Name: באתרו איתור של חיידקים בתוך רקמות מוטבעות-פרפין באמצעות DNA בדיקה שכותרת Digoxin מיקוד 16S rRNA (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 15 s
Description: למדו לאתר חיידקים ברקמות מוטבעות-פרפין באמצעות בדיקות DNA מסומנות ב-DIG המכוונות ל-rRNA 16S. שיטה זו מאפשרת זיהוי ויזואלי ברור של חיידקים בהקשר היסטולוגי לחקר מחלות דלקתיות וסרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענק (2013R1A1A3005669) מקרן המחקר הלאומית של קוריאה ומענק (HI13C0016) של בריאות הטכנולוגיה מו&quot;פ פרויקט, משרד הבריאות והרווחה הקוריאני.

1. בדיקה הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההגברה PCR של החללית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפ הבדיקה -specific gingivalis, להגביר קטע DNA 343-נ&quot;ב של פ rRNA 16S gingivalis על ידי PCR באמצעות הדנ&quot;א הגנומי של פ gingivalis ופריימרים הבאים: 5&#39;- TGC AAC TTG CCT TAC AGA GG-3 &#39;ו5&#39;- ACT CGT ATC GCC CGT TAT TC-3&#39; 10. בצע amplifications עם תנאי המחזור הבאים: 35 מחזורים ב 95 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות, 60 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות, ו -72 מעלות צלזיוס במשך 1 דקות 20 שניות אחרי ארכה 5 דקות ב 72 מעלות צלזיוס 10,11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגביר את הבדיקה eubacterial באמצעות 70-נ&quot;ב קטע DNA (5&#39;-CAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAG TCCCGCAACGAGCGCAACCC-3 &#39;) מסונתזים כoligonucleotide ופריימרים הבאים: 5&#39;-CAG GTR CTG CMT GGY-3&#39; ו5&#39;-AGG GTT GCG CTC 11 &#39;GTT-3. בצע amplifications עם תנאי המחזור הבאים: 40 מחזוריםבשעה 9 4 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות, 60 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות ו 72 מעלות צלזיוס במשך 1 דקות 20 שניות אחרי ארכה 5 דקות ב 72 מעלות צלזיוס 11,12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזרז את מוצרי ה- PCR (≥500 μl) על ידי הוספת 3 נתרן אצטט M (pH 5.2) ואתנול 100% (ב- 10: 1: 2 יחס) ודוגרים ב -20 ° C לשעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה את התערובת על 14,000 XG במשך 15 דקות, resuspend גלולה במאגר TE 100 של μl, ולמדוד את ריכוז ה- DNA על ידי צפיפות אופטית ב 260 ננומטר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DIG-תיוג באמצעות ערכת תיוג וזיהוי DIG DNA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערבב 3 מיקרוגרם של הבדיקה עם מים לנפח סופי של 15 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפגל את ה- DNA על 95 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ולצנן במהירות על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 μl של 10x תערובת hexanucleotide, 2 μl של תמהיל dNTP תיוג, וμl 1 של אנזים Klenow 15 μl של ה- DNA מפוגל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערבב ולדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות עד 48 שעות ולעצור תגובה על ידי חימום על 65 מעלות צלזיוס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הרגישות של הבדיקה שכותרת DIG באמצעות ערכת תיוג וזיהוי DIG DNA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ידני 1 טען μl של דילולים סדרתי של חללית הבקרה החיובית המסופקים בערכה וng 1 של החללית שכותרת DIG על קרום הניילון ויבש במשך 5 דקות על RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצרה להשרות את הקרום במאגר 2x SSC (0.3 M NaCl, 30 נתרן ציטרט מ&quot;מ, pH 7.0) ו דגירה הקרום על 80 מעלות צלזיוס במשך שעה 1 כדי לשתק את ה- DNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצרה להשרות את הקרום במאגר חומצת maleic (MAB, 0.1 מ &#39;חומצת maleic, 0.15 מ&#39; NaCl, pH 7.5) ו דגירה עם אנטי DIG phosphatase (AP) נוגדן -conjugated המדולל בסיסי (1: 5,000) ב 6 מיליליטר של תמיסת חסימה סיפק בערכה ב RT למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הממברנה עם MABT (MAB המכיל 1% Tween 20) ולהחיל 40 μl של פתרון NBT / BCIP מעורב עם חיץ 2 מיליליטר זיהוי (0.1 מ &#39;טריס HCl, 0.1 מ&#39; NaCl, 0.05 M MgCl 2, pH 9.5) על גבי קרום 1 דקות. אם את הרגישות של הבדיקה שכותרתו היאאינו מספק, חזור על שלבים מ1.1.3 ל1.3.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את ריכוז ה- DNA של החללית שכותרתו (OD260) ולהתאים את הריכוז עד 100 ng μl -1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את הספציפיות של הבדיקה שכותרת DIG <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפגל דגימות הדנ&quot;א הגנומי (25 ng 3 μl -1 לכל דגימה) ממיני חיידקים שונים, כוללים החיידק הממוקד על ידי הבדיקה הספציפית, על 95 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ולצנן במהירות על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ידני לטעון את ה- DNA מפוגל על ​​קרום הניילון ויבש במשך 20 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצרה להשרות את הקרום במאגר 2x SSC ודגירת הקרום על 80 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות כדי לשתק את ה- DNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חסום את הממברנה עם פתרון חסימה ב RT עבור שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את הבדיקה בng 1 μl -1 במאגר הכלאה, לפגל בדיקות מדוללים, ולהחיל על הממברנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הקרום ב 45 מעלות צלזיוס במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הממברנה שלושפעמים עם חיץ 2x SSC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצרה להשרות את הקרום בMAB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה עם הנוגדן אנטי DIG AP-מצומדות המדולל (1: 2,000) ב 6 מיליליטר של פתרון חסימה ב RT עבור שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הממברנה עם MABT ולהחיל 40 μl של פתרון NBT / BCIP מעורב עם חיץ זיהוי 2 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הבדיקה אינה משיגה את הספציפיות הצפויות, להגדיל את טמפרטורת ההכלאה עד הסגוליות הוא ציין. </li></ol></li></ol> 2. הכלאה באתר שים לב: כדי למנוע ייבוש של הדגימות וחומרים כימיים, לבצע את כל incubations בתא humidified המרופד במגבות נייר