Name: עכבר דגם של דחיית כלי דם הנוצרת על-Alloimmune וטרשת עורקים להשתלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: למדו השתלת אורטה בין עכברים לחקר דחיית כלי דם וטרשת עורקים להשתלות. השיטה מאפשרת ניתוח עיבוי דופן העורק והצרת החלל באמצעות היסטוכימיה אימונית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמוסד הקנדי לבריאות מחקר ולב ושבץ קרן של BC ויוקון (JCC).

<ol><li>Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+coronary+disease%3A+the+lesions+and+the+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Graft coronary disease: the lesions and the patients.</a> Transplant Proc. 21, 3665-3666 (1989).</li>
<li>Foegh, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection--graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection--graft arteriosclerosis.</a> Transplant Proc. 22, 119-122 (1990).</li>
<li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li>
<li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circulation research. 100, 622-632 (2007).</li>
<li>Johnson, D. E., Gao, S. Z., Schroeder, J. S., DeCampli, W. M., Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+coronary+artery+pathologic+findings+in+human+cardiac+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+heart+transplantation%22%5BJournal%5D)">The spectrum of coronary artery pathologic findings in human cardiac allografts.</a> The Journal of heart transplantation. 8, 349-359 (1989).</li>
<li>Gao, S. Z., Alderman, E. L., Schroeder, J. S., Silverman, J. F., Hunt, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+coronary+vascular+disease+in+the+heart+transplant+patient%3A+coronary+arteriographic+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Accelerated coronary vascular disease in the heart transplant patient: coronary arteriographic findings.</a> Journal of the American College of Cardiology. 12, 334-340 (1988).</li>
<li>Mennander, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+aortic+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat aortic allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granzymes+and+perforin+in+solid+organ+transplant+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Granzymes and perforin in solid organ transplant rejection.</a> Cell Death Differ. 17, 567-576 (2010).</li>
<li>Johnson, P., Carpenter, M., Hirsch, G., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipient+cells+form+the+intimal+proliferative+lesion+in+the+rat+aortic+model+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Recipient cells form the intimal proliferative lesion in the rat aortic model of allograft arteriosclerosis.</a> Am J Transplant. 2, 207-214 (2002).</li>
<li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li>
<li>Yu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+interferon-gamma-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting interferon-gamma-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Circ Res. 109, 418-427 (2011).</li>
<li>Miller, C., DeWitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+humoral+responses+to+major+and+minor+histocompatibility+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Cellular and humoral responses to major and minor histocompatibility antigens.</a> Transplant Proc. 5, 303-305 (1973).</li>
<li>Tsutsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumen+loss+in+transplant+coronary+artery+disease+is+a+biphasic+process+involving+early+intimal+thickening+and+late+constrictive+remodeling%3A+results+from+a+5-year+serial+intravascular+ultrasound+study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Lumen loss in transplant coronary artery disease is a biphasic process involving early intimal thickening and late constrictive remodeling: results from a 5-year serial intravascular ultrasound study.</a> Circulation. 104, 653-657 (2001).</li>
