Name: In vivo ההדמיה ומעקב של טכנציום-99m תווית תאי גזע מח העצם mesenchymal בסוסי Tendinopathy (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: למד מעקב לא פולשני אחרי תאי גזע מזנכימליים מסומנים בטכנציום-99m בסוסים עם טנדינופתיה. שיטת סינטיגרפיית גמא מאפשרת הערכת שרידות התאים והתפלגותם לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות למימון ממועצת היטל ההימורים על מרוצי סוסים בבריטניה (מענק מספר 721) ו-VetCell BioScience Ltd, בריטניה ו-Consejerìa de Innovaciòn, Ciencia y Empresa, Junta de Andalucìa, ספרד.

<ol><li>Becerra, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+injected+technetium%2899m%29-labeled+mesenchymal+stem+cells+in+horses+with+naturally+occurring+tendinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Distribution of injected technetium(99m)-labeled mesenchymal stem cells in horses with naturally occurring tendinopathy.</a> Journal of Orthopaedic Research. 31, 1096-1102 (2013).</li>
<li>Nixon, A. J., Dahlgren, L. A., Haupt, J. L., Yeager, A. E., Ward, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+adipose-derived+nucleated+cell+fractions+on+tendon+repair+in+horses+with+collagenase-induced+tendinitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of adipose-derived nucleated cell fractions on tendon repair in horses with collagenase-induced tendinitis.</a> American Journal of Veterinary Research. 69, 928-937 (2008).</li>
<li>Schnabel, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+and+insulin-like+growth+factor-I+gene-enhanced+mesenchymal+stem+cells+improve+structural+aspects+of+healing+in+equine+flexor+digitorum+superficialis+tendons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells and insulin-like growth factor-I gene-enhanced mesenchymal stem cells improve structural aspects of healing in equine flexor digitorum superficialis tendons.</a> Journal of Orthopaedic Research. 27, 1392-1398 (2009).</li>
<li>Smith, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+naturally+occurring+tendinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells in naturally occurring tendinopathy.</a> PloS one. 8, e75697(2013).</li>
<li>Sole, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+persistence+of+technetium-99+hexamethyl+propylene+amine+oxime-labelled+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+experimentally+induced+tendon+lesions+after+intratendinous+injection+and+regional+perfusion+of+the+equine+distal+limb%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Distribution and persistence of technetium-99 hexamethyl propylene amine oxime-labelled bone marrow-derived mesenchymal stem cells in experimentally induced tendon lesions after intratendinous injection and regional perfusion of the equine distal limb.</a> Equine Veterinary Journal. 45, 726-731 (2013).</li>
<li>Godwin, E. E., Young, N. J., Dudhia, J., Beamish, I. C., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+demonstrates+improved+outcome+in+horses+with+overstrain+injury+of+the+superficial+digital+flexor+tendon%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Implantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells demonstrates improved outcome in horses with overstrain injury of the superficial digital flexor tendon.</a> Equine Veterinary Journal. 44, 25-32 (2012).</li>
<li>Crevier-Denoix, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+pathological+equine+superficial+digital+flexor+tendons%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of pathological equine superficial digital flexor tendons.</a> Equine Veterinary Journal. 29, Suppl S23. 23-26 (1997).</li>
<li>O'Meara, B., Bladon, B., Parkin, T. D., Fraser, B., Lischer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+the+relationship+between+race+performance+and+superficial+digital+flexor+tendonitis+in+the+Thoroughbred+racehorse%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">An investigation of the relationship between race performance and superficial digital flexor tendonitis in the Thoroughbred racehorse.</a> Equine Veterinary Journal. 42, 322-326 (2010).</li>
<li>Alexander, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy-saving+mechanisms+in+walking+and+running%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Energy-saving mechanisms in walking and running.</a> The Journal of Experimental Biology. 160, 55-69 (1991).</li>
<li>Guest, D. J., Smith, M. R., Allen, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+fate+of+autologous+and+allogeneic+mesenchymal+progenitor+cells+injected+into+the+superficial+digital+flexor+tendon+of+horses%3A+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Monitoring the fate of autologous and allogeneic mesenchymal progenitor cells injected into the superficial digital flexor tendon of horses: preliminary study.</a> Equine Veterinary Journal. 40, 178-181 (2008).</li>
