Name: תאי תיוג ותיווך ויראלי השתלה של המדיאלי ganglionic רוממות (MGE) ל In vivo לימודים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: חקור שתלת תאי MGE מושתלים לקליפת המוח ללימוד אינטגרציה של אינטרנאורונים GABAergic בסביבה פיזיולוגית טבעית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר התנהגות תאים מסומנים בווירוס לטובת מחקרי מוח ותיקון עצבי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים לJLRR מ: אוטיזם ספיקס, נינה אירלנד, ווסטון נמלי קרן, NIMH R01 MH081880, וNIMH R37 MH049428. PRW נתמכה על ידי מענק מהמועצה הלאומית למדע של טייוואן. SFS נתמכה על ידי F32 (MH103003).

<ol><li>Huang, Z. J., Di Cristo, G., Ango, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+GABA+innervation+in+the+cerebral+and+cerebellar+cortices%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development of GABA innervation in the cerebral and cerebellar cortices.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8 (9), 673-686 (2007).</li>
<li>Rubenstein, J. L. R., Merzenich, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+of+autism%3A+increased+ratio+of+excitation%2Finhibition+in+key+neural+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+brain%2C+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Model of autism: increased ratio of excitation/inhibition in key neural systems.</a> Genes, brain, and behavior. 2 (5), 255-267 (2003).</li>
<li>Anderson, S. A., Eisenstat, D. D., Shi, L., Rubenstein, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interneuron+migration+from+basal+forebrain+to+neocortex%3A+dependence+on+Dlx+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Interneuron migration from basal forebrain to neocortex: dependence on Dlx genes.</a> Science. 278 (5337), 474-476 (1997).</li>
<li>Wonders, C. P., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+and+specification+of+cortical+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The origin and specification of cortical interneurons.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7 (9), 687-696 (2006).</li>
<li>Gelman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Wide+Diversity+of+Cortical+GABAergic+Interneurons+Derives+from+the+Embryonic+Preoptic+Area%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Wide Diversity of Cortical GABAergic Interneurons Derives from the Embryonic Preoptic Area.</a> J. Neurosci. 31 (46), 16570-16580 (2011).</li>
<li>Miyoshi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+fate+mapping+reveals+that+the+caudal+ganglionic+eminence+produces+a+large+and+diverse+population+of+superficial+cortical+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genetic fate mapping reveals that the caudal ganglionic eminence produces a large and diverse population of superficial cortical interneurons.</a> J. Neurosci. 30 (5), 1582-1594 (2010).</li>
<li>Batista-Brito, R., Fishell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+developmental+integration+of+cortical+interneurons+into+a+functional+network%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Dev.+Bio%22%5BJournal%5D)">The developmental integration of cortical interneurons into a functional network.</a> Curr. Top. Dev. Bio. 87, 81-118 (2009).</li>
<li>Inan, M., Welagen, J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+Temporal+Bias+in+the+Mitotic+Origins+of+Somatostatin%5BTitle%5D)+AND+%22and+Parvalbumin-Expressing+Interneuron+Subgroups+and+the+Chandelier+Subtype+in+the+Medial+Ganglionic%22%5BJournal%5D)">Spatial and Temporal Bias in the Mitotic Origins of Somatostatin.</a> and Parvalbumin-Expressing Interneuron Subgroups and the Chandelier Subtype in the Medial Ganglionic. 22 (4), 820-827 (2012).</li>