<li>Rossum, A., Enns, W., Shi, P., MacEwan, G. E., Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bim+regulates+allogeneic+immune+responses+and+transplant+arteriosclerosis+through+effects+on+T+cell+activation+and+death%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Bim regulates allogeneic immune responses and transplant arteriosclerosis through effects on T cell activation and death.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34, 1290-1297 (2014).</li>
<li>Ho, M. K., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+distribution%2C+structural+characterization%2C+and+biosynthesis+of+Mac-3%2C+a+macrophage+surface+glycoprotein+exhibiting+molecular+weight+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Tissue distribution, structural characterization, and biosynthesis of Mac-3, a macrophage surface glycoprotein exhibiting molecular weight heterogeneity.</a> J Biol Chem. 258, 636-642 (1983).</li>
<li>Inoue, T., Plieth, D., Venkov, C. D., Xu, C., Neilson, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+against+macrophages+that+overlap+in+specificity+with+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+international%22%5BJournal%5D)">Antibodies against macrophages that overlap in specificity with fibroblasts.</a> Kidney international. 67, 2488-2493 (2005).</li>
<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+basis+of+transplant-associated+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Immunologic basis of transplant-associated arteriosclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 4051-4056 (1996).</li>
<li>Skaro, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2B+T+cells+mediate+aortic+allograft+vasculopathy+by+direct+killing+and+an+interferon-gamma-dependent+indirect+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">CD8+ T cells mediate aortic allograft vasculopathy by direct killing and an interferon-gamma-dependent indirect pathway.</a> Cardiovasc Res. 65, 283-291 (2005).</li>
<li>Tellides, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ Res. 101, 560-569 (2007).</li>
<li>Soulez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+perlecan+fragment+LG3+is+a+novel+regulator+of+obliterative+remodeling+associated+with+allograft+vascular+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">The perlecan fragment LG3 is a novel regulator of obliterative remodeling associated with allograft vascular rejection.</a> Circ Res. 110, 94-104 (2012).</li>
<li>Choy, J. C., Kerjner, A., Wong, B. W., McManus, B. M., Granville, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perforin+mediates+endothelial+cell+death+and+resultant+transplant+vascular+disease+in+cardiac+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Perforin mediates endothelial cell death and resultant transplant vascular disease in cardiac allografts.</a> Am J Pathol. 165, 127-133 (2004).</li>
<li>Choy, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granzyme+B+induces+endothelial+cell+apoptosis+and+contributes+to+the+development+of+transplant+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Granzyme B induces endothelial cell apoptosis and contributes to the development of transplant vascular disease.</a> Am J Transplant. 5, 494-499 (2005).</li>
<li>Reis, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+remodeling+of+advanced+atherosclerotic+plaques+of+the+apolipoprotein+E-deficient+mouse+in+a+novel+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+vascular+surgery%22%5BJournal%5D)">Dramatic remodeling of advanced atherosclerotic plaques of the apolipoprotein E-deficient mouse in a novel transplantation model.</a> Journal of vascular surgery. 34, 541-547 (2001).</li>
<li>Potteaux, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppressed+monocyte+recruitment+drives+macrophage+removal+from+atherosclerotic+plaques+of+Apoe-%2F-+mice+during+disease+regression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Suppressed monocyte recruitment drives macrophage removal from atherosclerotic plaques of Apoe-/- mice during disease regression.</a> J Clin Invest. 121, 2025-2036 (2011).</li>
</ol>

