Name: טיפול במוצרי טסיות דם עם ריבופלבין ואור UV: יעילות גבוהה נגד כייל קטריאלי זיהום (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: למדו שיטת הפחתת פתוגנים בטסיות דם באמצעות ריבופלבין ואור UV. הטכניקה מפחיתה זיהום חיידקי ביעילות תוך שמירה על איכות מרכיבי הדם ומונעת מחלות המועברות בעירוי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין אישורים.

1. חיידקים השעיה הכנה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצלחת תרבות מפוספסת, סביבה נקיה מחיידקים לחסן מושבה אחת לתוך בקבוק סטרילי 250 מיליליטר מכיל של תקשורת הצמיחה המתאימה (טבלת 1) 100 מיליליטר בדרך של לולאת inoculating סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הבקבוק לתוך חממה רועדת מסלולית בתנאים המתאימים (טבלת 1) במשך 1-2 ימים, בדיקה לצמיחה מעת לעת. קבע את המהירות שייקר עד 140 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסביבה נקיה מהחיידקים להעביר את ההשעיה החיידקים לתוך צינורות שני 50 מיליליטר סטרילי חרוטי ו צנטריפוגות הצינורות ב 3000 XG במשך 20 דקות ב 23 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant ו resuspend כל גלולה חיידקים עם 15 מיליליטר של מים סטריליים peptone. מערבולת במידת צורך. מערבבים את תרבות חיידקים המושעית לצינור אחד / מיכל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל מניית התרבות בשלושה עותקים לסעיף 4 כדי לקבוע את כייל תרבות המניה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכניס למקרר לתקופה של עד 2 שבועות ב 477; עד צורך 2 מעלות צלזיוס. Re-כייל התרבות בעת השימוש, ראה שלב 4.8. </li></ol> 2. טסיות מוצרי הכנה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף מוצר טסיות סטנדרטי apheresis אדם בבנק דם מוכר. מוצר טסיות הדם חייב לעמוד במפרטי האוסף הבאים: 90-360 מיליליטר נפח וx 0.8 -3.8 10 6 טסיות דם / ריכוז μl. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהמוצר של טסיות דם שנח על מינימום של 2 שעות לפני עיבוד להפחתת הפתוגן. אחסן את המוצרים ב 22 ± 2 מעלות צלזיוס בחממה טסיות ללא תסיסה לשעה 2 אלה. אחרי שעות להבטיח מוצר טסיות הדם נסער ב 22 ± 2 מעלות צלזיוס בחממה של טסיות דם. השתמש במוצר לתקופה של עד 22 שעות שלאחר איסוף. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מזרק 3 מיליליטר להסיר מדגם 2 מיליליטר למדוד 22C pH של מוצר טסיות הדם. יש להשתמש מנתח גז דם כדי להבטיח את המוצר pH&gt; 6.6. השתמש באותו המדגם כדי למדוד את ריכוז טסיות של מוצר טסיות הדם באמצעות נתח המטולוגיות. להבטיח המוצר עומד .80-3.8 x 10 6 טסיות / דרישת ריכוז אוסף μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחינה ויזואלית להעריך את המערבולת של מוצר טסיות הדם. אם למוצר יש &quot;0&quot; מערבולת המוצר ייפסל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את התיק של טסיות דם תחת מקור לבן-אור ישיר ולסחוט את השקית של טסיות דם לזמן קצר. מבחינה ויזואלית לבחון את הדפוס המתערבל של מדגם טסיות הדם. ציון המוצר תוך שימוש בסולם הבא. הערה: 2 - חיובית מערבולת: מסתחרר inhomogeneity הגלוי לאורך כל השקית עם ניגוד חזק. 1 - ביניים מערבולת: inhomogeneity חלק גלוי, אלא רק בכמה מקומות ועם ניגוד עני. 0 - מערבולת שלילית: הומוגניות דלוח שנותרה לפני ואחרי לסחוט את שקית טסיות הדם </li></ol> תהליך 3. אור ריבופלבין וUV: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טראןספיר מוצר טסיות הדם לשקית תאורת אור ריבופלבין וUV ואחסון באמצעות התקן עגינה צינור סטרילי. לאחר ההעברה להסיר את שקית איסוף הריקה יחידת טסיות דם באמצעות אוטם צינורות וזורקים את השקית הריקה כמו פסולת ביולוגית מסוכנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר כיס 35 מיליליטר של 500 מיקרומטר ריבופלבין פתרון מניות מלעטוף חיצוני מגן האור שלה. מזח סטרילי ערכת ריבופלאבין על קו הכניסה של תיק הטיפול ואחסון. לאפשר את התוכן לנקז לתוך יחידת טסיות הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתלות את תיק שקיק / טיפול ואחסון ריבופלבין להגדיר מנרתיק ריבופלבין ועדינות להביע אוויר שייר מתוך תיק הטיפול ואחסון ולתוך שקית ריבופלבין. להבטיח כמות קטנה של מוצר טסיות בא לידי ביטוי גם בכיס ריבופלאבין לשטוף כל ריבופלאבין שייר למוצר טסיות הדם. אפשר פתרון ריבופלבין וטסיות דם לנקז בחזרה לשקית הטיפול ואחסון ולאחר מכן מהדק את קו הכניסה. הסר את השקית הריקה ריבופלאביןing אוטם צינורות וזורקים את השקית הריקה כמו פסולת ביולוגית מסוכנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזח סטרילי קו צינורות &quot;6 עם מחבר מזרק נקבה על קו הכניסה של תיק התאורה ואחסון. צרף חבית מזרק 10 מיליליטר (להסיר את הבוכנה) על מחבר מזרק הנקבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סביבה נקיה מחיידקים להוסיף 5 מיליליטר של חיידקי המניה לתוך חבית המזרק באמצעות פיפטה. פתח את המהדק על קו הכניסה ולאפשר לחיידקים כדי לנקז לתוך מוצר טסיות דם. יש לשטוף את חבית המזרק על ידי מתן כמה מוצר טסיות דם לזרום בחזרה לחבית מזרק 10 מיליליטר. הסר את חבית מזרק 10 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסביבה נקיה מהחיידקים לצרף מזרק 30 מ&quot;ל ולשטוף את נמל הכניסה מינימאלית של שתי פעמים כדי להבטיח את חיידקי המניות מעורבות למוצר טסיות הדם. לאחר שהמוצר הוא גם מעורב, להשתמש במזרק 5-10 מיליליטר נקי ולהסיר מדגם טרום טיפול 2 מיליליטר. באמצעות מזרק חדש להבטיח כל אוויר הציג מהצעד החיסון או דגימת צעד מוסר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל המדגם טרום טיפול לסעיף 4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את קו הכניסה משקית הטיפול ואחסון ולשקול את המוצר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המוצר אל נורת ובצע את הפקודות על המסך כדי להתחיל טיפול טסיות סטנדרטי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן בזיהוי מפעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Secure והר השקית לגליל דיו הפנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את קוד זיהוי לדוגמא לפנס או באמצעות הקורא ברקוד או לוח המקשים להזנה הידני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סוג מוצר סריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את מהדק קוורץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשיר התאורה באופן אוטומטי לספק 6.24 / מיליליטר J של אנרגיה. זמן הטיפול האופייני לוקח 5-10 דקות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות מזח סטרילי טיפול קו 6 &quot;צינורות עם מחבר מזרק נקבה על קו הנורה מדגם של טיפול ושקית אחסון. ודא שהמוצר גם מעורב ולאחר מכן לצרף מזרק 5 מ&quot;ל ולהסיר מדגם לאחר טיפול 2 מיליליטר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל לאחר הטיפול סםPLE לסעיף 4. </li></ol></li></ol> 4. בקטריאלי כייל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאמוד את כייל של הדגימות לפני טיפול ואחרי טיפול, ולהכין את המספר המתאים של 5 מיליליטר צינורות דילול צורך לבצע דילול סדרתי נקודת סיום של כל דגימה. סביבה נקיה מחיידקים למלא את הצינורות הנדרשים עם 1.8 מיליליטר של מים peptone. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל כל דגימה באמצעות תכנית דילול סדרתי של פי 10. הסביבה נקיה מחיידקים להעביר 0.2 מיליליטר מהמדגם חי לצינור הראשון דילול (10 -1). מערבולת צינור זה דילול והעברה 0.2 מיליליטר לצינור הדילול הבא. המשך דילול סדרתי דרך המספר הנדרש של דילולים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת הסביבה נקיה מחיידקים של כל דילול 100 μl להיות מצופה לצלחת מתאימה אגר (טבלה 1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מפזר תא סטרילי, שווה להפיץ את המדגם על כל צלחת אגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך דגירה הצלחות בתנאים המתאימים ( <strong&gt; לוח 1) במשך 1-2 ימי בדיקה לצמיחה מעת לעת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוזן צלחות עם 30-300 מושבות. צלחות המכילות יותר מ -300 מושבות נחשבות רבה מספור (TNTC). צלחות המכילות פחות מ -30 מושבות נחשבות מתחת לגבול כימות (LOQ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את כייל של כל דגימת בדיקה ולהקליט את התוצאות כCFU / ml. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במשוואה הבאה כדי לחשב CFU / מיליליטר: <img alt="משוואת 1" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq1.jpg" width="250" /></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אין מושבות על צלחת הדילול הנמוכה ביותר, להשתמש במשוואה הבאה כדי לחשב את הגבול של זיהוי (לוד): <img alt="משוואה 2" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq2.jpg" width="100" /> ו <img alt="משוואה 3" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq3.jpg" width="100" /> איפה: N = המספר הנמוך ביותר של חלקיקים (CFU) בעמ &#39;roduct שניתן לאתרם בביטחון. P = הסתברות שמיקרואורגניזם יהיה מבלי שיבחינו; לביטחון של 95% מגילוי חיידק, P = .05. V = הנפח כולל של מוצר במ&quot;ל נ &#39;רמת דילול x המצופה (מיליליטר) = נפח של צלחת </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבקרה שלילית, צלחת 0.5 מיליליטר של המים peptone המשמש לדילולי סדרתי על כל אחד משתי צלחות אגר. השתמש באותו סוג הצלחת כדגימות להיבדק. הפוך דגירה הצלחת בתנאים המתאימים ל1-2 ימי בדיקה לצמיחה מעת לעת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הצמיחה הוא ציין שתי צלחת אגר, בקבוק המים peptone שימוש חייב להיות מושלך; תוצאות המחקר גם ביטלו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבקרה חיובית, מחדש כייל מניית התרבות של חיידקים שהיה בשימוש. הפוך דגירה הצלחות בתנאים המתאימים ל1-2 ימי בדיקה לצמיחה מעת לעת. כייל יהיה ± 1.0 להיכנס CFU / מיליליטר של הרשומהכייל מניית אד (ראה סעיף 1.5) למחקר כדי להיחשב חוקי. </li></ol>

