Name: מבחן מוריס מים מבוך: אופטימיזציה לזני עכבר ובדיקת איכות סביבה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: למדו פרוטוקול מבחן מוריס מים מבוך מותאם לזני עכבר בחקר מחלת אלצהיימר. שיטה זו מאפשרת הערכת ליקויי קוגניציה, זיכרון מרחבי ולמידה בעכברים טרנסגניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי למדעי רפואה כלליים (ריד / אנגלר-Chiurazzi - U54GM104942), המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ (אש - R01NS33249, R01NS63249 וR01NS79374), Cobre (אנגלר-Chiurazzi - P20GM109098), אלצהיימר האגוד (ריד - NIRG-12-242,187), WVU פקולטה מחקר הסנאט גרנט (ריד), מענק WVU PSCOR (ריד), וקרנות פנימיות ממכללת WVU של משרד דיקן הרפואה (אנגלר-Chiurazzi). התוכן הוא באחריות בלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצג את הדעות הרשמיות של NIH או אגודת אלצהיימר.

<ol><li>Ramsden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+neurofibrillary+tangle+formation%2C+neuron+loss%2C+and+memory+impairment+in+a+mouse+model+of+human+tauopathy+%28P301L%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Age-dependent neurofibrillary tangle formation, neuron loss, and memory impairment in a mouse model of human tauopathy (P301L).</a> The Journal of Neuroscience. 25, 10637-10647 (2005).</li>
<li>Attar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+shortened+barnes+maze+protocol+reveals+memory+deficits+at+4-months+of+age+in+the+triple-transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A shortened barnes maze protocol reveals memory deficits at 4-months of age in the triple-transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> PLoS One. 8, e80355(2013).</li>
<li>Johnson, J. M., Bailey, J. M., Johnson, J. E., Newland, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice+under+an+incremental+repeated+acquisition+of+behavioral+chains+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Processes%22%5BJournal%5D)">Performance of BALB/c and C57BL/6 mice under an incremental repeated acquisition of behavioral chains procedure.</a> Behavioural Processes. 84, 705-714 (2010).</li>
<li>Crawley, J. N. What's wrong with my Mouse Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , 1st edition, Wiley-Liss. 94-95 (2000).</li>
<li>Westerman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+abeta+and+memory+in+the+Tg2576+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The relationship between abeta and memory in the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease.</a> The Journal of Neuroscience. 22, 1858-1867 (2002).</li>
<li>D'Hooge, R., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+the+morris+water+maze+in+the+study+of+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Applications of the morris water maze in the study of learning and memory.</a> Brain Research Reviews. 36, 60-90 (2001).</li>
<li>Santa Cruz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tau+suppression+in+a+neurodegenerative+mouse+model+improves+memory+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tau suppression in a neurodegenerative mouse model improves memory function.</a> Science. 309, 476-481 (2005).</li>
<li>Hunsberger, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+size+of+memory+deficits+in+mice+with+adult-onset+P301L+tau+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Effect size of memory deficits in mice with adult-onset P301L tau expression.</a> Behavioural Brain Research. 272, 181-195 (2014).</li>
<li>Yue, M., Hanna, A., Wilson, J., Roder, H., Janus, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+difference+in+pathology+and+memory+decline+in+rTg4510+mouse+model+of+tauopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Aging%22%5BJournal%5D)">Sex difference in pathology and memory decline in rTg4510 mouse model of tauopathy.</a> Neurobiology of Aging. 32, 590-603 (2011).</li>
<li>Sandi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+and+mechanisms+of+action+of+glucocorticoid+involvement+in+memory+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+plasticity%22%5BJournal%5D)">The role and mechanisms of action of glucocorticoid involvement in memory storage.</a> Neural plasticity. 6, 41-52 (1998).</li>
<li>Hölscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+impairs+performance+in+spatial+water+maze+learning+tasks%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">C. impairs performance in spatial water maze learning tasks.</a> Behavioural Brain Research. 100, 225-235 (1999).</li>
<li>Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+of+a+water-maze+procedure+for+studying+spatial+learning+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat.</a> Journal of Neuroscience Methods. 11, 47-60 (1984).</li>
<li>Reed, M. N., Liu, P., Kotilinek, L. A., Ashe, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+size+of+reference+memory+deficits+in+the+morris+water+maze+in+Tg2576+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Effect size of reference memory deficits in the morris water maze in Tg2576 mice.</a> Behavioural Brain Research. 212, 115-120 (2010).</li>
<li>Huang, Y., Zhou, W., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bright+lighting+conditions+during+testing+increase+thigmotaxis+and+impair+water+maze+performance+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Bright lighting conditions during testing increase thigmotaxis and impair water maze performance in BALB/c mice.</a> Behavioral Brain Research. 226, 26-31 (2012).</li>
<li>Baker, R. Water maze. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.watermaze.org">http://www.watermaze.org</a> (2013).</li>
<li>Ivonen, H., Nurminen, L., Harri, M., Tanila, H., Puolivali, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermia+in+mice+tested+in+Morris+water+maze%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Hypothermia in mice tested in Morris water maze.</a> Behavioural Brain Research. 141, 207-213 (2003).</li>
<li>Rubinow, M. J., Arseneau, L. M., Beverly, J. L., Juraska, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+estrous+cycle+on+water+maze+acquisition+depends+on+the+temperature+of+the+water%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effect of estrous cycle on water maze acquisition depends on the temperature of the water.</a> Behavioral Neuroscience. 118 (4), 863-868 (2004).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

