Name: Assay למדידת ההשפעות של אתנול במהירות התנועה של Elegans Caenorhabditis /em (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: למדו כיצד למדוד את השפעת האתנול על מהירות התנועה של Caenorhabditis elegans באמצעות אסיי התנהגותי. השיטה מאפשרת לכמת רגישות ראשונית ופיתוח סבילות פונקציונלית חריפה באורגניזם מודל זה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקרים אלה נתמכו על ידי מענקים מהמוסד הלאומי לבריאות, המכון הלאומי לאלכוהוליזם והתמכרות לאלכוהול: R01AA016837 (JCB) וP20AA017828 (AGD וJCB).

<ol><li>Prescott, C. A., Kendler, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+environmental+contributions+to+alcohol+abuse+and+dependence+in+a+population-based+sample+of+male+twins%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Genetic and environmental contributions to alcohol abuse and dependence in a population-based sample of male twins.</a> Am. J. Psychiatry. 156, 34-40 (1999).</li>
<li>Schuckit, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+the+risk+for+alcoholism%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Addict.+Article+Review%22%5BJournal%5D)">Genetics of the risk for alcoholism.</a> Am. J. Addict. Article Review. 9, 103-112 (2000).</li>
<li>Heath, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+differences+in+alcohol+sensitivity+and+the+inheritance+of+alcoholism+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Psychol.+Med%22%5BJournal%5D)">Genetic differences in alcohol sensitivity and the inheritance of alcoholism risk.</a> Psychol. Med. 29, 1069-1081 (1999).</li>
<li>Rodriguez, L. A., Wilson, J. R., Nagoshi, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+psychomotor+sensitivity+to+alcohol+predict+subsequent+alcohol+use%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol.+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Does psychomotor sensitivity to alcohol predict subsequent alcohol use.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 17, 155-161 (1993).</li>
<li>Schuckit, M. A., Smith, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+8-year+follow-up+of+450+sons+of+alcoholic+and+control+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Gen.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">An 8-year follow-up of 450 sons of alcoholic and control subjects.</a> Arch. Gen. Psychiatry. 53, 202-210 (1996).</li>
<li>Kalu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heritability+of+level+of+response+and+association+with+recent+drinking+history+in+nonalcohol-dependent+drinkers%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol.+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Heritability of level of response and association with recent drinking history in nonalcohol-dependent drinkers.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 36, 522-529 (2012).</li>
<li>Davis, S. J., Scott, L. L., Hu, K., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+single+residue+in+the+BK+potassium+channel+required+for+activation+by+alcohol+and+intoxication+in%5BTitle%5D)+AND+%22C.+elegans.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Conserved single residue in the BK potassium channel required for activation by alcohol and intoxication in.</a> C. elegans. J. Neurosci. 34, 9562-9573 (2014).</li>
<li>Raabe, R. C., Mathies, L. D., Davies, A. G., Bettinger, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Omega-3+Fatty+Acid+Eicosapentaenoic+Acid+Is+Required+for+Normal+Alcohol+Response+Behaviors+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">The Omega-3 Fatty Acid Eicosapentaenoic Acid Is Required for Normal Alcohol Response Behaviors in C. elegans.</a> PLoS ONE. 9, e105999(2014).</li>
<li>Topper, S. M., Aguilar, S. C., Topper, V. Y., Elbel, E., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+disinhibition+of+behaviors+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Alcohol disinhibition of behaviors in C. elegans.</a> PLoS ONE. 9, e92965(2014).</li>
<li>Bhandari, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloride+intracellular+channels+modulate+acute+ethanol+behaviors+Drosophila%2CCaenorhabditis+elegans+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Chloride intracellular channels modulate acute ethanol behaviors Drosophila,Caenorhabditis elegans and mice.</a> Genes Brain Behav. 11, 387-397 (2012).</li>
<li>Davies, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+of+the+BK+potassium+channel+in+behavioral+responses+to+ethanol+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A central role of the BK potassium channel in behavioral responses to ethanol in C. elegans.</a> Cell. 115, 655-666 (2003).</li>
<li>Davies, A. G., Bettinger, J. C., Thiele, T. R., Judy, M. E., McIntire, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+variation+in+the+npr-1+gene+modifies+ethanol+responses+of+wild+strains+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Natural variation in the npr-1 gene modifies ethanol responses of wild strains of C. elegans.</a> Neuron. 42, 731-743 (2004).</li>
<li>Kapfhamer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+RAB-3%2FA+in+Caenorhabditis+elegans+and+the+mouse+affects+behavioral+response+to+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Loss of RAB-3/A in Caenorhabditis elegans and the mouse affects behavioral response to ethanol.</a> Genes Brain Behav. 7, 669-676 (2008).</li>
