו את ההיפוקמפוס מהמוח בעזרת כלי הזכוכית המלוטשים באש.לאחר מכן הפרד את כל ההיפוקמפוס כשהצד החיצוני שלו פונה כלפי מעלה וחריץ ההיפוקמפוס פונה כלפי מטה יש למרוח במהירות שתיים עד שלוש טיפות של CSF קר קרח על הרקמה שוב, ולהסיר את התמיסה הנוספת סביבו. לאחר מכן השתמש בכלי הזכוכית המלוטשת באש כדי להפוך את כל ההיפוקמפוס. כדי לחשוף את הסולקוס, השתמש בלהב קר כקרח כדי לקצץ את קצוות המחיצה והרקתית של ההיפוקמפוס.במידת הצורך, הכנס מחט זכוכית בהתאמה אישית לתוך הסולקוס וחתוך את מסלול הסיבים מ-DG לשלוש. לאחר מכן השתמשו בלולאת חוט מתכת כדי למשוך את ה-DG ולפרוש את ההיפוקמפוס. כל תהליך הניתוח נמשך בדרך כלל כשתי דקות.מרחו עוד שתיים עד שלוש טיפות של סוכרוז קר כקרח A CSF על הרקמה והסירו את התמיסה הנוספת סביבה. לאחר מכן חתוך את שולי ההיפוקמפוס הפרוש עם להב קר כקרח. העבירו את התכשיר לתא ההתאוששות המלא ב-A CSF רגיל ומבעבע ב-95% חמצן, 5% פחמן דו חמצני בטמפרטורת החדר למשך שעה לפני העברתו לתא ההקלטה.בהליך זה, מלאו בקבוק אחד ב-A CSF רגיל ובקבוק אחר בארבע בועות AP A CSF. התמיסות עם 95% חמצן, 5% פחמן דו חמצני מתחילת הניסויים. השתמש במחבר תלת-שסתומי כדי לשלוט בפתרון שייבחר במהלך ניסוי.לאחר מכן, חבר צינור ואקום לשקע החדר. כדי להוציא את התמיסה למיכל אבק, יש לחמם את הצינור לפני העברת התמיסה לתא ההקלטה ולשמור אותה בטמפרטורה מבוקרת של 35 מעלות צלזיוס. לאחר סגירת הכניסה והיציאה של תא ההקלטה, השתמש בטפטפת פיפטה מזכוכית בהתאמה אישית כדי להעביר את ההיפוקמפוס שנפרש לתא ההקלטה.מתחת למיקום המיקרוסקופ, ההיפוקמפוס הפרוש כשהצד האלווי שלו פונה כלפי מטה כאזור של שלושה הפונים הצידה ושדה אחד המצביע לכיוון החוקר שואב בזהירות את התמיסה בתא באמצעות פיפטת ואקום מקצה תא ההקלטה עד שהתא מתייבש והרקמה מונחת על המערך. לאחר מכן הנח בזהירות עוגן רקמה מותאם אישית על גבי הרקמה כדי להחזיק את ההיפוקמפוס הפרוש על המערך. מלאו מחדש את תא ההקלטה בכמה טיפות תמיסה.פתח בהדרגה את הכניסה והיציאה כדי לכוונן את קצב הזרימה לכשתי טיפות לשנייה בתא הנסיעה לווריד. דגרו את הרקמה בתא ההקלטה עם CSF רגיל למשך כדקה. ואז החלף את הפתרונות.החל על ארבעה AP מומס A CSF והתאם את קצב הזרימה כראוי. דגרו את הרקמה בארבעה AP מומס CSF למשך כחמש עד 10 דקות לפני ההקלטה. כדי להסיר את הרקמה מה-PMEA, שלוט בעוגן הרקמה על ידי מיקרו מניפולטור והרם בהדרגה את העוגן מתא ההקלטה.כבה גם את הכניסה וגם את היציאה על מנת לעצור את הזרימה. בתא ההקלטה, השתמש במכחול קטן כדי להרים את פינת הרקמה. אם הרקמה אינה צפה בתמיסה, השתמש בצינור הוואקום כדי לייבש את החדר בזהירות כשהרקמה עדיין יושבת על המערך.לאחר מכן פתח בזהירות את הכניסה כדי למלא מחדש את החדר בהדרגה וסגר את הכניסה כדי לעצור את הזרימה. כאשר תא ההקלטה מלא, השתמש במברשת הקטנה כדי להרים את פינת הרקמה. שוב. אם הרקמה צפה בתמיסה, השתמש בצינור הוואקום כדי לשאוב את הרקמה.פתח את הזרימה בכניסה ואת הוואקום ביציאה. שוטפים את המערכת במים מזוקקים ומייבשים אותה. זוהי דוגמה לפעילות הספונטנית הנגרמת על ידי 100 מיקרומולרי ארבעה AP A CSF שהוקלטו מאחת האלקטרודות המיקרו הממוקמות באזור הדנדריטי הבסיסי עם יחס אות לרעש של 34.9 דציבלים.והנה הפעילויות המוגדלות במלבן האדום. אלה הנתונים הגולמיים ממיקרו אלקטרודה אחרת הממוקמת קרוב יותר לסומטה עם יחס אות לרעש של 27.2 דציבלים המוצגים. הנה דוגמה נוספת להקלטה המתקבלת מאלקטרודה הממוקמת בתוך השכבה הסומטית.בדוגמה זו, יחס האות לרעש הוא 18.53 דציבלים, והנה הרעש הבסיסי שנרשם ממיקרו אלקטרודה. לקו הבסיס יש בדרך כלל ערך שיא לשיא בין 150 ל -200 מיקרו וולט, והעכבה של אלקטרודה בודדת היא בסביבות 1 עד 2 מגה אוהם. סרטון זה מציג את ההתפשטות העצבית שהוקלטה עם המערך ולאחר מכן עובדה בשיטת נורמליזציה אינדיבידואלית.בניתוח נתונים, כל ההתפשטות על פני הרקמה כולה נמשכת כ-100 אלפיות השנייה לאחר הליך זה. שיטות אחרות כמו דימות מוחי בהיפוקמפוס פרוש במבחנה יכולות להתבצע גם על מנת לענות על שאלות נוספות כמו תנועה של מוקדים עצביים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לפרוש את ההיפוקמפוס במקום, את הכנת הרקמה השטוחה על מערך ההרצאות הקטן.

