Name: שיטות לExplants רקמות Culturing עצם ירך האדם ללמוד התיישבות תאי סרטן השד גרורתי של הנישה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 41 s
Description: למדו שיטות לגידול explants רקמות עצם אנושיות לחקירת התיישבות תאי סרטן השד הגרורתיים בנישת העצם. מודל זה מאפשר ניתוח התנהגות תאי סרטן במיקרו-סביבת העצם האנושית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקרים אלו מומנו, בין שאר, על ידי מענקים מהאלטרנטיביים למחקר ופיתוח (107,588), המכון הלאומי לבריאות (1U54CA136465-04S1), ותכנית לחקר סרטן שד קליפורניה (201B-0141). אנו מודים בני הזוג. אנדרו וילבר ור &#39;סקוט McIvor לתרומתם הנדיבה שלהם <pkt2 lubig=""> פלסמידים transposase transponson וPK / hUbiC-SB11. הכרת תודה אנו מודים ג&#39;ון Tamaresis, Ph.D. לקבלת ייעוץ על שיטות סטטיסטיות, טימותי בראון לביצוע cytometry זרימה, ג&#39;ורג&#39;ט היינריך לקבלת ייעוץ על מבחני הגירה, וננסי Bellagamba להקלה על האוסף של דגימות THR. </pkt2>