יש לנו תיארנו פרוטוקול לחציצת אב העורקים השתלה בעכברים שהם שימושי ללימוד דחייה של כלי דם בתיווך חיסוני ות&quot;א. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את הסיבות לת&quot;א, כמו גם את הפיתוח של אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. זה כבר נעשה שימוש בעבר להקים תפקיד חיוני של חסינות אדפטיבית, תגובות תא T ציטוטוקסי, תגובות מפעיל תאי CD4 T בתיווך ציטוקינים, ונזק שתל בתיווך נוגדנים בת&quot;א 14,17-21. השתלת עורק בעכברים קשה בשל הגודל הקטן הברור של בעלי החיים; עם זאת, עם תרגול ובדיקה נאות, יכולי...

מעל 30 + השנים האחרונות, התקדמות בתרופות לדיכוי המערכת החיסונית הצטמצמה דחיית שתל בשל דחייה חריפה אבל דחייה כרונית עדיין מהווה אתגר עיקרי. הביטוי העיקרי של דחיית השתלת לב הכרונית הוא טרשת עורקים השתלה (ת&quot;א) 1,2. מצב זה מאופיין על ידי היפרפלזיה intimal וחוסר תפקוד של עורקי vasomotor שתל ומתפתח כתוצאה של מיקוד חיסוני של תאי שריר אנדותל וחלק על ידי המערכת החיסונית הנמען. המיקוד הספציפי של כלי דם השתל בשל הכרה מורכבת הזר פפטיד-גדול histocompatibility (MHC) מודגש על ידי הפיתוח של ת&quot;א באופן בלעדי בעורקי שתל תוך חוסך כלי מארח 3. בקנה אחד עם זה הוא התצפית שת&quot;א אינה מתרחשת באופן ניסיוני כאשר הנמען הוא זהה מבחינה גנטית לתורם או כאשר הנמען חסר תאי T ו- B 4. פציעה של כלי דם בתיווך חיסוני וdysfunction גורם להתפתחות של עיבוי intimal וסיסטיק, כמו גם ההצטברות החריגה של שומנים וחלבוני ECM, בת&quot;א 5. עיבוי intimal נוטה להיות קונצנטריים לאורך 4-6 עץ עורקים כולו. אובדן שתל ומוות מתרחשים בדרך כלל כתוצאה מאיסכמיה מתקדמת כתוצאה מחסימה של עורקי luminal שתל 4. בשינה 1991, Mennander et al. 7 חלוצים מודל חציצת אב העורקים בחולדות מודל ת&quot;א. מספר קבוצות שלאחר מכן מותאמות הליך זה לשימוש בעכברים. במודל זה, מגזרי אב העורקים שתל לפתח נגעים שיש להם תכונות דומות לת&quot;א נצפו בהשתלות קליניות. זה כולל עיבוי intimal המאופיין בהצטברות של תאים כמו שריר חלק ולויקוציטים נמען 7. מעל 2 העשורים האחרונים מודל זה נעשה שימוש כדי ליצור תובנה חשובה למנגנונים של פגיעה בכלי הדם, דחייה ות&quot;א. זה יכול להיות לנואד לבחון שאלות הקשורות למערכת חיסונית וכלי דם במהלך פתולוגיה עורקים. הבחירה של השפעות חוסר התאמת אנטיגן היכולת לטפל כראוי על שאלות אלה. השתלה פני מחסומי MHC מלאים מאפשרת הערכה מקיפה של תגובות חיסוניות שידועים כי הם יהיו מעורבים בדחיית השתלות איברים. זה כולל הכרה ישירה CD4 ו CD8 T תא ומיקוד של פפטיד הזר-MHC שהוצג על ידי תאים שמקורם שתל, CD4 העקיף (ואולי CD8) הכרת T תא ומיקוד של alloantigens נגזר שתל שהוצג על ידי אנטיגן נמען מציג תאים, וantibody- הכרה בתיווך של alloantigens על משטחי תא כלי דם 8. עם זאת, התגובה של כלי הדם לפגיעה בניסויים הלא תואמים-MHC מלאים עשויה להיות שונה מזה שנצפה קליני. ג&#39;ונסון et al. 9 הראה כי, בשתלי אב העורקים חציצה מושתלים על פני מחסום חוסר התאמת MHC מלא, רובתאי neointimal הם ממוצא נמען ולא ממוצא תורם. זה שונה מזה שנצפה בהשתלות אנושיות שבו רוב תאי שריר חלק intimal הם ממוצא תורם 9,10. כדי להסביר למגבלה זו, מודלים ניסיוניים חלופיים שכרוכים בהשתלה על פני חוסר ההתאמה אנטיגן histocompatibility קטין פותחו כי לעורר תגובות של כלי דם שדומים יותר לאלו שנצפו בהשתלת קלינית 11. בעוד מודלים החלופיים אלה מאפשרים למסקנות חשובים להתבצע לגבי התגובות של כלי דם המניע את ההתפתחות של ת&quot;א, התהליכים החיסוניים הגורמים לדחייה של כלי דם בשתלים תואמים אנטיגן histocompatibility קטין לא לגמרי מחדש להיכנע אלה המתרחשים בסביבה הקלינית. לדוגמא, אנטיגנים histocompatibility קטין מוכרים היטב על ידי נוגדנים תגובתי שתל 12. בהתחשב בשיקולים שפורט לעיל, חשוב לשקול את Questi פתולוגיעל נבחן בעת ​​בחירת הסוג של חוסר התאמת אנטיגן בשימוש במודל חציצת אב העורקים. כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט להשתלת חציצת אב העורקים בעכברים. אנו מתארים השתלת חציצה בין עכברי MHC-תואמים מלאים אבל באותו הפרוטוקול משמש להשתלה על פני זני עכבר אחרים אנטיגן תואמים.