<ol><li>Brecher, M. E., Hay, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+contamination+of+blood+components%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Bacterial contamination of blood components.</a> Clin. Microbiol. Rev. 18 (1), 195-204 (2005).</li>
<li>Brecher, M. E., Holland, P. V., Pineda, A. A., Tegtmeier, G. E., Yomtovian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+bacteria+in+inoculated+platelets%3A+implications+for+bacteria+detection+and+the+extension+of+platelet+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Growth of bacteria in inoculated platelets: implications for bacteria detection and the extension of platelet storage.</a> Transfusion. 40 (11), 1308-1312 (2000).</li>
<li>Cardo, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen+inactivation+of+Leishmania+donovani+infantum+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Pathogen inactivation of Leishmania donovani infantum in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Vox Sang. 90 (2), 85-91 (2006).</li>
<li>Cardo, L. J., Salata, J., Mendez, J., Reddy, H., Goodrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen+inactivation+of+Trypanosoma+cruzi+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Apher.+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathogen inactivation of Trypanosoma cruzi in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfus. Apher. Sci. 37 (2), 131-137 (2007).</li>
<li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+viral+risks+of+blood+and+blood+products%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Med%22%5BJournal%5D)">Current viral risks of blood and blood products.</a> Ann. Med. 32 (7), 469-474 (2000).</li>
<li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+contamination+and+transfusion+safety%3A+experience+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Clin.+Biol%22%5BJournal%5D)">Bacterial contamination and transfusion safety: experience in the United States.</a> Transfus. Clin. Biol. 10 (1), 6-9 (2003).</li>
<li>Dumont, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+of+single-donor+apheresis+platelets+for+bacterial+contamination%3A+the+PASSPORT+study+results%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results.</a> Transfusion. 50 (3), 589-599 (2010).</li>
<li>Goodrich, R. P., Gilmour, D., Hovenga, N., Keil, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+laboratory+comparison+of+pathogen+reduction+technology+treatment+and+culture+of+platelet+products+for+addressing+bacterial+contamination+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">A laboratory comparison of pathogen reduction technology treatment and culture of platelet products for addressing bacterial contamination concerns.</a> Transfusion. 49 (6), 1205-1216 (2009).</li>
<li>Greco-Stewart, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serratia+marcescens+strains+implicated+in+adverse+transfusion+reactions+form+biofilms+in+platelet+concentrates+and+demonstrate+reduced+detection+by+automated+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Serratia marcescens strains implicated in adverse transfusion reactions form biofilms in platelet concentrates and demonstrate reduced detection by automated culture.</a> Vox Sang. 102 (3), 212-220 (2012).</li>
<li>Keil, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+Plasmodium+spp.+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Inactivation of Plasmodium spp. in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfusion. 53 (10), 2278-2286 (2013).</li>
<li>Kleinman, S., Chan, P., Robillard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+associated+with+transfusion+of+cellular+blood+components+in+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">Risks associated with transfusion of cellular blood components in Canada.</a> Transfus. Med Rev. 17 (2), 120-162 (2003).</li>
<li>Larsen, C. P., Ezligini, F., Hermansen, N. O., Kjeldsen-Kragh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six+years%27+experience+of+using+the+BacT%2FALERT+system+to+screen+all+platelet+concentrates%2C+and+additional+testing+of+outdated+platelet+concentrates+to+estimate+the+frequency+of+false-negative+results%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Six years' experience of using the BacT/ALERT system to screen all platelet concentrates, and additional testing of outdated platelet concentrates to estimate the frequency of false-negative results.</a> Vox Sang. 88 (2), 93-97 (2005).</li>
<li>Mundt, J. M., Rouse, L., Van den Bossche, J., Goodrich, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+Biological+Mechanisms+of+Pathogen+Reduction+Technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem.+Photobiol%22%5BJournal%5D)">Chemical and Biological Mechanisms of Pathogen Reduction Technologies.</a> Photochem. Photobiol. , (2014).</li>
<li>Murphy, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+platelet+concentrates+for+bacterial+contamination%3A+low+numbers+of+bacteria+and+slow+growth+in+contaminated+units+mandate+an+alternative+approach+to+product+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Screening platelet concentrates for bacterial contamination: low numbers of bacteria and slow growth in contaminated units mandate an alternative approach to product safety.</a> Vox Sang. 95 (1), 13-19 (2008).</li>
<li>Brien, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+incidence+and+residual+risk+of+HIV%2C+HBV+and+HCV+at+Canadian+Blood+Services%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Current incidence and residual risk of HIV, HBV and HCV at Canadian Blood Services.</a> Vox Sang. 103 (1), 83-86 (2012).</li>
<li>Pearce, S., Rowe, G. P., Field, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+of+platelets+for+bacterial+contamination+at+the+Welsh+Blood+Service%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med%22%5BJournal%5D)">Screening of platelets for bacterial contamination at the Welsh Blood Service.</a> Transfus. Med. 21 (1), 25-32 (2011).</li>
<li>Ramirez-Arcos, S., Kou, Y., Perkins, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+universal+point-of-issue+assay+for+bacterial+detection+in+buffy+coat+platelet+components%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a universal point-of-issue assay for bacterial detection in buffy coat platelet components.</a> Vox Sang. 107 (2), 192-195 (2014).</li>
<li>Reddy, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+testing+of+a+novel+riboflavin-based+technology+for+pathogen+reduction+and+white+blood+cell+inactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Rev%22%5BJournal%5D)">Toxicity testing of a novel riboflavin-based technology for pathogen reduction and white blood cell inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 22 (2), 133-153 (2008).</li>
<li>Ruane, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+inactivation+of+selected+viruses+and+bacteria+in+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Photochemical inactivation of selected viruses and bacteria in platelet concentrates using riboflavin and light.</a> Transfusion. 44 (6), 877-885 (2004).</li>
<li>Tonnetti, L., Proctor, M. C., Reddy, H. L., Goodrich, R. P., Leiby, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system+against+Babesia+microti+in+apheresis+platelets+and+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Mirasol pathogen reduction technology system against Babesia microti in apheresis platelets and plasma.</a> Transfusion. 50 (5), 1019-1027 (2010).</li>
<li>Vanlandingham, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+inactivation+of+chikungunya+virus+in+plasma+and+platelets+using+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Photochemical inactivation of chikungunya virus in plasma and platelets using the Mirasol pathogen reduction technology system.</a> Transfusion. 53 (2), 284-290 (2013).</li>
<li>Walther-Wenke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+bacterial+contamination+of+blood+components+in+Germany%3A+effect+of+contamination+reduction+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Monitoring bacterial contamination of blood components in Germany: effect of contamination reduction measures.</a> Vox Sang. 100 (4), 359-366 (2011).</li>
</ol>