ראש עצם הירך נאסף מחולים שעברו ניתוח THR בחירה במחלקה לכירורגיה אורטופדיים בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת סטנפורד. כל הרקמות נאספו כדגימות זוהתה de בהתאם לתקנות של משרד Compliance מחקר באוניברסיטת סטנפורד. 1. בחירת שורת תאי סרטן השד (ים) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג או transfect הקו הרצוי תאי סרטן השד (ים) עם מבנה כתב בלוציפראז-GFP. הניסויים הבאים בוצעו באמצעות מד&quot;א MB-231 וקווי MCF-7 בסרטן שד תא מהונדס עבור הביטוי היציב של לוציפראז גחלילית (fLuc) וחלבון משופר ירוק ניאון (EGFP) על ידי transfection עם הפלסמיד transposon היפיפה הנרדם pKT2 / LuBiG וPK פלסמיד transposase / hUbiC-SB11 45,46. הערה: שורות תאי transfected מכונות מד&quot;א MB-231-fLuc-EGFP, וMCF-7-fLuc-EGFP. </li></ol> 2. רקמות בידוד Fragments מראשי הירך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניתוח THR, לאסוף את ראש עצם הירך שהושלך במכל סטרילי המלא בתמיסת מלח פיסיולוגי. העבר את הדגימה למעבדה ולעבד אותו בתוך 1-3 שעות של ניתוח. הערה: אם יש עיכוב בעיבוד, הנח את הדגימה על 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן אזור עבודה על ידי הצבת את הפריטים הבאים על מחצלת סופגת בברדס בתרבית רקמת זרימה למינרית: כפפות סטריליות, rongeur כירורגית, מלקחיים, כוס עם isopropanol 70% כדי לשטוף כלים, וכלי תרבית הרקמה כמפורט להלן עבור כל סוג של ניסוי . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לובש כפפה כירורגית סטרילית להחזיק את הראש עצם הירך העגולה ביד אחת, להשתמש בrongeur ביד השנייה כדי לחלץ עצמות trabecular של גודל רצוי (~ 2-5 מ&quot;מ) מהפיר העליון החשוף של עצם הירך. העבר את שברי עצם לתוך כלי התרבות (למשל, 6, 12, או 24 גם צלחת תרבית רקמה או תא הגירה), בהתאם לסוג של הפצה, colניסוי onization או הגירה, כפי שתואר בשלבי 3, 4 או 5. הערה: שברי רקמת עצם צריך להיות שנקטפו כמתואר לעיל לאחר השלמת השלבים הראשוניים של כל assay שגשוג, קולוניזציה או הגירה ספציפית. שברים ינועו בגודל כפי שמוצג באיור 2. אפשר לשקול שברים לפני או אחרי ניסויים לצורך התקינה. </li></ol> 3. תאי סרטן שד culturing-Co בסמוך לברי עצמות כדי למדוד התפשטות תאי שד באמצעות BLI <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הניסוי, להכין השעיה המכילה 2 x 10 5 תאי סרטן השד / 50 μl, ולהכין את התקעים של שעוות עצם ללשתק שברי עצמות בתרבות. לחתוך קצה micropipette P200 ל -3 חלקים ולהשתמש בקצה הצר של החתיכה בגודלה באופן &quot;עוגייה מחתך&quot; לחתוך חתיכות קטנות (~ מ&quot;ג 35) של שעוות עצם. השתמש בקצה הרחב של החתיכה הקטנה ביותר כדי להוציא את תקעי שעוות עצם לתוך צלחת פטרילאחסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים פיסת שעוות עצם בכיוון השעה 12 כל טוב ולחץ בעדינות כלפי מטה עם אצבע עטויה בכפפה סטרילית-. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 50 μl של השעיה תא המכילה 1 x 10 5 תאי סרטן השד בDMEM-10 FBS% + פן-דלקת במרכז היטב בכל צלחת 6-היטב. (לחלופין, תאי זרע בדפוס פיזר אם תרצה בכך.) מניחים את הצלחת בתרבית רקמת חממת 37 ° C במשך 45 דקות כדי לקדם מצורף תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בר עצם 1 על 1 חתיכה של שעוות עצם לכל גם ניסיוני ולהפעיל לחץ עדין עם rongeur כדי לאבטח אותו. לבצע ניסויים בשלושה עותקים כך ש3 שברי עצמות מדגימת THR נתון מונחים לשלוש בארות העליונים, בעוד שלוש הבארות התחתונה מכילות שעוות עצם רק כפקדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת פיפטה 5 מיליליטר, בעדינות ובאיטיות לספק 5 מיליליטר של DMEM-10% FBS לצד השני של כל היטב כדי למנוע פירוק תאי שד או שברי עצמות. מניחים את הצלחת ב-3776; תרבית רקמת חממת C עבור 20-24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבצע הדמיה פליטת אור (BLI) להסיר את הצלחת מן החממה ולהוסיף מצע luciferin (כדי להשיג ריכוז של 300 מיקרוגרם / מיליליטר) היטב כל אחד. תמונת הצלחת מייד על IVIS הדמיה פלטפורמה באמצעות הפרמטרים הבאים: f-stop של 1, binning הקטנה, זמן חשיפה של 1 שניות, רמת ד מדוד את עוצמת האות של כל כן זוהר ממוצע (פוטונים / שני / סנטימטר מרובע / סטרדיאן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנת הדמיה להגדיר אזורים של העניין (ROI) לכמת את זוהר הממוצע לכל בארות הניסיוניות ושליטה. ערכי זוהר ממוצע יצוא לגיליון Excel כדי לבצע סטטיסטיקה וליצור גרפים. </li></ol> 4. תאי סרטן שד culturing-Co זרע ישירות על גבי שברי עצמות לחקר התיישבות ומספר נייד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים למקום שברי עצמות ישירות לתוך הבארות הריקות של צלחת תרבית רקמת 24 גם (בר 1 / טובים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פְּעִיםette אגל השעיה תא 50 μl של DMEM-10% FBS המכיל 1 X 03-6 אוקטובר תאי סרטן השד באופן ישיר על גבי כל בר עצם. מניחים את הצלחת בתרבית רקמת חממת 37 ° C במשך 45 דקות כדי לקדם מצורף תא. בעדינות להוסיף 1-2 מיליליטר DMEM-10% FBS לצד השני של כל גם כזה שהבר הוא שקוע כולו במדיום. דגירה את הצלחת בתרבית רקמת חממת 37 ° C 20-24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה, להשתמש במלקחיים כדי להעביר כל קטע רקמת עצם לצלחת 24 גם טרי המכילה 1 מיליליטר DMEM-10% FBS בכל טוב. כדי לבצע BLI, בצע את השלבים 3.6-3.7 לעיל. בנוסף, ניתן לראות שברים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, או סמוק להשיג את אוכלוסיית מח לניתוחים של מספרי תאי סרטן השד ומאפיינים כמתואר בשלב 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את שברים שלמים להערכה איכותית על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי הבא BLI, פיפטה 5 μl של פתרון תיוג בביספוספונטים ניאון (מראשpared על פי הוראות היצרן) לכל אחד גם לתייג spicules mineralized של שברי העצמות. דגירה את הצלחת בתרבית רקמת החממה לשעת 24 נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות 24 שעות של התרבות בפתרון תיוג בביספוספונטים ניאון, להשתמש במלקחיים כדי להעביר את שברי צלחות תרבית רקמה המכילות בינוני פנול אדום-חופשית ונוף באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי המוגדר GFP תמונה (485 ננומטר) ותווית בביספוספונטים (680 ננומטר). </li></ol> 5. מדידת