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6J (H-2b)</td><td>מעבדות ג'קסון, בר הרבור ME</td><td>Strain# 000664</td><td></td></tr><tr><td>Balb/cBYJ</td><td>Jackson Laboratories, בר הרבור ME</td><td>Strain# 001026</td><td></td></tr><tr><td>הזרקת קטמין הידרוכלוריד USP 100 מ"ג/מ"ל</td><td>Ketalean</td><td>DIN 00612316</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>הזרקת קסילזין 20 מ"ג/מ"ל</td><td>Rompum</td><td>DIN 02169592</td><td></td></tr><tr><td>הזרקת קטופרופן 100 מ"ג/מ"ל</td><td>אנאפן</td><td>DIN 01938126</td><td></td></tr><tr><td>בורטורפנול טרטרט&nbsp; הזרקה 10 מ"ג/מ"ל</td><td>Torbugesic</td><td>DIN 008450000</td><td></td></tr><tr><td>הזרקת בופרנורפין 0.3 מ"ג/מ"ל</td><td>רקיט</td><td>בנקיזר B.N. 5241</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה סטרילית להזרקה אנטיפמזול הידרוכלוריד</td><td>Antisedan</td><td>DIN 02237744</td><td></td></tr><tr><td>Heparin הזרקת נתרן, USP, 1,000 יחידות/מ"ל</td><td>McKesson Distribution DIN</td><td>02264315</td><td></td></tr><tr><td>Tears טבעי משחת עיניים</td><td>Alcon</td><td>DIN 02082519</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>0.9% נתרן כלורי, סטרילי</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lactated Ringer' s Solution, סטרילית</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.9% הזרקת נתרן כלורי, סטרילית, 10 מ"ל</td> רפידות הכנה לאלכוהול של <td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>לוריס</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פובידון יוד</td><td>בטדין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלורוהקסדין גלוקונאט 4% w/v</td><td>Germi-Stat</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שחור פוליאמיד מונופילמנט</td><td>AROSurgical מכשירים</td><td>T4A10Q07</td><td></td></tr><tr><td>תפרים, תפר 10-0, תפר מונופילמנט כחול 70 מיקרון</td><td>5-0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, מחט P3</td><td>Ethicon</td><td>8698G</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>REF 309659</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>REF 309604</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין 1 סמ"ק TB עם 28 גרם 1/2</td><td>BD</td><td>REF 309309</td><td></td></tr><tr><td>25 גרם 7/8, מחט היפודרמית</td><td>BD</td><td>REF 305124</td><td></td></tr><tr><td>27 גרם 1/2, מחט היפודרמית</td><td>BD</td><td>REF 305109</td><td></td></tr><tr><td>מפסק קוליברי- 1.5 ס"מ מפוזר 4 ס"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>S& T CAF-4 קליפ מריחת מלקחיים, ללא נעילה</td><td>Fine Science Tools</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים Supergrip, S& T</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים רפואיים מס' 5</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לתינוקות של Lexer</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו אדסון משוננים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tubingen מיקרו-מספריים</td> כלי <td>מדע עדינים</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>מהדקי מיקרו, b-1; 3.5 מ"מ x 1 מ"מ; אורך 7 מ"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים של Graefe, 10 ס"מ 1x2 שיניים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11054-10</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo עם מנעול ולסתות טונגסטן</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>מעקר חרוזי זכוכית חמה</td><td>Inotech 250</td><td>IS-250 - Steri-250</td><td></td></tr><tr><td>גזה לא ארוגים</td><td>Progene</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotton Tippped אפליקטורים</td> גוזם זקן <td>פוריטני</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>Sunbeam</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