משימת MWM נעשתה שימוש נרחב על מנת להעריך את למידה וזיכרון המרחביים. עם זאת, על חוסנו של משימה זו יכול להיות מושפע מגורמים רבים ודורש אופטימיזציה עבור שני מתח הרקע וסביבת בדיקות. כפי שניתן לראות באיור 4, באותו פרוטוקול אימון ומיושם רמזים חזותיים המשמשים בשני חדרים שונים בדיקות (גודל שווה ערך ופריסה) הניב ביצועי בדיקה שונים באופן משמעותי. מאז תכונות רבות של חדר הבדיקות עשויות לתרום לרמזים מרחביים 4, הועלה שערה ששני החדרים היו שונים באופן משמעותי בדרך כלשה...

מודלים עכבר מהונדסים כבר סייעו בהערכת הפתופיזיולוגיה של מחלת אלצהיימר (AD), כמו גם את הפוטנציאל של התערבויות טיפוליות. משימות קוגניטיביות, כגון מבוך המים של מוריס (MWM), משמשות בדרך כלל עם מודלים אלה כדי לזהות את הקושרת המולקולרית של גירעונות זיכרון ועל מנת להעריך את היעילות של תרופות פרה-קליניות. זה חיוני, עם זאת, כי הטווח הדינמי של המשימה קוגניטיבית להיות רחב מספיק כדי לזהות השפעות טיפול עדינות. עם מודלים עכבר של הספירה, ליקויים קוגניטיביים הם בדרך כלל תלוי גיל, ועכברים להציג ירידות מתקדמות בביצועים (לדוגמא, 1). שימוש במשימה קוגניטיבית רגישה יכול לאפשר זיהוי של הבדלים דקים מוקדם יותר בחיים של בעלי החיים, ובכך להפחית את העלויות הכרוכות בבעלי החיים הזדקנות. לדוגמא, צמצום מספר ניסויי הכשרה ברנס בהיפוקמפוס תלוי מבוך 15-5 הגדיל את הקושי של המשימה, וכתוצאה מכך דetection של גירעונות במודל 3xTg בגיל צעיר יותר מאשר דווח בעבר 2. איתור מוקדם יותר של גירעונות מציע לא רק זמן ניכר וחיסכון בעלויות, זה גם מעלה את הסבירות שניתן לזהות השינויים המולקולריים שבבסיס ליקויים קוגניטיביים. גורם אחד המשפיע על הרגישות של משימות קוגניטיביות הוא זן הרקע הגנטי של מודל העכבר. לדוגמא, עכברי BALB / ג להפגין ביצועים מעולים במשימות למידה וזיכרון בהשוואה לזנים אחרים, כגון C57BL / 6 3. FVB / N x 129S6 רקע F1 משמש לשני הדגמים המועסקים נרחב ביותר של הספירה, Tg2576 וRTG (TauP301L) 4510 דגמים. זן זה מציג יכולת למידה מעולה בMWM ביחס לזנים אחרים, כולל B6 / עכברי SJL 4. בגלל יכולת למידה מעולה זה, השימוש בבדיקה אחת לאחר הכשרה מקיפה עלולה להסוות הבדלים בין קבוצות כתוצאה מאימון יתר. בנוסף, sensitivity של ניסויי בדיקה עשוי להיות תלוי גיל. הראינו בעבר כי ניסויי בדיקה קודם לכן, לאחר אימון פלטפורמה נסתרת מוגבל, רגישים יותר להבדלים בTg2576 הצעיר בהשוואה לביקורות littermate צעירות transgene-שלילי מאשר ניסויי בדיקה מוכנסים לאחר הכשרה מקיפה יותר 5. לעומת זאת, ניסויי הבדיקה הבאים הכשרה מקיפה רגישים יותר במבוגרים (20-25 חודש) עכברי Tg2576 לעומת המלטה מבוגרת יותר הם ניסויי בדיקה קודם לכן 5. על ידי interspersing ניסויי בדיקה לאורך אימון, הסבירות שמשפט רגיש יזוהה