רטובות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דה-paraffinization והתייבשות של חלקי רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 4 מיקרומטר סעיפי רקמות עבים מלוקים מוטבעים פרפין. פורמלין, paraformaldehyde, ומקבעים מבוסס אבץ בקנה אחד עם פרוטוקול זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את כל חומרים כימיים במי DEPC שטופל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופיות חום בתנור יבש ב 60 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות ודגירת שקופיות ב RT למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופיות בקסילן 100% במשך 5 דקות שלוש פעמים; להשתמש קסילן הטרי בכל פעם. הערה: האם הליך השעווה-דה זה במנדף כימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופיות באתנול 100% במשך 5 דקות פעמיים, תוך שימוש באתנול טרי בכל פעם, ורעננותם דגימות ב -90% סדרתי, 80% ופתרונות אתנול 70% במשך 5 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופיות במי DEPC שטופל דקות 1 ולשטוף שקופיות בPBS (pH 7.4) DEPC שטופל במשך 6 דקות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Pretreatments של סעיפי רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופיות ב 0.1 N חומצה הידרוכלורית עבור 20 דקות ולשטוף במי מגלשות DEPC שטופל למשך 30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצייר מחסום הידרופובי סביב דגימות באמצעות עט שעווה. הערה: הגודל של המחסום הידרופובי תלוי בגודל של דגימות. לכן, הכרכים של חומרים כימיים המשמשים בשלבים הבאים משתנים בהתאם לגודלו של דגימות אבל צריכים למלא הי&quot;דמחסום drophobic (50 μl לדגימות קטנות וμl 400 לדגימות גדולות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את הדגימות עם 50-400 μl של proteinase K (1 עד 10 מיליליטר מיקרוגרם -1 בPBS DEPC שטופל) בתנור יבש על 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות ולשטוף בשקופיות PBS 1x DEPC שטופל דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים שקופיות בparaformaldehyde 4% ב- ​​PBS DEPC שטופל במשך 10 דקות, ולאחר מכן לשטוף בשקופיות PBS DEPC שטופל דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים שקופיות ב 0.1 M triethanolamine-HCl (pH 8.0) המכיל 0.5% אנהידריד אצטית עבור 20 דקות ולשטוף במי מגלשות DEPC שטופל למשך 30 שניות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכלאה עם בדיקה ושטיפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את השקופיות במאגר SSC 2x במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את הבדיקה בng 1 μl -1 במאגר הכלאה (4x SSC, 50% [כרך / כרך] פוראמיד, הפתרון של 1x Denhardt, 10% [כרך WT /] סולפט dextran, 0.1% [כרך WT /] נתרן גופרתי dodecyl, 0.4 מיליליטר מ&quot;ג -1 DNA זרע סלמון). עבור פקדים שליליים, לערבב את החללית שכותרתו עםסכום עודף של פי 10 מבדיקה שכותרתו שאינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפגל הבדיקות מדוללים ולהחיל 50-400 μl על סעיפי רקמות. במקום להחליק כיסוי בשקופית וחותם עם לק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופיות חום בPCR מכונה על 90 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ומגלשות דגירה בO תא humidified / N ב 45 ° C או בטמפרטורה אופטימלית נקבעו בצעד 1.4.11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקרר את השקופיות על 4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות, להסיר את המכסה מחליק, לטבול את השקופיות במאגר SSC סידורי כמו הדברים הבאים: 4x SSC במשך 10 דקות, (45 ° C) 2x SSC מראש התחמם במשך 20 דקות, 2x SSC במשך 10 דקות, ו0.2X SSC במשך 10 דקות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זיהוי עם נוגדן אנטי DIG AP-מצומדות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף שקופיות בMABT במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום עם 50-400 μl של חסימת פתרון עם 1% Tween 20 במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 50-400 μl של נוגדן אנטי DIG-AP מדולל חסימת פתרון (1: 1000) anld לדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך 90 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף שקופיות בMABT במשך 10 דקות. </li> &lt;li&gt; לטבול שקופיות במאגר זיהוי המכיל 1% Tween 20 במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק עם 50-400 μ של levamisole 1 מ&quot;מ (במאגר זיהוי המכיל 1% Tween 20) במשך 5 דקות כדי להשבית phosphatase אלקליין אנדוגני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפיץ 50-400 μl של הפתרון המעורבב מראש NBT / BCIP (בדילול במאגר זיהוי בשעה 1: 100) על כל דגימה ודגירת שקופיות בתא humidified ב RT עבור 2 עד 3 שעות עד האות פיתחה היא משביעת רצון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את שקופיות עם מים מיוננים להפסיק הדמיה ולהחיל 50-400 μl של 0.05% [כרך WT /] ירוק מתיל ככתם דלפק על 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את שקופיות עם מים מיוננים, ליבש באתנול 100%, ולטבול בקסילן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 80 μl של פתרון הרכבה על כל שקופית ולכסות עם מכסה מחליק. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Takarada, H., Cattoni, M., Sugimoto, A., Rose, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+human+gingiva.+II.+The+lower+part+of+the+pocket+epithelium+in+chronic+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of human gingiva. II. The lower part of the pocket epithelium in chronic periodontitis.</a> J. Periodontol. 45 (3), 155-169 (1974).</li>
<li>Allenspach-Petrzilka, G. E., Guggenheim, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+invasion+of+the+periodontium%3B+an+important+factor+in+the+pathogenesis+of+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Bacterial invasion of the periodontium; an important factor in the pathogenesis of periodontitis.</a> J. Clin. Periodontol. 10 (6), 609-617 (1983).</li>
<li>Saglie, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+presence+of+bacteria+in+the+oral+epithelium+in+periodontal+disease.+II.+Immunohistochemical+identification+of+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">The presence of bacteria in the oral epithelium in periodontal disease. II. Immunohistochemical identification of bacteria.</a> J. Periodontol. 57 (8), 492-500 (1986).</li>