עכבר דגם של דחיית כלי דם הנוצרת על-alloimmune וטרשת עורקים להשתלות

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

דחיית כלי הדם המובילה לטרשת עורקים מושתלת (TA) היא הייצוג המוביל של אי ספיקת השתלת לב כרונית. ב-TA, המערכת החיסונית של המושתל גורמת לנזק לדופן העורקים ולתפקוד לקוי של תאי אנדותל ותאי שריר חלק. זה מעורר תגובת תיקון פתולוגית המאופיינת בעיבוי אינטימי וחסימה לומינלית. הבנת המנגנונים שבאמצעותם מערכת החיסון גורמת לדחיית כלי דם ו-TA עשויה לתרום לפיתוח דרכים חדשות לניהול כישלון השתל. כאן, אנו מתארים מודל אינטרפוזיציה של אבי העורקים של עכבר שניתן להשתמש בו כדי לחקור את המנגנונים הפתוגניים של דחיית כלי דם ו-TA. המודל כולל השתלה של מקטע אבי העורקים מבעל חיים תורם לנמען אלוגני. דחיית מקטע העורק כרוכה בתגובות אלואימוניות וגורמת לשינויים בעורקים הדומים לדחיית כלי הדם. ניתן להשתמש בגישה הטכנית הבסיסית שאנו מתארים עם זני עכברים שונים והתערבויות ממוקדות כדי לענות על שאלות ספציפיות הקשורות לדחיית כלי דם ו-TA.

במודל זה, אב העורקים בבטן מעכבר BALB / cYJ הוא התערב לאב עורקי infrarenal של נמען C57Bl / 6. זה מאפשר הערכה מקיפה של alloimmune תגובות כי יעד עורקי שתל. פציעה של כלי דם בתיווך חיסוני במודל זה יוזמת תגובות מתקן כלי דם שמגיעות לשיא בעיבוי intimal, צמצום luminal וגיוס של תאים חיסוניים (איורים 1 ו -2). אז קריטריונים אלו משמשים כקריאה החוצה לחומרת alloimmune תגובות, דחייה של כלי דם, ות&quot;א. הצלחה של ההליך ניתן להעריך על ידי הפיתוח של עיבוי intimal ח...

אנו מתארים פרוטוקול להשתלת אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכברים. מטרת הפרוטוקול היא לספק מודל שבאמצעותו ניתן לחקור תהליכים פתולוגיים ואסטרטגיות טיפוליות הרלוונטיות לתגובות אלואימוניות בעורקים ולשינויים העורקיים הנובעים מכך התורמים לכישלון השתלת איברים.