<li>Taniguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Resource+of+Cre+Driver+Lines+for+Genetic+Targeting+of+GABAergic+Neurons+in+Cerebral+Cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A Resource of Cre Driver Lines for Genetic Targeting of GABAergic Neurons in Cerebral Cortex.</a> Neuron. 71 (6), 995-1013 (2011).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Hippenmeyer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+developmental+switch+in+the+response+of+DRG+neurons+to+ETS+transcription+factor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Bio%22%5BJournal%5D)">A developmental switch in the response of DRG neurons to ETS transcription factor signaling.</a> PLoS Bio. 3 (5), e159(2005).</li>
<li>Southwell, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interneurons+from+embryonic+development+to+cell-based+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Interneurons from embryonic development to cell-based therapy.</a> Science. 344 (6180), 1240622(2014).</li>
<li>Hunt, R. F., Girskis, K. M., Rubenstein, J. L., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+progenitors+grafted+into+the+adult+epileptic+brain+control+seizures+and+abnormal%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">GABA progenitors grafted into the adult epileptic brain control seizures and abnormal.</a> Nature Neuroscience. 16 (6), 692-697 (2013).</li>
<li>Braz, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forebrain+GABAergic+Neuron+Precursors+Integrate+into+Adult+Spinal+Cord+and+Reduce+Injury-Induced+Neuropathic+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Forebrain GABAergic Neuron Precursors Integrate into Adult Spinal Cord and Reduce Injury-Induced Neuropathic Pain.</a> Neuron. 74, 663-675 (2012).</li>
<li>Vogt, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lhx6+Directly+Regulates+Arx+and+CXCR7+to+Determine+Cortical+Interneuron+Fate+and+Laminar+Position%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Lhx6 Directly Regulates Arx and CXCR7 to Determine Cortical Interneuron Fate and Laminar Position.</a> Neuron. 82 (2), 350-364 (2014).</li>
<li>Alvarez-Dolado, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+inhibition+modified+by+embryonic+neural+precursors+grafted+into+the+postnatal+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain.</a> J. Neurosci. 26 (4), 7380-7389 (2006).</li>
<li>Du, T., Xu, Q., Ocbina, P. J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NKX2.1+specifies+cortical+interneuron+fate+by+activating+Lhx6%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">NKX2.1 specifies cortical interneuron fate by activating Lhx6.</a> Development. 135 (8), 1559-1567 (2008).</li>
<li>Arguello, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dapper+Antagonist+of+Catenin-1+Cooperates+with+Dishevelled-1+during+Postsynaptic+Development+in+Mouse+Forebrain+GABAergic+Interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Dapper Antagonist of Catenin-1 Cooperates with Dishevelled-1 during Postsynaptic Development in Mouse Forebrain GABAergic Interneurons.</a> PLoS ONE. 8 (6), e67679(2013).</li>
<li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyramidal+neurons+in+prefrontal+cortex+receive+subtype-specific+forms+of+excitation+and+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Pyramidal neurons in prefrontal cortex receive subtype-specific forms of excitation and inhibition.</a> Neuron. 81 (1), 61-68 (2014).</li>
<li>Chen, Y. J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+%E2%80%9CMGE+Enhancers%E2%80%9D+for+Labeling+and+Selection+of+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Medial+Ganglionic+Eminence+%28MGE%29+Progenitors+and+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Use of “MGE Enhancers” for Labeling and Selection of Embryonic Stem Cell-Derived Medial Ganglionic Eminence (MGE) Progenitors and Neurons.</a> PLoS ONE. 8 (5), e61956(2013).</li>
<li>Pattabiraman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+regulation+of+enhancers+active+in+protodomains+of+the+developing+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Transcriptional regulation of enhancers active in protodomains of the developing cerebral cortex.</a> Neuron. 82 (5), 989-1003 (2014).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