<li>Speca, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+role+of+unc-79+in+ethanol+responses+in+lightweight+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Conserved role of unc-79 in ethanol responses in lightweight mutant mice.</a> PLoS Genet. 6, e1001057(2010).</li>
<li>Thiele, T. E., Badia-Elder, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+neuropeptide+Y+in+alcohol+intake+control%3A+evidence+from+human+and+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">A role for neuropeptide Y in alcohol intake control: evidence from human and animal research.</a> Physiol. Behav. 79, 95-101 (2003).</li>
<li>Treistman, S. N., Martin, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BK+Channels%3A+mediators+and+models+for+alcohol+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">BK Channels: mediators and models for alcohol tolerance.</a> Trends Neurosci. 32, 629-637 (2009).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+GWASs+and+human+protein+interaction+networks+identifies+a+gene+subnetwork+underlying+alcohol+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hum.+Genet%22%5BJournal%5D)">Integrating GWASs and human protein interaction networks identifies a gene subnetwork underlying alcohol dependence.</a> Am. J. Hum. Genet. 93, 1027-1034 (2013).</li>
<li>Kendler, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomewide+association+analysis+of+symptoms+of+alcohol+dependence+in+the+molecular+genetics+of+schizophrenia+%28MGS2%29+control+sample%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol.+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Genomewide association analysis of symptoms of alcohol dependence in the molecular genetics of schizophrenia (MGS2) control sample.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 35, 963-975 (2011).</li>
<li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autosomal+linkage+analysis+for+the+level+of+response+to+alcohol%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol.+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Autosomal linkage analysis for the level of response to alcohol.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 29, 1976-1982 (2005).</li>
<li>Alaimo, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+metabolism+and+osmolarity+modify+behavioral+responses+to+ethanol+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol.+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Ethanol metabolism and osmolarity modify behavioral responses to ethanol in C. elegans.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 36, 1840-1850 (2012).</li>
<li>Morgan, P. G., Sedensky, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+affecting+sensitivity+to+ethanol+in+the+nematode%2C+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol.+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Mutations affecting sensitivity to ethanol in the nematode, Caenorhabditis elegans.</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 19, 1423-1429 (1995).</li>
<li>Mitchell, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+concentration-dependent+effects+of+ethanol+on+Caenorhabditis+elegans+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogenomics+J%22%5BJournal%5D)">The concentration-dependent effects of ethanol on Caenorhabditis elegans behaviour.</a> Pharmacogenomics J. 7, 411-417 (2007).</li>
<li>Vidal-Gadea, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+selects+distinct+crawling+and+swimming+gaits+via+dopamine+and+serotonin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans selects distinct crawling and swimming gaits via dopamine and serotonin.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108, 17504-17509 (2011).</li>
<li>Bettinger, J. C., Leung, K., Bolling, M. H., Goldsmith, A. D., Davies, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+environment+modulates+the+development+of+acute+tolerance+to+ethanol+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Lipid environment modulates the development of acute tolerance to ethanol in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS ONE. 7, e35129(2012).</li>
<li>Davies, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+genes+influence+toluene-+and+ethanol-induced+locomotor+impairment+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Alcohol+Depend%22%5BJournal%5D)">Different genes influence toluene- and ethanol-induced locomotor impairment in C. elegans.</a> Drug Alcohol Depend. 122, 47-54 (2012).</li>
<li>Newlin, D., Thomson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+challenge+with+sons+of+alcoholics%3A+a+critical+review+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Psychol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Alcohol challenge with sons of alcoholics: a critical review and analysis.</a> Psychol. Bull. 108, 383-402 (1990).</li>
<li>Ponomarev, I., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+to+assess+initial+sensitivity+and+acute+functional+tolerance+to+hypnotic+effects+of+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel method to assess initial sensitivity and acute functional tolerance to hypnotic effects of ethanol.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 302, 257-263 (2002).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9, 671-675 (2012).</li>
<li>Husson, S. J., Costa, W. S., Schmitt, C., Gottschalk, A. Keeping track of worm trackers. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHusson%2C+SJ+%22WormBook%22">WormBook</a>. , The C. elegans Research Community. (2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לגלות.

