Name: מפעילה תגובתי דבקה In vivo על ידי המוח הקדמי דקירת פגיעה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: למדו כיצד ליצור פציעת דקירה במוח הקדמי של עכברים בוגרים כדי לחקור תגובה דבקית תגובתית. שיטה זו מאפשרת לבחון את תהליכי התא והמולקולות המניעים היווצרות צלקת דבקית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו מודים לקתרין קלארק על הסיוע הטכני. A.D.R.G. ממומן בחלקו על ידי 5K01MH097957-03

למבוגרים עכברים (ישנים 3-4 חודשים) גבריים על C57BL / 6 רקע מעורב שמשו בפרוטוקול זה. בעלי חיים הוחזקו בשעתי אור 12 / מחזור כהה, ואפשרו גישה חופשית למזון ומים. כל הפרוצדורות שבוצעו בפרוטוקול זה נערכו על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי ועדת דרקסל האוניברסיטה המוסדית הטיפול בבעלי חיים ושימוש. 1. הכנת אזור ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא שולחן כירורגית עם 70% אתנול, ואז לכסות את הספסל כירורגית כל עם רפידות סופגים ולארגן מכשירי ניתוח בסמוך לstereotaxic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את ציוד stereotaxic ללא זרוע מניפולטור. מסדרים את כרית החימום על stereotaxic ומוגדר 37 מעלות צלזיוס. למנוע התחממות יתר של בעלי החיים על ידי הצבת חתיכה קטנה של נייר מגבת או כרית כירורגית בין בעלי החיים וכרית החימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת המספריים autoclaved, לחתוך לחתיכות קטנות של gelfoam autoclaved לתוך צלחת פטרי המכילה סטרילי תמיסת מלח 0.9% סטרילי עד Ready לשימוש. הערה: לשמור על סביבת עבודה סטרילית ידי שימוש במכשירי autoclaved ואספקת ניתוח סטרילי. מחדש לעקר מכשירי ניתוח במהלך ההליך או בבעלי החיים בין על ידי טבילה למעקר חרוז במשך 10-15 שניות, בהתאם לצורך. לשמור על כפפות נקיות לאורך כל ההליך על ידי שפשוף ידיים עם 70% אתנול, במידת צורך, כדי לחטא. </li></ol> 2. prepping עכבר לכירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר עכבר מכלוב בבית ולשקול (ז). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר מקום לתא אינדוקציה isoflurane וחמצן מוגדר 2 ליטר / דקה ומאדה isoflurane עד 5 כדי לגרום למטוס של הרדמה כירורגית, כ 3-5 דקות. לפקח על נשימה וחוסר תנועה מואטת. בדוק שהעכבר מסומם באופן מלא באמצעות רפלקס קמצוץ הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר עכבר מסומם לחלוטין, למקם במסגרת stereotaxic, לאבטח את האף בחרטום, אשר מצורף עם צינורות לisoflurane. הכנס ברים אוזן לתוך תעלת אוזן ולהדק, הבטחת הראש היא יציבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את ראשך מאוזן לאוזן, ומבין העיניים למאחורי האוזניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את העור עם מגבונים לסירוגין של אלכוהול איזופרופיל ותמיסת יוד בטאדין, 3 פעמים כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל דמעות מלאכותיות לשתי העיניים כדי למנוע מהם מהתייבשות במהלך ההליך הכירורגי. </li></ol> 3. נוהל כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג עומק ההרדמה על ידי צובט את הבוהן או זנב. העכבר הוא במישור הניתוחי המתאים כאשר אין תגובה, והנשימה איטית ואפילו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך בעור parasagittal מרק מאחורי העיניים לכמעט בין האוזניים בתנועה אחת, חברה אחת באמצעות סכין אזמל מס &#39;11. הזז עור בצד וקליפ צד ימין עם hemostat. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גולגולת ברורה של קרום שמעליה באמצעות הצד הקהה של אזמל מס &#39;11 וכותנה הטתה applicators. לחלופין, למחוק את הגולגולת עם מוליך כותנה שקצהו טבול בשיעור של 0.9% תמיסת מלח. לאפשר לו להתייבש לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלנוing שליט קטן, לסמן את הגבול הקדמי של פתיחת הגולגולת בזנב 1 מ&quot;מ לתפר העטרה, והקצה השמאלי של פתיחת הגולגולת ליום 1 במ&quot;מ לרוחב תפר sagittal (איור 1), עם סמן קבע. לאחר מכן לסמן את הזכות וגבולות הזנב של פתיחת הגולגולת ב 4 מ&quot;מ מתפרי sagittal ו עטרה, בהתאמה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מקדח 0.5 מ&quot;מ, מתחיל לעשות craniotomy על ידי קידוח לאט הבא המתווה סמן הקבועה. הקפד שלא לפרוץ את הגולגולת לחלוטין. לחץ בעדינות על פיסת העצם הקודקודית עם מס &#39;5 מלקחיים המבודדים, אזורים של חולשה ייתן דרך הלחץ. כאשר העצם דליל חלש מספיק לאורך ההיקף, חתיכת העצם מוכנה להסרת. הערה: אם קושי חוויות חוקר הסרת העצם בחתיכה אחת, זה מצביע על כך שהעצם לא היה דליל מספיק במהלך קידוח. שקול קידוח הגולגולת נוספת בבעלי חיים לאחר facilitaהסרה קלה te של חתיכת העצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מצויד