עכבר דגם של דחיית כלי דם הנוצרת על-Alloimmune וטרשת עורקים להשתלות

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבצע השתקת מעקף של האביס (aortic interposition grafting) מקצה לקצה בעכברים, לצורך חקר דחייה וסקלרוזיס של עורקים לאחר השתלה. זאת מושג תחילה על ידי קציר של מקטע מהאביס הבטני של העכבר התורם. לאחר מכן, המקטע מושתל באופן אורטוטופי לתוך האביס התוך-כלייתי של מקבל אלוגנאי השונה גנטית מהתורם.בשלב הסופי, מקטע כלי הדם שהושתל מוצא ומנותח כדי לבחון התפתחות של טרש artery של השתלה (transplant arteriosclerosis). בסופו של דבר, ניתן להעריך את היקף הטרש של השתלה ואת הדחייה הווסקולרית של השתל הכולסטרולי (allograft) המתווכת על ידי מערכת החיסון, באמצעות מדידת העיבוי האינטימלי וההיצרות הלומנלית, וכן באמצעות ניתוח אימונוהיסטוכימי של הרקמה לבדיקת הצטברות של תאי חיסון.בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בפרוצדורה זו זקוקים לזמן כדי להתרגל לטכניקה המיקרו-כירורגית, כיוון שהשליטה בה דורשת רמה גבוהה של מיומנות ותרגול. עם זאת, השיטה אמורה להיות נגישה לרוב החוקרים באמצעות תרגול חרוץ. לכן, נדגים את הפרוצדורה עם ד"ר וויני, נוירוכירורגית מוכשרת, ואדם רוסו, סטודנט לדוקטורט מוכשר במעבדה שלי. התחילו במיקום עכבר התורם במצב גב (supine) על לוח פלקסיגלס דק ונקי, העטוף בכיסוי סטרילי, תחת מיקרוסקופ ניתוחי בהגדלה של 8.30x.לאחר אישור השגת הרדמה כירורגית נאותה באמצעות צביטה בבהו, השתמשו במספריים סטריליים כדי לבצע חתך אחד בקו האמצע מהפובס (עצם הח恥) ועד לתהליך ה-ZipID. לאחר מכן, השתמשו במגדיל (retractor) קטן כדי לפתוח את דפנות הבטן ולחשוף את חלל הבטן. לאחר מכן, השתמשו במקלונים סטריליים עם טיפ צמר כדי להסיט בעדינות את המעיים לכיוון עליון ושמאלה של בעל החיים.כסו את הרקמה בתגגאוסס ספוג במלח פיזיולוגי, והזיזו את איברי הרבייה כלפי מטה כדי לאתר את האאורטה התת-כלייתית ואת הווריד הנבוב התחתון (IVC). כעת השתמשו בפינצטה רפואית מספר 5 כדי להפריד את האאורטה מה-IVC באזור העורק הכליתי השמאלי בקרבת ההסתעפות. לאחר מכן, השתמשו בתפרים מונופילמנטיים מפוליאמיד במידה 10-0 כדי לקשור את הענפים הקטנים בקרבת האאורטה.לאחר הפרדת האורטה והוריד הנבוב (IVC) של התורם, רווי את כלי הדם במי מלח, כסה את החלל החשוף בגזה לחה והצב את התורם בצד באזור סטרילי. כעת, הנח את העכבר המקבל תחת המיקרוסקופ והפרד את האורטה של המקבל מה-IVC כפי שהודגם. לאחר מכן, הנח שני תסמיכי מיקרו-וסקולריים של 4 מילימטר, פרוקסימלית ודיסטלית למקטע הרלוונטי, במרחק של כ-5 מילימטרים זה מזה.בשלב הבא, בעזרת מיקרו-מספריים של vanous tube engine, בצעו פתיחה אופקית בודדת של האורטה (aortotomy) והסִירו לא יותר מ-0.5 millimeters של האורטה הבטנית כדי להכניס את השתל האורטלי מהתורם. החזירו את התורם למיקרוסקופ וחתכו סגמנט של השתל באורך של שלושה עד ארבעה millimeters, כפי שהודגם כעת. לאחר מכן, השתמשו במחט 25 gauge בגודל five eight כדי לשטוף את האורטה שהוסרה במי מלח עם הפרין.