נוירוביולוגיה הפשוטה וכלים גנטיים זמינה ב C. elegans לעשות תולעת מודל מצוין שבו ללמוד את הבסיסים המולקולריים של ההשפעות של אתנול על התנהגות. כאן אנו מתארים assay שנעשה שימוש כדי לזהות כמה מתווכים מולקולריים וסביבתיים של התגובה התנהגותית החריפה כדי אתנול 8,10,20,24,25. שיטה זו מאפשרת בידול ובדיקה בו זמנית של שני פנוטיפים שונים תגובת אתנול התנהגות, רגישות ראשונית והפיתוח של סובלנות פונקציונלית חריפה, שביחד מודל פנוטיפ שילוב של רמת התגובה ביונקים. אותו assay יכול ...

הפרעות בשימוש באלכוהול (AUD) נפוצות וגורמות לבעיות בריאותיות, חברתיות וכלכליות חמורות. בבני אדם, הרגישות לפיתוח הפרעת שימוש באלכוהול מושפעת מאוד הן מגנטיקה והן מהסביבה1,2. מדד פיזיולוגי חזק לנטייה להתמכרות הוא הרמה הראשונית של תגובה (LR) לאלכוהול (אתנול) שמוצגת על ידי שותים חסרי ניסיון3-5. פנוטיפ LR זה מושפע מרכיבים גנטיים ושאינם גנטיים6. קביעת המנגנונים המולקולריים המשפיעים על ה-LR לאתנול היא מטרה חשובה במחקר על התנהגויות תגובה לאתנול.
הנמטודה, Caenorhabditis elegans, משמשת יותר ויותר כמודל לחקר ההשפעות של אתנול על ההתנהגות7-9. ישנה שימור מולקולרי חזק במנגנון תפקוד מערכת העצבים בין תולעים ויונקים, ומספר גנים שהוכחו כמשפיעים על ה-LR לאתנול בתולעים הוכחו כמשפיעים על ה-LR לאתנול ביונקים10-16, והוצגו כמרמזים על נטייה להתמכרות בבני אדם17-19.
אתנול מרעיל תולעים, מה שבא לידי ביטוי בירידה במהירות התנועה שלהן. מספר מעבדות שונות פיתחו מבחנים התנהגותיים הנבדלים זה מזה במספר דרכים, לדוגמה, התנהגות התנועה שהם חוקרים (זחילה לעומת שחייה11,12,14,20,21) או בהרכב הפתרונות שבהם מתבצעים המבחנים (מדיום גידול נמטודה לעומת תמיסת דנט20,22). באופן מעניין, מבחנים מגוונים אלו חשפו פרופילי תגובת מינון שונים במקצת להשפעות האתנול. תוצאות אלו הצביעו על הבדלים חשובים בהתנהגויות הבסיסיות של זחילה ושחייה9,23, כמו גם על תפקיד המשתנה הסביבתי אוסמולריות בתגובות לאתנול20, והדגישו את החשיבות בתיאור פירוט ניסויי של המבחנים השונים.
מבחן למדידת ההשפעות החריפות של אתנול על התנהגות הזחילה מוצג כאן. מבחן זה שימש בהרחבה לחקר ההשפעות הגנטיות והסביבתיות על ה-LR לאתנול8,10,20,24,25. פנוטיפ ה-LR של היונק הוא הרכב של לפחות שני רכיבים, רגישות ראשונית לאתנול וסובלנות תפקודית חריפה לאתנול26,27. בתולעים, הוכח שפנוטיפ ה-LR ניתן להפרדה לשני הרכיבים הללו באמצעות מבחן התנהגותי זה. ניתן לבחון את ההשפעות של מניפולציות גנטיות וסביבתיות על שני הפנוטיפים באמצעות מבחן יחיד זה. חשוב לציין ששני הפנוטיפים הללו ניתנים להפרדה גנטית.