במחט G 23 מזרק 10 מיליליטר, למרוח כמות קטנה של תמיסת מלח 0.9% להשרות את העצם המבודד ואזור שנקדח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את זרוע מניפולטור לציוד stereotaxic. צרף להב סכין מנתחים מס &#39;11 חדש לבעל הבדיקה עם הצד החד של הלהב מול rostrally. הערה: למרות שהרקמות מקורי ואת הזנב לחוות את הקצוות החדים ובוטים של הלהב, בהתאמה, הנזק המכני הנגרם על ידי הפציעה החודרת דומה בכל רחבי היקף הנגע. אנו צופים אין הבדלים משמעותיים במאפיינים עיקריים של דבק תגובה כוללים upregulation ביטוי GFAP או הפצה, בין חלקים מקורי ואת הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמירת מהדרך זרוע מניפולטור, להרים בזהירות את העצם המבודד באמצעות 5/45 מלקחיים זווית. הכנס את קצה המלקחיים לצד של העצם והרמה המבודדים, שימוש במינוף למשוך את פיסת העצם שנשארה באחד פולתנועת l. הערה: היזהר שלא לדקור את המוח או להפריע הדורה מתחת לגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח חתיכה קטנה של קצף ג&#39;ל נספג הספוג ומניח על המוח החשוף כדי למנוע ממנו להתייבש ולספוג את כל דם שעלולה להיות נוכח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שקצף ג&#39;ל הוא במקום, הנדנדה זרוע מניפולטור למקום ולהב להסתגל למרכז craniotomy מעל קצף ג&#39;ל. הסר את קצף ג&#39;ל ולהוריד את הלהב עד הקצה נוגע הדורה ללא ניקוב הדורה. מארק גב / קואורדינטות הגחון תוך שימוש בסולם ורניה על הזרוע האנכית של stereotaxic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות זרוע מניפולטור, לאט לאט להוריד את הלהב 3 מ&quot;מ בדיוק לתוך המוח. זו מושגת על ידי שימוש בסימונים בקנה מידה ורניה על זרוע מניפולטור. לאפשר להב להישאר במקום במשך 5-10 שניות. הזז את זרוע stereotaxic עם קובץ מצורף מקורי להב הזנב שלוש פעמים מאפשרות את הלהב כדי להגיע לגבולות מקורי ואת הזנב של פתיחת הגולגולת, לפני שעברתי לopposiסוף te. הערה: הדורה לא יוסר לפני החדרת הלהב. בניגוד לדורת החולדה, שהוא ~ 80 מיקרומטר בעובי 7, הדורה העכבר היא משמעותי יותר רזה (רק כמה שכבות תאים עבים) ולא לייצר התנגדות ניכרת ללהב סכין המנתחים בכניסה. השתמש בלהב סכין מנתחים חדש עבור כל עכבר כדי להבטיח שכל חיה מקבלת פגיעה עקבית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להעלות את זרוע stereotaxic, הסרת הלהב מהמוח. לאחר ההסרה של הלהב, מקום מייד חתיכת gelfoam אחרת על פני השטח של המוח כדי לספוג את כל דם או נוזלים עודפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בינתיים, להסיר את זרוע stereotaxic ולהשליך את להב סכין המנתחים מס &#39;11. ברגע שהדימום נפסק, להסיר את gelfoam. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגור את הפצע על ידי תפירת העור עם תפר שאינו נספג, כגון ethilon או prolene. תפרים יש להסיר 9-10 ימים לאחר ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את העכבר לכלוב בבית שלה, ולאפשר העכבר כדי להתאושש לאט על חימוםכרית גרם ולפקח על כל סימני מצוקה. התאוששות מהרדמה מושרה isofluorane מתרחשת בדרך כלל בתוך 2-5 דקות לאחר ההסרה מisofluorane. אל תשאירו את בעלי החיים ללא השגחה עד שהוא חזר recumbancy sternal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל 0.5-1 מיליליטר של תת עורי תמיסה הרטמן כדי להבטיח לחות. </li></ol> טיפול 4. לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן הדוק לפקח בעלי חיים שלאחר ניתוח עד להחלמה מהרדמה לפני ההחזרה למושבה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפחית את הכאב ואי נוחות לאחר ניתוח, לנהל 0.05-0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות על ידי הזרקת IP ביצוע ההליך באופן מיידי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תצפיות על בעלי חיים במשך 2-3 ימים לאחר ניתוח לסימני מצוקה קשים כגון תנועות מוגבלות, חוסר הטיפוח, או ירידה במשקל. להרדים בעלי חיים מפגינים כל סימני מצוקה אלה ולהסיר מהמחקר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבחון histopathology של רקמות פצועות, להרדים בעלי חיים על ידי סטןזלוף intracardial dard. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצרה, להרדים חיות עם מנת יתר של קטמין / xylazine, אז perfused intracardially עם 15-20 מיליליטר של 0.9% NaCl, או עד שהכבד מתנקה מדם, ואחריו 60 מיליליטר של paraformaldehyde 4% בסיומו של הניסוי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את מוח ולאחר תיקון-2-4 שעות בparaformaldehyde 4% לפני העברה לתמיסת סוכרוז 30%. מוח סעיף על cryostat ב40-60 מיקרומטר, ותהליך על ידי נהלים היסטולוגית או immunohistochemical סטנדרטיים, או כפי שמתואר בגרסיה 8,9. </li></ol>