כל המחברים של מאמר זה מועסקים כיום על ידי Terumo BCT, מפתחת ויצרנית של מערכת Mirasol PRT. עמלות פרסום למאמר וידאו זה כבר שולם על ידי BCT Terumo.

הקרנת חיידקים הפכה מנהג נפוץ במוסדות בנקאיים דם ולמקומות רבים היא משמשת כשיטת העיקרית למניעת עירוי של טסיות דם מזוהמים bacterially. למרות שבדרך כלל הקרנת חיידקי מודעות חרם רוב חיידקים שליליים גרם גדלו במהירות כמו ס marcescens, א &#39; coli וא cloacae, זה נאבק כדי לזהות חיידקים חיוביים גרם גדלו איטי כמו ס aureus, spp סטרפטוקוקוס. וס epidermidis 8. למרבה הצער, חיידקים החיוביים אלה שלוש גרם הם מעורבים בלמעלה מ 50% מכלל היחידות של טסיות דם המזוהמים והעירוי של מוצרי טסיות דם המכילים שלושת אורגניזמים אלה הובילו לתמותת חולה 1. הקרנת חיידקים מסתמכת על כייל החיידקים במוצר טסיות דם להיות גבוה מספיק מספיק כדי שאורגניזם אחד לפחות הוא הכיל בתוך מדגם ההקרנה 4-8 מיליליטר הטיפוסי. אם כייל החיידקים הוא לא מספיק גבוה לחיידק להיות בשבי 4-8 מיליליטר נפח הדגימה, היחידה מסומנת באופן שגוי כשלילית והוא שוחרר לעירוי. גישה חלופית להקרנת חיידקים יכולה להיות להעסיק תהליך יזום שיכול להתבצע על כל היחידות של טסיות דם וזה יכול להפוך את אורגניזמים מזהמים כמו שאינו פונקציונלי. במחקר זה, titers הגבוה של חיידקים נוספו בכוונה ליחידות של טסיות דם על מנת לבחון את יכולת ההפחתה הכוללת של תהליך הפחתת הפתוגן אור ריבופלבין וUV. למרות עומסי חיידקים שנבדקו במחקר זה עולה בהרבה על אלה בדרך כלל נמצאים במוצרי דם בעת התרומה, מחקר זה מסייע להוכיח שתהליך ריבופלבין ואור UV יכול להפחית באופן משמעותי את כייל של חיידקי קיימא ביחידת טסיות דם מזוהם ב 2.6-5.4 יומן (הפחתת 99.7-99.9996% מזיהום חיידקים) (איור 2). כדי להשיג Accuraערך הפחתת יומן te, זה קריטי, כי יש לי המפעיל טכניקת aseptic טובה יחד עם כישורי pipetting מדויקים בעת ביצוע צעדי כייל חיידקים. pipetting מדויק בעת ביצוע דילולים סדרתי יכול להוביל להצטברות של שגיאות, כך מדידת כייל לא מדויקת. הנתונים שנאספו במחקר זה תומך בעבודה קודמת עם ריבופלבין ואור UV, שקרא תיגר על המערכת נגד רמה נמוכה, בקטרמיה הרלוונטית קליני (&lt;20 CFU / יחידה). המחקר קודם שנועד לחקות אירוע זיהום קליני בפועל והתוצאות הראו ריבופלבין ואור UV היה יעיל במניעת התפתחות חיידקים על פני תקופת אחסון טסיות 7 הימים. דוגמנות מבוססת על נתונים מהמחקר הקודם מצביעה על כך שהערכות הסיכון הנוכחיות של זיהום חיידקים של מוצרי טסיות דם יכולות להיות מופחתות על ידי ככל 98% מהרמות הנוכחיות 8. תהליך אור ריבופלבין וUV משווה לטובה למסך חיידקיםING, שרק הוכיח יעילות של 66% לזיהוי זיהום חיידקים ביחידות של טסיות דם כאשר קראו תיגר עם עומס חיידקים רלוונטי קליני 8. כמו בכל הטכנולוגיות, טיפול PRT של מוצרי טסיות דם למניעת סיבוכים הקשורים ליחידות של טסיות דם מזוהמות bacterially יש מגבלות. מערכות PRT אינן יעילות נגד חיידקי נבגים ולא להשבית רעלן פנימי, ובכך גם אם מערכת PRT יכול להשבית titers הגבוה של חיידקים שליליים גרם רעלן פנימי שנותר עדיין יכול לגרום להלם ספטי בנמען. PRT מבוצע הטוב ביותר מוקדם במהלך אחסון לפני החיידקים יכולים להפיץ לtiters הגבוה. לסיכום, כפי שהודגם על ידי השילוב של שני המחקרים הללו, תהליך ריבופלבין ואור UV הוא יעיל בהפחתת עומסי חיידקים של שני אורגניזמים החיוביים גרם שלילי וגרם ועשויה להציע חלופה להקרנה בקטריאלי. treatin באופן שגרתימוצרי טסיות דם גרם עם אור ריבופלבין וUV יש גם יתרון הנוסף של הפחתת שידור הפוטנציאל של סוכני דם נישא אחרים כמו וירוסים וטפילים.