הגירה של תאי סרטן השד לברי רקמת עצם והעצם בתרבית שבר Supernatants <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגירה לכיוון supernatant תרבית רקמת עצם. הערה: בצע ניסויים בשלושה עותקים כך ש3 ברים מדגימת THR נתון משמשות ליצירת 3 supernatants. עבור כל ניסוי, הגירה היא בהשוואה על פני שלוש בארות המכילות supernatants עצם לעומת שלוש בארות המכילות מדיום שליטה בלבד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור tis עצםלתבוע supernatants על ידי הנחת שברי עצמות לתוך הבארות של צלחת 12-היטב המכילה 2.2 מיליליטר DMEM-10% FBS בכל טוב. תרבות בתרבית רקמת חממת 37 ° C למשך 24 שעות. לסגת הבינוני ב 24 שעות ולהחליף עם 2.2 מיליליטר טרי FBS% DMEM-10. בארות שליטת פינוק המכילות DMEM-10% FBS באותה הדרך. הערה: הבינוני משתנה ב 24 שעות כדי להסיר גורמים מופרשים בתגובה לטראומה לרקמות כתוצאה מניתוח. בגלל supernatants רקמת עצם נוצרת בFBS המכיל בינוניות, בארות המכילות מדיום FBS המכיל רק כלולים לשלוט על תרומתם של FBS לנדידת תאי סרטן שד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב 48 שעות, לאסוף 0.9 מיליליטר של כל supernatant / בינוני שליטה ופיפטה לתוך הבארות של צלחת מקלט. מוסיף מאוחר יותר להציב לתוך בארות אלה. דגירה את צלחת המקלט בתרבית רקמת החממה תוך זריעה מוסיף. הערה: supernatant הנותר (~ 1 מיליליטר לאחר אידוי) ניתן לאסוף עבור ניתוח של secretome פקטוrs אם תרצה בכך 44. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרע מוסיף Transwell, להכניס אותם לתוך סטנדרטי, צלחת תרבית רקמת 24 גם ריקה. ההשעיה פיפטה 350 μl תא המכילה 1 x 10 5 תאי סרטן השד בDMEM-10% FBS על פני השטח העליונים, פנימי קרום של להכניס כל אחד כפי שמוצג באיור 1 א. מניחים את צלחת 24 גם מכילה מוסיף זרע לתרבית רקמת חממת 37 ° C במשך 45 דקות כדי לקדם קובץ מצורף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהתאים מחוברים למוסיף, להשתמש במלקחיים כדי להעביר מוסיף לצלחת המקלט בהתאם להוראות היצרן. זווית להכניס כל אחד בעת ביצוע אותה למקלט גם כדי למנוע היווצרות בועה בין הקרום להוסיף והמקלט גם supernatant. דגירה את צלחת המקלט עם מוסיף במשך 20 שעות בתרבית רקמת חממת 37 ° C. הערה: בדוק את הצד התחתון של צלחת המקלט לבועות בין הקרום להוסיף והמקלט גם supernatant. אם בועות גלויות, להסיר את מוסיף הספציפי ומניח אותם שוב לתוך השפופרת היטב עד שאין בועות נמצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי 20 מלקחיים שימוש hr להסיר מוסיף מצלחת המקלט. שימוש בהליכים בצעדים 3.6-3.7 לבצע BLI לתמונת התאים שהגרו ולמחוברים לחלק התחתון של בארות צלחת מקלט. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגירה לברי רקמת עצם. הערה: בצע ניסויים בשלושה עותקים כך ש3 ברים מדגימת THR ניתנה ממוקמות לתוך 3 מוסיף נפרד, ו- 3 חרוזי זכוכית ממוקמים לתוך 3 מוסיף נפרדים כפקדים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את צלחת המקלט על ידי pipetting 0.9 מיליליטר FBS% DMEM-10 לכל אחד. הנח אותו לתרבית רקמת החממה בעת הכנה מוסיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרע מוסיף, להפוך אותם על פני השטח של תיבת צינור microfuge פלסטיק שיש לו מכסה. פיפטה טיפת השעיה תא 50 μl של FBS% DMEM-10 המכיל 1 x 10 5 תאי סרטן שד דirectly על פני השטח החיצוניים, תחתית כל קרום כנס (שהוא פונה כלפי מעלה במוסיף ההפוך). לכסות את תיבת צינור microfuge עם המכסה הסדוק פתוחה ולהעביר אותו לחממת רקמת 37 ° C במשך 45 דקות כדי לקדם מצורף תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את תיבת צינור microfuge למכסה מנוע תרבית רקמה, ולהשתמש במלקחיים כדי להפוך את מוסיף זרע צד ימין למעלה ולהעביר אותם לתוך הבארות של צלחת המקלט. FBS 0.450 מיליליטר DMEM-10% פיפטה לכל כוס להוסיף. בעזרת מלקחיים, להעביר בר רקמת עצם אחד (~ 3 מ&quot;מ) לכל כוס להכניס מוכנה. לחלופין, להשתמש בחרוזי זכוכית בקרות שליליות כמו בבארות נוספות. מניחים את הצלחת בתרבית רקמת חממה במשך 20 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד הגירה, להכין צלחת תרבית רקמה סטנדרטית 24 גם המכילה 1 מיליליטר DMEM-10% FBS בכל טוב. הסר את צלחת המקלט מהחממה ולהשתמש במלקחיים כדי להעביר את שברי עצמות וחרוזים מכל להכניס לתוך בארות נפרדות של הצלחת סטנדרטית. להוסיף luciferinמצע (כדי להשיג ריכוז סופי של 300 מיקרוגרם / מיליליטר) היטב כל אחד ולבצע BLI תוך שימוש בנהלים בצעדים 3.6-3.7. </li></ol></li></ol> 6. ניתוח לפני ואחרי ניסוי נוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח של מח סמוק. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את בר עצם לתוך מסננת תא 70 מיקרומטר ממוקמת בחלק העליון של צינור חרוטי 50 מיליליטר. השתמש במזרק 10 מיליליטר עם מחט 25 G כדי לשטוף נמרצות הבר עם 10 מיליליטר של PBS לקבל השעיה של תאים במח בצינור חרוטי. צנטריפוגה ההשעיה התא 3 דקות ב 300 XG ו -21 מעלות צלזיוס, לשאוב supernatant ו resuspend תאי pelleted בPBS או הפתרון רצוי אחר לזרימה cytometry. הערה: כרכי Resuspension ישתנו בהתאם לגודל של התא גלולה לאחר צנטריפוגה, ויישום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מבחני כדאיות ~ 75-300 כרכי μl של PBS מתאימים, וניתן לנתח השעיות אלה באמצעות fluorescenc זמין מסחרימבחני כדאיות מבוססות דואר על פי הוראות היצרן, pipetted לתוך hemocytometer קונבנציונלי, וספרו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניתוח cytometric זרימה או מיון המבוסס על זיהוי של תאי סרטן שד GFP חיובי, resuspend התא גלולה ב 1 מיליליטר PBS המכיל 2% FBS, 2 המ&quot;מ EDTA, ו -10 מ&quot;מ HEPES כך שהריכוז הוא 1 x 10 6 תאים / מיליליטר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> H &amp; E מכתים ואימונוהיסטוכימיה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לעבד את שברים לhematoxylin &amp; eosin (H &amp; E) מכתים ו / או אימונוהיסטוכימיה, למקם את הברים בקלטות פלסטיק שכותרתו עם עיפרון מספר 2, ולצלול במכל המלא עם 10% שנאגרו פורמלין למשך 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות תהליך להטבעת פרפין, חתך ומכתים תוך שימוש בפרוטוקולים שיגרתי הכוללים צעד decalcification כדי להסביר את spicules mineralized בתוך כל בר. </li></ol></li></ol>