<ol><li>Hamby, M. E., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+astrocytes+as+therapeutic+targets+for+CNS+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Reactive astrocytes as therapeutic targets for CNS disorders.</a> Neurotherapeutics. 7 (4), 494-506 (2010).</li>
<li>Bush, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+infiltration%2C+neuronal+degeneration%2C+and+neurite+outgrowth+after+ablation+of+scar-forming%2C+reactive+astrocytes+in+adult+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Leukocyte infiltration, neuronal degeneration, and neurite outgrowth after ablation of scar-forming, reactive astrocytes in adult transgenic mice.</a> Neuron. 23 (2), 297-308 (1999).</li>
<li>Faulkner, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+astrocytes+protect+tissue+and+preserve+function+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reactive astrocytes protect tissue and preserve function after spinal cord injury.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 24 (9), 2143-2155 (2004).</li>
<li>Okada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+ablation+of+Stat3+or+Socs3+discloses+a+dual+role+for+reactive+astrocytes+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Conditional ablation of Stat3 or Socs3 discloses a dual role for reactive astrocytes after spinal cord injury.</a> Nature Medicine. 12 (7), 829-834 (2006).</li>
<li>Voskuhl, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+Astrocytes+Form+Scar-Like+Perivascular+Barriers+to+Leukocytes+during+Adaptive+Immune+Inflammation+of+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reactive Astrocytes Form Scar-Like Perivascular Barriers to Leukocytes during Adaptive Immune Inflammation of the CNS.</a> Journal of Neuroscience. 29 (37), 11511-11522 (2009).</li>
<li>Burda, J. E., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+Gliosis+and+the+Multicellular+Response+to+CNS+Damage+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Reactive Gliosis and the Multicellular Response to CNS Damage and Disease.</a> Neuron. 81 (2), 229-248 (2014).</li>
<li>Maikos, J. T., Elias, R. A., Shreiber, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+dura+mater+from+the+rat+brain+and+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of dura mater from the rat brain and spinal cord.</a> Journal of neurotrauma. 25 (1), 38-51 (2008).</li>
<li>Garcia, A. D., Doan, N. B., Imura, T., Bush, T. G., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFAP-expressing+progenitors+are+the+principal+source+of+constitutive+neurogenesis+in+adult+mouse+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GFAP-expressing progenitors are the principal source of constitutive neurogenesis in adult mouse forebrain.</a> Nat Neurosci. 7 (11), 1233-1241 (2004).</li>
<li>Garcia, A. D., Petrova, R., Eng, L., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog+regulates+discrete+populations+of+astrocytes+in+the+adult+mouse+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog regulates discrete populations of astrocytes in the adult mouse forebrain.</a> J Neurosci. 30 (41), 13597-13608 (2010).</li>
<li>Amat, J. A., Ishiguro, H., Nakamura, K., Norton, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+diversity+and+kinetics+of+proliferating+microglia+and+astrocytes+following+cortical+stab+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Phenotypic diversity and kinetics of proliferating microglia and astrocytes following cortical stab wounds.</a> Glia. 16 (4), 368-382 (1996).</li>
<li>Hozumi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+prosaposin+ameliorates+spatial+learning+disturbance+and+reduces+cavity+formation+following+stab+wounds+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Administration of prosaposin ameliorates spatial learning disturbance and reduces cavity formation following stab wounds in rat brain.</a> Neuroscience letters. 267 (1), 73-76 (1999).</li>
<li>Ness, R., David, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptomeningeal+cells+modulate+the+neurite+growth+promoting+properties+of+astrocytes+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Leptomeningeal cells modulate the neurite growth promoting properties of astrocytes in vitro.</a> Glia. 19 (1), 47-57 (1997).</li>
<li>Byrnes, K. R., Fricke, S. T., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+differences+between+rats+and+mice+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+magnetic+resonance+imaging+%3A+JMRI%22%5BJournal%5D)">Neuropathological differences between rats and mice after spinal cord injury.</a> Journal of magnetic resonance imaging : JMRI. 32 (4), 836-846 (2010).</li>