<table><tbody><tr><td>C. elegans strains</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>60 x 15 mm Petri plates, triple vented</td><td>Greiner Bio-One</td><td>628161</td><td>Other plate brands will suffice.</td></tr><tr><td>NGM agar</td><td>Various</td><td></td><td>NaCl (3 g/L), agar (17 g/L), peptone (2.5 g/L), 1 ml cholesterol (5 mg/ml in ethanol), 1 ml (1 M) MgSO4, 1 ml (1 M) CaCl2, 25 ml (1 M) KPO4, pH=6, 975 ml H2O</td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Various</td><td></td><td>e.g., Fisher Scientific #10300</td></tr><tr><td>37 &deg;C Incubator</td><td>Various</td><td></td><td>For drying agar</td></tr><tr><td>Digital balance</td><td>Various</td><td></td><td>For determining plate weights and agar volume</td></tr><tr><td>Copper rings</td><td>Plumbmaster</td><td>STK#35583 (48 cap thread gasket)</td><td>1.6 cm inner diameter, 1.8 cm outer diameter copper rings</td></tr><tr><td>100% ethanol</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>CCD camera</td><td>QImaging</td><td>RET-4000R-F-M-12</td><td>This camera has a large field of view.</td></tr><tr><td>Stereomicroscope with C-mount and 0.5X objective</td><td>Leica</td><td>MZ6</td><td>Discontinued model, M60 is current equivalent.</td></tr><tr><td>Light source</td><td>Schott</td><td>A08923</td><td>3&rdquo;x3&rdquo;&nbsp; backlight for even illumination across the field of view</td></tr><tr><td>Imaging and tracking software</td><td>Media Cybernetics</td><td>ImagePro-Plus v6.0-6.3</td><td>Newer versions of the software have tracking functions.</td></tr></tbody></table>

assay למדידת ההשפעות של אתנול במהירות התנועה של<em&gt; elegans caenorhabditis</em

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

הפרעות בשימוש באלכוהול הן דאגה בריאותית ציבורית משמעותית, שיש להן אסטרטגיות טיפול יעילות מעטות. אחת הקשיים שעיכבה את הפיתוח של טיפולים יעילים יותר היא חוסר ההבנה היחסי של היסודות המולקולריים של ההשפעות של אתנול על ההתנהגות. הנמטודה, Caenorhabditis elegans (C. elegans), מספקת מודל שימושי שבו ניתן לייצר ולבחון השערות לגבי ההשפעות המולקולריות של אתנול. כאן, אנו מתארים מבחן שפותח ושימש לבחינת התפקידים של גנים מסוימים וגורמים סביבתיים בתגובות התנהגותיות לאתנול, שבהן התנועה היא תוצאת ההתנהגות. אתנול גורם באופן מינון תלוי לדיכוי חריף של זחילה על משטח אגר. ההשפעות הן דינמיות; בעלי חיים שנחשפים לריכוז גבוה מפגינים דיכוי חזק ראשוני של זחילה, המכונה כאן רגישות ראשונית, ואז מתאוששים חלקית ממהירות התנועה למרות המשך נוכחות התרופה. הפלסטיות ההתנהגותית הנגרמת על ידי אתנול מכונה כאן התפתחות סובלנות תפקודית חריפה. מבחן זה שימש כדי להוכיח ששני הפנוטיפים הללו הם שונים וניתנים להפרדה גנטית. מבחן התנועה הפשוט המתואר כאן מתאים לבחינת ההשפעות של מניפולציות גנטיות וסביבתיות על תגובות התנהגותיות חריפות אלו לאתנול ב-C. elegans.