עירוי של טסיות דם, פלזמה, תאי דם אדום ארוז ומוצרי דם כל לשחק תפקיד מרכזי ברפואה מודרנית ויכולים לשמש לטיפול במצבים רפואיים שונים, להחליף נוזלים חיוניים וסופו של דבר להציל חיים. טסיות דם הם מוצר סלולארי המבודדים או מכל דם ונקווה למנת transfusable או נאספים בתהליך של apheresis טסיות דם. תפקידו העיקרי של טסיות דם בגוף הוא כדי לעצור את הדימום באתרי פצע וכדי לסייע לשמור על עצירת דימום. חולים הסובלים מספירה נמוכה של טסיות תא (תרומבוציטופניה) רגישים לאירועי דימום ספונטניים ועירוי עם טסיות להביא תא טסיות דמם לספור חזרה לטווח נורמלי. טסיות דם שנאסף מאוחסנות לתקופה מקסימלית של 5-7 ימים ומאוחסנים בגיל 22 ± 2 מעלות צלזיוס בזמן שתחת תסיסה מתמדת. למרות הצלת החיים מאפיינים של עירויי טסיות דם נותרים קל סיכון למקבלי עירוי בשל שיתוףntamination של מוצרים אלה על ידי טפילים, חיידקים ווירוסים 11. ביצוע בדיקות חומצת גרעין נגיפיות (NAT) ירד הסיכון להעברה נגיפית של סוכני דם נישא עיקריים, כגון וירוס הצהבת מסוג C (HCV), נגיף הפטיטיס B. (HBV) ונגיף חיסוני חוסר אנושי (HIV) באופן משמעותי 5. פרסום האחרון משירותי הדם הקנדיים מעריך סיכון השיורי לסוכנים אלה להיות 1 ל8 מ&#39;תרומות ל- HIV, 1 ל-6.7 מ&#39;תרומות לHCV ו1 ל-1.7 מ&#39;תרומות עבור 15 HBV. למרות שבדרך כלל חיידקים לגייס פחות תשומת לב בציבור הרחב, בתדירות של זיהום חיידקים במוצרי טסיות דם כבר מוערכת כגבוה כמו 1: 1,000 7 וכי מיליוני מוצרי טסיות דם הם בעירוי בכל שנה נמענים רבים נחשפים לסיבוכים שעלולים להיות סכנת חיים כמו אלח דם 6. מחקר מצביע על כך שעומס החיידקים בזמןהזיהום הוא נמוך, &lt;100 יחידות מושבה להרכיב (CFU) / מוצר 2,16, לעומת זאת אחסון הסביבה וטמפרטורת חדר העשיר המזינה מאפשר זיהום חיידקים להתרבות לtiters הגבוה בצורה מסוכנת לפני העירוי. נכון לעכשיו, את השיטות שאושרו רק הזמינות כדי למנוע מוצרים מזוהמים bacterially מלהגיע נמען טסיות דם היא באמצעות השימוש במערכות מבוססת תרבות ונקודת בדיקת טיפול מהירה. בקצרה, למערכות תרבות המבוססת מוצרי טסיות דם מאוחסנים על תועמלן ב 22 מעלות צלזיוס במשך 12-24 שעות כדי לאפשר לחיידקים להתרבות במוצר, עליו מדגם 4-8 מיליליטר יוסר ממוצר טסיות הדם ומחוסן לתוך בקבוק המכיל תקשורת תזונתית. הבקבוק מושם לתוך מכשיר העוקב אחר הבקבוק להתפתחות חיידקים. אם המכשיר מזהה התפתחות חיידקים בבקבוק זה מסומן ויחידת טסיות הדם המתאימה נמחקת. בעוד תהליך זה הוא מוצלח למדי באיתור Gro המהיראורגניזמים אגף, רבים של המינים גדלו איטיים לא גדלים למספיק כייל גבוה כדי להתגלות, ובכך ליצור את הפוטנציאל ליחידות שווא שלילי להשתחרר לעירוי 7,12,14,16,22. בניגוד למערכות גילוי תרבות המבוססת, נקודת בדיקת טיפול מהירה מבוצעת בדרך כלל מאוחר יותר בתקופת אחסון טסיות דם כאשר עומס החיידקים גדל באופן משמעותי. Titers גבוה יותר נדרש מאז נקודת בדיקות טיפול היא פחות רגישה ממערכות התרבות מבוססת, ורק באופן מהימן לזהות חיידקים ברגע שהם מגיעים לכייל ≥1 x 10 3 CFU / מיליליטר 17. עם זאת בדיקות כאלה יכולים לספק תוצאות תוך שעה 1 של דגימה. השתנות בביצוע בדיקות אלה הובילו לשחרורו של מוצר שלילי כוזב, שגרמו לתגובה ספיגה קטלנית בנמען 9. דרך חלופית כדי להילחם בבעיה של זיהום חיידקים של מוצרי טסיות דם היא באמצעות השימוש השגרתי של proc הפחתת הפתוגןESS שיכול להשבית חיידקים מזהמים במקום לנסות לזהות אותם. באמצעות ריבופלאבין כהפוטוסנסיטייזר, בשילוב עם אור UV, הוכח להפחית את ההדבקה של מגוון רחב של מזהמים נישאים דם פתוגניים, כולל חיידקים 3,4,8,10,19-21 .the שימוש של ריבופלאבין וUV אור להפחתת הפתוגן אינו רעיל ואינו mutagenic, ורכיבים שטופל אור ריבופלבין וUV הוכחו כבטוח למקבלי עירוי, כמו גם לאלה טיפול במוצרי דם 18. בקצרה, מולקולות ריבופלאבין יכולות לקשר עם חומצות הגרעין (DNA ו- RNA) של חיידקים, טפילים, וירוסים וכל תא גרעיני (למשל תאי דם לבנים). חשיפה לאור UV מפעילה ריבופלאבין, גרימת שינוי כימי לקבוצות פונקציונליות של חומצות גרעין (בעיקר בסיסי גואנין), ובכך למנוע שכפול ו / או שעתוק של חומצות גרעין ועוזב את האורגניזם מומת 13. תאי Anucleated כמו צלחתמאפשר לי ותאי דם אדומים אינם מושפעים מכימית ריבופלאבין בשל חוסר חומצות גרעין. עבודה קודמת עם טכנולוגיית אור ריבופלבין וUV מוערכת קבוצה נבחרת של חיידקים באמצעות עיצוב ניסיוני שנועד לחקות מוצר טסיות דם מזוהם עם רלוונטי קליני עומס חיידקים (&lt;20 CFU / מוצר) 8. מטרת המחקר הייתה להעריך את תהליך אור ריבופלבין וUV נגד זיהום חיידקים גבוה כייל (&gt; 1.0 x 10 5 CFU / ml) במוצרים של טסיות דם שטופלו בפלזמה כדי למדוד את יכולת הפחתת חיידקים הכוללת של המערכת. בהתבסס על נתונים שנאספו ממחקרי hemovigilance 1, פנל של אורגניזמים חיוביים שליליים וגרמו גרם נפוץ המתרחשים נבחר להערכה במחקר זה וכלל את המינים הבאים: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, סטרפטוקוקוס mitis, pyogenes סטרפטוקוקוס, marcescens Serratia, Yersinia enterocolitica ,neotomae Brucella, cereus Bacillus (טופס וגטטיבי), Esherichia coli, Pseudomonas aeruginosa וKlebsiella pneumoniae. כל היצורים, למעט ב cereus, התקבל מATCC ועדיפות הונחה על קבלת זני חיידקים שזוהו כמבודד ממרכיבי דם. ב cereus נבדק במחקר זה הוא זן קליני המבודדים פנימי ממוצר טסיות דם מזוהם.