<li>Guest, D. J., Smith, M. R., Allen, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+embryonic+stem-like+cells+and+mesenchymal+stromal+cells+have+different+survival+rates+and+migration+patterns+following+their+injection+into+damaged+superficial+digital+flexor+tendon%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Equine embryonic stem-like cells and mesenchymal stromal cells have different survival rates and migration patterns following their injection into damaged superficial digital flexor tendon.</a> Equine Veterinary Journal. 42, 636-642 (2010).</li>
<li>Sole, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scintigraphic+evaluation+of+intra-arterial+and+intravenous+regional+limb+perfusion+of+allogeneic+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+the+normal+equine+distal+limb+using+%2899m%29+Tc-HMPAO%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Scintigraphic evaluation of intra-arterial and intravenous regional limb perfusion of allogeneic bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the normal equine distal limb using (99m) Tc-HMPAO.</a> Equine Veterinary Journal. 44, 594-599 (2012).</li>
<li>Carvalho, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+mesenchymal+stem+cell+migration+after+equine+tendonitis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Evaluation of mesenchymal stem cell migration after equine tendonitis therapy.</a> Equine Veterinary Journal. 46, 635-638 (2014).</li>
<li>Welling, M. M., Duijvestein, M., Signore, A., van der Weerd, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+biodistribution+of+stem+cells+using+molecular+nuclear+medicine+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo biodistribution of stem cells using molecular nuclear medicine imaging.</a> Journal of Cellular Physiology. 226, 1444-1452 (2011).</li>
<li>Dowling, B. A., Dart, A. J., Hodgson, D. R., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superficial+digital+flexor+tendonitis+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Superficial digital flexor tendonitis in the horse.</a> Equine Veterinary Journal. 32, 369-378 (2000).</li>
<li>Kasashima, Y., Ueno, T., Tomita, A., Goodship, A. E., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimisation+of+bone+marrow+aspiration+from+the+equine+sternum+for+the+safe+recovery+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Optimisation of bone marrow aspiration from the equine sternum for the safe recovery of mesenchymal stem cells.</a> Equine Veterinary Journal. 43, 288-294 (2011).</li>
<li>Avella, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonographic+assessment+of+the+superficial+digital+flexor+tendons+of+National+Hunt+racehorses+in+training+over+two+racing+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Ultrasonographic assessment of the superficial digital flexor tendons of National Hunt racehorses in training over two racing seasons.</a> Equine Veterinary Journal. 41, 449-454 (2009).</li>
<li>de Vries, E. F., Roca, M., Jamar, F., Israel, O., Signore, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+labelling+of+leucocytes+with+%2899m%29Tc-HMPAO.+Inflammation%2FInfection+Taskgroup+of+the+European+Association+of+Nuclear+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the labelling of leucocytes with (99m)Tc-HMPAO. Inflammation/Infection Taskgroup of the European Association of Nuclear Medicine.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 37, 842-848 (2010).</li>
<li>Trela, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scintigraphic+comparison+of+intra-arterial+injection+and+distal+intravenous+regional+limb+perfusion+for+administration+of+mesenchymal+stem+cells+to+the+equine+foot%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Scintigraphic comparison of intra-arterial injection and distal intravenous regional limb perfusion for administration of mesenchymal stem cells to the equine foot.</a> Equine Veterinary Journal. 46, 479-483 (2014).</li>
<li>Barbash, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+delivery+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+to+the+infarcted+myocardium%3A+feasibility%2C+cell+migration%2C+and+body+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Systemic delivery of bone marrow-derived mesenchymal stem cells to the infarcted myocardium: feasibility, cell migration, and body distribution.</a> Circulation. 108, 863-868 (2003).</li>
<li>Heckl, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+contrast+agents+for+molecular+imaging+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Future contrast agents for molecular imaging in stroke.</a> Current Medicinal Chemistry. 14, 1713-1728 (2007).</li>
</ol>

JD ו-RKS הם חברים במועצה המדעית המייעצת של ReCellerate Inc.

בנוסף למח עצם, תאי גזע מבודדים ממקורות כגון רקמת שומן מתאימים לתיוג עם פרוטוקול זה. יתר על כן, תאים ממצב קפוא ניתן לתחייה והרחיבו בתרבות למספרים הרצויים ללימודי תיוג 12. גורם קריטי הקובע את היעילות של תיוג BMMSC הוא הזמן בין elution של TC-99m מגנרטור מוליבדן בradiopharmacy, הכנת Tc-99m-HMPAO ושימוש בradiopharmaceutical במרפאת. יש יחס הפוך בין יעילות תיוג והזמן לאחר elution Tc-99m מגנרטור כך שעיכובים מע...