השימוש של מבשרי interneuron קליפת המוח GABAergic מהוד ganglionic העוברי (GES) לטיפולים בתאים מבוססים מראה הבטחה למצבים רבים 12 -1 4. יש צורך בטכניקות מולקולריות מדויקות כדי לעקוב אחר, ולהביע את הגנים של עניין בתת-קבוצות interneuron ספציפיות. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט לתיוג תאים עובריים MGE עם lentiviruses לפני ההשתלה ולהראות כיצד טכניקה זו ניתן להשתמש כדי לבטא את הגנים של עניין בתת-קבוצות interneuron קליפת המוח ספציפיות לניתוח in vivo. <p class="jove_co...

interneurons קליפת המוח GABAergic מהווה ~ 20-30% מתאי עצב שבקליפת המוח של היונקים, ואילו השאר מתאים לגירוי, הנוירונים עיקריים glutamatergic. Interneurons מגוונת מאוד בנכסים, האקסון אלקטרו ומורפולוגיה דנדריט והסינפטי מיקוד 1, וחוסר איזון בטון מעכב / מעורר הם שיערו לבסיס כמה פנוטיפים של הפרעות נוירו-פסיכיאטריות / נוירולוגית כוללים אוטיזם, סכיזופרניה ואפילפסיה 2. המטרה הכוללת של הפרוטוקול המתואר במסמך זה היא לספק אמצעים לשנות ביעילות גנטית אבות interneuron קליפת המוח GABAergic לפני ההשתלה לin vivo ניתוחים. interneurons קליפת המוח GABAergic נולדות בהוד המדיאלי וזנב ganglionic (MGE וCGE, בהתאמה) 3,4, כמו גם את אזור הקדם-האופטי התיכון 5. אבות interneuron קליפת המוח עוברים הגירה משיקה למרחקים ארוכים ואחריעל ידי הגירת רדיאלי להגיע ליעדים הסופיים שלהם. עם הגעה ליעדים שלהם, interneurons קליפת המוח אלה חייבת בצורה נכונה להשתלב ברשת העצבית הקיימת, וכל תת-קבוצה interneuron ייחודית תתרום למעגלים בקליפת המוח בדרכים מסוימות. ניתן להבחין בארבע קבוצות עיקריות על ידי סמנים מולקולריים: סומטוסטטין נגזר MGE (SST) + וparvalbumin (PV) + תת-קבוצות, ופפטיד נגזר CGE vasoactive מעיים (VIP) + וReelin +; SST - תת-קבוצות 6. תת-קבוצות שונות בקליפת המוח interneuron נולדות על זמנים שונים במהלך התפתחות עוברית ובMGE 7 CGE, 8. אלה וסמני interneuron אחרים בקליפת המוח GABAergic כבר השתמש כדי ליצור קווי Cre-נהג ספציפיים עבור רבים מתת-קבוצות אלה 9-11. ההשתלה של תאי אב MGE התפתחה כטיפול מבוסס תאי פוטנציאל לטיפול בהפרעות שעלולות להיגרם על ידי חוסר איזוןבעירור / עיכוב 12-24. יתרונות טיפוליים אלה עשויים להיות נובעים בחלקו את היכולת הייחודית של אבות MGE (לפיזור, להבדיל ולהשתלב במוח מארח), או שעלול להיות בגלל פרי גופני רב PV + תאים מעכבים נגזרים מMGE. תאי MGE יכולים להיות גם transduced מהירות וביעילות עם lentiviruses לפני ההשתלה 15, המאפשרים לתאים שעברו שינוי גנטי במבחנה כדי להיחקר in vivo. הרציונל לפיתוח גישה זו היה להתגבר על מחסומים בלימוד פיתוח GABAergic קליפת המוח interneuron והתבגרות. בפרט, השתלת MGE אפשרה לחוקרים ללמוד את התפתחותם של תאים שעברו מוטציה in vivo, כאשר עכבר המוטציה אחרת היה מת בנקודת זמן מוקדמת. יתר על כן, על ידי החדרת גנים של עניין לפני ההשתלה, את ההשפעות של גנים ספציפיים על פנוטיפ מוטנטי יכולות להיות מוערכים בEFFאופן icient. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לtransduce תאי MGE עם lentiviruses לפני ההשתלה. בנוסף, אנו מראים כיצד טכניקה זו ניתן להתאים להביע גן של עניין בתת-קבוצות interneuron ספציפיות מקבוצה הטרוגנית של מבשרי interneuron קליפת המוח, באמצעות שילוב של lentiviruses הביטוי Cre תלוי וקווי עכבר Cre-נהג זמינים. יתר על כן, פרוטוקול זה מציג טכניקות ופלטפורמה לחוקרים לשנות גנטי מבשרי interneuron קליפת המוח GABAergic לin vivo מחקרים בדרך ייחודית. אחד יתרונות של שיטה זו על פני גישות שוטפות אחרות הוא שהתאים המושתלים MGE יתפזרו מאתר ההזרקה. כמו כן, בניגוד לזריקות נגיפיות מוקד, לאחר תאי MGE לפזר המורפולוגיה שלהם קלה יותר להעריך. גישה זו יכולה לשמש כדי לחקור את ההשפעה של החדרת גנים של עניין לסוג בר או תאים שעברו מוטציה, מציג סוג תא מסויםכתב להעריך מורפולוגיה, או שעלול להיות כדי לחקור את ההשפעה של אללים מחלה in vivo.