<li>Christersson, L. A., Albini, B., Zambon, J. J., Wikesjö, U. M., Genco, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+localization+of+Actinobacillus+actinomycetemcomitans.+in+human+periodontitis.+I.+Light%2C+immunofluorescence+and+electron+microscopic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Tissue localization of Actinobacillus actinomycetemcomitans. in human periodontitis. I. Light, immunofluorescence and electron microscopic studies.</a> J. Periodontol. 58 (8), 529-539 (1987).</li>
<li>Saglie, F. R., Pertuiset, J., Rezende, M. T., Nestor, M., Marfany, A., Cheng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ.+correlative+immuno-identification+of+mononuclear+infiltrates+and+invasive+bacteria+in+diseased+gingiva%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">In situ. correlative immuno-identification of mononuclear infiltrates and invasive bacteria in diseased gingiva.</a> J. Periodontol. 59 (10), 688-696 (1988).</li>
<li>Rautemaa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+localization+of+Porphyromonas+gingivalis.+thiol+proteinase+in+periodontal+tissues+of+chronic+periodontitis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">Intracellular localization of Porphyromonas gingivalis. thiol proteinase in periodontal tissues of chronic periodontitis patients.</a> Oral Dis. 10 (5), 298-305 (2004).</li>
<li>Marttila, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+localization+of+Treponema+denticola.+chymotrypsin-like+proteinase+in+chronic+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Oral+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Intracellular localization of Treponema denticola. chymotrypsin-like proteinase in chronic periodontitis.</a> J. Oral Microbiol. 6, (2014).</li>
<li>Colombo, A. V., da Silva, C. M., Haffajee, A., Colombo, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+intracellular+oral+species+within+human+crevicular+epithelial+cells+from+subjects+with+chronic+periodontitis+by+fluorescence+in+situ.+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontal+Res%22%5BJournal%5D)">Identification of intracellular oral species within human crevicular epithelial cells from subjects with chronic periodontitis by fluorescence in situ. hybridization.</a> J. Periodontal Res. 42 (3), 236-243 (2007).</li>
<li>Abrams, K., Caton, J., Polson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histologic+comparisons+of+interproximal+gingival+tissues+related+to+the+presence+or+absence+of+bleeding%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Histologic comparisons of interproximal gingival tissues related to the presence or absence of bleeding.</a> J. Periodontol. 55 (11), 629-632 (1984).</li>
<li>Kim, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+Porphyromonas+gingivalis.+and+plasma+cell+dominance+in+gingival+tissues+with+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">Presence of Porphyromonas gingivalis. and plasma cell dominance in gingival tissues with periodontitis.</a> Oral Dis. 16 (4), 375-381 (2010).</li>
<li>Choi, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porphyromonas+gingivalis.+and+dextran+sodium+sulfate+induce+periodontitis+through+the+disruption+of+physical+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Porphyromonas gingivalis. and dextran sodium sulfate induce periodontitis through the disruption of physical barriers.</a> Eur. J. Inflammation. 10, 419-431 (2013).</li>
<li>Choi, Y. S., Kim, Y. C., Ji, S., Choi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+bacterial+invasion+and+differential+expression+of+tight+junction+proteins%2C+growth+factors%2C+and+growth+factor+receptors+in+periodontal+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Increased bacterial invasion and differential expression of tight junction proteins, growth factors, and growth factor receptors in periodontal lesions.</a> J. Periodontol. 85 (8), e313-e322 (2014).</li>
<li>Baker, G. C., Smith, J. J., Cowan, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+and+re-analysis+of+domain-specific+16S+primers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Review and re-analysis of domain-specific 16S primers.</a> J. Microbiol. Methods. 55 (3), 541-555 (2003).</li>
<li>Hajishengallis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Low-abundance+biofilm+species+orchestrates+inflammatory+periodontal+disease+through+the+commensal+microbiota+and+the+complement%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">A Low-abundance biofilm species orchestrates inflammatory periodontal disease through the commensal microbiota and the complement.</a> Cell Host Microbe. 10 (5), 497-506 (2011).</li>
<li>Axon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastric+cancer+and+Helicobacter+pylori%5BTitle%5D)+AND+%22Aliment.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Gastric cancer and Helicobacter pylori.</a> Aliment. Pharmacol. Ther. 16 (suppl. 4), 83-88 (2002).</li>
<li>Fenhalls, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ.+detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+transcripts+in+human+lung+granulomas+reveals+differential+gene+expression+in+necrotic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">In situ. detection of Mycobacterium tuberculosis transcripts in human lung granulomas reveals differential gene expression in necrotic lesions.</a> Infect. Immun. 70 (11), 6330-6338 (2002).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