הקפידו שקצה המחט לא יבוא במגע עם הכלי, והניחו את הכלי בתוך מיכל של תמיסת מלח עם הפרין על קרח. בתוך 30 דקות מהכרסום, מקמו את השתל העורקי של התורמה במיקום האורתוטופי במקבל, תוך התאמת האוריינטציה האנטומית של השתל לזו של המקבל. לאחר מכן, אחזו בעדינות ב-tunica externa של הכלי והשתמשו בפינצטה מספר חמש כדי להסיטו מעט.כעת השתמשו בפינצטה כדי להעביר מחט המחוברת לחוט תפר פוליאמיד מונופילמנט במידה 10-0 דרך העובי המלא של דופן כלי הדם, כדי לקבע את השתל האורטלי התורם לכלי הדם שנכרת מהמקבל לצורך ביצוע תפרים רציפים. מקמו תפרי קיבוע (Stay sutures) בשעה תשע, הן בקצה העליון והן בקצה התחתון של השתל. לאחר מכן, התחילו מהקצה העליון של השתל, משעה שלוש, את האנסטומוזיס.חברו את הקצוות שהוסרו באמצעות שתי תפרים רציפים והדקו את התפר לתפר המייצב. לאחר מכן, הפכו את הש Transplant והמשיכו בתפר הרציף אל החלק הגבי של הכלי, עד להגעה לנקודת המקור.הקפידו על התפרים. הדקקו את התפר מבלי להפעיל לחץ רב על כלי הדם, וחזרו על פעולת התפירה עבור האנסטומוזה התחתונה. לאחר השלמת האנסטומוזה.שחררו את התפס המיקרו-וסקולרי הדיסטלי כדי לאפשר זרימת דם רטרוגרדית דרך כלי הדם. אם לא נצפה דימום, שחררו את התפס הפרוקסימלי. אם לא נצפו חסימות דם, השתמשו בפינצטה כדי לתפוס בעדינות קצה אחד של תפרי הקיבוע והסיטו מעט את כלי הדם כדי לבחון את הדופן האחורית של כלי הדם.אין להבחין בקמטות; אם ניתן לראות תבנית דופק נמרצת הן בכלי התורם והן בכלי המקבל, השתמש במקלונים עם קצה צמר כדי להחזיר את המעיים לחלל הבטן. לבסוף, השתמש במחזיק מחטים ובמלקחי Grof כדי לסגור את דופן הבטן בעזרת תפרים מפוליפרופילן 5/0 בתפירה רצופה. בצע סגירה תת-עורית לסגירת שכבת העור באמצעות אותם תפרים.ניתן להביט בתפקוד המוטורי של הגפיים האחוריות כדי להעריך את הצלחת הניתוח. כמות הנזק הווסקולרי של השתל האלוגנאי המתוּוך על ידי מערכת החיסון נבדקת באמצעות כימות העיבוי של האינטימה וההיצרות של הלומן במקטעי אאורטה מושתלים ביום ה-30 לאחר הש transplantation.ואכן, כפי שנצפה, מקטעי העורק של השתולי-הזירה (allograft) מפתחים עיבוי אינטימה משמעותי וחסימה של הלומן, בעוד שבמקטעי העורק של ביקרת השתולי-הסוג (ISO graft) לא נצפו שינויים. יתרה מכך, ניתן להעריך את גיוס הלוקוציטים אל העורק המשתול-זירה על ידי בחינת הצטברותם של תאי T חיוביים ל-CD4 ו-CD8 ומקרופאגים באמצעות אימונוהיסטוכימיה. כצפוי, שלושת סוגי התאים החסוניים זוהו בתוך האינטימה של רקמות העורק התורמות לאחר הפיתוח.טכניקה זו סללה את הדרך עבור חוקרים בתחום ההשתלות לחקור צמצום כלי דם המתווך על ידי תגובה אלו-אימונית וטרשת עורקים של השתלות.