<li>Steward, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+approaches+to+neurotrauma+research%3A+opportunities+and+potential+pitfalls+of+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">Genetic approaches to neurotrauma research: opportunities and potential pitfalls of murine models.</a> Experimental neurology. 157 (1), 19-42 (1999).</li>
<li>Davalos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+mediates+rapid+microglial+response+to+local+brain+injury+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo.</a> Nature neuroscience. 8 (6), 752-758 (2005).</li>
<li>Hanisch, U. -K., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+active+sensor+and+versatile+effector+cells+in+the+normal+and+pathologic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Microglia: active sensor and versatile effector cells in the normal and pathologic brain.</a> Nature neuroscience. 10 (11), 1387-1394 (2007).</li>
<li>Neumann, H., Kotter, M. R., Franklin, R. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Debris+clearance+by+microglia%3A+an+essential+link+between+degeneration+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Debris clearance by microglia: an essential link between degeneration and regeneration.</a> Brain. 132 (2), 288-295 (2008).</li>
<li>Nimmerjahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+Microglial+Cells+Are+Highly+Dynamic+Surveillants+of+Brain+Parenchyma+in+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resting Microglial Cells Are Highly Dynamic Surveillants of Brain Parenchyma in Vivo.</a> Science. 308 (5726), 1314-1318 (2005).</li>
<li>Horn, K. P., Busch, S. A., Hawthorne, A. L., van Rooijen, N., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Another+Barrier+to+Regeneration+in+the+CNS%3A+Activated+Macrophages+Induce+Extensive+Retraction+of+Dystrophic+Axons+through+Direct+Physical+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Another Barrier to Regeneration in the CNS: Activated Macrophages Induce Extensive Retraction of Dystrophic Axons through Direct Physical Interactions.</a> Journal of Neuroscience. 28 (38), 9330-9341 (2008).</li>
<li>Ip, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Cells+Contribute+to+Myelin+Degeneration+and+Axonopathic+Changes+in+Mice+Overexpressing+Proteolipid+Protein+in+Oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Immune Cells Contribute to Myelin Degeneration and Axonopathic Changes in Mice Overexpressing Proteolipid Protein in Oligodendrocytes.</a> Journal of Neuroscience. 26 (31), 8206-8216 (2006).</li>
<li>Perry, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+systemic+inflammation+to+chronic+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Contribution of systemic inflammation to chronic neurodegeneration.</a> Acta neuropathologica. 120 (3), 277-286 (2010).</li>
<li>McKeon, R. J., Jurynec, M. J., Buck, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chondroitin+sulfate+proteoglycans+neurocan+and+phosphacan+are+expressed+by+reactive+astrocytes+in+the+chronic+CNS+glial+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The chondroitin sulfate proteoglycans neurocan and phosphacan are expressed by reactive astrocytes in the chronic CNS glial scar.</a> Journal of Neuroscience. 19 (24), 10778-10788 (1999).</li>
<li>Silver, J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+beyond+the+glial+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Regeneration beyond the glial scar.</a> Nature reviews. Neuroscience. 5 (2), 146-156 (2004).</li>
<li>Zamanian, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+analysis+of+reactive+astrogliosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genomic analysis of reactive astrogliosis.</a> J Neurosci. 32 (18), 6391-6410 (2012).</li>
<li>Buffo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+progeny+of+reactive+gliosis%3A+A+source+of+multipotent+cells+in+the+injured+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Origin and progeny of reactive gliosis: A source of multipotent cells in the injured brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (9), 3581-3586 (2008).</li>
<li>Sirko, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+glia+in+the+injured+brain+acquire+stem+cell+properties+in+response+to+sonic+hedgehog.+%5Bcorrected%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Reactive glia in the injured brain acquire stem cell properties in response to sonic hedgehog. [corrected].</a> Cell stem cell. 12 (4), 426-439 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