הנה פרוטוקול למקם חיידקים בתוך רקמות מוטבעים פרפין באמצעות בדיקה DNA שכותרת DIG תואר. הבדיקה מתמקדת במולקולות ה- DNA או RNA של גן 16S rRNA חיידקים, ויכולות להיות מתוכננות בדיקות 16S rRNA המיקוד כמו גם מינים ספציפיים או אוניוורסלי. הכלאה מסוימת של פ הבדיקה -specific gingivalis לפ gingivalis אבל לא לחיידקים אוראליים אחרים כבר הראה בעבר 10. לעומת זאת, הבדיקה eubacterial הכלאה לכל DNA החיידקים הגנומי שנבדק (17 מינים שונים), למרות שיעילות הכלאה מגוונת ...

חיידקים לשחק תפקיד באטיולוגיה של מחלות פה שונות כגון חניכיים, דַלֶקֶת הַמוֹך, pericoronitis, צלוליטיס, ודלקת עצם. על מנת להבין את תפקידם של חיידקים בפתוגנזה של מחלה ולעקוב אחר ההשפעה של טיפולים, לוקליזציה של חיידקים בתוך הרקמה חשובה. הנוכחות של חיידקים בתוך רקמת חניכיים מחולים עם מחלת חניכיים הוכחה בשיטות שונות, כולל מיקרוסקופ אלקטרונים 1,2, אימונוהיסטוכימיה וimmunofluorescence באמצעות חיידקים ספציפיים נוגדנים 3-7, וניאון הכלאה באתר (דגים) 8 באמצעות fluorescence- הבדיקה oligonucleotide שכותרתו מיקוד rRNA 16S. עם זאת, שיטות אלה אינן בשימוש נרחב בשל מגבלה או קשיים טכניים. לעומת נוגדנים, בדיקות מיקוד rRNA 16S קלות לייצר ולהשיג מינים-סגוליות. FISH הוכיח להיות כלי מצוין להדמיה של התרהeria בסביבתם הטבעית כגון biofilm שלט. עם זאת, יישום של דגים לדגימות רקמה מוגבל בשל autofluorescence של רכיבי רקמות שונים. לדוגמא, autofluorescence החזק של תאי דם אדומים לעתים קרובות מעכב את היישום של טכנולוגית הקרינה לרקמות מודלקות כשהם כרוכים בדימום 9. כדי למקם חיידקים בתוך רקמות החניכיים המודלקות, ולכן, באתר שיטת הכלאה באמצעות digoxigenin (DIG) הבדיקה DNA -labeled פותחה ומיושמת בהצלחה 10,11. כאן פרוטוקול מפורט ללוקליזציה של חיידקים בתוך רקמות מוטבעים פרפין באמצעות פ בדיקות eubacterial -specific והאוניברסליות gingivalis תוארו. הוא התמקד בעיקר בסטנדרטיזציה של השיטה כדי שניתן תהיה לשכפל תוצאות דומות במעבדות אחרות. פרוטוקול זה מאפשר לוקליזציה של חיידקים בתוך ההקשר היסטולוגית שלהם וresuLTS הם מאוד לשחזור. הפרוטוקול המתואר ניתן להשתמש כדי למקם חיידקים או באופן מינים ספציפיים או אוניוורסלי ברקמות שונות. הבדיקה האוניברסלית שימושית במיוחד כדי לזהות חיידקים במחלות polymicrobial וללמוד את תפקיד פוטנציאלי של חיידקים במחלות שבי התפקיד של חיידקים מסוימים אינו ידוע.