neural-activity-propagation-an-unfolded-hippocampal-preparation-with

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

ההכנה של פרוסות חריפות מוח מhippocampi המבודד, כמו גם את ההקלטות אלקטרו סימולטני של האסטרוציטים ונוירונים...

קלטות אלקטרו כפולות של תגובות Astroglial ועצביות עוררו-synaptically בפרוסות ביפוקמפוס חריפות

סרטון זה מדגים את ההליך להקמת תא הקלטה עם מערך מיקרואלקטרודות חודר (PMEA) כדי ללכוד אותות עצביים מהיפוקמפוס פתוח. שיטה זו מאפשרת לנו לחקור את המהירות והכיוון של התפשטות הפעילות העצבית בתוך ההיפוקמפוס הפרוש במבחנה.

רישום פעילות עצבית של רקמת היפוקמפוס פרושה באמצעות מערך מיקרואלקטרודות חודרות

פרוטוקול זה כולל שימוש במערך מיקרואלקטרודות (MEA) כדי לרשום פעילות חשמלית בפרוסת מוח שנחשפה לתרופה הגורמת להתקפים. ההליך כולל מיקום פרוסת המוח בתא הקלטה MEA, הפעלת גירוי חשמלי כדי לגרום להתקפים מלאכותיים, וניתוח האותות המתקבלים.

ניטור פעילות חשמלית עצבית הנגרמת על ידי פרכוסים בפרוסות מוח באמצעות מערכי מיקרואלקטרודות

סרטון זה מדגים את ההליך להגדרת פרוסת מוח בתא טבילה כדי להקליט פעילות סינפטית. התהליך כולל אבטחת הפרוסה על נייר עדשה, שמירה על זרימה רציפה של נוזל מוחי מלאכותי (aCSF) כדי להבטיח כדאיות עצבית, ומיקום מדויק של אלקטרודות הגירוי וההקלטה ביחס לאזור מסוים במוח. מערך זה מאפשר ניטור מדויק של הפעילות הסינפטית הבסיסית והשפעות הגירוי החשמלי.