אסטרטגיות משובי לתיקון רקמות חולות או פגומות מבוססות על תאי גזע multipotent נגזרים ממגוון רחב של רקמות ומושתלים לתוך האזור הפגוע. התקדמות ביישום של BMMSC אוטולוגית לטיפול בגיד ופציעות רצועה בסוס הראו אמצעים השתפרו תוצאה בשני 1-5 הניסיוניים ומחקרים קליניים 6. הסוס הוא מודל אטרקטיבי במיוחד להערכת היעילות של תאי גזע הקשורים טיפולים כי היא סובלת מגיל ולמתוח יתר על המדה פציעות הקשורות לגידים של forelimb דיסטלי, זה בעלי חיים ספורטיביים, וזה התאוששות גדולה, להקל על מח עצם ו השתלה מדויקת. פציעות גיד להחלים באופן טבעי עם סיסטיק אבל הגיד נרפא מבחינה פונקציונלית נחותה 7 ויש לו סיכון גבוה לפגיעה מחדש 8. הגיד המכופף הדיגיטלי השטחי (SDFT) המושפע ביותר בכינויו זה התפתח לפעול כאנרגיה אלסטיתחנות וחוויות גבוהה טעינה מדגישה להשיג אנרגיה יעילה ותנועה במהירות גבוהה. שחזור פונקציה לאחר פציעה לכן קריטי. פגיעות אלה דומות לאלה המשפיעים על גיד אכילס בבני אדם שמבצע פונקציה דומה 9. אין אפשרויות טיפול טובות לטיפול או להשיג תיקון טוב לפציעות כגון, אסטרטגיות משובי מבוססות תאים לכן מציעות הזדמנות אטרקטיבית לשיפור תוצאות ולהפחית מחדש פציעה. במרבית המחקרים 5-20,000,000 BMMSC אוטולוגית מוזרקים ישירות לתוך הנגע שמתרחש בדרך כלל בתוך הליבה של גוף הגיד שלכן פועל ככלי קיבול לתאים. גורלם של התאים המוזרקים פעם אחת הוא לא שיטות תיוג תא ברורות ושונות כדי לעקוב אחר התאים תוארו לאחרונה. תאים שכותרתו עם תג הקרינה הוצגו לשרוד רק במספרים קטנים יחסית (&lt;10%) 10,11. תוויות הקרינה מחייבותחילוץ רקמות וחתך לניתוח היסטולוגית שזה זמן רב ולא בקלות להקל על ניתוח זמני במודל חיה גדול או במקרים קליניים. בעבודה מאוחרת יותר השתמשנו 99m Tc הרדיו-איזוטופי לתייג תאים ועיקבו אחרי גורלם על ידי מיפוי גמא 1. שיטה זו מאפשרת השוואות מהירות להתבצע בין מסלולים השונים של משלוח תא, כוללים intralesional, תוך ורידי באמצעות וריד הצוואר 1 או זלוף האזורי באמצעות זריקות תוך ורידי או 12 1,12 תוך-עורקים. ההתמדה וההפצה של תאים ולאחר מכן ניתן הדמיה על ידי מיפוי גמא של איברים שונים. זה הוכיח כי רק 24% מהתאים המוזרקים נשארו intralesionally בנגע על ידי 24 שעות 1 וזו נתמכת על ידי מחקר אחר באמצעות נגעים נוצרו בניסוי ומשתמש באותו radiolabel 5. יתר על כן, התאים להראות יכולת המוגבלת לבית לנגעי גיד כאשר delivereD על ידי זלוף האזורי או לוריד, אבל הם התפזרו לריאות על ידי הנתיבים האחרונים 4. BMMSC שכותרתו עם חלקיקי ברזל הוא שיטה חלופית כדי לעקוב אחר התאים מושתלים לגידי forelimb 13. למרות שתאי שכותרתו ננו-חלקיקי הברזל לאפשר מעקב תא in vivo על ידי MRI, מחקרים זמניים בבעלי חיים גדולים מוגבלים במספר הפעמים יכולות להינתן הרדמה בכל נקודה לביצוע סריקות MRI זמן. יתר על כן, חלקיקי ברזל הם hypointense על MRI אשר מגביל את המידע על ההגירה של תאים שכותרתו לתוך גוף הגיד. רדיואיזוטופים אחרים שניתן להשתמש בי כוללים אינדיום-111 אבל זה סובל חסרון של מחצית חיים ארוכים יותר מTc-99m (2.8 ימים לעומת 6.0 שעות) ואנרגיה פליטה קרני גמא גבוהה יותר. בנוסף, כדאיות תא דווחה להיות מופחתות כאשר כותרתו עם אינדיום-111 14. TC-99m, לעומת זאת, משמש באופן שגרתי בשני גרעיני סוסים ובני אדםרפואה לתייג תאי דם היקפי mononuclear ועיקבו אחרי ההפצה שלהם in vivo על ידי מיפוי. ניתן בקלות יחסית לקח את זה על ידי תאים באמצעות HMPAO כמולקולת מקשר לקשור טכנציום, כTc-99m-HMPAO, לתאים. TC-99m-HMPAO כותרת BMMSC להראות כדאיות טובה ויכול להתרבות במבחנה 4. פרוטוקול זה מפרט את התיוג ומעקב של BMMSC אוטולוגית סוסים מושתל לתוך נגעים טבעיים בSDFT forelimb. חשוב לציין כי הפרוטוקול נועד רק כדי לשמש ככלי מחקר. השימוש בו ככלים טיפוליים קליניים אינו מומלץ כהשפעה על הפנוטיפ radiolabel סלולארי לא הובהרה במלואו.