אין גילויים לדווח.

Mehra et al. תיאר בעבר את אוסף הנתיחה שלאחר המוות וניתוח של דגימות עצם של חולי סרטן ערמונית גרורתי שנקטפו בעת הנתיחה שלאחר המוות, חושף רקמות באיכות גבוהות ואימות של השימוש בדגימות עצמות אדם ללמוד את התהליך גרורתי 47. כאן יש לנו תארנו פרוטוקולים לאיסוף, עיבוד ושימוש שבברי רקמה אנושיים עצם המתקבלים מראש עצם הירך שהושלך לאחר ניתוח THR במערכת שיתוף תרבות לטווח קצר כדי ללמוד נדידת תאי שד, קולוניזציה ושגשוג. כ -300,000 ניתוחי החלפת מפרק ירך מבוצעים מדי שנה בארה&quot;...

מייקרו-הסביבה של הגידול להכרה רחבה כקובע קריטי של תאים סרטניים התנהגות במהלך התקדמות סרטן השד גרורתי והתפשטה 1-3. המטרה של השיטה שהוצגה כאן היא להקל על המחקר של תאי סרטן השד במייקרו-הסביבה של רקמת עצם אנושי, האתר השכיח ביותר לגרורות סרטן השד 4-6. עצם מורכב מתאי mineralized ומח 7-9, אשר שניהם נמל תאים וגורמים מופרשים מעורבים בהתקדמות גרורתי 10,11. למרות שימוש נרחב במודלים של עכברי vivo להקל על מחקרים מערכתיים של התהליך גרורתי 12-15, אינטראקציות תא בתוך השלד אינן נגישים לתצפית והפרעות ישירות. מערכות מודל ללימוד וculturing רקמות עצם עכבר ותאי מח העכבר לספק גישה טובה יותר והניבו תובנות רבות לגבי crosstalk ומנגנונים מ &#39;תאי סרטן שדetastasis של השלד העכברי 16-22. עם זאת, המחקרים הראו כי ייתכן שיש מינים ספציפיים דפוסי osteotropism לרקמת עצם 23,24. דפוסים אלה יכולים לשקף מינים ספציפיים הגלומים הבדלים במאפייני רקמת עצם, הבדלים הנובעים מאוכלוסיות מח העצם שינו בעכברי חיסון לקוי 11, ו / או גיל צעיר יחסית של עכברים המשמש בניסויים, שכולן עשויים גורמים של העצם מייקרו-סביבה. במבחנה גישות ללימוד תאי סרטן השד בשיתוף תרבויות עצם אנושיות התמקד בדרך כלל על סוגי תאי עצם ספציפיים כגון osteoblasts-נגזר מח עצם או תאי סטרומה מתורבתים כמו monolayers או בתוך מערכות מודל 3 ממדים מהונדסים 25-35. למרות שמודלי תרבית תאים 2 ממדים יצרו עמוד התווך של במבחנה גישות לחקר סרטן, זה כבר זמן רב הכיר בכך שהתנהגות התא משתנה מן היסוד במ &#39;onolayer מערכות תרבות 18,36,37. זה הוביל לפיתוח של מייקרו-סביבות מהונדסות המחקות את המורכבות של רקמות חיות 3 ממדים, כולל מטריצה ​​ומודלים מבוססי פיגום המורכב מחומרים טבעיים כמו קולגן, או פולימרים סינטטיים שנזרעו עם סוגי תאים מסוימים ליצירת מייקרו-סביבות כמו רקמה- 36-41. גם גישות מהונדסות כללו שימוש בפלטפורמות bioreactor לשלוט וללמוד את הסביבה ההורמונלית של מייקרו-הסביבה 18,19,41-43. למרות שמודלים וbioreactors biomimetic לספק אלמנטים רבים של מייקרו-סביבת רקמה מורכבת בסביבה מבוקרת, ויושמו בהצלחה על מנת לקדם את המחקר של גרורות סרטן השד לעצם 18,19,35,42,43, מערכות מודל מהונדסות בדרך כלל אינן לשלב הספקטרום המלא של סוגי תאים ורכיבי מטריצה ​​תאיים הנוכחיים בסביבת עצם הילידים. עד לאחרונה, סרטן השדתאים לא נחקרו במייקרו-הסביבה המקומית, שלם, 3 ממדים של רקמות עצם אנושיות. לאחרונה דיווחו על ההתפתחות של מודל שיתוף תרבות באמצעות שברי רקמה אנושיים עצם מבודד מסך החלפת מפרק ירך ניתוח (THR) דגימות 44. דגימות אלה נמל שני תאי mineralized ומח הצורך ללמוד מנגנוני מיקרו-גרורות בתרבות טווח קצרה. בעבודה קודמת הקמנו הוכחה של עיקרון לשימוש בהדמית פליטת אור (BLI) כדי לפקח על ההתפשטות של תאים (מד&quot;א MB-231-fLuc) שיתוף תרבותי עם שברי עצמות 44 להביע לוציפראז סרטן השד. כאן אנו מציגים מפורטים פרוטוקולי ניסוי ללימוד התפשטות תאי סרטן שד, קולוניזציה, והגירה בהקשר של מייקרו-הסביבה המקומית באמצעות explants רקמת עצם אנושי. ראשית אנו מציגים פרוטוקול לתאי סרטן שד שיתוף culturing סמוכים לברי עצמות למדוד שדהתפשטות תאים באמצעות BLI. בסעיף זה, השעיות תא שד הם זורעים ככתמי תא 6 צלחות גם בסמוך לברי עצמות, שהם משותקים על ידי חתיכות של שעוות עצם. בארות בקרה מכילות שעוות עצם, אך לא שבר עצם. ברגע שכתמי תא לצרף, בינוני הוא הוסיף את הצלחת היא בתרבית למשך 24 שעות, לאחר שעוצמת אות bioluminescent (הקשורים במספר תא) נמדדת עם BLI. בשלב הבא אנו מציגים שיטות לתאי סרטן שד culturing-שיתוף זרע ישירות על גבי שברי עצמות ללמוד קולוניזציה ושגשוג. כאן השעיות תא השד pipetted ישירות על גבי שברי רקמת העצם, שנמצאים תחת פיקוח בתרבות על ידי BLI ומיקרוסקופ פלואורסצנטי לאורך זמן כדי לעקוב אחר קולוניזציה ומספר תא. בשיטה זו, תא מוח יכול להיות סמוק מברי עצמות בכל נקודה לניתוח של תאי סרטן השד יישבו על ידי זרימת זמן cytometry, או מבחני כדאיות מח. בנוסף, אנו מבטליםסופר שתי גישות שונות למדידת נדידת תאי סרטן השד. בשיטה הראשונה צעדים מפורטים למדידת הגירה כלפי supernatants תרבית רקמת עצם. בפרוטוקול זה תאי סרטן השד הם זורעים על גבי המשטחים הפנימיים, העליונים של Transwell להכניס קרומים עם גודל נקבובית 8 מיקרומטר (כפי שמוצגים באיור 1 א). לאחר מכן מוסיף ממוקמים לתוך צלחת מקלט עם בארות המכילות supernatant רקמת עצם או בינוני שליטה. במהלך תקופת דגירה 20 שעות, מספר קטן של תאי סרטן השד להעביר דרך הממברנות להכניס לתוך בארות תרבית הרקמה הנמוכות שבו הם מייחסים לגילוי על ידי BLI. בשיטה השנייה הגירת תאי סרטן השד הם זורעים על גבי המשטחים התחתונים, החיצוניים של קרומים להוסיף Transwell. שברי רקמת עצם ממוקמים לתוך הכוסות להוסיף ותאי סרטן השד להעביר דרך ממברנות ליישב את שברי עצמות (כפי שמוצגים באיור 1), שלאחר מכן צילם באמצעות BLI.