<table><tbody><tr><td>אצטי אנהידריד</td><td>סיגמא</td><td>6404</td><td></td></tr><tr><td>50% תמיסת דקסטרן סולפט</td><td>Millipore</td><td>S4030</td><td></td></tr><tr><td>50X Denhardt' s פתרון</td><td>Sigma</td><td>D2532</td><td></td></tr><tr><td>DEPC</td><td>Sigma</td><td>P159220</td><td></td></tr><tr><td>DIG ערכת תיוג וזיהוי DNA</td><td>Roche</td><td>11 093 657 910</td><td></td></tr><tr><td>Formamide</td><td>Sigma</td><td>F9037</td><td></td></tr><tr><td>ImmEdge&trade; Pen</td><td>Dako</td><td>H-400</td><td></td></tr><tr><td>Levamisole</td><td>Vector</td><td>SP-5000</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד</td><td>Sigma</td><td>246964</td><td></td></tr><tr><td>חומצה מאלית</td><td>Sigma</td><td>M0375</td><td></td></tr><tr><td>מתיל ירוק</td><td>Sigma</td><td>M6776</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma</td><td>P1648</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת DNA של זרע סלמון</td><td>Invitrogen</td> <td>#15632-011</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>Sigma</td><td>S9625</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ציטראט</td><td>Duksan</td><td>D1420</td><td></td></tr><tr><td>נתרן דודציל סולפט</td><td>אמרסקו</td><td>227</td><td></td></tr><tr><td>Triethanolamine-HCl</td><td>Sigma</td><td>90279</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Research אורגניים</td><td>3098T</td><td></td></tr></tbody></table>

באתרו איתור של חיידקים בתוך רקמות מוטבעות-פרפין באמצעות dna בדיקה שכותרת digoxin מיקוד 16s rrna

In Situ Detection of Bacteria within Paraffin-embedded Tissues Using a Digoxin-labeled DNA Probe Targeting 16S rRNA

נוכחות חיידקים בתוך אפיתל הכיס ורקמת החיבור הבסיסית בביופסיות חניכיים מחולים עם דלקת חניכיים דווחה בשיטות שונות, כולל מיקרוסקופ אלקטרונים, אימונוהיסטוכימיה או אימונופלואורסצנציה באמצעות נוגדנים ספציפיים לחיידקים, והכלאה פלואורסצנטית באתרה (FISH) באמצעות בדיקה אוליגונוקלאוטידים עם תווית פלואורסצנטית. עם זאת, שיטות אלה אינן נמצאות בשימוש נרחב בגלל מגבלה טכנית או קשיים. כאן הוצגה שיטה לאיתור חיידקים בתוך רקמות משובצות פרפין באמצעות בדיקות DNA המסומנות ב-DIG. הרקמות המשובצות בפרפין הן הצורה הנפוצה ביותר של רקמות ביופסיה הזמינות בבנקים פתולוגיים. ניתן לזהות חיידקים באופן ספציפי למין או באופן אוניברסלי. אותות חיידקים מזוהים כצורות נפרדות (קוקוס, מוט, פוזיפורם וצורה שעירה) של חיידקים או צורות מפוזרות. הטכניקה מאפשרת לקבל מידע היסטולוגי אחר: האפיתליה, רקמת החיבור, ההסתננות הדלקתית וכלי הדם מובחנים היטב. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לחקור את תפקידם של חיידקים במחלות שונות, כגון דלקת חניכיים, סרטן ומחלות חיסון דלקתיות.

מופעי איור 1 dot סופג של בדיקות שכותרת DIG לעומת הבדיקה הבקרה החיובית המסופקת בערכה כדי לקבוע את רגישותם. 343 נ&quot;ב פ הבדיקה -specific gingivalis היא 25 פעמים יותר רגישה מבדיקת eubacterial 70 נ&quot;ב. איור 2 מראה הכלאה באתר של רקמות חניכיים המתקבלות מחולים עם מחלת חניכיים כרוניות לגילוי של פ gingivalis וeubacteria. אותות החיידקים, מוצגים בסגול, התגלו בתוך epithelia, propria lamina, וbiofilm הממוקם מחוץ לרקמה...

כאן תוארה שיטה לאיתור חיידקים בתוך רקמות משובצות פרפין באמצעות בדיקות DNA מכוונות 16S rRNA המכוונות ל-DIG. ניתן ליישם פרוטוקול זה כדי לחקור את תפקידם של חיידקים במחלות שונות כגון דלקת חניכיים, סרטן ומחלות חיסון דלקתיות.

באתרו איתור של חיידקים בתוך רקמות מוטבעות-פרפין באמצעות DNA בדיקה שכותרת Digoxin מיקוד 16S rRNA