<table><tbody><tr><td colspan="4">ריאגנטים וציוד להשתלת תאי MGE</td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>REF 309602</td><td>BD, Becton Dickinson וחברה</td><td></td></tr><tr><td>30 1/2 G מחט</td><td>305106</td><td>BD, Becton Dickinson וחברת</td><td></td></tr><tr><td>Precision נשאו לספק 5 ומיקרו; l (מגיע עם בוכנה)</td><td>5-000-1005</td> חברת <td></td><td>המדע Drummond</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>PM-999</td><td>Polysciences, Inc.</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סטריאו עם מעמד **</td><td>MZ6</td><td>Leica</td><td></td></tr><tr><td>Digital רק לעכברים מכשיר סטריאוטקסי **</td><td>51725D</td><td>חברת</td><td></td>Stoelting</tr><tr><td>מיקרומניפולטור הידראולי עדין שמן חד צירי **</td><td>MO-10</td><td>Narishige</td><td></td></tr><tr><td>משופע סיבובי מצופה יהלום</td><td>תוצרת הבית</td><td></td>חולץ פיפטה מחט 730 Kopf <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td> מכשירים</td><td></td></tr><tr>שמן <td></td><td>מינרלי</td><td>כל בית מרקחת או בית מרקחת</td><td></td></tr><tr><td>כל פיפטה וטיפים שיכולים למדוד 1 ומיקרו; l של נפח</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">** אלה הדגמים הספציפיים שבהם אנו משתמשים, אך הגדרות רבות אחרות אמורות לעבוד</td></tr><tr><td colspan="4">ריאגנטים אופציונליים (לייצור לנטי-וירוסים)</td></tr><tr><td>25 מ"מ, 0.45 ומיקרו; מסנן m</td><td>09-719B</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה שקופים במיוחד (25 x 89 מ"מ)</td><td>344058</td><td>בקמן קולטר&reg;</td><td></td></tr><tr><td>ליפופקטמין 2000 (גודל 1.5 מ"ל)11668019</td><td></td> <td>Invitrogen</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">אספקה זמינה מסחרית אחרת</td></tr><tr><td>pMDLg/pRRE מקודד פלסמיד gag/pol</td><td>12251</td><td>Addgene</td><td></td></tr><tr><td>pRSV-Rev מקודד פלסמיד Rev</td><td>12253</td><td>Addgene</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G מקודד פלסמיד VSVG</td><td>12259</td><td>Addgene</td><td></td></tr><tr><td>pAAV-Flex-GFP</td><td>28304</td><td>Addgene</td><td></td></tr></tbody></table>

תאי תיוג ותיווך ויראלי השתלה של המדיאלי ganglionic רוממות (mge) ל<em&gt; in vivo</em&gt; לימודים

Viral-mediated Labeling and Transplantation of Medial Ganglionic Eminence (MGE) Cells for In Vivo Studies

interneurons GABAergic קליפת המוח, הנגזרת מהמדיאלי העוברית והוד הזנב ganglionic (MGE וCGE), היא מבחינה תפקודית ומורפולוגית מגוונת. אחיזה נעשתה בהבנת התפקידים של תת-קבוצות שונות בקליפת המוח interneuron, עם זאת, עדיין יש מנגנונים רבים יש לעבד שעשויה לתרום להתפתחות והתבגרות סוגים שונים של תאי GABAergic של. יתר על כן, איתות GABAergic שינתה עשויה לתרום לפנוטיפים של אוטיזם, סכיזופרניה ואפילפסיה. קווי Cre-נהג ספציפיים החלו לעטוף את הפונקציות של תת-קבוצות interneuron ייחודיות. למרות ההתקדמות במודלים של עכברים, לעתים קרובות קשה ללמוד אבות interneuron קליפת המוח GABAergic ביעילות עם גישות מולקולריות in vivo. טכניקה חשובה אחד משמשת ללמוד תכנות האוטונומי התא של תאים אלה היא השתלה של תאי MGE לקליפת מוח מארח. תאים מושתלים אלו נעים בהרחבה, להבדיל,nd תפקודי לשלב. בנוסף, תאי MGE ניתן transduced ביעילות עם lentivirus מייד לפני ההשתלה, ומאפשרים למספר רב של גישות מולקולריות. כאן אנו פירוט פרוטוקול לtransduce תאי MGE ביעילות לפני ההשתלה לניתוח in vivo, באמצעות קווי Cre-נהג זמינים ווקטורי ביטוי Cre-תלויים. גישה זו יש יתרון משום שהוא משלב מניפולציה גנטית מדויקת עם היכולת של תאים אלה לפיזור לאחר השתלה, מאפשר רזולוציה מסוימת תאים מסוג גדולה יותר in vivo.

מאז יש לי תאי MGE היכולת הייחודית להעביר ולשלב כאשר הושתלו הניאוקורטקס מארח 16, שהם מספקים מערכת מודל מצוינת למניפולציה גנטית לפני מחקרי in vivo. במסמך זה, אנו מראים כיצד ניתן לבודד את רקמת MGE מעוברי E13.5 (איורים 1 ו -2), אשר לאחר מכן ניתן transduced עם lentiviruses או במבחנה או בצורה מהירה לפני ההשתלה ללימודי in vivo. MGE תיוג באמצעות lentiviruses בוצע לפני השימוש משפר נהיגה GFP בתאי עצב GABAergic 15. עם זאת, היכ...