<table><tbody><tr><td>Mirasol Illuminator</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mirasol תיק טיפול/אחסון</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>מנתח המטולוגיה</td><td>בקמן-קולטר</td><td>Ac&bull; T diff&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מנתח גזי דם</td><td>סימנס</td><td>RapidLab 1265&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר עגינה סטרילי</td><td>Terumo BCT</td><td>TSCD</td><td></td></tr><tr><td>חממת טסיות</td><td>דם הלמר</td><td>PC2200</td><td></td></tr><tr><td>חממה אורביטלית</td><td>שייקר Lab-Line</td><td>4628</td><td></td></tr><tr><td>חממה יבשה</td><td>פישר</td><td>איזו-טמפ'</td><td></td></tr><tr><td>Class II A/B3 ארון בטיחות ביולוגית</td><td>תרמו-פורמה</td><td>1286</td><td></td></tr><tr><td>אוטם צינורות</td><td>סברה</td><td>Smart Sealer II</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה שולחנית</td><td>IEC</td><td>Centra GP8R</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>30 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>309650</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל צינור דילול</td><td>VWR</td><td>211-0058</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינור חרוטי</td><td>קורנינג</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופיפטה</td><td>גילסון</td><td>P-200</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופיפטה</td><td>Rainin</td><td>R-200</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה חוזרת</td><td>Eppendorf</td><td>4780</td><td></td></tr><tr><td>1-200 ומיקרו; l טיפ פילטר</td><td>Costar</td><td>4810</td><td></td></tr><tr><td>25 מ"ל פיפטה סרולוגית חד פעמית Costar</td><td></td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל חד פעמי פיפטה סרולוגית</td><td>Costar</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>35 מ"ל 500 ומיקרו; M ריבופלבין</td><td>Terumo BCT</td><td>35 מ"ל 500 ומיקרו; M&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ברוצלה אגר עם 5% דם סוס</td><td>BBL</td><td>221547</td><td></td></tr><tr><td>עירוי לב מוח</td><td>Teknova</td><td>B9993</td><td></td></tr><tr><td>מי פפטון</td><td>BD</td><td>257087</td><td></td></tr><tr><td>מרק סויה טריפטיקז</td><td>BD</td><td>299113</td><td></td></tr><tr><td>טריפטיקז סויה אגר</td><td>רמל</td><td>R01917</td><td></td></tr><tr><td>סרום סוס מומת בחום</td><td>Gibco</td><td>26050</td><td></td></tr></tbody></table>

טיפול במוצרי טסיות דם עם ריבופלבין ואור uv: יעילות גבוהה נגד כייל קטריאלי זיהום

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

זיהום של יחידות טסיות דם על ידי חיידקים כבר הודה עוד סיכון עירוי משמעותי בשל תנאי האחסון לאחר התרומה שלהם. מוצרים מאוחסנים באופן שיגרתי על 22 מעלות צלזיוס בייקר התססה, מצב שיכול לקדם את התפתחות חיידקים. למרות שהמספר הכולל של חיידקים האמינו להיות הציג למוצר טסיות דם הוא נמוך ביותר, חיידקים אלה יכולים להתרבות לכייל גבוה מאוד לפני העירוי, שעלול לגרום בתופעות לוואי חמורות. מטרת המחקר הייתה להעריך תהליך הפחתת הפתוגן ריבופלאבין מבוסס נגד פנל של חיידקים שזוהו כמזהמים נפוצים של מוצרי טסיות דם. לוח זה כולל אורגניזמים הבאים: ס epidermidis, S. aureus, mitis ס, pyogenes ס, marcescens ס, י &#39;enterocolitica, ב neotomae, cereus ב&#39;, E. coli, פ aeruginosa וק pneumoniae. כל יחידת טסיות דם הייתה מחוסנת עם עומס חיידקים גבוה ודגימות הוסרו בoth לפני ואחרי הטיפול. מושבה להרכיב assay, באמצעות תכנית דילול נקודת סיום, שימשה כדי לקבוע titers חיידקי הטיפול מראש ולאחר טיפול. הפחתת יומן הייתה מחושבת על ידי הפחתת כייל לאחר הטיפול מכייל הטיפול מראש. ירידות היומן הבאות נצפו: ס יומן epidermidis 4.7 (99.998%), יומן S. aureus 4.8 (99.998%), ס &#39;mitis 3.7 יומן (99.98%), יומן ס pyogenes 2.6 (99.7%), יומן ס marcescens 4.0 (99.99%), י&#39; יומן enterocolitica 3.3 (99.95%), ב &#39;neotomae 5.4 יומן (99.9996%), ב&#39; cereus 2.6 יומן (99.7%), יומן E. coli ≥5.4 (99.9996%), יומן 4.7 פ aeruginosa (99.998%) ו- K . יומן pneumoniae 2.8 (99.8%). התוצאות ממחקר זה מציעות התהליך יכול לעזור להוריד את הסיכון לאירועי עירוי לוואי חמורים הקשורות לזיהום חיידקים.