The presence of bacteria within the pocket epithelium and underlying connective tissue in gingival biopsies from patients with periodontitis has been ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לאתר חיידקים בתוך רקמות טבועות בפראפין באמצעות גששים של DNA המכוונים ל-RNA ריבוסומלי 16s המסומנים ב-DIG. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת הגשש באמצעות הגברה ב-PCR וסימון ב-DIG. השלב השני הוא הכנת חיתוכי הרקמה כדי להשיג אתרי מטרה נגישים יותר ופחות קישור רקע.בשלב הבא, נבצע היברידיזציה של נתחי הרקמה שהוכנו עם גשש המסומן ב-dig. לבסוף, הגשש שעבר היברידיזציה מזוהה באמצעות נוגדני anti-D dig המסומנים באלקליין פוספטאז. בסופו של דבר, שיטת היברידיזציה זו ב-C two יכולה להראות נוכחות של חיידקים ברקמות הטבולות בפרפין.היתרון המרכזי של שיטה זו על פני שיטות קיימות כמו ING הוא ששיטה זו יכולה לזהות חיידקי SHS בתוך ההקשר של מבנים היסטולוגיים. שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי הפתוגנזה, אך תגובה דלקתית משתנה כגון פריודונטיטיס ו-R planet. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון ששלבי הכנת הרקמה והעיכול ההיברידי קשים לביצוע כיוון שחתכי הרקמה נישכים לנזק בקלות.כדי להכין את הגשש לבקטריה U, השתמשו במקטע DNA בן 70 זוגות בסיסים כתבנית ובשני פריימרים בני 15 זוגות בסיסים להגברת הגשש באמצעות PCR. אספו את האמפליקון בבופר בריכוז ידוע. לאחר מכן, סמנו את הגשש באמצעות ערכה לסיומון וזיהוי DNA מסוג dig.ראשית, ערבבו שלושה מיקרוגרם של הגשוש (probe) ב-15 מיקרוליטר של מים. דנטורו את הגשוש בבלוק חימום למשך 10 דקות ב-95 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הניחו את הגשוש הדנטורי על קרח.בשלב הבא, הוסיפו שני מיקרוליטרים של 10 XH nucleotides, שני מיקרוליטרים של DN NTPs ומיקרוליטר אחד של canal enzyme. לאחר הערבוב, הדגירו את הגשש בטמפרטורה של 37 °C למשך 24 עד 48 שעות. הפסיקו את התגובה על ידי חימום התערובת ל-65 °C.לאחר מכן, מדדו את ריכוז ה-DNA של הגשוש המסומן באורך גל של 260 ננומטר והתאימו את הריכוז ל-100 ננוגרם למיקרוליטר. באמצעות הערכה, בדקו תחילה את רגישות הגשוש על ממברנת ניילון על ידי טעינה של מיקרוליטר אחד של ביקורת חיובית בדילול סדרתי. גשוש וגשוש המסומן ב-dig.הניחו לממברנה להתייבש במשך חמש דקות. לאחר הייבוש, טבלו את הממברנה לזמן קצר ב-two XSSC ולאחר מכן העבירו אותה לאינקובטור בטמפרטורה של 80 degree Celsius למשך שעה. כדי לקבע את ה-DNA לאחר האינקובציה, השרו את הממברנה לזמן קצר בבופר חומצה מאליית, ולאחר חצי שעה העבירו אותה לבופר חסימה המכיל נוגדנים מצומדים ל-AP בדילול של one to 5,000.שטוף את הממברנה ב-MABT. לאחר מכן, ערבב 40 microliters של N-B-T-B-C-I-P לתוך שני milliliters של תמיפת גילוי. לאחר השטיפה, הוסף תערובת זו לממברנה למשך דקה אחת.לאחר הסרת הפרפין והידראציה מחדש של נתחי הרקמה כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב, הכינו אותם להיברידיזציה ב-C two; ראשית טבלו את השקופיות בחומצה כלורית (hydrochloric acid) בריכוז 0.1 normal למשך 20 דקות. לאחר רחצץ החומצה, שטפו את השקופיות במים שעובדו ב-DEPC למשך 30 שניות. לאחר מכן, סמנו את תבנית הדגימות על כל שקופית באמצעות עט שעווה.לאחר מכן, יש להוסיף לדגימות 50 עד 400 µL של תמיסת proteinase K, בהתאם לגודלן. יש להמתין 30 דקות בטמפרטורה של 37 °C כדי לאפשר לאנזים לפעול, ולאחר מכן לשטוף את השקופיות ב-1x PBS שעובד ב-DEPC למשך דקה אחת. כעת, יש להעביר את השקופיות ל-4% paraform aldehyde ב-PBS שעובד ב-DEPC למשך 10 דקות.