<table><tbody><tr><td>טכנציום99m&nbsp;</td><td></td><td></td><td>אנא בררו עם ספק קרינת היינון המקומי בהתאם לדרישות החוק.&nbsp; יש להשתמש באיזוטופ תוך שעתיים מרגע הפליטה ממחולל מוליבדן-99</td></tr><tr><td>Ceretec - Hexamethylpropyleneamine oxime (HMPAO)&nbsp;</td><td>GE HealthCare</td><td></td><td>נא לברר ישירות עם GE HealthCare</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microfuge, Minispin/Minispin Plus</td><td>Ependorf</td><td>22620100</td><td></td></tr><tr><td>18 גרם ו-19 גרם מחטים</td><td>Terumo Medical</td><td>NN-1838R (18 גרם); &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; NN1938R (19 גרם)</td><td></td></tr><tr><td>מזרקים 1 מ"ל ו-2 מ"ל</td><td>Scientific Laboratory Supplies Ltd</td><td>SYR6200 (1 מ"ל); SYR6003 (2 מ"ל)</td><td></td></tr> <tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל</td><td>גריינר ביו-וואן בע"מ</td><td>616201</td><td></td></tr><tr><td>PBS - Phosphate-Buffered Saline</td><td>LifeTechnologies</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>ספוגיות גזה סטריליות</td><td>שרמונד בע"מ</td><td>UNG602</td><td></td></tr><tr><td>CoflexVet תחבושת דבקה עצמית</td><td>Andover Healthcare, Inc.</td><td>3540RB-018</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת הדמיית אולטרסאונד</td><td>Scion Image, Scion Corporation, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוכנת עיבוד MicasXplus Scintigram</td><td>Bartec Technologies Ltd</td><td></td><td>http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html</td></tr><tr><td>מונה איזוטופים שדה לניטור איזוטופ</td><td>ג'ון קאונט בריטניה</td><td>GMS1800a</td><td>http://www.johncaunt.com/</td></tr> <tr><td>מונה באר למדידות איזוטופים, כיול מינון</td><td>Capintec Southern Scientific</td><td>CRC-25R</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo ההדמיה ומעקב של טכנציום-99m תווית תאי גזע מח העצם mesenchymal בסוסי tendinopathy