הוא גדל, במיוחד אם בדיקות אורך מתבצעת ואת הרגישות של בדיקה בדיקה מסוימת היא תלוי גיל. איור 1 מציג את הביצועים מעולים של x F1 FVB / N עכברי 129S6 תחת הפרוטוקול מותאם לזן זה, בהשוואה לעכברים של רקע B6 / SJL התאמן תחת פרוטוקול עם הכשרה מקיפה יותר. MWM הואבדרך כלל חשב לספק אמצעים אמין כי הם לשחזור פני הזמן ומעבדות 6. לדוגמא, הפרוטוקול העיקרי המשמש במקור על ידי 1,7 המעבדה מינסוטה יושם בהצלחה עם שינויים קלים באוניברסיטת מערב וירג&#39;יניה 8. כמו כן, רמות שווה ערך לירידת הערך נצפו בRTG (TauP301L) 4510 עכברים ביחס לשליטה המלטה אם שוכנו בתנאי הפתוגן ללא או קונבנציונלי 9. עם זאת, סביבת הבדיקות יכולה להשפיע על הרגישות של משימת MWM. גורמים כגון תאורה בחדר, פתחי אוורור, טמפרטורה הדרגתיים, ורעשים כולם תורמים לרמזים סביבתיים 4 שיכולים להשפיע על ביצועי סופו של דבר. כאשר המעבדה מינסוטה והביבר הועברו לבניין חדש, עד לירידה של 38% בביצועי wild-type נצפה, צמצום משמעותי את הטווח הדינמי של המשימה ואת היכולת לזהות את גירעונות הקשורים transgene. שינוי בPE זהrformance התרחש למרות עיצוב חדר הבדיקות להיות בגודל שווה ותצורה, ובאמצעות אותו הרמזים חזותיים שימושיים. &quot;מחדש אופטימיזציה&quot; של הפרוטוקול המקורי נדרשה להגדיל את הטווח הדינמי של משימת MWM בסביבת הבדיקות החדשה. הנה הפרוטוקול המקורי המותאם לשימוש עם F1 FVB / N x רקע 129S6 5 מתואר. בגלל כמה מחקרים מראים לחץ קשור לביצועים ירודים MWM 10 ולפני טיפול יכול להקל גירעון מתח מושרה זה בביצועים 11, פרוטוקול טרום טיפול נועד להסתגל העכברים להקדמה וההסרה של הבריכה לפני בדיקת MWM . בעקבות מראש טיפול, עכברים לעבור הכשרת פלטפורמה גלויה, שבו במה מוגבהת מסומנת בדגל. אימון פלטפורמה גלוי משמש לזיהוי עכברים עם בעיות ביצועים הקשורים להפרעות הסנסורית. תוך שימוש בקריטריונים שמתוארים בהדרת protסעיף ocol, עכברי ביצועים-פסול יוסרו מהבדיקות הבאות של ניסויי הכשרת פלטפורמה ובדיקה סמויים. ליקויים בניסויי אימוני פלטפורמה ובדיקה סמויים מתפרשים כליקויים קוגניטיביים, כי ביצועים הסנסורית הוא בחשבון את הנתונים. לאחר השלמת הכשרת פלטפורמה גלויה, עכברים להתחיל אימוני פלטפורמה נסתרים שבו הפלטפורמה היא שקועה במים ונשארה באותו המיקום היחסי לרמזים חיצוניים. ניסויים שבי הפלטפורמה מוסרת (ניסויי בדיקה) משובצים בכל אימון פלטפורמה נסתר כדי להעריך את ההשפעה של אימון נוסף. בגלל ניסויי בדיקה להתרחש בתחילתו של כל יום, לפני אימון פלטפורמה נסתר נוסף, ניסויי בדיקה מודדים את היכולת של בעלי החיים כדי לזכור את המיקום של הפלטפורמה לאחר עיכוב של 20 שעות, שנחשב למדד לזכרון התייחסות 12. לבסוף, דרכים שבהן פרוטוקול מקורי זה מחדש מותאם כאשר שינויים בסביבת הבדיקותביצועי שליטה שיבשו מתוארים.