<table><tbody><tr><td>DMEM (1X) + GlutaMAX-l</td><td>Life Technologies</td><td>10569-010</td><td>תוסף את כל ה-DMEM עם 10% סרום בקר עוברי ו-1% עט/סטרפטוקוקוס</td></tr><tr><td>McCoy's 5A Medium (1X)</td><td>Life Technologies</td><td>16600-082</td><td>תוסף כל McCoy's&nbsp; עם 10% סרום בקר עוברי ו-1%</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Life Technologies</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>פניצילן סטרפטומיצין</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>בלסטוצידין (10 מגה-גל/מ"ל)</td><td>InvivoGen&nbsp;</td><td>ant-bl</td><td>מדיית תוסף המשמשת לקווי תאים שעברו טרנספטציה.</td></tr><tr><td>פלקון&רג; מוסיף תרבית תאים לצלחת 24 בארות עם קרום PET שקוף (8.0 &mu; m גודל נקבוביות)</td><td>קורנינג משולב</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>בז &reg; 24 באר TC-מטופל TC תרבית תאי פוליסטירן הכנס צלחת נלווית</td><td>קורנינג משולב</td><td>353504</td><td></td></tr> חי <tr><td>/ מת כדאיות / ערכת ציטוטוקסיות * לתאי יונקים * טכנולוגיות</td> <td>זיהוי Invitrogen</td><td>L-3224</td><td></td></tr><tr><td>FluoroBrite DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>A18967-01</td><td></td></tr><tr><td>D-לוציפרין גחלילית, מלח אשלגן 5 גרם (30 מ"ג/מ"ל)</td><td>Life Technologies</td> מסננת תאים סטרילית <td>L-8220</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363548</td><td></td></tr><tr><td>6 אשכול תרבית תאים שטופל היטב ב-TC</td><td>Corning Incorporated</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>12 אשכול תרבית תאים מטופל היטב</td><td>TC Corning Incorporated</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>24 אשכול תרבית תאים מטופל היטב</td><td>TC Corning Incorporated</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Friedman-Pearson Rongeur</td><td>Fine Science Tools</td><td>16021-14</td><td></td></tr><tr><td>Bone Wax</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>903</td><td></td></tr><tr><td>IVIS 50 פלטפורמת הדמיה</td><td>קליפר מדעי החיים/PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Living Image Software Program&nbsp;</td><td>קליפר מדעי החיים/PerkinElmer</td><td>133026</td><td></td></tr><tr><td>EVOS FL Imaging</td><td>System Life</td><td>Technologies גרסה 4.2</td><td></td></tr><tr><td>OsteoSense 680 EX</td><td>PerkinElmer</td><td>NEV10020EX</td><td></td></tr><tr><td>MCF-7 תאי סרטן שד</td><td>ATCC</td><td>HTB-22</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231 תאי סרטן שד</td><td>ATCC</td><td>HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>עכבר חד-שבטי אנטי אנושי נוגדן</td><td>DAKO ציטומציה</td><td>שיבוט (AE1/AE3)</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטות לexplants רקמות culturing עצם ירך האדם ללמוד התיישבות תאי סרטן השד גרורתי של הנישה

Methods for Culturing Human Femur Tissue Explants to Study Breast Cancer Cell Colonization of the Metastatic Niche

עצם הוא האתר הנפוץ ביותר של גרורות סרטן השד. למרות שזה מקובל שסרטן השפעות מייקרו-סביבת התנהגות התא, מעט מאוד ידוע על מאפייני סרטן שד תא והתנהגויות בתוך מייקרו-הסביבה המקומית של רקמת עצם אנושית. פיתחנו גישות כדי לעקוב אחר, לכמת ולווסת את תאי סרטן השד אנושיים במייקרו-הסביבה של שברים בתרבית רקמת עצם אנושיים מבודדים מראשי הירך הושלכו הבאים כולל ניתוחי החלפת מפרק ירך. שימוש בתאי סרטן השד מהונדס ללוציפראז ומשופר חלבון פלואורסצנטי ביטוי ירוק (EGFP), אנו יכולים לכמת reproducibly דפוסי הגירה והתפשטות שימוש בהדמית פליטת אור (BLI), אינטראקציות תא מסלול בתוך שברי העצמות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ולהעריך את תאי שד לאחר קולוניזציה עם cytometry זרימה. היתרונות העיקריים של מודל זה כוללים: 1) microe ילידים, ארכיטקטוני שלם רקמהnvironment הכולל סוגי תאים אנושיים רלוונטיים, ו- 2) גישה ישירה למייקרו-הסביבה, המאפשר כמותית מהירה וניטור איכותי והפרעות של נכסי שד ותאי עצם, התנהגויות ואינטראקציות. מגבלה העיקרית, כיום, היא הכדאיות סופית של שברי הרקמות, אשר מגביל את החלון של מחקר לתרבות לטווח קצר. יישומים של מערכת המודל כוללים מחקר על הביולוגיה הבסיסית של סרטן השד וגידולים ממאירים המבקש עצם אחרים בתוך הנישה גרורתי, ופיתוח אסטרטגיות טיפוליות למקד ביעילות תאי סרטן השד ברקמות עצם.

בידוד ברי רקמה מראשי הירך ראש עצם הירך נאסף ממספר שווה של גברים ונשים חולים (44-90 שנים) שעבר ניתוח להחלפת מפרק ירך בחירה במחלקה לכירורגיה אורטופדיים בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת סטנפורד. כל ראש עצם הירך הושלך מכיל חלק קטן של עצם הירך העליונה, אשר מטפחת רקמת עצם trabecular המורכבת מspicules ומח mineralized. רקמה זו נגישה באמצעות הסעיף נחשף בניתוח הצולב של הפיר (איור 2 א) באמצעות rongeur כירורגי...