אבות interneuron קליפת המוח GABAergic לפזר, לפתח וsynaptically להשתלב קליפת מארח לאחר השתלה. ניתן transduced תאים אלה בקלות לפני ההשתלה ללימודי in vivo של מבשרי GABAergic מהונדסים גנטי. כאן, אנו מציגים טכניקות תיוג נגיפיות למקד תת-קבוצות interneuron ספציפיות באמצעות קווי Cre קיימים וכתבי Cre-תלויים.

תאי תיוג ותיווך ויראלי השתלה של המדיאלי ganglionic רוממות (MGE) ל<em&gt; In vivo</em&gt; לימודים

GABAergic cortical interneurons, derived from the embryonic medial and caudal ganglionic eminences (MGE and CGE), are functionally and morphologically ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא לבצע טרנסדוקציה ויראלית מהירה של תאי GABAergic בתוך תאי פרוגניטורים של נוירונים מה-MGE לפני השתלתם במארח לצורך מחקרים in vivo. זאת מושג תחילה על ידי בידוד תאי MGE מעובר תורם חיובי ל-Cree. השלב השני הוא סימון מהיר ויעיל של תאי ה-MGE המבודדים באמצעות נגיף שהונדס למטרה ספציפית, כגון סימון של סוג תא מסוים.בשלב הבא, התאים שעברו טרנסדוקציה מושתלים במארח ומורשים להתפתח in vivo. לבסוף, ניתן להשתמש במיקרוסקופיית ריח או בטכניקות אחרות כדי להעריך את התאים שעברו טרנסדוקציה והשתלה במועד המתאים. אחד היתרונות המרכזיים של גישה זו על פני טכניקות אחרות, כגון הזרקה ישירה של נגיף, הוא שתאי MGE נודדים למרחקים גדולים מאתר ההזרקה, שהוא אתר של פגיעה, מה שמאפשר לחקור את התאים בסביבה נורמלית יותר.מכיוון שתאי MGE הם תאי מקור של נוירונים קורטיקליים, סוג של תאים המעורבים בהפרעות נוירופסיכיאטריות הכוללות אוטיזם, סכיזופרניה ואפילפסיה, אנו סבורים שהטכניקות המתוארות כאן יסייעו למעשה להבנת הבסיסים הביולוגיים של חלק מהמחלות הנוירופסיכיאטריות הללו. בנוסף, טכניקה זו מספקת דרך מהירה לביצוע שינוי גנטי בתאים אלו עבור מחקרי in vivo. לאחר הכנת הלנטיבירוס והבדיקה של ה-MGE, בהתאם להנחיות בפרוטוקול הכתוב, אספו את שני חצאי ה-MGE והכניסו את הרקמה לשתי מבחנות איסוף של 1.5 milliliter המכילות 500 mi

viral-mediated-labeling-transplantation-medial-ganglionic-eminence

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

Transfection של תאים עכבר רשתית גנגליון על ידי In vivo Electroporation

מאמר זה מתאר רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal של שתלי הסלולר מכרסם במוח באמצעות: (i) ביולומינציה vivo ו הדמיה באמצעות תהודה מגנטית, ו (ב) הודעה מורטם ניתוח היסטולוגית. השילוב בין שיטות הדמיה על חיה אחת מאפשר הערכה שתל נייד עם רגישות גבוהה רזולוציה, וספציפיות.

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

כאן אנו מפתחים את הכלים הדרושים...

Ex vivo הדמיה חיה של חלוקות תא יחיד בNeuroepithelium מאוס

סרטון זה מדגים את התיוג הנגיפי וההשתלה של תאי בולטות גנגליונית מדיאלית (MGE) למחקרי in vivo. הוא מתאר את השלבים הכרוכים בהתמרת תאי MGE עם מדווח ויראלי, השתלת תאים מתמרים אלה לקליפת המוח של גור עכבר, ומאפשר ביטוי מדווח בתת-סוגים ספציפיים של תאי עצב.