זה קריטי, כי הגולגולת או דורה שבבסיסם לא ניזוקו במהלך הקידוח. השתמש לחץ קל בעת קידוח על מנת להבטיח את הגולגולת לא ניקב. בנוסף, יש להקפיד בעת הרמת חתיכת הגולגולת כדי להבטיח את הדורה לא המריא עם העצם. פציעת דקירת המוח הקדמי מתוארת כאן דגמי פציעה חודרת למערכת העצבים המרכזית. אם כי פחות מבחינה קלינית לתרגום מאשר דגמי TBI כגון FPI או CCI, מודל נגע דקירת המוח הקדמי משמש ככלי שימושי למגוון רחב של מחקרים שנועדו לבחון איר...

אתגר מרכזי לפיתוח טיפולים מוצלחים לטיפול במערכת העצבים המרכזית הפגועה הוא הבנה חלקית של האירועים הרב-תאיים המורכבים המופעלים על ידי הטראומה. אסטרוציטים ריאקטיביים זוכים להכרה הולכת וגוברת כמטרה מבטיחה לטיפולים חדשים1. למרות שהיסטורית נחשבים עוינים לתיקון עצבי, אסטרוציטים ריאקטיביים מוכרים כיום כמרכיבים קריטיים של תגובה נוירו-פרוטקטיבית מורכבת ורב-תאית הכוללת הנחתה של תהליכים דלקתיים והגבלת נזק משני וניוון עצבי2-6. למרות שהמאפיינים הנוירופתולוגיים של גליוזיס תגובתי הוגדרו זה מכבר היטב, המנגנונים התאיים והמולקולריים המווסתים גליוזיס תגובתי והמערך המגוון של השלכות במורד הזרם נותרו לא מובנים היטב. הבנת המנגנונים המניעים גליוזיס תגובתית, כמו גם האירועים התאיים והמולקולריים הבאים, היא צעד חשוב לקראת פיתוח אסטרטגיות שמטרתן לקדם את התכונות הנוירו-פרוטקטיביות של גליוזיס תגובתית, תוך החלשת ההשפעות המזיקות. 
כאן אנו מדגימים שיטה לגרימת אסטרוגליוזיס תגובתי חמור במוח הקדמי של עכברים בוגרים באמצעות פגיעת דקירה. בניגוד למודלים אחרים של פגיעה מוחית טראומטית (TBI), כגון פגיעה מבוקרת בקליפת המוח (CCI) או פגיעה בכלי הקשה נוזליים (FPI), הדורשים ציוד מיוחד כדי לייצר פציעה, הדקירה הקדמית דורשת רק מכשיר סטריאוטקסי כדי לייצב את הראש ולהב אזמל מס' 11. לפיכך, מודל נגע הדקירה במוח הקדמי נגיש באופן נרחב יותר למגוון רחב של מעבדות שאין להן גישה למכשירים המיוחדים הדרושים ליצירת פגיעה FPI או CCI. השיטה המתוארת כאן מאפשרת לחוקרים לעורר באופן אמין וחוזר תגובת גליוזיס חזקה כדי לחקור אירועים תאיים ומולקולריים עוקבים. לאחר ההתאוששות מהניתוח, בעלי חיים שקיבלו פגיעה בדקירה קדמית יכולים לשרוד תקופות ממושכות ללא צורך בטיפול מיוחד וניתן להחזירם למושבה למחקרים אקוטיים, בינוניים או כרוניים. למרות שפחות ניתן לתרגום קליני ממודלים של FPI או CCI של TBI, נגע מוחי קדמי המיוצר על ידי פגיעת דקירה משמש כמודל ניסיוני פשוט אך שימושי לחקירת מנגנונים ביולוגיים בסיסיים העומדים בבסיס גליוזיס תגובתי ואירועים נוירופתולוגיים אחרים בעקבות טראומה למערכת העצבים המרכזית.