ההפחתה של עשרה מיני חיידקים שונים הוערכה באמצעות תהליך PRT מבוסס אור ריבופלבין וUV. סוכנים אלה מייצגים חלק מהמזהמים הנפוצים יותר של מוצרי טסיות דם וכוללים חמש גרם חיובי ושישה אורגניזמים שליליים גרם. לפחות שישה מוצרי טסיות דם הוערכו לאורגניזם וכל מוצר היה מחוסן עם מספיק חיידקים להניב&gt; 1.0 10 5 CFU / כייל סופי מיליליטר x של חיידקים במוצר של טסיות הדם. לפני טיפול מדגם הוסר כדי לקבוע את כייל הטיפול מראש, לאחר שטופל במוצר של טסיות דם מייד עם ריבופלבין ותהליך UV. בעקבות טיפול של מוצרי טסיות דם הפחתת היומן הבא נצפו: ס יומן epidermidis 4.7 (99.998%), יומן S. aureus 4.8 (99.998%), ס &#39;mitis 3.7 יומן (99.98%), יומן ס pyogenes 2.6 (99.7%), יומן ס marcescens 4.0 (99.99%), י&#39; יומן enterocolitica 3.3 (99.95%), ב &#39;יומן neotomae 5.4 (99.9996%), יומן ב cereus 2.6 (99.7%), יומן E. coli ≥ 5.4 (99.9996%), P. יומן 4.7 aeruginosa (99.998%) וק &#39;יומן pneumoniae 2.8 (99.8%) (איור 2). כל היחידות פגשו את מפרט המערכת כאמור לעיל לריבופלבין ותהליך UV. בדיקות הפחתה נוספות בוצעו עם ס &#39; pyogenes באמצעות טסיות נגזרות מעיל באפי. לא נצפה הבדל משמעותי בהפחתה של ס pyogenes בטסיות נגזרות מעיל באפי לעומת טסיות apheresis (מידע לא מוצג). <img alt="טבלת 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820table1.jpg" /> טבלה 1: תנאי גידול למיני חיידקים הוערכו באמצעות ריבופלבין ואור UV. פנל של שני חיידקים החיוביים גרם שלילי וגרמתי שהוכחו לזהם מוצרי טסיות דם, שנבחרו למחקר זה. תנאי הגידול (סוג טמפרטורה ותקשורת) המשמשים להפצה וTiter אורגניזמים מוצגים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig1.jpg" /> איור 1: תהליך הפחתת הפתוגן אור ריבופלבין וUV. ריבופלבין פורקה ב מלוח 0.9% בריכוז נומינלי של 500 מיקרומטר. הפתרון היה סטרילי קשר ומנוקז לכל מוצר טסיות דם. חיידקים נוספו הסביבה נקיה מחיידקים לכל יחידת טסיות דם ולאחר מכן טופלו ב6.2 / מיליליטר J אנרגיית UV (כ 6-10 דקות). בזה במבחנה ללמוד את יחידת טסיות הדם לאחר הטיפול תדגם כדי לקבוע את כייל החיידקים הסופי. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig2.jpg" /> איור 2: הפחתה של מיני חיידקים שונים כאשר טופל בריבופלבין והאור UV ריבופלבין ואור UV שימש להקטנת עומסי חיידקים מזהמים חיידקים נפוצים של מוצרי טסיות דם.. יומן 10 הפחתת ההבדלבין כייל טיפול מראש הממוצע וכייל לאחר הטיפול הממוצע. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52820/52820fig2highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

תנאי האחסון של מוצרי טסיות יוצרים סביבה אידיאלית למזהמים חיידקיים להתרבות לרמות מסוכנות. מטרת מחקר זה הייתה להשתמש בבדיקה ליצירת מושבה כדי להעריך תהליך הפחתת פתוגנים מבוסס ריבופלבין כנגד זיהום חיידקי טיטר גבוה במוצרי טסיות דם אנושיים.