רישום פוטנציאלים פוסט-סינפטיים מעוררי שדה עצבי בפרוסות היפוקמפוס חריפות

סרטון זה מדגים את ההשתלה הסטריאוטקטית של מערך אלקטרודות תיל וסיב אופטי בהיפוקמפוס של מודל עכבר.

השתלת מערך אלקטרודות וסיבים אופטיים בהיפוקמפוס של העכבר

השתלת מערכים מאורגנים של microwires לשימוש בקלטות אלקטרו יחידה אחת מציגה מספר האתגרים טכניים. שיטות לביצוע טכניקה זו ואת הציוד הדרוש מתוארות. כמו כן, השימוש מועיל של מערכי Microwire מאורגנים להקליט מאזורי משנה עצביים שונים עם סלקטיביות מרחבית גבוהה נדון.

הליך השתלת מערכים מאורגנים של Microwires להקלטות יחידה אחת בAwake, מתנהגת בעלי חיים

מאמר וידאו זה מתאר הליכים ניסיוניים לחקר פלסטיות לטווח ארוך ותהליכים אסוציאטיביים שלה כגון תיוג סינפטי, לכידה ותיוג צולב בנוירונים הפירמידליים CA1 באמצעות פרוסות היפוקמפוס חריפות ממכרסמים.

חקירה של Synaptic תיוג / לכידה וצלב-לכידה באמצעות חריפות בהיפוקמפוס פרוסות ממכרסמים

אנו מדגימים כיצד לבצע הקלטה וחשמליים מודולציה של פעילות אפילפטית 4-aminopyridine-induced פרוסות המוח מכרסמים באמצעות מערכי microelectrode. חדר הקלטה מותאמת אישית שומר על רקמות הכדאיות ברחבי מישיבות ניסיוני. חיים מיפוי אלקטרודה, מבחר זוגות מגרה מבוצעות על ידי ממשק משתמש גרפי מותאם אישית.

הקלטה של אפנון של הפעילות פרוסות המוח מכרסמים מצמידים מערכים Microelectrode

פרוטוקול זה מתאר את ההקלטה של פוטנציאל שדה מקומי עם רב shank סיליקון ליניארי רגשים. המרה של האותות באמצעות ניתוח צפיפות המקור הנוכחי מאפשר השחזור של הפעילות החשמלית המקומית בהיפוקמפוס העכבר. בטכניקה זו, תנודות המוח מוגבל יכול להילמד במעבר בחופשיות עכברים.

הקלטה במרחב מוגבל תנודות בהיפוקמפוס מתנהגים באופן עכברים

פרוטוקול זה מטרתו להדגים כיצד לשלב במבחנה microelectrode מערכים להתקנים microfluidic לימוד פוטנציאל הפעולה שידור בתרבויות עצביים. ניתוח נתונים, כלומר זיהוי ואפיון של הפצת פוטנציאל פעולה, הוא שבוצעו באמצעות חדש מתקדם, אך ידידותי למשתמש, זמינה בחופשיות, כלי חישובית.

התממשקות מיקרופלואידיקה עם מערכים Microelectrode ללמוד תקשורת עצביים והתפשטות אות עצב

פרוטוקול זה מתאר את הכנת פרוסות קליפת המוח ההיפוקמפוס-סנטורינאלית האופקית (HEC) מעכברים המציגים פעילות אדווה ספונטנית של גל חד. פרוסות מודגרות בתא החזקת ממשק פשוט והקלטות מבוצעות בתנאים שקועים עם נוזל שדרתי מלאכותי זורם במהירות כדי לקדם חמצון רקמות ואת הופעתה הספונטנית של פעילות ברמת הרשת.

חריף המוח עכבר חותכת לחקור פעילות רשת היפוקמפוס ספונטנית

למדו את שיטת פרישת ההיפוקמפוס בעכברים לרישום פעילות עצבית באמצעות מערך מיקרו-אלקטרודות חודרות. טכניקה זו מאפשרת מעקב סימולטני בשני הכיוונים האורכי והרוחבי.

עצבי פעילות הרבייה בהיפוקמפוס הכנה פרש בחודר מיקרו-אלקטרודה Array

גלה סרטונים נוספים