פרוטוקולים מתוארים ללימוד הגירה של תאי סרטן השד, התפשטות והתנחלות במערכת מודל explant רקמת עצם אנושית.

שיטות לExplants רקמות Culturing עצם ירך האדם ללמוד התיישבות תאי סרטן השד גרורתי של הנישה

Bone is the most common site of breast cancer metastasis. Although it is widely accepted that the microenvironment influences cancer cell behavior, little ...

מטרת הליך זה היא לחקור ת proliferation, התנחלות (colonization) ונדירה של תאי סרטן השד במערכת מודל של נתח רקמת עצם אנושית. הדבר משיג על ידי בידוד חלקיקי רקמת עצם טרבקולרית מדגימות כירורגיות של ראש הפמור ותרבותם יחד עם תאי סרטן השד המבטאים לוסיפראז וחלבון פלואורסצנטי ירוק. דימוי ביו-לומינסנציה משמש למדידת ה-proliferation של התאים ולאישור ההתנחלות של תאי סרטן השד בחלקיקי רקמת העצם.דפוסי התנחלות של תאי סרטן השד נסרקים באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. ניתן לשטוף את מדור מחול השתבץ מהרסיסים לצורך ניתוח באמצעות ציטומטריית זרימה, בדיקות לומינסצנציה וצביעה. נדידה של תאי סרטן השד לעבר תרביות רקמה, תעלילים ורסיסי רקמת עצם נמדדת במסבבי נדידה מסוג Transwell עם דימוי ביולומינסצנטי. העצם היא האתר השכיח ביותר לגרורות של סרטן השד, ובסופו של דבר, מודל זה מספק חלון חדש לחקר תאי סרטן השד בתוך הנישה הגרורתית של העצם.יתרון משמעותי של מודל זה הוא שהוא מספק גישה ישירה למיקרו-סביבה של מקטעי רקמת עצם אנושית, מה שמאפשר לנו לצפות ולנתח בקלות את התנהגות תאי סרטן השד במהלך ניסויי תרבית משותפת (co culture) לטווח קצר. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לחקור שאלות מפתח לגבי המנגנונים העומדים בבסיס גרורות של סרטן השד לעצם, במטרה לזהות אסטרטגיות טיפוליות למניעה ולטיפול יעילים. למרות שמודל זה יכול לספק תובנות לגבי גרורות של סרטן השד, ניתן להשתמש בו גם כדי לחקור גידולים ממאירים אחרים הנוטים להתפשט לעצם, כגון סרטן前ערבון (prostate cancer).יש לאסוף מקטעי רקמת עצם בנקודות שונות בכל בדיקה. תהליך זה מתחיל באיסוף והובלה של דגימת עצם ירך (femur) בתוך תמיסת סליין, והכנת תחנת העבודה בתוך מabilis בטיחות ביולוגית תוך כדי חבישת כפפה כירורגית. אחוזו את ראש עצם הירך ביד אחת והשתמשו במגלח כירורגי כדי לחלץ עצם טרבנכולרית.השברים הם בגודל של כ-שניים עד חמישה מילימטרים. פינצטה לא תהיה יעילה בשלב זה. יש להשתמש במכשיר כריתה כירורגי באיכות גבוהה.עבור ניסוי זה, הכין תרחיף תאי סרטן שד בריכוז של 100,000 תאים ל-50 µL של DMEM בתוספת 10% FBS. בנוסף, הכן רכיבי שעוות עצם לנייד של רגמני העצם באמצעות קצוות חתוכים של טיפ מיקרופיפטה, ואחסן את הרכיבים בצלחת פטרי. לאחר מכן, העבר בעזרת פינצטה את הרכיבים לפלטה בעלת שישה בארות, ובעזרת כפפה סטרילית, לחץ את הרכיבים למיקום של השעה 12.בשלב הבא, העבירו בפיפט 50 µL מהתליה התאית למרכז כל באר. הכניסו את הפלטה לאינקובטור לתרביות רקמה למשך 45 דקות כדי לעודד היצמדות של התאים. בזמן שהפלטה דוגרת, הוציאו את שברי העצם עם התאים ההצמודים לפלטה. הניחו שבר רקמת עצם על שעוות העצם בשלוש בארים והדקו כל אחד מהם באמצעות GER. שלוש הבאריים ללא שברים ישמשו כביקרות.בשלב הבא, הוסיפו באיטיות חמישה מיליליטרים של DMEM בתוספת 10% FBS לדופן של כל באר. יש להקפיד ששעוות העצם ושברי העצם לא יזוזו ממקומם. לאחר מכן, דגרו את התרבית למשך 20 עד 24 שעות.למחרת, בצע תחילה דימות של התאים. הוסף 300 micrograms per milliliter של Lucifer לכל באר, ולאחר מכן דמט מיד את הפלטה באמצעות פלטפורמת דימות Ivis. ניסוי זה דורש תרחיף תאי סרטן שד, בדומה לניסוי הקודם.לאחר הוצאת רסיסי העצם, השתמשו בפינצטה כדי להעביר כל רסיס לבאר ריקה בלוחית 24 בארות, לאחר מכן טפטפו 50 µL של תרחיף תאים ישירות על כל רסיס עצם, והעבירו את הלוחית למדגרה למשך 45 דקות כדי לעודד היצמדות של התאים. לאחר שהתאים נצמדו, הוסיפו בעדינות 1 עד 2 mL של מצע לכל באר, בכמות מספיקה כדי לשקוע את רסיס העצם. לאחר מכן, הניחו את הלוחית במדגרה לתרביות רקמה למשך 20 עד 24 שעות.כהכנה לדימוי Ivis, דימוי פלואורסצנציה או איסוף תאי מחיתיים לצורך ניתוח לדימויי Ivis, העבירו את רסיסי העצם לפלטה בעלת 24 בארות עם 1 ml של מצע טרי לכל בארה. הוסיפו 300 µg/mL של Lucifer לכל בארה והמשיכו כפי שתואר בעבר עבור מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. טפטפו 5 µL של תמיסת סימון ביספוספואט פלואורסצנטית לכל בארה כדי לסמן את הספיקולות הגומיות של רסיס העצם והדגרירו את הפלטה למשך 24 שעות נוספות.