<table><tbody><tr><td>תוכנת מעקב צופה</td><td>Biobserve</td><td></td><td>תוכנה מסוימת זו אינה דרישה - ישנן מערכות מעקב אחרות זמינות</td></tr> טיפול <tr><td>מקדים בבריכה</td><td></td><td></td><td>מידות כ-1 רגל רוחב x 2 רגל אורך x 1.5 רגל</td></tr><tr><td>עומק</td><td></td><td></td> פלסטיק <td>1 ליטר</td></tr><tr><td>סקופ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>רשת קטנה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>שעון</td><td></td><td></td><td></td>עצר</tr><tr><td>צבע</td><td></td><td></td> טמפרה לבן לא רעיל <td>ניתן להשתמש בכל צבע; עם זאת, רוב תוכנות המעקב דורשות שהצבע יהיה מנוגד לצבע החיה.</td></tr><tr><td>פלטפורמה</td><td></td><td></td> גלויה <td>צבע צריך להיות מנוגד לזה של</td></tr><tr><td>מבוך מוט</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>וילון וילונות</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אמבטיה</td><td></td><td></td> עגולה <td>בדרך כלל בצבע לבן; בקוטר של כ-4 מטר</td></tr><tr><td>פלטפורמה</td><td></td><td></td> נסתרת <td>צבועה באותו צבע כמו המים</td></tr></tbody></table>

מבחן מוריס מים מבוך: אופטימיזציה לזני עכבר ובדיקת איכות סביבה

Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment

מבוך המים של מוריס (MWM) הוא מטלה נפוצה להערכת למידה וזיכרון מרחביים תלויי היפוקמפוס במודלים של מחלות עכברים טרנסגניים, כולל הפרעות נוירו-קוגניטיביות כגון מחלת אלצהיימר. עם זאת, למתח הרקע של מודל העכבר בו נעשה שימוש יכולה להיות השפעה משמעותית על הפנוטיפ ההתנהגותי הנצפה, כאשר זנים מסוימים מציגים יכולת למידה טובה יותר ביחס לאחרים. כדי להבטיח שניתן לזהות הבדלים בין עכברים שליליים לטרנסגנים חיוביים, זיהוי הליך אימון רגיש לזן הרקע הוא חיוני. כישלון בהתאמת פרוטוקול MWM למתח הרקע של מודל העכבר עלול להוביל לאימון חסר או יתר, ובכך להסוות את ההבדלים בין הקבוצות בניסויי בדיקה. כאן, מתואר פרוטוקול MWM המותאם לשימוש עם רקע F1 FVB/N x 129S6. זהו זן רקע המשמש לעתים קרובות לחקר ההשפעות תלויות הגיל של עכברי P301L tau מוטנטיים (rTg(TauP301L)4510) על ליקויי הזיכרון הקשורים למחלת אלצהיימר. כמו כן מתוארת אסטרטגיה לאופטימיזציה מחדש, כפי שמוכתבת על ידי סביבת הבדיקה המסוימת בה נעשה שימוש.

השתמשנו מבוך המים של מוריס כדי לחקור את ההשפעות של בטא-עמילואיד (עכברי Tg2576) וטאו P301L מוטציה (RTG (TauP301L) 4510 עכברים) בזיכרון המרחבי התייחסות (למשל, 1,5,7,8). איור 3 הוא תוצאת הנציג דיווחה במחקר שלנו בוחנת את ההשפעה של ביטוי גיל המבוגר טאו P301L על למידה וזיכרון 8, ניצול א איכות הסביבה בדיקות כדי להעריך את היכולות המוטוריות והחזותיות, עכברים הושוו על פני בלוקים הכשרת פלטפורמה גלויה, שבו כל בלוק אימונים כללו 3 ניסויים. Pathlen...