תיוג והשתלה בתיווך ויראלי של תאי בולטות גנגליונים מדיאליים למחקרי in vivo

מקור: Pereira, M. et al., In vivo Direct Reprogramming של תאי גליה תושבים לאינטרנוירונים על ידי הזרקה תוך מוחית של וקטורים ויראליים. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים הזרקה סטריאוטקסית של נגיף הקשור לאדנו לקליפת המוח של עכבר טרנסגני כדי להעביר תכנות מחדש של עצבים תלויי Cre וגנים מדווחים פלואורסצנטיים לתאי גליה.

הזרקה סטריאוטקסית של וקטורים ויראליים לתכנות מחדש של תאי גליה במודל עכבר

מקור: Denaxa, M., el al., השתלת אבות של אינטרנוירונים קליפתיים מהונדסים כימוגנטית לתוך מוחות עכברים מוקדמים לאחר הלידה. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את ההליך להזרקת וקטור פלסמיד הנושא את הגן המעניין לאבות בין-נוירוניים בפרוסת מוח עוברית, ואחריו אלקטרופורציה לכניסת פלסמיד וביטוי גנים. אבות אבות מותאמים אלה יכולים לשמש מאוחר יותר לטיפול בהפרעות מוחיות.

העברת גנים בסיוע אלקטרופורציה משובצת אגרוז באבות אבות בין-עצביים בקליפת המוח של עכברים

כאן אנו מתארים הליך המבוסס על שימוש בחלקיקים לנטי-ויראלים לשינוי גנטי ארוך טווח של תאי גזע עצביים ו/או תאי אפנדימליים סמוכים להם בנישה הנוירוגנית הגחנית-תת-חדרית הבוגרת המאפשרת ניתוח נפרד של השפעות אוטונומיות ולא אוטונומיות של תאים, תלויות נישה על תאי גזע עצביים.

הנדסה גנטית יציבה ויעילה של תאי V-SVZ העכבר למבוגרים עבור הניתוח של הגזע עצבי נייד אוטונומי והשפעות חד אוטונומיות

כאן, אנו מספקים שיטה נמוכים ואמין כדי ליצור electroporated המוח organotypic פרוסה תרבויות מעוברים עכבר מתאים מיקרוסקופיה קונפוקלית טכניקות הדמיה לחיות.

. פשוט תאכל לשעבר אלקטרופורציה ותרבויות פרוסה Organotypic מוח עובריים בעכבר עבור Live-הדמיה של העברת Interneurons GABAergic

פרוטוקול זה מתכוון לייצר האינטרנוירונים מתוכנת באופן ישיר ב-vivo, באמצעות מערכת ויראלי מבוססי AAV במוח וכתבת ה-GFP FLEX סינפסין, המאפשרת זיהוי תאים וניתוח נוסף בvivo.

בתוך Vivo ישיר של תאים Glial תושב לתוך Interneurons על ידי הזרקת גרם של וקטורים ויראלי

לייזר לחיתוך מיקרו (LMD) היא טכניקה רגישה ומאוד לגילוי שניתן להשתמש בה כדי לחשוף מסלולים כי בתווך glioma טרוגניות ופלישה. כאן, אנו מתארים פרוטוקול ממוטב כדי לבודד אזורים נפרדים מרקמת glioma באמצעות LMD לייזר ואחריו ניתוח טרנססקריפט.

לכידת לייזר מיקרודיסקציה של גלימה Subregions עבור אפיון מרחבית ומולקולרית של טרוגניות Intrאטומוראלי, הנחלים, ופלישה

אנו מציגים פרוטוקולים משופרים להתמרה רטרו-ויראלית של קולטני סחר וביות תחרותי כדי לחקור מיקום לימפוציטים ספציפיים לאיברים ומיקרו-סביבה בתיווך קולטנים. שיטה זו מציעה תובנות חשובות לגבי מנגנוני סחר בתאי חיסון ויש לה יישומים פוטנציאליים במחקר בסיסי וטיפולי עתידי.

התמרה רטרו-ויראלית יעילה וביות תחרותי לחקירת לוקליזציה של תאי T בתיווך GPCR במיקרו-סביבות רקמה מגוונות

חקור שתלת תאי MGE מושתלים לקליפת המוח ללימוד אינטגרציה של אינטרנאורונים GABAergic בסביבה פיזיולוגית טבעית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר התנהגות תאים מסומנים בווירוס לטובת מחקרי מוח ותיקון עצבי.

תאי תיוג ותיווך ויראלי השתלה של המדיאלי ganglionic רוממות (MGE) ל

גלה סרטונים נוספים