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

התקדמות ביישום של תאי גזע mesenchymal מח עצם (BMMSC) לטיפול בפציעות גיד ורצועה בסוס מציעה שיפור מדדי תוצאה בשני מחקרים ניסיוניים וקליניים. למרות BMMSC מושתל לתוך נגע הגיד במספרים גדולים (בדרך כלל 10-20,000,000 תאים), רק מספר קטן יחסית לשרוד (&lt;10%) אם כי אלה יכולים להימשך עד 5 חודשים לאחר השתלה. זה נראה תצפית נפוצה במינים אחרים שבי BMMSC כבר מושתלת לתוך רקמות אחרות וזה חשוב להבין, כאשר אובדן זה מתרחש, כמה לשרוד את תהליך ההשתלה הראשוני והאם התאים נמחקים לאיברים אחרים. מעקב הגורל של התאים יכולים להיות מושגת על ידי radiolabeling BMMSC לפני ההשתלה שמאפשרת לא פולשנית בהדמיה vivo של מיקום תא וכימות של מספרים סלולריים. פרוטוקול זה מתאר labeli תאהליך ng המשתמש בטכנציום-99m (TC-99m), ומעקב של תאים אלה לאחר השתלה לגידים המכופפים נפצעו בסוסים. TC-99m הוא איזוטופ קצר (t 1/2 של 6.01 שעות) שפולט קרני גמא ויכול להיות מופנם על ידי תאים בנוכחות oxime מתחם lipophilic hexamethylpropyleneamine (HMPAO). תכונות אלו הופכות אותו אידיאליים לשימוש במרפאות רפואה גרעיניות לאבחון של מחלות רבות ושונות. גורלם של התאים שכותרתו ניתן בעקבות בטווח הקצר (עד 36 שעות) על ידי מיפוי גמא לכמת הן את מספר התאים נשמרו בנגע וההפצה של התאים לתוך ריאות, בלוטת התריס ואיברים אחרים. טכניקה זו מותאמת התיוג של כדוריות דם לבנות בדם ויכולה להיות מנוצלת לתמונה המושתלת BMMSC באיברים אחרים.

<html> התאגדות TC-99m-HMPAO לBMMSs אינה משפיעה לרעה על יכולתן לעמוד בפלסטיק בתרבית רקמה ובעוד הם מראים יכולת התפשטות כדי ליצור monolayers (איור 1) שיש לנו לא נחוש באופן מלא אם שיעורי התפשטות או פנוטיפים סלולריים אחרים אינם מושפעים. המורפולוגיה שלהם דומה לתאים ללא תווית עם צורת כישור טיפוסית. יעילות התיוג הסלולרית (כלומר., הספיגה של תווית) בדרך כלל נעה בין כ -1.5% ל- 25%. הסיבה העיקרית ליעילות התיוג הנמוכה הייתה קשורה לעיכוב באספקת 99m Tc למרפאת ...

פרוטוקול זה מתאר תיוג רדיו של תאי גזע מזנכימליים של סוסים והשתלתם בפגיעות גידים בסוס על מנת לקבוע את הישרדות התאים ואת התפלגות הרקמות באמצעות סינטיגרפיה גמא.

In vivo ההדמיה ומעקב של טכנציום-99m תווית תאי גזע מח העצם mesenchymal בסוסי Tendinopathy