<table><tbody><tr><td></td><td>Stereotax Harvard Apparatus</td><td>726049</td><td></td></tr><tr><td>מקדחה מיקרו במהירות גבוהה</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>724950</td><td></td></tr><tr><td>להב אזמל נירוסטה, #11</td><td>MedVet</td><td>JOR581S</td><td></td></tr><tr><td>5/45 מלקחיים זוויתיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>ספוג קצף ג'ל 12 ס"מ x 7 מ"מ</td><td>פישר</td><td>NC9841478</td><td></td></tr><tr><td>Rb נגד GFAP</td><td>דאקו</td><td>&nbsp; Z033429-2</td><td>דילול - 1:20,000 (שדה בהיר); 1:1,000 (פלואורסצנטיות)</td></tr><tr><td>Shp anti-BrdU</td><td>Abcam</td><td>ab1893</td><td>דילול - 1:20,000 (שדה בהיר); 1:500 (פלואורסצנטי)</td></tr><tr><td>ביוטיניליזציה עז אנטי-ארנב</td><td>מעבדות וקטור</td><td>BA-1000&nbsp;</td><td>דילול - 1:400 (שדה בהיר)</td></tr>דילול <tr><td>ארנב ביוטיניל נגד כבשים</td><td>מעבדות וקטור</td><td>BA-6000</td><td>- 1:400 (שדה בהיר)</td></tr><tr><td>Alexafluor 488 עיזים נגד ארנב</td><td>Life Technologies</td><td>A-11008</td><td>דילול - 1:400 (שדה בהיר)</td></tr><tr><td>Alexafluor 568 חמור נגד כבשים</td><td>Life Technologies</td><td>A-21099</td><td>דילול - 1:1,000 (פלואורסצנטי)</td></tr><tr><td>DAPI טכנולוגיות חיים של כתמי חומצות גרעין</td><td></td><td>D3571</td><td>דילול - 1:1,000 (פלואורסצנטי)</td></tr><tr><td>קרזיל סגול אצטט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>C5042-10G</td><td>דילול - 1% (שדה בהיר)</td></tr></tbody></table>

מפעילה תגובתי דבקה<em&gt; in vivo</em&gt; על ידי המוח הקדמי דקירת פגיעה

Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury

בעקבות פגיעה במערכת העצבים המרכזית, אסטרוציטים עוברים מגוון רחב של שינויים ביוכימיים, מורפולוגיים ומולקולריים המכונים ביחד אסטרוגליוזיס תגובתי. לאסטרוציטים תגובתיים יש השפעות דלקתיות ומגנות שמעכבות ומקדמות, בהתאמה, תיקון עצבי. המנגנונים העומדים בבסיס התכונות התפקודיות המגוונות של אסטרוגליוזיס תגובתי אינם מובנים היטב. השגת הבנה טובה יותר של מנגנונים אלה היא קריטית לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות לטיפול במערכת העצבים המרכזית הפגועה. כאן אנו מדגימים שיטה להפעלת אסטרוגליוזיס תגובתי במוח הקדמי של עכבר בוגר באמצעות נגע דקירה במוח הקדמי. מודל נגע זה הוא פשוט, אמין ודורש רק מכשיר סטריאוטקסי ולהב אזמל כדי לייצר את הפציעה. השימוש בנגעי דקירה כמודל פגיעה במוח הקדמי מבוסס היטב ומתאים למחקרים העוסקים במגוון רחב של תוצאות נוירופתולוגיות, כגון ניוון עצבי, דלקת עצבית ושיבושים במחסום הדם המוחי (BBB). לפיכך, מודל פגיעת הדקירה במוח הקדמי משמש ככלי רב עוצמה שניתן ליישם במגוון רחב של מחקרים על תגובת מערכת העצבים המרכזית לטראומה.

בגלל בעלי חיים שעברו הליך זה אינו דורשים תקופות הישרדות מיוחדות טיפול שלאחר ניתוח, קצרות או זמן ארוך טווח משולבים בקלות לתוך המחקר, בהתאם לצורך לחקור פתולוגיה אקוטית או כרונית בעקבות פציעה. תכונות עיקריות של דבק תגובתי, כגון גברת ביטוי של GFAP והיפרטרופיה של סומה, ניתן להבחין כבר ב2-3 ימים בעקבות פציעה. שלב השיא של התפשטות להאסטרוציטים תגובתי הוא בימים 3-5 בעקבות פציעה 10. תוצאות הנציג שמוצגים להלן הן מבעלי החיים שקיבלו נגע דקירת פצע 7 ימים קודם לכן. <p class="jove_...