כתב יד זה מתאר פרוטוקול מבוך מים של מוריס (MWM) המותאם לשימוש עם מודל עכברי נפוץ של מחלת אלצהיימר. ה-MWM נמצא בשימוש נרחב במודלים של עכברים טרנסגניים. יישום הליך רגיש למתח הרקע של מודל העכבר חיוני לאיתור הבדלים בין קבוצות.

 The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, ...

מטרת הליך זה היא לזהות ליקויים קוגניטיביים במודל עכבר של מחלת אלצהיימר באמצעות שימוש בפרוטוקול מבוך מים של מוריס (Morris Water maze), המותאם לשימוש עם זן הרקע 1 2 9 6 FBB. הדבר מושג תחילה על ידי הסגלה של העכברים למשימה כדי להפחית ליקויים בביצועים שנגרמו כתוצאה מלחץ. השלב השני הוא שימוש במשימת הפלטפורמה החזותית, שבה פלטפורמה מוגבהת באינץ' אחד מעל קו המים, כדי להעריך תפקוד חזותי ומוטורי.בשלב הבא, נערכים ניסיונות של פלטפורמה נסתרת, כאשר הפלטפורמה שקועה חמישה מילימטרים מתחת לפני המים. השלב האחרון הוא שימוש בניסיונות בדיקה (probe trials), שבהם הפלטפורמה מוסרת, כדי להעריך את הזיכרון המרחבי ולקבוע את סוג אסטרטגיית החיפוש שנעשה בה שימוש. בסופו של דבר, הליך ה-MAs מותאם אישית זה במים מאפשר להעריך למידה וזיכרון מרחבי במודל עכברים נפוץ של מחלת אלצהיימר.באופן כללי, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקלו בקשיים בשל הצורך באופטימיזציה של הליכי הבדיקה, כגון מספר ניסיונות האימון והגששים (probes) שנעשה בהם שימוש, בהתאם לזן הרקע של קו העכברים ולסביבה שבה נבדקים העכברים. חלק זה של הפרוטוקול נועד להכשיר את העכברים לכניסה ויציאה מהמכשיר. ראשית, מקמו את התיבה כך שתהיה בגובה נוח ומלאו אותה בשני ליטרים של מים בטמפרטורה של 21 °C ובגובה של כסנטימטר אחד.לאחר העברת העכברים לחדר הבדיקה, הוציאו נסיינה מהכלוב, ודאו את זיהוי הנסיינה, ולאחר מכן סמנו את הזנב באמצעות טוש קבוע לא רעיל כדי להבחין בינה לבין עכברים שטרם עברו את הפרוצדורה. הניחו עכבר בכלי ההעברה למשך כחמישה שניות. לאחר מכן, שפכו בעדינות את העכבר מהכלי אל תוך בריכת טרום-הטיפול והשהו את העכבר בבריכה למשך 20 שניות.לאחר שחלף הזמן, הניחו בעדינות כף איסוף לפני העכבר ללא זווית. אפשרו לעכבר להיכנס לכף ולחקור אותה. במידת הצורך, עודדו את העכבר לעלות על הכף על ידי החלקתה בעדינות מתחת לעכבר תוך כדי הרמה איטית. הקפידו שלא להבהיל את העכברים בעזרת כף האיסוף.חזור על הליכים אלה עבור כל עכבר בכל כלוב פעם אחת ביום במשך 10 ימים. לאחר כל בעל חיים, אסוף את כדורי הצואה ואת מצע השביבית מהבריכה, באמצעות רשת תוך שימוש בכלי המעבר בין הכלובים. בצע אימון גלוי בימי הבדיקה הראשון, השני והשלישי, עם שישה ניסיונות בכל יום ומרווח של כ-10 דקות בין ניסוי לניסוי.