נציגי נתונים (איור 1) מכמה גנוטיפים שונים ובקרות לזווגם מוצגים 8,24; הנתונים שנבחרו במיוחד שהבדלי גולת הכותרת בבעלי החיים assayed. מידת ההשפעה על 10 דקות של חשיפה נחשבת הרגישות הראשונית של מתח, אשר מוצג על הצירים שנותרו באיור 1 ב-G. זנים מוטנטים עם מהירות היחסית גדולה יותר מהשליטה בשעה 10 דקות נחשבים לעמיד אתנול (איור 1F, G), ואילו זנים מוטנטים עם מהירות היחסית שהיא פחות מהשליטה נחשב לרגיש לאתנול (1D איור, E).</...

C. elegans הוא מודל שימושי לחקר ההשפעות של אתנול על ההתנהגות. אנו מציגים בדיקת התנהגותית שמכמתת את ההשפעות של אתנול על מהירות התנועה של תולעים זוחלות; ניתן למדוד עם הבדיקה הזו גם את הרגישות הראשונית וגם את התפתחות הסובלנות התפקודית החריפה לאתנול.

Assay למדידת ההשפעות של אתנול במהירות התנועה של<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לכמת את השפעת האלכוהול על איברי CL של גנוטיפים שונים בצורה עקבית. זה מושג על ידי יצירת צלחת אגר המכילה אלכוהול עם טבעות נחושת מוטבעות במשטח כדי לאסוף את בעלי החיים. לאחר מכן, כל אחד מהגנוטיפים נאסף בנפרד וחשוף לאלכוהול. במהלך החשיפה, נתוני וידיאו נאספים בנקודות זמן קבועות.השלב האחרון הוא מדידת המהירות של כל גנוטיפ באמצעות תוכנת זיהוי אובייקטים. בסופו של דבר, השוואה של מהירויות בנקודות זמן מוקדמות ומאוחרות משמשת כדי לחשוף רגישות חריגה או התפתחות סובלנות לאלכוהול. הגנוטיפים הספציפיים.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, אשר משוות גנוטיפים בצלחות שונות, הוא שהשונות הסביבתית מופחתת. באופן כללי, אנשים חדשים לשיטה זו ייתקלו בקשיים בבחירת תולעים באמצעות פיק בהיר. ביום שלפני הבדיקה. לוקחים ארבעה תולעים שלב L לצלחות NGM טריות. יש לשבת אותם עם שכבה של תרבות OP 50 E coli, הצלחות ב 20 מעלות צלזיוס למשך הלילה, הבדיקה דורשת צלחות סטנדרטיות ללא מושב של 60 על 15 מילימטר.צלחות NGM מייבשות את כל הצלחות שישמשו ב 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים עם המכסים מורמים. כל ניסוי דורש ארבע צלחות. השימוש בצלחות NGM חשוב כאן.הבדלים בהרכב הצלחות. במיוחד, האוסמולריות שלהן יכולה להשפיע מאוד על מינון האתנול התגובתי על ההתנהגות. זה נובע לפחות בחלקו, משינויים בכמות האתנול שנצברה על ידי בעלי החיים. לאחר הייבוש, יש לשקול כל אחת מהצלחות ה-NGM ללא מושב.