מבחן מוריס מים מבוך: אופטימיזציה לזני עכבר ובדיקת איכות סביבה

מטרת הליך זה היא לזהות ליקויים קוגניטיביים במודל עכברי של מחלת אלצהיימר באמצעות שימוש בפרוטוקול מבוך מים של מוריס, המותאם לשימוש עם זן הרקע 1 2 9 6 FBB. זה מושג על ידי התאקלמות העכברים תחילה למשימה להקל על ליקויי ביצועים הנגרמים על ידי לחץ. השלב השני הוא להשתמש במשימת הפלטפורמה החזותית שבה פלטפורמה מוגבהת סנטימטר אחד מעל קו המים כדי להעריך את התפקוד החזותי והמוטורי.

לאחר מכן, נערכים ניסויי הפלטפורמה הנסתרת כאשר הפלטפורמה שקועה בעומק של חמישה מילימטרים מתחת לפני המים. השלב האחרון הוא להשתמש בניסויי בדיקה שבהם הפלטפורמה מוסרת כדי להעריך זיכרון ייחוס מרחבי ולקבוע את סוג אסטרטגיית החיפוש בה נעשה שימוש. בסופו של דבר, הליך MAs מותאם זה מאפשר הערכה של למידה וזיכרון מרחבי במודל עכברי נפוץ של מחלת אלצהיימר.

בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו בגלל הצורך לייעל את הליכי הבדיקה, כגון מספר ניסויי האימון והבדיקות המשמשות על סמך מתח הרקע של קו העכבר והסביבה בה נבדקים העכברים. חלק זה של ההליך מאקלם את העכברים למשוך כניסה והוצאה. ראשית, הניחו את הקופסה כך שתוגבה לגובה נוח ומלאו אותה בשני ליטר מים בטמפרטורה של 21 מעלות צלזיוס ועד לרמה של כסנטימטר אחד.

לאחר הבאת העכברים לחדר הבדיקה, הוציאו נבדק מהכלוב, וודאו את זיהוי הנבדק ולאחר מכן סמנו את הזנב בטוש קבוע לא רעיל כדי להבדיל בינו לבין עכברים שלא עברו את ההליך. הנח עכבר בכוס ההעברה למשך כחמש שניות. לאחר מכן שפכו בעדינות את העכבר מהכוס לתוך הבריכה לפני הטיפול תזמן את העכבר בבריכה למשך 20 שניות.

לאחר שחלף הזמן, הניחו בעדינות כף מדידה מול העכבר מבלי לכוון אותה. אפשר לעכבר להיכנס ולחקור את כף המדידה במידת הצורך, עודד את העכבר לעלות על כף המדידה על-ידי החלקה עדינה של כף המדידה מתחת לעכבר תוך הרמה איטית. הקפד לא להפחיד את העכברים עם הסקופ.

חזור על הליכים אלה עבור כל עכבר בכלוב פעם ביום למשך 10 ימים. לאחר כל חיה, אספו צואה של בולי ומצעים מהבריכה, באמצעות רשת שהיא ההעברה בין הכלובים. בצע אימון גלוי בימי הבדיקה הראשון, השני והשלישי עם שישה ניסויים בכל יום וכ-10 דקות בין כל ניסוי.

ראשית, הגדר את תוכנת מעקב ביצועי העכבר וצור את גיליונות ההפעלה בהתאם להוראות בחלק הטקסט של הפרוטוקול. לאחר הגדרת התוכנה, הגדר את החדר על ידי תליית וילונות תחילה כך שכל רמזים מרחביים יוסתרו. לאחר מכן, הגדר את האמבטיה על ידי מילוי מי ברז בטמפרטורה של 21 מעלות צלזיוס.

השתמש במדחום כדי להבטיח שטמפרטורת המים תישאר בטווח של מעלה אחת מטמפרטורה זו. לאורך כל הבדיקות. הנח את הפלטפורמה, שיש לה דגל רכוב שמגיע לגובה של 13 סנטימטרים וגודלה 4.5 על 4.5 סנטימטרים, עם תו מודגש בצורת S מוטבע עליו במיקום הראשון שנקבע מראש של האמבטיה כך שהיא מתנשאת כסנטימטר אחד מעל פני המים.

עכשיו קח את העכבר הראשון מהכלוב. ודא את זיהוי הנושא, סמן את הזנב באמצעות טוש קבוע בצבע הנכון והנח אותו בכוס העברה. הנח בעדינות את העכבר לתוך האמבטיה.

הפעל את הטיימר וודא שתוכנת המעקב עוקבת אחר החיה. אפשר לעכבר עד שתי דקות לאתר את הפלטפורמה. לאחר שהעכבר מאתר את הפלטפורמה, אפשר לעכבר 20 שניות על הרציף.

אם החיה לא מצליחה למצוא את הפלטפורמה בפרק הזמן של שתי הדקות, גרפו את העכבר והניחו אותו על הפלטפורמה למשך 20 שניות. לאחר 20 שניות על הרציף, הוציאו את העכבר מהפלטפורמה כפי שנעשה באימוני התאקלמות, והניחו אותו בכלוב מחומם מרופד במגבות נייר וחממו לכ-31 מעלות צלזיוס על ידי כרית חימום ומנורת חום למשך 30 שניות. לאחר מכן העבירו את העכבר לכלוב האחיזה עם כרית חימום בלבד, אך ללא מנורת חום להתאוששות בין הניסיונות.