ראשית, הגדירו את התוכנה למעקב אחר ביצועי העכברים והכינו את גיליונות הריצה בהתאם להוראות בחלק הטקסטואלי של הפרוטוקול. לאחר הגדרת התוכנה, הכינו את החדר על ידי תליית וילונות כדי להסוות רמזים מרחביים. לאחר מכן, הכינו את האמבטיה על ידי מילויה במי ברז בטמפרטורה של 21 °C.השתמש במדחום כדי להבטיח שטמפרטורת המים תישאר בסטייה של מעלה אחת בלבד מטמפרטורה זו לאורך כל הבדיקה. מקם את הפלטפורמה, שעליה מותקן דגל המגיע לגובה של 13 סנטימטרים ומימדיו 4.5 על 4.5 סנטימטרים עם תו בצורת S בולט המוטבע עליו, במיקום הראשון שנקבע מראש באמבטיה, כך שתבלוט כאינץ' אחד מעל פני המים.כעת הוציאו את העכבר הראשון מהכלוב. וודאו את זיהוי הנבדק, סמנו את הזנב בעזרת טוש קבוע בצבע המתאים, והניחו אותו בכלי העברה. הניחו בעדינות את העכבר לתוך האמבטיה.הפעילו את הטיימר ווודאו שתוכנת המעקב עוקבת אחרי בעל החיים. אפשרו לעכבר עד שתי דקות לאתר את הפלטפורמה. ברגע שהעכבר איתר את הפלטפורמה, השאירו אותו עליה למשך 20 שניות.אם החיה אינה מוצאת את הפלטפורמה בתוך פרק הזמן של שתי דקות, יש להוציא את העכבר ולהניחו על הפלטפורמה למשך 20 שניות. לאחר 20 שניות על הפלטפורמה, יש להסיר את העכבר מהפלטפורמה כפי שנעשה באימון ההרגלה, ולהניחו בכלוב מחומם המרופד במגבונים נייר, ולחממו ל-31 degrees Celsius בקירוב באמצעות פד חימום ומנורת חימום למשך 30 שניות. לאחר מכן, העבירו את העכבר לכלוב ההמתנה עם פד חימום בלבד, ללא מנורת חימום, כדי שיוכל להתאושש בין הניסויים.לאחר ניקוי השאריות מהאמבטיה באמצעות רשת, חזרו על שלבים אלה עבור כל עכבר בקבוצה. כאשר עבור כל עכבר הושלב הניסוי הראשון, העבירו את הפלטפורמה למיקום השני שנקבע מראש. בצעו אימון של פלטפורמה נסתרת מהיום הרביעי ועד היום ה-10 לאחר תליית המסכים.כפי שנעשה קודם לכן, מקמו את הרמזים באופן אסטרטגי על המסכים. ודאו שהרמזים גדולים וכוללים צבעים מנוגדים לנראות טובה יותר, ושהם ממוקמים במרחק ובגובה שבהם הם נראים לעכברים מתוך האמבטיה. הגדירו את התוכנה בהתאם להוראות בחלק הכתוב של הפרוטוקול.לאחר מכן, הכינו את האמבטיה על ידי מילוי ראשוני במים, כך שהפלטפורמה תהיה בערך חמישה מילימטרים מתחת לפני המים. הניחו את הפלטפורמה במיקום שנקבע מראש. מיקומה של הפלטפורמה יישאר קבוע עבור כל הנבדקים לאורך כל הימים והניסויים.חשוב לגוון את נקודת ההתחלה כדי שהבעלי החיים לא יפתחו אסטרטגיה מוטורית שאינה מרחבית ואינה היפוקמפית. כדי לפתור את המבוך, השתמשו בצבע לבן לא רעיל המיועד למים כדי להפוך אותם למעורפלים. עשו זאת כדי להבטיח שחלקו העליון של הפלטפורמה לא יהיה גלוי מגובה העיניים של בעל החיים בעת השחייה.לאחר זיהוי וסימון העכברים מראש, העבירו בעדינות את העכבר אל תוך המבוך, כך שהאף יהיה פונה לעבר הקיר. כל עכבר ימוקם באותה נקודת התחלה עבור כל ניסוי ייחודי. עם שחרורו הראשוני של העכבר, הפעילו את הטיימר ועמדו באזור שבו הבודק אינו נראה בקלות לעיני העכברים.