טיפול במוצרי טסיות דם עם ריבופלבין ואור UV: יעילות גבוהה נגד כייל קטריאלי זיהום

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להעריך את ההפחתה של מזהמים בקטריאליים נפוצים במוצרי טסיות באמצעות תהליך להפחתת פתוגנים המבוסס על ריבופלבין ו-UV. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת מלאי של בקטריות בריכוז גבוה. השלב השני הוא השגת מוצר טסיות אנושי והערכת איכות התאים ביחידה.בשלב הבא, יחידת הטסיות מקבלת מנה של ריבופלאבין ומוחדרת בריכוז ידוע של חיידקים. השלב האחרון הוא טיפול של היחידה באור UV. לבסוף, ההפחתה הבקטריאלית נמדדת על ידי השוואה של דגימות לפני הטיפול ואחריו לבדיקת חיידקים חיים, כפי שנמדד באמצעות בדיקת plated dilution endpoint.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון סריקה בקטריאלית, הוא שריבופלאבין ואור UV יכולים להשבית פתוגנים אחרים כגון H-I-V-H-C-V, מלריה ו-Babesia. ההשלכות של טכנולוגיה זו חורגות מפתוגנים המועברים בדם, כיוון שהיא מסוגלת להשבית גם תאי דם לבנים ותוצרי דם נתרומים. אלו נקשרו לאירועים חריגים בעקבות עירוי, כגון מחלת השתב כנגד מאכסן הקשורה לעירוי.העליתי לראשונה את הרעיון להשתמש בשיטה זו כדי לנטרל פתוגנים בדם בעקבות מחקרים שערכתי על אינטראקציה בין תרכובות, תרכובות פוטוכימיות, לחומצות גרעיניות. הטכניקה מנצלת את העובדה שפתוגנים, בניגוד לתאי דם אדומים, טסיות וחלבוני פלזמה, מכילים חומצות גרעיניות גנומיות החיוניות לשכפול ולבעברת המחלה. לפיכך, על ידי התמקדות בכימיה של חומצות גרעיניות בתוך סביבת תוצרי דם קיימים, אנו יכולים לנטרל את הפתוגנים באופן סלקטיבי יותר תוך שמירה על האיכות של מרכיבי תאי הדם האדומים, הטסיות וחלבוני הפלזמה. הדגמת הפרוצדורה.היום ילוו אותנו Nick HOA, מדען מעבדה, ו-Denise Gilmore, טכנאית מעבדה. ראשית, הכינו בקבוק סטרילי של 250 milliliter המכיל 100 milliliters של מצע גידול ספציפי עבור החיידק הנחקר. באמצעות לולאת הזרקה סטרילית, הזריקו מושבה חיידקית אחת מלוח תרבית מבודדת לתוך המצע.בשלב הבא, העבירו את הבקבוק למדגרה עם מנער אורביטלי. הגדירו את מהירות הנעורה ל-140 RPM והדגירו את התרבית למשך יום עד יומיים. בדקו את התרבית מעת לעת כדי לוודא צמיחה חיידקית.לאחר הדגירה, העבירו את תרחיף החיידקים לשני מבחנות קוניות סטריליות של 15 מיליליטר. סובבו את המבחנות בצנטריפוגה ב-3000 ×g למשך 20 דקות ב-23 °C. לאחר מכן, שאבו את הנוזל העליון (supernatant) ותלו את משקע החיידקים ב-15 מיליליטר של מי פפטיד סטריליים.יש לנער את המבחנות בוורטקס כדי לסייע בסספנסיה, ולאחר מכן לאחד את תרביות החיידקים שהועברו לסספנסיה כדי להדק את תרבית המקור. מלאו מבחנות דילול של חמישה מיליליטר עם 1.8 milliliters של מי-פפטיד בכל אחת. העבירו 200 microliters של דגימה לא מדוללת למבחנה הראשונה, נער את המבחנה בוורטקס, ולאחר מכן העבירו 200 microliters למבחנה הבאה.חזור על הפעולה עד להגעה לדילול המתאים. העבר 100 µL מכל דילול לצלחת אגר מתאימה. בעזרת פוזור תאים סטרילי, פזר את הדגימה באופן שווה על פני כל שטח הצלחת. עבור צלחת ביקורת שלילית, פזר את הדגימה על פני ה-AER.העבר 500 microliters של מי הפפטיד לשתי צלחות אגר. בעזרת פורס תאים סטרילי, פזר את הדגימה באופן שווה על פני האגר, הפוך את כל הצלחות והדגר אותן בטמפרטורה המתאימה למשך יום עד יומיים. אם נצפה גדילה באחת מצלחות הביקורת השלילית, מי הפפטיד מזוהמים והטיטר אינו תקף.אם צלחות הביקורת השלילית הן שליליות, ספרו את המושבות בכל הצלחות שבהן יש בין 30 ל-300 מושבות. לאחר מכן, חשבו את הטיטר של כל דגימת בדיקה, ורשמו את התוצאות כדי לראות את מספר היחידות למיליליטר. קררו את תרביות החיידקים למשך עד שבועיים בטמפרטורה של 4 °C.לצורך דיוק, יש לבצע טיטרציה חוזרת של התרבית לפני השימוש. השג מוצר טסיות דם אנושי סטנדרטי מאפרזיס של 90 עד 360 milliliters בריכוז של 0.80 עד 3.8 מיליון טסיות ל-microliter. השאר את השקית למנוחה למשך שעתיים לפחות באינקובטור לטסיות בטמפרטורה של 22 °C, ולאחר מכן ערבב בעדינות במהירות של 60 RPM עד למועד השימוש.הוצא דגימה של 2 mL ממוצר הפלטलेट्स והשתמש במנתח גזי דם בטמפרטורה של 22 °C כדי לוודא שה-pH גבוה מ-6.6. באמצעות אותה דגימה, מדוד את ריכוז הפלטלטס באמצעות מנתח המטולוגי כדי לוודא שהוא נמצא בטווח הרצוי. לאחר מכן, בצע בדיקה חזותית של שקית הפלטלטס על ידי החזקתה תחת מקור אור לבן ישיר.לחצו קצרה על השקית והבחינו בתבנית הסיבוב של הדגימה. אם נשמרת הומוגניות עכורה לפני ואחרי לחיצה על השקית, אין להשתמש בטסיות עם התקן חיבור לצנתר (tubing docking device). העבירו את הטסיות לשקית אחסון והקרנה של riboflavin ואור UV.הסיר את שקית הפלטלטית הריקה באמצעות סוגר צינורות (tubing sealer) והשלך אותה כפסולת ביולוגית מסוכנת. לאחר מכן, הסר את עטיפת ההגנה מהאור של תמיסת המלאי הסטרילית של riboflavin בריכוז 500 micromolar. חבר את שקיק ה-riboflavin לקו הכניסה של שק הטיפול והאחסון, ורוקן את התוכן לתוך יחידת הפלטלטית.לאחר מכן, תלה את סט שקיות האיסוף והטיפול מהשקית של הריבופלאבין. לחץ בעדינות כדי להוציא את האוויר שנותר משקית הטיפול אל תוך שקית הריבופלאבין. שטוף שאריות ריבופלאבין אל תוך שקית הפלטלטים באמצעות כמות קטנה של מוצר פלטלטים.אפשרו לתמיסת הריבופלאבין והטסיות לנזול חזרה אל שק הטיפול. לאחר מכן, סגרו את קו הכניסה באמצעות תסמיך (clamp). הסירו את שק הריבופלאבין הריק בעזרת אוטם הצינורות (tubing sealer) והשליכו את השק הריק באופן המתאים. סטרילי.חברו קו צינור באורך six inch עם מחבר מזרק נקבי לקו הכניסה של שק התאורה והאחסון. חברו גוף מזרק של 10 milliliter לקו הצינור. לאחר מכן, הוסיפו five milliliters של תרחיף גבעולים חיידקיים לתוך גוף המזרק.לאחר מכן, פתח את תסביב קו הכניסה ואפשר לחיידקים להתנקז לתוך תוצר הטסיות. שטוף את גוף המזרק על ידי אישור זרימה חוזרת של מעט מתוצר הטסיות. לאחר השטיפה, הסר את גוף המזרק.חברו מזרק של 30 milliliter ושטפו את פתח הכניסה לפחות פעמיים לאחר שהמוצר עורבב היטב. השתמשו במזרק נקי של five milliliter ושאבו דגימת טיפול מקדים של two milliliter. השתמשו במזרק חדש כדי להוציא כל אוויר שנכנס לשקית.לאחר מכן, הוצא את קו הכניסה משקית הטיפול ושקול את תמיסת הטסיות. התחל את הטיפול בטסיות על ידי הזנת מזהה המפעיל, ולאחר מכן הצמד את השקית לפלטת המאיר. לבסוף, הזן את מזהה הדגימה באמצעות קורא ברקודים.הזינו את סוג המוצר ואת משקלו לתוך התוכנה. לאחר מכן, סגרו את תפס הקוורץ כדי לספק באופן אוטומטי 6.24 joules per milliliter של אנרגיית ultraviolet. טיפול טיפוסי נמשך חמש עד 10 דקות.בינתיים, בצעו טיטרציה לדגימה שלפני הטיפול לאחר טיפול ב-UV, בצעו טיטרציה לדגימה שאחרי הטיפול כדי לבחון את הישרדות החיידקים, ולאחר מכן בצעו טיטרציה לתרבית החיידקים מהמלאי כביקורת חיובית. טיטר המלאי של התרבית צריך להיות בטווח של יחידת לוג אחת של CFU למילליליטר מהטיטר הרשום שלו. ההפחתה של 11 מיני חיידקים שונים הוערכה באמצעות ריבופלבין ותהליך טכנולוגי להפחתת פתוגנים המבוסס על אור UV.לפחות שישה מוצרי טסיות הוערכו עבור כל אורגניזם וכל אחד מהם הוחדר. עם כמות מספקת של תרחיש חיידקים, כאשר התיתר הסופי היה גבוה מ-10,000 CFU למילליטר, נלקחו דגימות לפני הטיפול, וכן מיד לאחר הטיפול בריבופלאבין ו-UV בהשוואה לתמיסות שלפני הטיפול. כל העומסים החיידקיים הופחתו בלפחות 2.6 יחידות לוג (פי 400 בקירוב) באמצעות טיפול בריבופלאבין ואור UV.בעקבות מחקרים אלו עם חיידקים בתרכיז גבוה, ניתן לבצע מחקרים נוספים תוך שימוש בתרכיזי spike רלוונטיים יותר מבחינה קלינית. אלו מייצגים למעשה את רמות החיידקים שעשויות להיות נוכחות במוצרים בזמן התרומה. המטרה של מחקרים אלו עם spiking בתרכיז נמוך היא להעריך את היכולת של השיטה למנוע צמיחה של חיידקים ולאפשר להם להישאר שליליים לתרבית במהלך תקופת האחסון, ובפרט בתקופות אחסון ממושכות בטמפרטורת החדר.בעקבות הצגת טכנולוגיה זו, היא אפשרה לחוקרים ולאנשי מקצוע רפואיים להעריך את היכולת להשבית קשת רחבה של פתוגנים ולהשתמש בטכנולוגיה זו למניעת התפשטות של מחלות המועברות בעירוי. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן למדוד את הפחתת הלוג (log reduction) של חיידקים במוצר טסיות מזוהם מאוד שטופל בריבופלאבין ובאור UV.

treatment-platelet-products-with-riboflavin-uv-light-effectiveness

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מאמר זה מתאר את התהליך שבו בית החולים של אוניברסיטת Örebro לייצר טסיות כפולות מנת אפי מעייל מתרכז הוכנו מתרומות דם שלמות וטופלו במערכת הדם ליירט לאיון הפתוגן.