שטפו את המקבע באמצעות PBS כפי שבוצע קודם לכן. לאחר מכן, השרו את השקופיות בטריאתנולאמין הידרוכלוריד 0.1 molar ב-pH 8 עם 0.5% acetic and hydride; לאחר 20 דקות, שטפו את השקופיות במים נקיים כפי שבוצע קודם לכן. כעת התחילו את ה-in C two על ידי טבילה ראשונית של השקופיות ב-two XSSC למשך 20 דקות.בינתיים, לדללו את הגשוש המסומן לריכוז של 1 ng/µL בבופר היברידיזציה עבור ביקורת שלילית. השתמשו בריכוז הגבוה פי 10 מזה של הגשוש שאינו מסומן. לאחר מכן, דנטורו את הגששים על ידי חימום בטמפרטורה של 90 °C למשך 10 דקות, ולאחריהם קירור מהיר על קרח.בשלב הבא, יש להוסיף לכל סלייד את אותו נפח של דילול גשש (probe dilution) שהוסף קודם לכן של proteinase K. לאחר מכן, יש לכסות בזהירות בזכוכית כיסוי ולאטום את החתכים באמצעות לק ציפורניים. כעת, יש לחמם את הסליידים על בלוק של מכונת PCR בטמפרטורה של 90 °C למשך 10 דקות ולהעבירם לאינקובטור לח בטמפרטורה של 45 °C למשך לילה עד ליום למחרת.קררו את השקופיות בטמפרטורה של 4 °C למשך חצי שעה, ולאחר מכן הסירו בזהירות את זכוכית הכיסוי. הרקמות שבירות. לבסוף, העבירו את השקופיות דרך סדרה של תמיסות SSC בטמפרטורת החדר.ראשית, שטפו את שתי השקופיות ההיברידיות של ה-NC למשך חמש דקות ב-MABT. לאחר מכן, מרחו 50 עד 400 µl של תמיסת חסימה ב-1% tween 20 למשך 20 דקות. לאחר דגירת החסימה, מרחו 50 עד 400 µl של נוגדן anti-D dig alkaline phosphatase בדילול של 1:1000 ותמיסת חסימה.הנח לדגימה להיקשר במשך 90 דקות ב-37 °C לאחר יישום הנוגדן הראשוני. שטוף את השקופיות ב-MABT למשך 10 דקות. לאחר מכן, הנח את השקופיות בבופר גילוי עם 1% tween 20 למשך חמש דקות.כעת יש להוסיף 50 עד 400 µL של תמיסת ole בריכוז 1 mM בבופר גילוי לכל שקופית, ולהדגיר אותן למשך חמש דקות כדי לבטל את הפעילות של הפוספטאז האלקלי האנדוגני. לאחר מכן, יש להוסיף 50 עד 400 µL של N-B-T-B-C-I-P המדולל בבופר גילוי ביחס של 1:100 לכל שקופית, ולהדגיר את השקופיות למשך שעתיים עד שלוש שעות בתא לח, בהתאם לניסיון.שטפו את הפלואות במים מזוקקים (DI water), ולאחר מכן מרחו methyl green בריכוז של 0.05% משקל לנפח והניחו לצביג המשני לפעול על הרקמה במשך 10 דקות בטמפרטורה של 37 °C. שטפו את הפלואות שוב במים מזוקקים (DI water), ולאחר מכןבצעו דהידרטציה באמצעות 100% ethanol, ולאחריה טבילה ב-xylene.לבסוף, יש להוסיף 80 µL של מדיום קיבוע (mounting media) ולכסות בכיסוי זכוכית. לאחר מכן, הנסלידים שעליהם נמצאו הגששים סומנו בסימון דיגיטלי. הרגישות שלהם הושוותה לדילול של גשש ביקורת חיובי.הגשושית הספציפית ל-p gingivalis באורך 43 זוגות בסיסים הייתה רגישה פי 25 מהגשושית הבקטריאלית המהונדסת באורך 70 זוגות בסיסים. לאחר מכן, שתי הגשושיות הוחלו על רקמות חניכיים של מטופלים עם פריודונטיטיס כרונית בהגדלה גבוהה. ניתן היה להבחין בצורות השונות של הבקטריות באמצעות הגשושית הבקטריאלית.בעוד שהגשש הספציפי ל-p gingivalis זיהה רק חיידקים בצורת מוט, הוחל DSS, כימיקל המשבש צומת הדוקה, על רירית החניכיים של עכברים. דגימות רקמה מעכברים אלו שימשו להשוואת הגששים בהקשר שונה. במקרה זה, הגשש הבקטריאלי U הצליח לזהות את החיידקים שהגשש השני לא זיהה.לאחר מכן נבחנה יכולתה של גששת חיידקי ה-U לזהות חיידקים אחרים בחתכי רקמת ריאה המכילים גידולים. חיידקים זוהו הן מחוץ לגידול והן בתוך הגידול. בבדיקת רקמות של מטופלים עם lichen planus פהי, מחלה בעלת אטיולוגיה לא ידועה, זיהתה גששת החיידקים אותות בקטריאליים בתוך תאי האפיתליום והלמינה פרופריה (lamina propria) שבה נצפתה חדירה דלקתית.מאז פיתוחה, טכניקה זו סייעה לחוקרים בתחום מחלות הזיהום לחקור פלישת חיידקים לרקמות הן בבני אדם והן בבעלי חיים בעקבות הליך זה. שיטות אחרות, כגון זיהוי אימונוכימי של סמני תאים, יכולות להיות מיושמות על מנת לענות על שאלות נוספות, כגון אילו סוגי תאים מאכלסים את החיידקים בתוך הרקמות.