ברגע שהחיה מגיעה לפלטפורמה, יש להניח לה להישאר עליה למשך 15 שניות כדי שתכוון את מיקומה המרחבי בחדר. אם העכבר אינו מאתר את הפלטפורמה בתוך 60 שניות, יש להרים אותו בעדינות ולהניחו על הפלטפורמה. לאחר 15 שניות על הפלטפורמה, יש להוציא את העכבר מהמבוך ולהחזירו לכלוב המחומם.לאחר ניקוי המבוך משאריות, חזור על הנהלים הללו עבור שאר העכברים בקבוצה. לפיכך, עבור ימי הבדיקה הרביעי עד התשיעי, בצע ארבעה ניסיונות של אימון פלטפורמה נסתרת בכל יום, עם מרווח של כ-20 דקות בין ניסוי לניסוי. בצע ניסיונות בדיקה (probe trials) לפני אימון הפלטפורמה בימים השישי, השביעי והשמיני, ובניסוי הבדיקה הסופי.ביום ה-10, בצעו את ניסיונות הגשוש (probe trials) באופן דומה לאימון עם פלטפורמה נסתרת, למעט העובדה שאין פלטפורמה במבוך. שחררו עכבר מנקודת שחרור שנקבעה מראש ואפשרו לעכבר לשחות במבוך במשך 60 שניות. לאחר ניסוי הגשוש ביום ה-10, לא נערכים ניסיונות נוספים במהלך שלב ניסיונות הגשוש. השתמשו בתוכנה למעקב אחר בעלי חיים כדי לעקוב אחר אורך הנתיב של בעל החיים, אחוז הזמן שבעל החיים מבלה בכל רבע של המבוך, ומספר הפעמים שבהן בעל החיים שוחה מעל האזור שבו שכנה הפלטפורמה בעבר.פתחו את לשונית רשימת הניסויים והוציאו את המדידות מלשונית ניתוח הנתונים ומלשונית מבוך המים. ייצאו את הנתונים ישירות לגיליון Excel. לאחר מכן, נתחו את הנתונים בהתאם להוראות בחלק הכתוב של הפרוטוקול.41 עכברים מסוג TP 3 0 1 L המכילים את הגן האנושי P 3 0 1 LTL ו-46 ביקורות נבחנו באמצעות פרוטוקול זה בגיל של כ-6.5 חודשים. נתון זה מייצג שלושה חודשים של ביטוי Tau P 3 0 1 L בעכברים התורגניים. כל קבוצה הכילה מספרים שווים בקירוב של זכרים ונקבות.האימון על פלטפורמה בלתי נראית לא היה שונה בין קבוצת הביקורת לבין עכברי TP 3 0 1 L. היעדר הבדל זה מעיד כי קבוצת הביקורת ועכברי tau P 3 0 1 LM אינם נבדלים ביכולותיהם החזותיות או הלוקומטוריות, ולכן ניתן לייחס את הליקויים בביצועים בבדיקת הפלטפורמה החבויה לפגיעה בזיכרון. עם זאת, במהלך האימון על פלטפורמה חבויה, עכברי TP 3 0 1 LM הראו אורכי נתיב ארוכים משמעותית בכל בלוקי האימון.לבסוף, הביצועים של קבוצות הביקורת השתפרו לאורך ארבעת ניסויי הבדיקה (probe trials). בעוד שעכברי Tau P 3 0 1 L לא הצליחו, עכברי הביקורת היו מסוגלים יותר להשתמש באסטרטגיה מרחבית כדי לפתור את המשימה, והפנימו טוב יותר את מיקום הפלטפורמה באזור המטרה. בעת התאמת פרוצדורה זו לשימוש עם זני עכברים אחרים, חשוב להעריך את קצב הלמידה של קבוצות הביקורת, כדי לזהות את מספר ניסויי האימון הדרושים להגעה למטרה, ולקבוע מתי יש להחדיר את ניסוי הבדיקה הראשון.