השתמש במשקל זה כדי לקבוע את נפח המדיום בכל צלחת, בהנחה שהמדיום שוקל כמו מים. לאחר מכן, תכנן להמיס ארבע טבעות נחושת עם קוטר פנימי של 1.6 סנטימטרים בכל צלחת, כך שניתן יהיה לצפות בהן בו זמנית על ידי המצלמה. בעזרת מלקטים.אוכלים כל טבעת בלהבה למשך כשלוש שניות ומיד שמים את הטבעת על הצלחת מבלי להפיל אותה. לאחר מכן, לחצו על הטבעת בעדינות במספר מקומות כדי לאבטח אותה לאורך ההיקף. תווית את הצלחות עם הזן שיהיה בכל טבעת.כעת, חשב את כמות האתנול 100% הנחוצה כדי להשיג ריכוז משקל לנפח של 400 מילומולאר על הצלחת. לאחר מכן טען חצי מהצלחות באתנול על ידי פיזור האתנול מצינורית. תן לכל הצלחות המוכנות להתאזן במשך שעתיים לפני תחילת הניסוי.כדי להתחיל, קח שתי דקות או פחות להעביר 10 תולעים מכל קבוצת ניסוי למרכז טבעת נחושת על צלחת הסתגלות. זו צלחת ללא אתנול. הימנע מהעברת מזון עם התולעים מכיוון שזה יפחית את תנועתם.כמו כן, הימנע מפגיעה במשטח האגר מכיוון שהתולעים יתחפרו. רשום את זמן הטעינה לצלחת וודא לפזר את העברת התולעים לכל צלחת במשך יותר משתי דקות, כך שניתן יהיה לצלם כל צלחת בנפרד במרווח זמן המתאים. השאר כל צלחת הסתגלות להדגרה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.לאחר מכן, העבירו את התולעים לצלחת הבדיקה בהתאם לסדר ששימש להנחת התולעים על צלחת ההסתגלות באמצעות פיק מחודד ומשוטח. בחר ללא חיידקים. אוסף את התולעים על גבי הפיק המשוטח.בעזרת תנועת גלישה, ואז אוטם את הצלחות בסרט מעבדה כדי למזער אובדן אתנול להתאדות. המהירות בה בעלי החיים מועברים בשלב זה חשובה מאוד מכיוון שההעברה לבעלי חיים תהיה חשופה לאתנול יותר, לכן זו רעיון טוב לסובב אילו זנים מוצבים על הצלחת. ראשית דרך שכפולים ניסויים.נדרש מיקרוסקופ עם מצלמת וידיאו ברזולוציה גבוהה כדי לצלם את התולעים. כעת, תאורה אחידה, כמו מאור גב בגודל שלושה סנטימטרים רבועים, היא חיונ

an-assay-for-measuring-effects-ethanol-on-locomotion-speed

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

Assay פשוט למדוד את ההשפעות מרגיעים של אתנול...

דרך פשוטה למדוד את רגישות אתנול זבובים

חוקרים יכולים להפעיל תנועה לפי דרישה ב-C. elegans על ידי הפעלת שדה חשמלי שתולעים חשות בו ומגיבות אליו. סרטון זה מציג התנהגות אלקטרוטקטית ומציג פרוטוקול דגימה שנעשה במכשיר מיקרופלואידי.

בדיקת Electrotaxis: שיטה לצפייה בתנועה ב- C. elegans

סרטון זה מתאר את השימוש בתוכנת וידאו ומעקב כדי להקליט תנועת תולעים בזירה. הפרוטוקול לדוגמה מודד את ההשפעה של חשיפה לאתנול על תנועת תולעים.