לאחר 24 שעות, השתמשו בפינצטה כדי להעביר את השברים לצלחות המכילות מצע ללא phenol red. לאחר מכן, בחנו את הצלחות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה המוגדר לדוגם באורך גל של 485 nanometers כדי לאתר מושבות של תאי סרטן שד המבטאים GFP, ובאורך גל של 680 nanometers כדי לזהות ספיקולות עצם המסומנות בביספוספטים. שטפו את תא מוח העצם לצורך ניתוח של מספר התאים או תכונותיהם.העבירו פסיפס (fragment) למסנן של 70 מיקרון מעל מבחנה מסוג chronicle בנפח 50 מיליליטר. לאחר מכן, השתמשו במזרק של 10 מיליליטר עם מחט בכילובר 25 כדי לשטוף בעוצמה את הפסיפס עם 10 מיליליטר של PBS. סבבו את התמיה בצנטריפוגה ב-300 G למשך שלוש דקות בטמפרטורת החדר כדי לשקיע את התאים; שאבו והשליכו את הנוזל העליון (supernatant).שוטפו (Resuspend) את משקע תאי המחול ב-PBS או בתמיסות רצויות אחרות בהתאם לבדיקות ציטומטריה של זרימה או בדיקות חיוניות. התחילו ביצירת רשת רקמת עצם. הניחו את שברי העצם לתוך בארי של פלטת 12.לוחית בארות המכילה 2.2 milliliters של DMEM 10%FBS לכל בארה, כאשר חלק מהבארות ישאירו כביקורת ללא שברי עצם. דגרו את הלוחית למשך 24 שעות. לאחר מכן, שאבו והחליפו את המצע והמשיכו בגידול למשך 24 שעות נוספות. לאחר 48 שעות מתחילת הגידול, העבירו 0.9 milliliters של הנוזל העליון (supinate) ללוחית קולט, תוך כדי דגירה זמנית של לוחית הקולט.הניחו רכיבי transwell לתוך פלטה ריקה בעלת 24 בארות. לאחר מכן, זרקו 100,000 תאי סרטן שד ב-350 µL לתוך כל רכיב. לאחר מכן, דגרו את הפלטות למשך 45 דקות כדי לעודד היצמדות של התאים. לאחר 45 דקות, השתמשו בפינצטה כדי להעביר את רכיבי ה-transwell לפלטת קיבול.יש להטות את המכניסים (inserts) בעת הצבתם לתוך המקלט. בצעו סופינציה (supinate) כדי למנוע היווצרות בועות. לאחר מכן, דגרו את הפלטה עם המכניסים למשך 20 שעות בטמפרטורה של 37 °C למחרת.השתמשו בפינצטה כדי להוציא את הרכיבים המוכנסים (inserts) והוסיפו לכל אחד מהם 300 micrograms per milliliter של Lucifer. בצעו דימות ביו-לומינסנציה (bioluminescence imaging) בלוח המקלט כדי לזהות תאי סרטן השד שנדדרו דרך הממברנות ונצמדו לתחתית בארות לוח המקלט. ראשית, טענו לוח מקלט עם מצע והניחו אותו באינקובטור לתרביית רקמות.לזריעת התאים במכמירים. הפכו אותם בתוך קופסה של מבחנות מיקרו-פיוזד עם מכסה. לאחר מכן, הוסיפו 100,000 תאים ב-50 µL למשטח התחתון החיצוני של ממברנת כל מכמיר.כסו את הקופסה תוך השארת המכסה מרווח מעט, והדגירו את התבתים למשך 45 דקות באינקובטור לתרביית רקמות. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה כדי להפוך ולהעביר את התבתים לבארות של פלטת קליטה, כאשר בכל כוס של תבת יש 0.45 milliliters של DMEM עם 10% FBS. לאחר מכן, הוסיפו לכל תבת שבר עצם בגודל שלושה מילימטרים או חרוז זכוכית, והחזירו לפלטה למשך 20 שעות.ביום למחרת השתמשו בפינצטה כדי להעביר את השברים והחרוזים לפלטה עם בארות המכילות מיליליטר של מצע טרי. הוסיפו 300 micrograms per milliliter של Lucifer לכל בארה והמשיכו לדימוי ביו-לומינסנציה. MDA MB 2 31 F.Luke EGFP.תאי סרטן השד גודלו בתרבית משותפת בסמיכות לרסיסי עצם מקובעים כדי למדוד את השגשוג של תאי השד. הדמיית ביו-לומינסנציה לאחר 24 שעות של תרבית הראתה שגשוג מוגבר של תאי סרטן השד בנוכחות רסיסי עצם בשלושת הבארים העליונים, בהשוואה להיעדר רסיסי עצם בשלושת הבארים התחתונים. תוצאות הניסויים שנעשו עם רסיסים משלוש דגימות כירורגיות נפרדות הראו שגשוג מוגבר בנוכחות עצם לעומת היעדרה.בכל שלושת המקרים, נצפתה התיישבות של תאי MCF 7 Luke EGFP שהוצבו ישירות תחת מקטעי רקמת עצם, באמצעות דימוי ביולומינצנציה לאחר 24 שעות. אות חלש יותר היה קשור לצפיפות זריעה נמוכה יותר לאחר 48 שעות. מקטעים שנזרעו ישירות וסומנו באמצעות ריאגנט ביספוספונט חשפו התיישבות של תאי סרטן השד החיוביים ל-GFP בתוך המדורים המינרליים ומדוברי המח).p>נדידה של תאי סרטן השד דרך קרום הנדידה נקבובי לעבר תרבית רקמת עצם; נדידה חזקה נצפתה בתשלומי העל בשלושת הבארים העליונים בהשוון לנקרים של ביקורת. מצע נצפה בשלושת הבארים התחתונים. כמו כן נצפתה נדידה לשלושה שברי עצם מדגימת THR נתונה, בעוד שלא נצפתה נדידה אל החרוזיקים.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להפיקe רגמנים של רקמת עצם אנושית מדגימה של ראש הפמור ולהחדירם לבדיקות של תרבית משולבת (co-culture) למדידת התנהגויות של תאי סרטן השד, כולל נדידה, התיישבות ושגשוג.