morris-water-maze-test-optimization-for-mouse-strain-testing

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

מבוך המים מוריס הוא כלי טוב מקובל בשימוש במסמך מעורבותו של ההיפוקמפוס במשימה התנהגותיות.

מבוך מוריס מים הניסוי

מבוך III Lashley היא משימה מסלול למידה אשר אינו מסתמך על גירויים מרתיעים או רמזים חזותיים. זהו אפוא אופציה אטרקטיבית ביותר להערכת הלמידה והזיכרון, במיוחד אצל עכברים מזדקנים או אחרת שבה הלחץ הוא שיקול.

מתח נמוך מסלול למידה באמצעות מבוך III Lashley ב עכברים

מים רדודים (חתירה) נוסחים שונים של בדיקות מבוך מים בעכברים

מבוך המים מוריס היא משימה התנהגותית לבדוק בהיפוקמפוס תלויי למידה וזיכרון. היא נמצאת בשימוש נרחב במחקר לנוירוביולוגיה, neuropharmacology והפרעות נוירו במודלים של מכרסמים.

מוריס מבוך המים מבחן גירעונות למידה וזיכרון במודל של מחלת אלצהיימר עכברים

ליקוי קוגניטיבי הנובע מטיפול רדיותרפי בגידולי מוח מהווה מצב קליני שקשה לטיפול, המשפיע לרעה על איכות החיים. היכולת להעריך באופן ביקורתי התערבויות פוטנציאליות לשיפור פגיעות קוגניטיביות הנגרמות מקרינה תלויה בסופו של דבר ביכולת לבצע הערכות כמותיות קפדניות של התפקוד הקוגניטיבי.

כימות decrements קוגניטיבי נגרמת על ידי הקרנות גולגולתי

מבוך בארנס היבשתי נעשה שימוש נרחב כדי למדוד את יכולת ניווט המרחבי לגירויים המעטה מרתיעים תגובה. במשך ימים רצופים, ביצועים (למשל השהיה לאתר כלוב בריחה) של נבדקי ביקורת משתפרת, מעיד על למידה וזיכרון רגילים. הבדלים בין חולדות ועכברים מחייבים שינויי מנגנון ומתודולוגיה המפורטים כאן.

בארנס מבוך אסטרטגיות בדיקה עם קטן ומודלים מכרסמים גדולים

סוללה מבחן התנהגותי מקיף של מיומנויות מוטוריות, רוח — לרבות אינטראקציה חברתית, דיכאון וחרדה – קוגניציה מיועד המבדק חוזרות ונשנות של שינויים התנהגותיים הקשורים ניוון מוחיים הקשורים בעכברים.

סוללה בדיקה התנהגותית להערכה חוזרת ונשנית של מיומנויות מוטוריות, מצב רוח, קוגניציה בעכברים

להלן, פרוטוקול לניהול בדיקות מבוך מים של מוריס כדי להעריך את היכולת של למידה וזיכרון של עכברי מודל מחלת אלצהיימר ולהעריך את ההשפעה של דיקור ידני לטיפול בהם מתוארת.

ניתוח של היכולת למידה וזיכרון במודל של מחלת אלצהיימר באמצעות מבוך המים של מוריס

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשראת היפוקסיה בעכברים יילודים על ידי מסירתם בסביבות מבוקרות עם ריכוזי חמצן משתנים. מודלים של עכברים שנחשפו לשינויי חמצן בלידה שינו לאורך זמן את הביטוי של miRNAs המעורבים באינדוקציה של שינויים פנוטיפיים התנהגותיים כגון אוטיזם.

היפוקסיה משנה את רמות ה-miRNAs המעורבים בתורשה לא מנדלית של הפרעת הספקטרום האוטיסטי בעכברים

מבוך המים הרדיאלי בעל שמונה הזרועות נועד להעריך את ביצועי הייחוס וזיכרון העבודה בו זמנית על ידי דרישה מהנבדקים להשתמש ברמזים מחוץ למבוך כדי לאתר פלטפורמות מילוט ולתקן את המגבלות שנצפו בעיצובי מבוך זרועות רדיאלי יבשתי.

שימוש במבוך מים שמונה רדיאליים להעריך עבודה וזכרון עזר בעקבות ילודים פגיעה מוחית

למדו פרוטוקול מבחן מוריס מים מבוך מותאם לזני עכבר בחקר מחלת אלצהיימר. שיטה זו מאפשרת הערכת ליקויי קוגניציה, זיכרון מרחבי ולמידה בעכברים טרנסגניים.

מבחן מוריס מים מבוך: אופטימיזציה לזני עכבר ובדיקת איכות סביבה

גלה סרטונים נוספים