לאחר ניקוי אמבט הפסולת ברשת, חזור על שלבים אלה עבור כל עכבר בקבוצה. לאחר השלמת כל עכבר, הניסיון הראשון, העבר את הפלטפורמה למיקום השני שנקבע מראש. בצע אימוני פלטפורמה נסתרת מימים 4 עד 10 לאחר תליית וילונות.

כמו קודם, הניחו רמזים אסטרטגיים על הווילונות. ודא שהרמזים גדולים ומכילים צבעים מנוגדים לנראות טובה יותר, והם מוגדרים למרחק ולגובה במקום שבו הם נראים לעכברים מתוך האמבטיה. הגדר את התוכנה בהתאם להוראות בחלק הכתוב של הפרוטוקול.

לאחר מכן הגדר את האמבטיה על ידי מילויה תחילה במים כך שהפלטפורמה תהיה כחמישה מילימטרים מתחת לפני המים. הנח את הפלטפורמה במיקום שנקבע מראש. מיקום הפלטפורמה יישאר זהה כמעט להיבדק לאורך כל הימים והניסויים.

It.It חיוני לשנות את מיקום ההתחלה כך שבעלי החיים לא יפתחו אסטרטגיה מוטורית לא מרחבית ולא היפוקמפוסית. כדי לפתור את המבוך, השתמש בצבע ממוזג לבן לא רעיל כדי להפוך את המים לאטומים. עשה זאת כדי להבטיח שהחלק העליון של הפלטפורמה אינו נראה מגובה העיניים של החיה בזמן השחייה.

לאחר זיהוי וסימון העכברים לפני, שפכו בעדינות את העכבר לתוך המבוך, כך שאף אוזן גרון יפנה לקיר. כל עכבר יוצב באותו מיקום התחלה לניסוי ייחודי. בשחרור הראשוני של העכבר, הפעל את הטיימר ועמד באזור בו הבוחן אינו נראה בקלות לעכברים.

ברגע שהחיה מגיעה לפלטפורמה, אפשרו לה להישאר על הרציף למשך 15 שניות כדי לכוון את מיקומה המרחבי בתוך החדר. אם העכבר לא מאתר את הפלטפורמה תוך 60 שניות, גרוף בעדינות את העכבר והנח אותו על הרציף. לאחר 15 שניות על הרציף, הסר את העכבר מהמבוך והחזיר אותו לכלוב המחומם.

לאחר ניקוי מבוך הפסולת לפני, חזור על הליכים אלה עבור העכברים הנותרים בקבוצה. לפיכך, בימי הבדיקה הרביעי עד התשיעי, ערכו ארבעה ניסויים של אימון פלטפורמה נסתרת ביום עם כ-20 דקות בין כל ניסוי. בצע ניסויי בדיקה לפני אימון הפלטפורמה ביום השישי, השביעי והשמיני, וניסוי הבדיקה האחרון.

ביום העשירי, ערכו את ניסויי הגשושית באופן דומה לאימון פלטפורמה נסתרת, למעט העובדה שאף פלטפורמה לא נמצאת במבוך. שחרר עכבר מנקודת שחרור שנקבעה מראש ואפשר לעכבר 60 שניות לשחות במבוך לאחר ניסוי הגשושית ביום ה-10, לא נערכו ניסויים נוספים במהלך ניסויי הבדיקה. השתמש בתוכנת המעקב אחר בעלי חיים כדי לעקוב אחר אורך הנתיב של החיה, אחוז הזמן שהחיה מבלה בכל רביע של המבוך, ומספר הפעמים שבעל חיים שוחה מעל האזור שקודם לכן הוצב בפלטפורמה.

פתח את לשונית הרשימה הניסיונית וקבל את המדידות מלשונית ניתוח הנתונים ומהכרטיסייה מבוך המים. ייצא ישירות לגיליון אלקטרוני של Excel. לאחר מכן נתח את הנתונים על פי ההוראות בחלק הכתוב של הפרוטוקול.

41 עכברים TP 3 0 1 ליטר המכילים את הגן האנושי P 3 0 1 LTL ו-46 בקרות נבדקו באמצעות פרוטוקול זה בגיל 6.5 חודשים בערך. זה מייצג שלושה חודשים של ביטוי Tau P 3 0 1 L בטרנסגנים. כל קבוצה הכילה מספר שווה של זכרים ונקבות באורך השביל.

אימון פלטפורמה בלתי נראית לא היה שונה בין בקרות לעכברי TP 3 0 1 ליטר. חוסר הבדל זה מצביע על כך שבקרה ו-tau P 3 0 1 LM אינם שונים ביכולת הראייה או התנועה, ולכן ניתן לייחס ליקויים בביצועים בבדיקות ניסוי נסתרות לליקויי זיכרון. עם זאת, במהלך אימון פלטפורמה נסתרת, TP 3 0 1 LM הפגין אורכי נתיב ארוכים משמעותית בכל גושי האימון.

לבסוף, הבקרות השתפרו בארבעת ניסויי הבדיקה. בעוד שעכברי Tau P 3 0 1 L לא שלטו, עכברים היו מסוגלים יותר להשתמש באסטרטגיה מרחבית כדי לפתור את המשימה ולמדו טוב יותר למקם את הפלטפורמה לאזור המטרה. בעת התאמת הליך זה לשימוש עם קווי עכבר אחרים, חשוב להעריך את קצב הלמידה של הבקרות, לזהות את מספר ניסויי האימון הדרושים ולקבוע מתי יש להכניס את ניסוי הבדיקה הראשון.