methods-for-culturing-human-femur-tissue-explants-to-study-breast

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

לטווח ארוך של תרבות האדם סרטן השד דוגמאות וניתוח שלהם באמצעות טומוגרפיה הקרנה אופטית

סרטון זה מתאר את ההתרבות של תאי סרטן השד הסמוכים לצמחי עצם הירך כדי למדוד התפשטות והתיישבות של תאים סרטניים במערכת מודל צמחי רקמת עצם אנושית.

גידול משותף של תאי BC: טיפוח תאי סרטן השד עם שברי עצם לחקר התפשטות תאים סרטניים

בשיטות סטנדרטיות תרבות תאים נלקחים מתוך הסביבה הפיזיולוגית שלהם וגדלו על משטח הפלסטיק של מנה. כדי לחקור את התנהגותם של תאים במח עצם אנושיים ראשוניים שיצרנו מערכת תרבות 3-D בו תאים גדלים בתנאים משחזרים microenvironment יליד הרקמות.

דגם תרבות רקמות תלת ממדי למחקר עיקרי עצם אדם מח וממאיר שלו

תרבית תאים ראשונית באמצעות organoids רקמה שלמה מספקת מערכת מודל המחקה את המיקרו-הסביבה רב-התאית בגוף חי. פיתחנו מודל סרום ללא עיקרי רקמת האפיתל שד תרבות המנציח שושלות מעורבות תרבית תאים ותערוכות מובחנות מורפולוגיה, ללא הפרעה רקמה האנזימטית. organoids השד בר-קיימא ל&gt; 6 חודשים.

אינו אנזימטית, תרבות רקמות סרום ללא נגעי שד טרום פולשני לדור ספונטני של Mammospheres

כאן אנו מציגים פרוטוקול לתרבית משותפת בתלת מימד, שימושי לחקירת אינטראקציות רב-תאיות ואפנון תלוי מטריצה חוץ-תאית של התנהגות תאי סרטן. במודל ניסיוני זה, תאים סרטניים מתורבתים על ג'ל קולגן המשובץ בפיברובלסטים הקשורים לסרטן אנושי.

מודל שיתוף תרבות תלת-ממדי לגידול אינטראקציה-סטרומה

כתב יד זה מתאר מערכת מודל ex vivo המורכבת ממדיה מותנית איברים שמקורה בבלוטת הלימפה, העצם, הריאה והמוח של עכברים. ניתן להשתמש במערכת מודל זו כדי לזהות ולחקור גורמים מסיסים שמקורם באיברים והשפעותיהם על טרופיזם האיברים וההתנהגות הגרורתית של תאים סרטניים.

דור של איברים ממוזגים מדיה ויישומים עבור לימוד השפעות איבר ספציפי על התנהגות סרטן שד גרורתי

תאי סרטן מוטבעים בג'ל קולגן ולאחר מכן נדחקים בג'ל פיברין תאי כדי ליצור מערכת תרבית תלת מימדית שבה ניתן לנטר את הפולשניות והיווצרות גידולי לווין.

תלת ממדי Assay תרבות לחקור הפולשנות תאים סרטניים היווצרות גידולים בלוויין

פרוטוקול ניסיוני זה מתאר את הבידוד של BCSCs מדגימות תאים ורקמות של סרטן השד, כמו גם את מבחני in vitro ו - in vivo שניתן להשתמש בהם כדי להעריך את הפנוטיפ והתפקוד של BCSC.

בידוד והערכה תפקודית של תאי גזע מסרטן השד האנושי מדגימות תאים ורקמות

כתב היד מתאר מתודולוגיה להקמה וכן ניטור גדילה אורכי של גרורות ריאה ספונטניות מגידולי שד בהזרקה אורתוטופית, הניתנת להתערבות בכל שלבי המפל הגרורתי.

ב Vivo הדמיה למדידת גרורות ריאה ספונטניות של תאי גידול שד בהזרקה אורתוטופית

יש צורך קריטי במודלים תלת מימדיים של סרטן הלוכדים הצלבה הטרו-תאית כדי לחקור גרורות סרטניות. המחקר שלנו מציג את הדור של הטרו-אפיתל סטרומלטי-תאי בסביבה נטולת פיגומים ופיגומים שניתן להשתמש בהם לחקר פלישה והתפלגות מרחבית תאית.

תאי סטרומה הטרו-תאיים בתרביות תלת מימד ללא פיגומים של תאי סרטן אפיתל כדי להניע פלישה

פרוטוקול זה מתאר שיטות לתרבות, מניפולציה וניתוח CAFs של עכברים, כולל מבחנים פונקציונליים במבחנה/in vivo , טרנסקריפטומיקה וניתוח חישובי. יתר על כן, הוא מתאר פלטפורמה מבוססת אינטרנט שפותחה כדי לנתח את הטרנסקריפטומים הזמינים לציבור של רכיבי סטרומה ואפיתל של לכידת לייזר מאוסף של גידולי סרטן שד אנושיים.

פיברובלסטים הקשורים לסרטן מגידולי חלב של עכברים ככלים למחקרים מולקולריים וחישוביים

למדו שיטות לגידול explants רקמות עצם אנושיות לחקירת התיישבות תאי סרטן השד הגרורתיים בנישת העצם. מודל זה מאפשר ניתוח התנהגות תאי סרטן במיקרו-סביבת העצם האנושית.

שיטות לExplants רקמות Culturing עצם ירך האדם ללמוד התיישבות תאי סרטן השד גרורתי של הנישה

גלה סרטונים נוספים