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לעקוב באופן לא פולשני אחר ההתפלגות וגורלן של תאי גזע מזנכימליים מסומנים ממח העצם לאחר הזרקתם, באמצעות סקנטיגרפיה של גמא. גורלן של תאי גזע לאחר ההזרקה אינו מובן דיו. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא מאפשרת מעקב לא פולשני אחר תאי הגזע במספר איברים לאחר המתן, וכן שחציו החיים הקצר של A osteo מבטיח את פינויו תוך 48 שעות.אף שדבר זה סיפק תובנות לגבי השימוש בתאי גזע בטיפול בטנדונופתיות המתרחשות באופן טבעי, ניתן להשתמש בו גם לחקר טיפולים למחלות לב ומחלות עצם. באופן כללי, האתגרים עבור אנשים שאינם בקיאים בשיטה זו הם תיאום התאים והערכה לסימון, וכן הכנת המטופל. לצורך יישום מיידי של התאים, התחל במריחת ג'ל צימוד אקוסטי על הגפה הקצוצה והשתמש במתמר ליניארי כדי לסרוק באופן שיטתי את כל אזור המטקרפליס הפלמרי (Palmer metacarpal region) כדי לקבל סדרת תמונות רוחביות ואורכיות, במטרה לזהות את אזור הפגיעה המקסימלי.לאחר מתן אלחוש מקומי, קרצפו את אתר ההשתלה בתמיסת קרצוף כירורגית של כלורהקסידין למשך חמש דקות לפחות, ולאחר מכן נגבו עם גזה ספוגה באתנול. לאחר הכנת בעל החיים, לבשו זוג כפפות, והעבירו לצנטריפוגה מנה של 1x10⁷ תאי גזע מזנכימליים ממח עצם ב-1 ml של עליון (supernatant) ממח עצם. לאחר מכן, שאבו את העליון באמצעות מזרק של 2 ml, המצויד במחט בכי মাপ 18 או 19, כך שיישארו כ-100 µL של תמיסה במבחנה.העבירו את הנוזל העליון (supernatant) למבחנת מיקרו-צנטריפוגה על קרח, ולאחר מכן השתמשו בטפיחות עדינות כדי להחזיר את התאים לתמיסה (resuspend) ב-100 microliters שנותרו מהנוזל העליון. ודאו שהתאים חזרו לתמיסה באופן מלא ושאין גושי רקמה נראים לעין. לאחר מכן, השאירו את התאים בטמפרטורת החדר.כעת ערבבו מיליליטר אחד של technetium Protec nutate לתוך מבחנה של H-M-P-A-O. לאחר חמש דקות, השתמשו במזרק ומחט של מיליליטר אחד כדי לטפל בתאי הגזע המזנכימליים עם כל המנה של TECHNETIUM 99 M-H-M-P-A-O. לאחר מכן סגרו את המבחנה במכסה, ערבבו את התאים בנקישה עדינה והניחו את המבחנה בטמפרטורת החדר מאחורי מגן עופרת.לאחר 30 דקות, פתחו את המבחנה בעזרת פינצטה והשתמשו במזרק של מילליטר אחת המצויד במחט gauge 21 כדי להוסיף 1 mL של PBS לתאים. סגרו שוב את המבחנה וערבבו את התאים. לאחר מכן, סבבו את התאים בצנטריפוגה והשתמשו במזרק של 2 mL כדי להעביר בזהירות את העלייה למבחנה מוגנת המסומנת wash one.לאחר מכן, שטפו את המשקע במיליליטר נוסף של PBS כפי שהודגם כעת. העבירו את השטיפה השנייה לשפוף מוגן המסומן כ-W2 לאחר סיום השטיפה השנייה. השביהו מחדש את התאים באופן יסודי ב-PBS שנותר והוסיפו מנה של על-נוזל (supernatant) של מח עצם קר מאוד, תוך החזקת המתמר במקביל למחט.החדירו באיטיות מחט 20 gauge באורך 1.5 או 2 אינץ' לאזור הפגיעה המקסימלי במרכז הנגע, בכיוון אורכי. לאחר מכן, תוך שימוש במיגון המתאים, שאבו את התאים למזרק Luer-lock בנפח 2 ml המצויד במחט 20 gauge, והשליכו את המחט תוך הקפדה שלא לאבד נוזלים. לאחר חיבור המזרק למחט שהוצבה מראש בגיד, מקמו את מתמר האולטרסאונד מתחת למחט כך שנתיב המחט ברקמה יהיה גלוי בבירור, והזריקו את התאים לק ngưỡng הנגע בקצב איטי אך קבוע.וודאו כי הנוזל המוזרק אל תוך הנגע נראה בתמונת האולטרסאונד כנוזל אקואי (koic) המכיל בועות אוויר היפר-אקוגניות; לאחר שכל התאים הוזרקו, הוציאו את המחט. השתמשו באפשרויות "acquire study selection" ו-"bone static" בתוכנת העיבוד כדי להשיג תמונות סטטיות למשך 60 שניות כל אחת. לאחר מכן, השגיו תמונות צדדיות מאזור הנגע, מהקרפוס (carpus) ועד לקצה הדיסטלי, מהאזור המקביל בגפה הנגדית, משדה הריאה השמאלית ומהבלוטה המגן (thyroid) השמאלית בזמנים המצוינים.לאחר מכן, בחרו את כלי הגדרת אזור העניין (region of interest) ואת כלי האליפסה, ושנו את צורת מסכת הבחירה מעל אזור הנגע לפי הצורך. לבסוף, בחרו באפשרות "add two statistics" כדי לקבל את הספירות מעל אזור העניין. יש להקפיד על כך שאזורי עניין בעלי גודל זהה יסומנו עבור כל בעל חיים בנקודות הזמן השונות.לאחר הזרקה תוך-נגעיים, התאים ייראו כאזור מוקד של אות עם התפשטות מוגבלת של התאים לרקמת הגיד הסובבת עם הגעתם של פרקי זמן. לעומת זאת, כאשר התאים מוחדרים באמצעות פרפוזיה אזורית דרך וריד פלמר (Palmer) בדיגיטל, נצפה הפסדה הדרגתית של האות באתר ההזרקה. עם הזמן, שדות הריאה הם בדרך כלל שליליים לאחר הזרקה תוך-נגעית, אך לעיתים ניתן לזהות בנקודות זמן מוקדמות אות מוקדי מאוד שהופך לגנרלי יותר עם הזמן.הבלוטה המגן נותרת שלילית גם בנתיב מתנה זה. פרפוזיה אזורית מדגימה גם היא אות מוקדי בריאות, אשר הופך להיות דיפוזי יותר עם הזמן, אם כי האות אינטנסיבי משמעותית בהשוואה לזה שנצפה בנתיב התוך-נגעי. כאשר בלוטת המגן מראה לעיתים קרובות אות מוקדי, ספירת הרדיו-איזוטופ הראשונית הכוללת של התאים בזמן אפס לפני ההזרקה, והספירות מהגמא-גרם הראשוני באזור העניין.ניתן להשתמש בנקודת הזמן אפס לאחר ההזרקה כדי לחשב את אחוז הירידה בספירות בכל נקודת זמן לאחר ההזרקה, במטרה לקבוע את הדעיכה החזויה של ה-TC 99 M מהספירות הראשוניות. לאחר מכן, ניתן לחשב גם את ההישארות של התאים שנותרו באתר ההזרקה בכל נקודת זמן לאחר ההזרקה. בעקבות הליך זה, ניתן ליישם מסלולים אחרים של הגירה תאית כדי לענות על שאלות נוספות לגבי יכולת ההומינג (homing) של תאי הגזע המזנכימליים לאחר פיתוחם.טכניקה זו סללה את הדרך עבור חוקרים בתחום הרפואה האזורית לבחון שיטות לשיפור השמירה על תאים בתוך פגיעות בגידים. לאחר צפייה בסרטון זה, תגמירו עם הבנה טובה של אופן סימון התאים ותיעוד פיזורם וריכוזם במערכות איברים שונות. זכרו כי עבודה עם קרינה מייננת עלולה להיות מסוכנת ביותר, ואמצעי זהירות כגון ציוד מגן אישי, מדי קרינה, מיגון עופרת וסילוק נכון של פסולת מזוהמת הם חיוניים בעת ביצוע הליך זה.