מאמר זה מתאר פרוטוקול מפורט ליצירת פגיעת דקירה קדמית בעכברים בוגרים. פגיעת הדקירה גורמת לגליוזיס תגובתי חמור ולהיווצרות צלקת גליה שניתן לבחון לאחר מכן בשיטות אימונוהיסטוכימיה סטנדרטיות.

מפעילה תגובתי דבקה<em&gt; In vivo</em&gt; על ידי המוח הקדמי דקירת פגיעה

Following injury to the CNS, astrocytes undergo a broad range of biochemical, morphological, and molecular changes collectively referred to as reactive ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לעורר גליוזיס אסטרוציטרית תגובתית (reactive astro gliosis) במוח הקדמי של עכבר בוגר באמצעות יצירת נגע מכני, וזאת כדי לחקור את התהליכים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיס הגליוזיס התגובתית. דבר זה מושג על ידי ביצוע קרניאוטומי (craniotomy) והחדרה עוקבת של להב סקאלפל סטרילי לעומק ולאורך של שלושה עד ארבעה מילימטרים לתוך המוח הקדמי כדי ליצור את הנגע. בעלי החיים יכולים לשרוד לנקודות זמן חריפות או כרוניות, ורקמותיהם נגבהות בסיום הניסוי.ניתן לעבד את הרקמה הבאה לבדיקות היסטולוגיות, ביוכימיות או ביולוגיות מולקולריות כדי לחקור את התהליכים המולקולריים והתאיים המניעים גליוזיס תגובתית. התוצאות מראות כי הליך זה מעורר גליוזיס תגובתית חזקה, המבוססת על עלייה דרמטית בביטוי של GFAP ועל שגשוג של אסטרוציטים תגובתיים. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות אחרות, כגון פגיעת פרקוסיות של נוזלים או פגיעה קורטקלית מבוקרת, הוא שניתן להשרות ולחקור גליוזיס תגובתית בקלות ללא צורך בציוד נוסף.כדי להתחיל בפרוצדורה זו, חטא את שולחן הניתוח באמצעות 70% ethanol, לאחר מכן כסה את כל משטח הניתוח במגבות סופגות וסדר את מכשיר הניתוח על השולחן. לאחר מכן, הגדר את הציוד הסטריאוטקסי ללא זרוע המניפולטור. הנח את פד החימום על המסגרת הסטריאוטקסית והגדר אותו ל-37 degrees Celsius.מנעו התחממות יתר של בעל ה

triggering-reactive-gliosis-in-vivo-by-a-forebrain-stab-injury

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים את הליך פגיעת הדקירה בקליפת המוח בעכברים, הכולל חשיפה לגולגולת ויצירת נגעים במוח. הוא גורם לאסטרוגליוזיס תגובתי, תגובה נוירו-פרוטקטיבית של אסטרוציטים, לחקור טראומה במערכת העצבים המרכזית, דלקת ומנגנוני תיקון.

יצירת פציעת דקירה קורטיקלית במודל עכבר כדי לגרום לאסטרוגליוזיס תגובתי

הפרדיגמה פציעה באמצעות כבל עצב גחון תסיסנית הזחל לחקור התחדשות במערכת עצבים מרכזיות ותיקון מתואר. דקירה ואחרי סריקת הליזר מיקרוסקופיה confocal בדגימות זמן לשגות וקבועים, בשילוב עם ניתוח הכמותי עם תוכנה שפותחה בתכליתיות וגנטיקה, משמשת כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים של התחדשות ותיקון מערכת עצבים מרכזיים.

פרדיגמה פגיעה לחקור תיקון של מערכת עצבים מרכזי ב<em&gt; דרוזופילה</em

טראומה מוחית חריפה היא פגיעה חמורה שאין לה טיפול הולם עד כה. מיקרוסקופיה multiphoton מאפשרת לימוד אורכי התהליך של התפתחות טראומה המוחית חריפה וחיטוט אסטרטגיות טיפוליות במכרסמים. שני דגמים של טראומה מוחית חריפה למדה אצל בשני פוטונים הדמיה vivo של המוח הם הפגינו בפרוטוקול זה.