ג. אלגנס מעקב אחר תנועה: שיטה להערכת תנועה בתולעים

סרטון זה מדגים את השימוש בבדיקת תנועה רדיאלית כדי להעריך תפקוד לקוי של מוטוריקה ב-C. elegans המבטא חלבון TDP-43 אנושי מסוג פרא או מוטנטי ALS. תולעים עם רמות שונות של ביטוי TDP-43 מסוג בר או מוטנטי מורשות לזחול, ותנועתן נמדדת על ידי המרחק הרדיאלי שעובר מהנקודה המרכזית על לוחית הבדיקה. הבדיקה מבחינה בין ליקויים מוטוריים קלים, בינוניים וחמורים על סמך המרחק שעברו הזנים השונים C. elegans.

הערכת ליקוי מוטורי במודלים של C. elegans באמצעות בדיקת תנועה רדיאלית

שיטת הערכת כמותית תגובת chemotactic...

Assay Chemotaxis סי אלגנס

שיטת מייקרו אלקטרו fluidic חצי אוטומטית כדי לגרום לתנועה על פי דרישה...

Electrotaxis מבוסס microfluidic לניתוח כמותי על פי דרישה של<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; &#39;נידות

ביצה בתולעת assay (EIW) הוא שיטה יעילה לכמת-הטלת התנהגות. שינויים בנחת ביצה יכולים להיות תגובה התנהגותית של האורגניזם...

מדידת ההשפעות של חיידקים על<em&gt; ג Elegans</em&gt; התנהגות באמצעות Assay שימור ביצה

בדיקות פשוטות למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בדרוזופילה מקלות על השימוש באורגניזם מודל זה לחקירת התנהגויות חשובות אלה הקשורות לאתנול. כאן מתוארת בדיקה פשוטה יחסית וניתנת להרחבה למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בזבובים.

Assay זול, Scalable התנהגות למדידת אתנול הרגעת רגישות וסובלנות מהירה ב<em&gt; דרוזופילה</em

שיטות נוכחיות למדידת רגישות האלכוהול בדרוזופילה נועדו לבחון קבוצות של זבובים. אנו מציגים בקלות, בעלות נמוכה, התפוקה גבוהה הערכה להערכת רגישות הרגעה אלכוהול במספר גדול של זבובים בודדים. השיטה אינה דורשת כלים מיוחדים וניתן לבצעו בכל מעבדה המשתמשת בחומרים משותפים.

שיטת תפוקה גבוהה עבור מדידת אלכוהול הרגעה זמן של הפרט דרוזופילה מלאנוגסטר

מחקר זה מציג פרוטוקולים עבור שתי גישות ניתוח פעילות לוקומוטור חצי אוטומטי ב C. elegans קומפלקס I מחלות גז-1(fc21) תולעים, כלומר, ZebraLab (בדיקת תפוקה בינונית) ו- WormScan (בדיקה בעלת תפוקה גבוהה) ומספקים ניתוח השוואתי בין מגוון רחב של שיטות מחקר לכימות התנהגות נמטודה ותפקוד עצבי שרירי משולב.

ניתוח השוואתי של שיטות ניסיוניות לכימות פעילות בעלי חיים בקאנורבדיטיס אלגנס מודלים של מחלות מיטוכונדריאליות

הפרוטוקול הנוכחי מתאר בדיקה לקביעת התגובה ללבמיזול, אגוניסט פרמקולוגי של סוג אחד של קולטני אצטילכולין Caenorhabditis elegans . במבחן השחייה הנוזלי הזה, החוקרים מתבוננים באופן חזותי ומכמתים את השיתוק תלוי הזמן של בעלי חיים המעובדים בצלחות של 24 בארות.

מדידת רגישות Caenorhabditis elegans לקולטן אצטילכולין אגוניסט לבאמיזול

למדו כיצד למדוד את השפעת האתנול על מהירות התנועה של Caenorhabditis elegans באמצעות אסיי התנהגותי. השיטה מאפשרת לכמת רגישות ראשונית ופיתוח סבילות פונקציונלית חריפה באורגניזם מודל זה.

Assay למדידת ההשפעות של אתנול במהירות התנועה של

גלה סרטונים נוספים