in-vivo-imaging-tracking-technetium-99m-labeled-bone-marrow

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מעקב דינמיקה של engraftment שריר בבעלי חיים קטנים על ידי In vivo פלורסנט הדמיה

מודל עכבר ניסיוני של גרורות בעצמות הוקמה בעקבות משלוח intracardiac של בלוציפראז להביע תאים סרטניים החלב. התפתחות הגידול נבע הנגע osteolytic נוטרו longitudinally עם פליטת אור מיקרו CT הדמיה.

ניטור גרורות סרטן ונגעים Osteolytic עם פליטת אור CT ו - Micro Imaging

מדידת כמותית של פונקצית אב עצם בריפוי שבר דורשת טכנולוגיית הדמיה סידורי ברזולוציה גבוהה. הנה, פרוטוקולים ניתנים לשימוש במיקרוסקופיה intravital ומעקב osteo שושלת ברצף תמונה ולכמת את ההגירה, השגשוג והתמיינות של תאי גזע / אב osteogenic אנדוגני בתהליך של תיקון שברים בעצמות.

עוקב<em&gt; בvivo</em&gt; הדמיה של תאי גזע / אב osteogenic במהלך תיקון שבר

הטבע של האינטראקציות בין תאי גזע hematopoietic ואב (HSPCs) ונישות מח עצם הוא הבין היטב. שינויי חומרה מותאם אישית ופרוטוקול רכישה רב שלבים לאפשר את השימוש בשני הפוטונים ומיקרוסקופיה confocal לתמונת vivo לשעבר HSPCs שכותרתו התביית בתוך אזורי מוח עצם, אינטראקציות מעקב ותנועה.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

מונוציטים הם מווסתים מרכזיים של חסינות מולדת וממלאים תפקיד קריטי בחידוש המערכת הפגוציטית החד-גרעינית ההיקפית ובמקרה של דלקת. כתב יד זה מתאר את הליך ההדמיה בזמן אמת של מח העצם של קלווריה של העכבר כדי לחקור את מנגנון הגיוס של המונוציטים.