הכנה ואיון פעולה של הפתוגן מוצרי Double מנת באפי Coat טסיות דם באמצעות מערכת הדם ליירט

מקור: Cheng, C., et al. השבתת פתוגנים באמצעות פוטוליזה באור נראה של ריבופלבין-5'-פוספט. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים שיטה להערכת ההשפעות הפוטוטוקסיות של פלבין מונונוקלאוטיד (FMN) על חיידקים פתוגניים. תרביות חיידקים חשופות לריכוזים הולכים וגדלים של FMN ומוארות באור נראה כדי ליצור מיני חמצן תגובתיים (ROS) הפוגעים ברכיבים תאיים. לאחר מכן מכמתים את החיידקים השורדים כדי להעריך את הירידה תלוית המינון בכדאיות.

נטרול חיידקים באמצעות פלבין מונונוקלאוטיד המופעל באור

מקור: Cheng, C., et al. השבתת פתוגנים באמצעות פוטוליזה באור נראה של ריבופלבין-5'-פוספט. J. Vis. Exp. (2022).בסרטון זה, תערובת תגובה חוצצת המכילה L-מתיונין, טטרזוליום כחול ניטרו (NBT) ופלבין מונונוקלאוטיד (FMN) מוקרנת באור סגול כדי לגרום לייצור מיני חמצן תגובתיים (ROS). זה מוביל להשבתת חיידקים ולהיווצרות פורמזאן הניתן לזיהוי ספקטרומטרי.

כימות של השבתה חיידקית הנגרמת על ידי אור באמצעות יצירת מיני חמצן תגובתיים

מקור: ז'או, ק. ואחרים. מודל Invitro לחקר השפעת טיפול פוטודינמי בתיווך חומצה 5-אמינולוולינית על ביופילם סטפילוקוקוס אוראוס . J. Vis. Exp. (2018)הסרטון מדגים פרוטוקול טיפול פוטודינמי להערכת השפעות אנטיבקטריאליות על ביופילמים חיידקיים גרם-חיוביים. ביופילמים מחולקים לארבע קבוצות: שתיים מקבלות חומר קדם-רגיש לאור, ושתיים מקבלות בופר. כולם מודגרים בחושך, ואחריהם חשיפה לאור אדום לקבוצה אחת שטופלה בקדימות וקבוצה אחת בלבד עם בופר. מיני חמצן תגובתיים נוצרים רק בקבוצה המקבלת גם קדם וגם אור, מה שמוביל למוות...

טיפול מופעל באור של ביופילמים חיידקיים באמצעות חומר קדם-רגיש לאור

סרטון זה מדגים את תהליך הפחתת הפתוגנים מבוססי ריבופלבין ואור UV כנגד זיהום חיידקי בעל טיטר גבוה במוצרי טסיות דם אנושיים. תהליך זה יכול לסייע בהפחתת הסיכון לאירועי עירוי שליליים חמורים הקשורים לזיהום חיידקי.

טיפול בריבופלבין ובאור UV במוצרי טסיות דם לחיסול חיידקים

זיהום שתל הקשורים הוא סיבוך קליני משמעותי. מחקר זה מתאר גישה באמצעות פלזמה עשירה בטסיות (PRP) כדי למנוע זיהומים הקשורים שתל, מציג את הפרוטוקול להכנת PRP עם ריכוז טסיות דם קבוע, ומדווח על נכסים שזוהו לאחרונה מיקרוביאלית של PRP ופרוטוקולים הקשורים לבחינת מאפיינים מיקרוביאלית...

PRP כגישה חדשה למניעת זיהום: הכנה ו<em&gt; במבחנה</em&gt; מאפיינים מיקרוביאלית של PRP

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך את התוצאה של יישום באור אדום הצמיחה של קנדידה אלביקנס biofilm. מכשיר האור הלא קוהרנטי אדום עם אורך הגל של 635 nm, צפיפות האנרגיה של 87.6 J·cm-2 הוחל ברחבי הצמיחה של קנדידה אלביקנס biofilms במשך 48 שעות.

פוטותרפיה יומי עם אור אדום כדי לווסת קנדידה אלביקנס Biofilm צמיחה

כאן אנו מציגים פרוטוקול להשבתת חיידקים פתוגניים עם מיני חמצן תגובתי המיוצרים במהלך פוטוליזה של פלווין מונונוקלאוטיד (FMN) תחת קרינת אור כחול וסגול בעוצמה נמוכה. פוטוליזה FMN הוכחה כשיטה פשוטה ובטוחה לתהליכים סניטריים.

השבתה של פתוגנים באמצעות פוטוליזה של אור נראה של ריבופלבין-5′-פוספט

היווצרות טסיות דם מעודדות נקשרה עם סיכון מוגבר לפקקת. מוצג כאן פרוטוקול מדויק לבידוד טסיות דם שטופות מדם אדם, שנועד לכמת את החשיפה של פוספטידיל-סרין ושחרור מיקרו-שלפוחית, שהם מאפיינים ייחודיים של טסיות מעודדות.

אפיון טסיות מעודדות קרישה על ידי מדידת חשיפה לפוספטידיל-סרין ושחרור מיקרו-שלפוחיות מטסיות אדם מטוהרות

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה וחסכונית להערכת היעילות של רגישים לאור פוטו-רגישים פוטנציאליים באינאקטיבציה פוטודינמית אנטיבקטריאלית (aPDI), תוך שימוש בפורמט צלחת של 96 בארות בשילוב עם מקור אור פאנל LED. גישה זו מאפשרת בדיקה בו-זמנית של תנאי ניסוי מרובים, כולל ריכוזים שונים, תרכובות וזני חיידקים.

הקרנה במבחנה מבוססת LED להערכת מולקולות הניתנות להפעלה פוטודינמית בהפעלה פוטודינמית של חיידקים

למדו שיטת הפחתת פתוגנים בטסיות דם באמצעות ריבופלבין ואור UV. הטכניקה מפחיתה זיהום חיידקי ביעילות תוך שמירה על איכות מרכיבי הדם ומונעת מחלות המועברות בעירוי.

טיפול במוצרי טסיות דם עם ריבופלבין ואור UV: יעילות גבוהה נגד כייל קטריאלי זיהום

גלה סרטונים נוספים