in-situ-detection-bacteria-within-paraffin-embedded-tissues-using

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

דיווחנו לאחרונה גישה חדשנית להפקת בדיקות DNAzyme fluorogenic כי ניתן להחיל על הקמת פשוט, "תמהיל-and-לקרוא" assay ניאון לגילוי חיידקי. אלו בדיקות דנ"א מיוחד לזרז את המחשוף של מצע ה-DNA-RNA-chromophore שונה chimeric בנוכחות תערובת תאי גולמי (CEM) המיוצר על ידי חיידק מסוים, ובכך לתרגם את גילוי החיידק לדור אותות הקרינה. בדוח זה נתאר את הליכי הניסוי העיקריים שבהם בדיקה DNAzyme מסוים כונה "RFD-EC1" מועסק לצורך זיהוי של החיידק...

זיהוי של חיידקים באמצעות DNAzymes Fluorogenic

מקור: צ'וי, י. ס. ואחרים. זיהוי במקום של חיידקים בתוך רקמות מוטמעות בפרפין באמצעות גלאי DNA מסומן בדיגוקסין המיועד ל-16S rRNA. J. Vis. Exp. (2015).סרטון זה מדגים את זיהוי החיידקים בשטח בחתכי רקמת החניכיים של העכבר באמצעות גלאי DNA מסומנים בדיגוקסין המכוונים ל-DNA חיידקי. הקטע מודגר יחד עם הגשושית. מתווספים נוגדנים מצורפים אלקליין פוספטאז הספציפיים לדיגוקסין. פוספטאזים אנדוגניים מושבתים, ומשקע צבעוני מתקבל על ידי הוספת תת-קרקעית. החתך מוצבע נגד, מיובש, מנוקה בקסילן, ומותקן לפני הדמיה מיקרוסקופית...

זיהוי במקום של חיידקים בחתכי רקמת החניכיים של העכבר

סרטון זה מדגים הדמיה של חיידקים ברקמת שלפוחית השתן מחולה נגוע בדרכי השתן. בדיקה בעלת תווית פלואורסצנטית המשולבת עם רנ"א ריבוזומלי חיידקי 16s חושפת את החיידקים הקשורים לרקמות ואת תפוצתם, ומספקת תובנות מרחביות יקרות ערך לגבי צפיפותם בתוך הדגימה.

הדמיה של חיידקים במקטעי ביופסיה של שלפוחית השתן באמצעות הכלאה פלואורסצנטית באתרו

כאן אנו מתארים שלם הר...

הר כולו RNA פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עוברים

המטרה של הווידאו הזה היא להדגים כיצד לבצע מיצוי DNA אוטומטי מהקווים קבוע פורמלין מוטבע פרפין התייחסות (FFPE) סטנדרטיים תא וניתוח אגל דיגיטלי PCR (ddPCR) כדי לזהות מוטציות נדירות בסביבה קלינית. זיהוי מוטציות בדגימות FFPE מדגים את התועלת הקלינית של ddPCR בדגימות FFPE.

העסקת דיגיטלי אגל PCR לזיהוי מוטציות V600E BRAF בשורות תאי ההפניה תקן קבוע פורמלין מוטבע-פרפין

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להעריך במרחב של חנותם הנוכחות של קיימא microbiota במעיים שנתות תוך שימוש בגישה שונה כולה-הר היברידיזציה.

ויזואליזציה של Microbiota במעיים שנתות על-ידי הכלאה כולה-הר בחיי עיר

המטרה של פרוטוקול זה היא לבצע הכלאה בחיי עיר על דגימות אלמוגים מבוגרים שמוטבע פרפין, למחלקה על גבי מדרון זכוכית. זוהי שיטה איכותי המשמש כדי להמחיש את הביטוי המרחבי לווין אנטי-חוש RNA ברקמות פרפין-מוטבע.

בחיי עיר טכניקות הכלאה פרפין-מוטבע דגימות אלמוגים למבוגרים

פרוטוקול זה מיועד לגילוי משוחדת של חיידקים הקשורים לרקמות ביופסיות החולה על ידי היברידינה של 16 s rrna באתרו הכלאה ו קונפוקלית מיקרוסקופ.

איתור של רקמות בקטריה תושב ביופסיות שלפוחית השתן על ידי הזריחה של 16S rRNA באתרו היברידיזציה

פרוטוקול יעיל זה מפרט זרימת עבודה לזיהוי ותמונה של חיידקים בדגימות רקמות מורכבות, החל מתיקון הרקמה ועד להכתמת חיידקים עם פלואורסצנטיות בהכלאה במקום .

הדמיה של אינטראקציות מארחות מיקרוביוטה במעיים באמצעות פלואורסצנטיות בהכלאה במקום , כתמי לטין והדמיה

חיידקי מעיים, כולל חיידקים חוץ-תאיים ופתוגנים תוך-תאיים כמו נגיף אורסיי ומיקרוספורידיה (פטריות), קשורים לעתים קרובות לנמטודות פראיות של Caenorhabditis . מאמר זה מציג פרוטוקול לאיתור וכימות מיקרובים המאכלסים ו/או מדביקים נמטודות C. elegans , ולמדידת עומס פתוגנים לאחר זיהומים מבוקרים במעבדה.

RNA פלואורסצנטי באתרו הכלאה (FISH) כדי לדמיין התיישבות מיקרוביאלית וזיהום במעיים Caenorhabditis elegans

פרוטוקול זה מספק שיטה הניתנת לשחזור כדי להמחיש הגברה גנטית בדגימות רקמה משובצות פרפין קבוע פורמלין (FFPE).

זיהוי חזק של הגברה גנטית בדגימות משובצות פרפין קבועות פורמלין על ידי הכלאה פלואורסצנטית באתרו

למדו לאתר חיידקים ברקמות מוטבעות-פרפין באמצעות בדיקות DNA מסומנות ב-DIG המכוונות ל-rRNA 16S. שיטה זו מאפשרת זיהוי ויזואלי ברור של חיידקים בהקשר היסטולוגי לחקר מחלות דלקתיות וסרטן.

באתרו איתור של חיידקים בתוך רקמות מוטבעות-פרפין באמצעות DNA בדיקה שכותרת Digoxin מיקוד 16S rRNA

גלה סרטונים נוספים