מעקב עכבר מח עצם המונוציטים<em&gt; In vivo</em

הפרוטוקול מתאר מודל חדש של תא חלון עצם הירך של עכברים שניתן להשתמש בו כדי לעקוב אחר תנועת תאים במח עצם הירך in vivo. מיקרוסקופיה פלואורסצנטית רב-פוטונית תוך-חיונית משמשת להדמיית שלושה מרכיבים של מח עצם הירך (כלי דם, מטריצת קולגן ונויטרופילים) לאורך זמן.

חלון ירך דגם קאמרי<em&gt; In vivo</em&gt; מעקב תא Murine מח עצם

פרוטוקול זה מתאר דרך יעילה כדי לנטר את התא התמדה ואת biodistribution של האדם נגזר שומן בתאי גזע mesenchymal (haMSCs) על-ידי קרינה פלואורסצנטית מרחיקת אדום תיוג במודל חולדה דלקת מפרקים ניוונית (קואה) הברך באמצעות הזרקה תוך-מפרקיות (IA).

אין ויוו מעקב של האדם נגזר שומן בתאי גזע Mesenchymal במודל דלקת מפרקים ניוונית של הברך עכברוש עם קרום Lipophilic פלורסנט לצבוע

כאן נשתמש זוהרים, רנטגן, והדמיה פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה/שחושב טומוגרפיה ללמוד איך מעכבים פעילות mTOR משפיעה על engrafted-מח עצם מיאלומה גידולים במודל xenograft. דבר זה מאפשר ניתוחים פיזיולוגית הרלוונטיים, לא פולשנית, והן עם מודאלים מרובים של מיאלומה נגד ההשפעה של טיפולים מיקוד engrafted מח עצם מיאלומה גידולים ויוו.

הדמיה עם מודאלים מרובים זוהרים, פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה/חישובית טומוגרפיה של מיאלומה נפוצה מח עצם Xenografts בעכברים ליקר ביצים

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור משלוח של תאי גזע mesenchymal לא פולשנית (MSC) ומעקב במודל העכבר של פציעה מוחית טראומטית. ברזל פאראמגנטי תחמוצת הברזל מועסקים כהדמיה תהודה מגנטית (MRI) בדיקה עבור התיוג MSC ו פולשני ב vivo מעקב אחר משלוח intranasal באמצעות MRI בזמן אמת.

מעקב על תחמוצת ברזל פאראמגנטית-מתויג תאי גזע Mesenchymal באמצעות ה-MRI לאחר Intranasal משלוח ב מודל טראומטי פציעה במוח

פרוטוקול זה מתאר את הזיהוי של נדידת תאי גזע שלד periosteal בתיווך CCL5 בזמן אמת באמצעות מיקרוסקופיה תוך-וינטלית חיה של בעלי חיים.

הדמיה בזמן אמת של הגירה הנגרמת על ידי CCL5 של תאי גזע שלד Periosteal בעכברים

הזרקות מקומיות של תווית צבע מיטוכונדריאלי סופית של מיטוכונדריה תא שוואן ב-vivo למיקרוסקופיה קונפוקלית. שיטה זו משתמשת בהוכחת היתכנות שהודגמה ברקמת שריר שלד של עכברים עם שריר בריא או חולה, כדי לספק הדמיה מיטוכונדרית ברזולוציה גבוהה.

שיטות לכימות במקום של מורפולוגיית מיטוכונדריה בתאי שריר וסופיים של עכברים

למד מעקב לא פולשני אחרי תאי גזע מזנכימליים מסומנים בטכנציום-99m בסוסים עם טנדינופתיה. שיטת סינטיגרפיית גמא מאפשרת הערכת שרידות התאים והתפלגותם לאורך זמן.

In vivo ההדמיה ומעקב של טכנציום-99m תווית תאי גזע מח העצם mesenchymal בסוסי Tendinopathy

גלה סרטונים נוספים