mouse-model-alloimmune-induced-vascular-rejection-transplant

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

וידאו זה מדגים את מודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי כמודל פשוט ללמוד את הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP) בחולדות.

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

אנו מתארים טכניקה שבה קטע של אב העורקים בבטן מעכבר הושתל orthotopically ממש מתחת לעורקי הכליה בנמען אלוגנאית או syngeneic. טכניקה זו יכולה להיות שימושית במחקרים בם השתלה של עורקים גדולים של גודל אחיד נחשבת יתרון.

השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת מודל אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכבר לחקר דחיית כלי דם הנגרמת על ידי מערכת החיסון. לאחר הנחת עכבר תורם מורדם במצב שכיבה, אבי העורקים הבטני האינפרא-כלייתי (IAA) מבודד בזהירות מהמבנים הסובבים. כלי ההסתעפות קשורים, ושני קצוות רשות העתיקות מהודקים כדי למנוע זרימת דם לפני כריתה. לאחר מכן, מושתל התורם בעכבר מושתל אלוגני, וזרימת הדם משוחזרת באמצעות אנסטומוזה כדי לחקור דחיית כלי דם הנגרמת על ידי מערכת החיסון.

מודל אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכבר לחקר דחיית כלי דם הנגרמת על ידי מערכת החיסון

אנו מתארים פרוטוקולים לarteriosclerois שוחדנו העכבר (GA) דגמים אשר כרוך חציצה של מגזר כלי עכבר לנמען של אותו הזן המולד. על ידי backcrossing שינויים גנטיים נוספים לתורם הכלי, המודל יכול להעריך את ההשפעה של גנים ספציפיים על GA.

מודלים עכבר לטרשת עורקים שתל

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקר האימונולוגיה של דחייה. המודל הכירורגי הציג דוחות על זמן ניתוח קצר וטכניקה תמציתית. בהתאם לשילוב הזן של התורם-מקבל, הכליה המושתלת עלולה לפתח דחייה תאית חריפה או נזק כרוני לאלוגרפט, המוגדר על ידי פיברוזיס אינטרסטיציאלי וניוון צינור.

השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

כדי לחקור השתלה משולבת של איברים מוצקים וכלי דם, אנו מתארים מודל חדש של השתלת דופן חזה הטרוטופית, בלוטת התימוס ולב בעכברים באמצעות טכניקת שרוול צוואר הרחם ללא תפרים.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

מודל הרומן הזה להשתלה הגפיים האחוריות orthotopic בתוך העכבר, החלת טכניקה השרוול הלא תפר עבור השקה סופר-כלי הדם, מספק כלי רב עוצמה עבור מחקר אימונולוגי מכניסטית in vivo הקשורים אלוגרפט מרוכבים vascularized (VCA).

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של הטרוסקסואלים השתלת אבי העורקים בעכברים באמצעות שימוש בטכניקת השרוול שאינו תפר במודל מורטין הצווארי. מודל זה יכול לשמש כדי ללמוד את הפתולוגיה הבסיסית של השתלת האלופתיה כרונית (קו) והוא יכול לעזור להעריך סוכנים רפואיים חדשים כדי למנוע את הקמתה.

מורי צוואר הרחם מורנה השתלת מודל באמצעות שינוי שאינו תפר שיטה השרוול

מחקר זה בונה שני מודלים סטנדרטיים של השתלת זרים בעכברים כדי לשחזר באופן ספציפי דחייה תאית חריפה ודחייה חריפה בתיווך נוגדנים. מודלים אלו משמשים פלטפורמה אמינה לחקר מנגנוני דחיית מערכת החיסון על ידי זנוגרפט, להערכת אסטרטגיות מדכאות חיסון ולקידום מחקר טרום-קליני של השתלות זנו.

מודל עכברו סטנדרטי עם זרימת עבודה של שלושה אנשים לחקר דחייה תאית חריפה ותיווך נוגדנים בזנוטרנספלטציה

המודל להשלים עכבר קיפאון של פקקת נחות הווריד הנבוב התשואות כמויות מדידים של רקמת עורק בקיר פקיק. זה הוכיח שימושי להערכת אינטראקציות בין הקיר וריד ואת פקיק occlusive והן להערכת התקדמות של דלקת כרונית חריפה.

עכבר דגם השלם הקיפאון של פקקת נחותים הווריד הנבוב

למדו השתלת אורטה בין עכברים לחקר דחיית כלי דם וטרשת עורקים להשתלות. השיטה מאפשרת ניתוח עיבוי דופן העורק והצרת החלל באמצעות היסטוכימיה אימונית.

עכבר דגם של דחיית כלי דם הנוצרת על-Alloimmune וטרשת עורקים להשתלות

גלה סרטונים נוספים