טראומה מוחית חריפה בעכברים אחריו שני פוטונים הדמיה אורכית

אסטרוציטים מסוג פרא פנוטיפי ותאי גזע עצביים שנאספו מעכברים שהונדסו עם אללים אונקוגניים מותנים ומותנים ועברו טרנספורמציה ויראלית יכולים לשמש למודל פתוגנזה של אסטרוציטומה במבחנה ובגוף החי על ידי הזרקה אורתוטופית של תאים שעברו טרנספורמציה למוחם של חברים סינגניים בעלי יכולת חיסונית.

דוגמנות אסטרוציטומה פתוגנזה במבחנה ו בVivo שימוש בקליפת מוח האסטרוציטים או בתאי גזע עצביים מעכברים מותנים, מהונדסים גנטי

ניתן להשתמש בהדמיה תוך-חיונית של שני פוטונים כדי לחקור אינטראקציות בין סוגי תאים שונים בחוט השדרה בסביבת הרקמה הטבעית שלהם בחיה כימרית של מח עצם עם פגיעת ריסוק טראומטית של חוט השדרה בעמוד הגב.

ההדמיה Intravital של axonal אינטראקציות עם Microglia והמקרופאגים בפגיעת Crush טור העכבר הגבי

פרוטוקול שיטתי זה מתאר מודל חדש לבעלי חיים של אפילפסיה פוסט-טראומטית לאחר פגיעה קלה במוח הטראומטי. החלק הראשון לפרטים צעדים לפגיעה מוחית טראומטית אינדוקציה באמצעות מודל שונה ירידה במשקל. החלק השני מספק הנחיות לגבי הגישה הכירורגית עבור מערכות מידע חד-ערוצית לרכישת נתונים אלקטרונצלוגרפיה.

גרימת אפילפסיה פוסט טראומטית במודל עכבר של פגיעה במוח החוזר ומפוזר טראומטי

הפרוטוקול מתאר פגיעה מוחית טראומטית קלה במודל עכבר. בפרט, פרוטוקול שלב אחר שלב לגרימת פגיעת ראש סגורה קלה בקו האמצע ואפיון מודל בעלי החיים מוסבר במלואו.

מודל ראש סגור מבוקר אלקטרומגנטי של פגיעה מוחית טראומטית קלה בעכברים

מחקר זה מדגים העברה של פגיעה מוחית טראומטית חוזרת ונשנית לעכברים והשתלה סימולטנית של חלון גולגולתי לצורך הדמיה תוך-חיונית עוקבת של EGFP המתבטא בנוירונים באמצעות מיקרוסקופ של שני פוטונים.

הדמיה תוך חיונית של ביטוי חלבון פלואורסצנטי בעכברים עם פגיעה מוחית טראומטית בגולגולת סגורה וחלון גולגולת באמצעות מיקרוסקופ דו-פוטוני

פרוטוקול זה מתאר מערכת אוויר מותאמת אישית בלחץ יתר שנועדה לגרום לפציעות במערכת העצבים המרכזית (CNS) במערכת סגורה בעכברים, כולל טראומות עיניים, מוח וחוט השדרה. מטרת פרוטוקול זה היא לספק מסגרת לחוקרים להתאים ולהרחיב בקלות את המערכת למחקרי הטראומה הייחודיים שלהם במערכת העצבים המרכזית.

מערכת לפגיעה מוקדית וסגורה במערכת העצבים המרכזית

מודלים פשוטים של פגיעה מוחית טראומטית (TBI) הקלו על פיתוח גישות טיפוליות. פרוטוקול זה מתאר את היצירה של קליפת עכבר פצוע דקירה באמצעות מחטים, המאפשרת ניתוח של דימום ודלקת. מודל עכבר TBI פצוע דקירה מציע את היתרון של ביצוע ללא צורך בציוד מיוחד.

מודל עכבר פצע דקירה לחקר דימום ודלקת בפגיעה מוחית טראומטית

כאן, אנו מספקים מתודולוגיה מפורטת לבידוד הרשתית מעין העכבר לניסויים ממושכים ex vivo . פרוטוקול זה מדגיש את הנגשת הגישה התובענית מבחינה טכנית לחוקרים המעוניינים לנצל את דרכי המחקר הניתנות על ידי שמירה על גליה ברשתית באתרה ברקמה חיה.

מודל ex vivo explant לחקר אינטראקציות גליה ברשתית העכבר

למדו כיצד ליצור פציעת דקירה במוח הקדמי של עכברים בוגרים כדי לחקור תגובה דבקית תגובתית. שיטה זו מאפשרת לבחון את תהליכי התא והמולקולות המניעים היווצרות צלקת דבקית.

מפעילה תגובתי דבקה

גלה סרטונים נוספים